CN112684031A - 聚维酮k30含量的hplc测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种聚维酮K30含量的HPLC测定方法，测定方法中以硝酸钾‑乙腈‑水混合溶液为流动相，采用分子排阻色谱法测定待测产品中的聚维酮K30含量。本申请的方法简便、快捷、准确性好、灵敏度高，能够准确测定聚维酮K30的含量，可运用于口服固体制剂中聚维酮K30的反向工程研究，为仿制药开发、一致性评价及生物等效性研究提供支持性数据，加快研发进程。

Description

聚维酮K30含量的HPLC测定方法

技术领域

本发明涉及聚维酮含量的检测技术领域，更具体地涉及一种聚维酮K30含量的HPLC测定方法。

背景技术

聚维酮K30(PVPK30)在医药上有广泛的应用，为国际倡导的三大药用新辅料之一。应用最广的是片剂、颗粒剂的粘合剂。PVP还可用作胶囊的助流剂，眼药的去毒剂及润滑剂，注射剂的助溶剂，液体制剂的分散剂，酶及热敏药物的稳定剂。聚维酮还可与碘合成PVP-I消毒杀菌剂。PVP在医药上还可用作低温保存剂。采用PVP产品作辅料的药物已有上百种。仿制药的开发及一致性评价以及生物等效性实验的豁免均要求与原研质量和疗效一致，为了达到与原研质量疗效一致，逆向工程技术应运而生，聚维酮作为药物制剂中常用的辅料，如何在制剂处方中快速检测出其含量对仿制药开发、一致性评价等显得尤为重要。作为一种重要的药用辅料，现有技术仅有公开的申请号201610423183.7—聚维酮碘水溶液中聚维酮含量的HPLC测定方法，其使用的是C18色谱柱，紫外检测器，无法具体测定聚维酮K30的含量，只能测定聚维酮总量。

因此，有必要提供一种聚维酮K30含量的HPLC测定方法以解决上述技术缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种聚维酮K30含量的HPLC测定方法，在反向研究中可快速测定聚维酮K30的含量，方法简单、测试结果准确度高，为仿制药开发、一致性评价及生物等效性研究提供支持性数据，加快研发进程。

为了实现上述目的，本发明公开了一种聚维酮K30含量的HPLC测定方法，测定方法中以硝酸钾-乙腈-水混合溶液为流动相，采用分子排阻色谱法测定待测产品中的聚维酮K30含量。

与现有技术相比，本申请的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，测定方法中以硝酸钾-乙腈-水混合溶液为流动相，采用分子排阻色谱法测定待测产品中的聚维酮K30含量，方法简便、快捷、准确性好、灵敏度高，能够准确测定聚维酮K30的含量，可运用于口服固体制剂中聚维酮K30的反向工程研究，为仿制药开发、一致性评价及生物等效性研究提供支持性数据，加快研发进程。

较佳的，聚维酮K30含量的HPLC测定方法中，其检测步骤包括：

流动相的配制：以硝酸钾-乙腈-水混合溶液为流动相；

对照品溶液的配制：将聚维酮K30与溶剂配制成对照品溶液；

样品溶液的配制：将待测产品与溶剂配制成样品溶液；

将对照品溶液注入液相色谱仪，再将样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。

较佳的，所述溶剂选自水、甲醇、乙醇，其中优选为无水乙醇。

较佳的，取一定量的聚维酮K30置于定量瓶中，加适量的无水乙醇超声，放冷至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液在低温离心，取上清液作为对照品溶液。

较佳的，取一定量的待测产品，预处理后置于定量瓶中，加适量的无水乙醇超声，放冷至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液在低温离心，取上清液作为样品溶液。

较佳的，样品溶液的浓度为0.4-0.6mg/ml。优选地，样品溶液的浓度为0.5mg/ml

较佳的，对照品溶液的浓度为0.4-0.8mg/ml的溶液。优选地，对照品溶液的浓度为0.5mg/ml的溶液

较佳的，对照品溶液的配制中还包括辅料，辅料选自待测产品的成分。为了提高该产品中聚维酮K30含量的测量灵敏度，优选地，将其他组分作为辅料配制对照品溶液可有效提高聚维酮K30含量测试的准确度。

较佳的，待测产品为琥珀酸亚铁片，辅料有琥珀酸亚铁、琥珀酸、二水磷酸氢钙、玉米淀粉、硬脂酸镁。

较佳的，称取聚维酮K30 50mg、琥珀酸亚铁2300mg、琥珀酸1800mg、二水磷酸氢钙1800mg、玉米淀粉860mg、硬脂酸镁280mg，然后分别置于100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成含聚维酮K30浓度为0.5mg/ml的溶液，取适量上述溶液在10000r/min低温下离心5分钟，温度为8℃，取上清液，作为对照品溶液。通过将琥珀酸亚铁片中的辅料与聚维酮K30共同配制对照品溶液，避免杂质的影响，有效提高琥珀酸亚铁片中聚维酮K30含量的测试准确度。

