CN106117357A - Bmp‑2抗体及其在检测骨修复材料中bmp‑2蛋白含量中的应用 - Google Patents

Bmp‑2抗体及其在检测骨修复材料中bmp‑2蛋白含量中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了BMP‑2抗体及其在检测骨修复材料中BMP‑2蛋白含量中的应用。本发明所提供的应用中，BMP‑2抗体为由在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP‑2单克隆抗体细胞株44F5分泌的抗体。实验证明，利用本发明的BMP‑2抗体检测骨修复材料中BMP‑2蛋白含量的特异性高，灵敏度高，准确性好，稳定性好，回收率(即BMP‑2含量检测值与BMP‑2含量实际值的比值)为106.4％，精密度为5.2％，并且建立的检测骨修复材料或骨组织中BMP‑2蛋白含量的方法比较稳定，准确性高，适用于作为常规方法来检测骨修复材料中BMP‑2蛋白含量。

Description

BMP-2抗体及其在检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域中BMP-2抗体及其在检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量中的应用。
背景技术
骨形态发生蛋白(BMP)是由骨基质分泌的一种疏水性蛋白，属于转化生长因子(TGF-β)超家族成员，由Urist等人于1965年首次提出，1972年定义，并于1982年首次从脱钙骨基质提取物中分离得到的一种活性蛋白质。BMP家族包括BMP-1,2,4,6,7,9,12,14等，其中BMP-2具有明显诱导未分化的间充质干细胞和成纤维细胞定向分化为成骨细胞的作用并能调节成骨细胞和成软骨细胞的分化，诱导异位骨形成和促进骨折愈合的功能。BMP-2是骨生成的启动因子，可以加速骨的重建，是骨修复基因治疗的理想目的基因，是目前唯一能诱导异位成骨的细胞因子，因而成为骨组织工程学研究中最重要的生长因子。目前，BMP-2已成功地用于治疗骨不连和骨缺损的修复。BMP一般无种属特异性，