附图说明

图1为空白溶剂(乙醇)高效液相色谱图。

图2为流动相的高效液相色谱图。

图3为空白辅料的高效液相色谱图。

图4为对照品溶液高效液相色谱图。

图5为样品溶液高效液相色谱图。

图6为对照品溶液中聚维酮K30峰面积对浓度线性图；

以主峰峰面积的平均值为纵坐标；以聚维酮K30对照品溶液浓度为横坐标。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

1、仪器设备：

赛默飞高效液相色谱仪(Ultimate 3000)；菲罗门色谱柱(H19-165010)；Chromeleon色谱数据工作站，梅特勒电子天平(PL6001E/02和XS105DU)。

2、试药：

聚维酮K30(巴斯夫，批号：G71866PTO)；

琥珀酸亚铁(成都奥邦，批号190701)；

琥珀酸(成都利尔，批号171207)；

乙腈(HPLC纯，赛默飞，批号：19888)；

硝酸钾(国药，批号：20190716)；

磷酸氢钙(斯百全，3GB0037)；

玉米淀粉(安徽山河，批号：171118)；

硬脂酸镁(上海运宏化工，批号C832520)。

3、溶液配制：

流动相的配制：取硝酸钾10.1g与800ml水进行溶解，用0.45μm水系微孔过滤膜过滤得硝酸钾溶液。取800ml硝酸钾溶液与乙腈(HPLC)200ml混匀，即得流动相，但不以该过程中的用量为限制，可根据实际使用情况按比例调整配制溶液的体积。

对照品溶液的配制：分别称取聚维酮K30 50mg、琥珀酸亚铁2300mg，琥珀酸1800mg，二水磷酸氢钙1800mg、玉米淀粉860mg、硬脂酸镁280mg，置于100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液在10000r/min低温(温度控制在8℃)离心5分钟后，取上清液，作为对照品溶液。当然，为了提高精确度，可平行制备2份对照品溶液待用，即对照品溶液1及对照品溶液2。

空白辅料溶液的配制：按照琥珀酸亚铁：琥珀酸：二水磷酸氢钙：玉米淀粉：硬脂酸镁＝115：90：90：43：14的比例称取空白辅料约7.04g，精密称定，置100ml量瓶中，加适量的无水乙醇超声15min，放冷至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液在10000r/min低温(8℃)离心5分钟后，取上清液作为作为空白辅料溶液。

准确度溶液的配制：称空白辅料约7.04g和聚维酮K30约50mg，精密称定，置100ml量瓶中，加适量的无水乙醇超声15min，放冷至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液在10000r/min低温(8℃)离心5分钟后，取上清液作为准确度溶液，平行制备3份。

样品溶液的配制：本实施例待测产品取琥珀酸亚铁片，但不以此为限。取琥珀酸亚铁片7.2g，去除包衣，研细，置于100ml量瓶中，加适量的无水乙醇超声15min，放冷至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液在10000r/min低温(温度控制在8℃)离心5分钟后，取上清液作为样品溶液。为了提高精确度，可平行制备2份样品溶液待用，即样品溶液1及样品溶液2，而对于测试的数值取平均值。

系统适用性合格后，对样品溶液进行测定，在进样序列中，每隔约6h，将对照品溶液进样2针，记录色谱图。

4、色谱条件：

色谱柱：Polysep-GFC-P-linear300*7.8mm色谱柱，流动相：0.1M硝酸钾的[乙腈-水(1:4)]溶液

检测器：示差检测器

流速：1.0ml/min

示差检测器温度的温度：55℃

柱温：40℃

进样盘温度：10℃

进样量：50ul。

5、方法学：

1)色谱系统适用性实验：

待仪器稳定后，按照对照品溶液1进样6针、对照品溶液2进样2针、流动相1针、无水乙醇1针进行系统适用性实验。系统适用性实验中流动相与无水乙醇的色谱图中在主峰位置附近应无吸收峰，对照品溶液1连续进样6针的主峰面积RSD应不得大于3.0％，主峰保留时间RSD应不得大于1.0％；对照品溶液2的回收率应在97.0％～103.0％之间。

2)方法专属性：

根据本法测定对照品溶液、准确度溶液，得到相应的保留时间t＝9.160min，聚维酮K30色谱峰不受溶剂峰、空白辅料和准确度中其他成分的干扰，且峰形较好(如图1、2、3、4、5所示)；

3)线性范围：

配制含聚维酮K30浓度为0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mg/mL的对照品溶液，各取50μL进样，按上述色谱条件进行分析，以主峰峰面积的平均值对线性溶液浓度的函数作图(标准曲线如图6)，再用最小二乘法进行线性回归，得到线性回归方程：y＝5.7476x-0.2843(R²＝0.9956，n＝5)，结果表明：在0.4026mg/ml-0.8008mg/ml的范围内线性良好，在0.4026mg/ml-0.6106mg/ml范围内方法精密度、准确度、线性良好。由此可知，聚维酮K30峰面积A与浓度C呈良好线性关系。

4)方法的准确度及重复性(以回收率表示)：

配制含聚维酮K30浓度为0.4、0.5、0.6mg/ml的准确度溶液，依法进行回收率测定，测得准确度溶液的回收率见下表1所示：

表1 HPLC测定方法测试聚维酮K30含量方法回收率

5)方法的精密度

按照准确度溶液配制方法，配制含聚维酮K30浓度为0.4、0.5、0.6mg/ml的精密度溶液，依法进行回收率测定。一日内测定三次，测得日内精密度；连续测定两日，测的日间精密度。结果见下表2所示：

表2精密度试验结果

6)溶液的稳定性

配制0.5mg/ml的对照品溶液并于冷藏(10℃)条件分别下放置4h、8h、12h、16h、18h、24h、30h、33h、36h、39h、42h，同时于每个时间点分别取对照品溶液50ul，注入高效液相色谱仪，分别进样2针，记录色谱图。考察溶液的稳定性，结果显示，对照品溶液在39h内未有明显变化，峰面积RSD＝1.49％，表明在39h内样品测定是稳定的。

7)样品中聚维酮K30含量测定：

分别取样品溶液1和样品溶液2、对照品溶液50ul分别进样2针进行分析，记录色谱图；按照以下计算公式计算琥珀酸亚铁片中聚维酮K30百分含量(相当于纯的聚维酮K30占琥珀酸亚铁片片芯的百分含量)：

式中：

A_R1为对照品溶液连续6针的平均主峰面积；

A_Tn1和A_Tn2分别为样品溶液n(n＝1、2)的第1针和第2针的峰面积；

M_R1为对照品1中聚维酮K30的称样量；

C_R1为对照品1中聚维酮K30的纯度；

S_T为样品溶液的稀释倍数；

S_R为对照品溶液的稀释倍数；

W为样品称样量，mg。

C_Tn为样品n(n＝1～2)中琥珀酸亚铁片中聚维酮K30的含量，％；

C_T为样品中琥珀酸亚铁片中聚维酮K30的含量，％。

结果如表3所示：

表3琥珀酸亚铁片中聚维酮K30的含量

编号	1	2	3
				测量结果(％)	0.94	1.05	1.17

试验结果表明，采用本申请的聚维酮K30含量的HPLC测定方法测得三份琥珀酸亚铁片中聚维酮K30的含量分别为0.94％、1.05％、1.17％。

以上所揭露的仅为本发明的优选实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明申请专利范围所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (9)

1.一种聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，测定方法中以硝酸钾-乙腈-水混合溶液为流动相，采用分子排阻色谱法测定待测产品中的聚维酮K30含量。

2.如权利要求1所述的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，检测步骤包括：

流动相的配制：以硝酸钾-乙腈-水混合溶液为流动相；

对照品溶液的配制：将聚维酮K30与溶剂配制成对照品溶液；

样品溶液的配制：将待测产品与溶剂配制成样品溶液；

将对照品溶液注入液相色谱仪，再将样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。

3.如权利要求2所述的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，

取一定量的聚维酮K30置于定量瓶中，加适量的溶剂超声，放冷至室温，用溶剂稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液进行低温离心，取上清液作为对照品溶液。

4.如权利要求2所述的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，

取一定量的待测产品，预处理后置于定量瓶中，加适量的溶剂超声，放冷至室温，用溶剂稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液进行低温离心，取上清液作为样品溶液。

5.如权利要求2所述的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，样品溶液的浓度为0.4-0.6mg/ml。

6.如权利要求2所述的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，对照品溶液的浓度为0.4-0.8mg/ml的溶液。

7.如权利要求2所述的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，对照品溶液的配制中还包括辅料，辅料选自待测产品的成分。

8.如权利要求7所述的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，待测产品为琥珀酸亚铁片，辅料有琥珀酸亚铁、琥珀酸、二水磷酸氢钙、玉米淀粉、硬脂酸镁。

9.如权利要求8所述的聚维酮K30含量的HPLC测定方法，其特征在于，

称取聚维酮K30 50mg，还根据处方比例称取适量的琥珀酸亚铁、琥珀酸、二水磷酸氢钙、玉米淀粉、硬脂酸镁，然后分别置于100ml容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，取适量上述溶液在10000r/min低温下离心5分钟，温度为8℃，取上清液，作为对照品溶液。

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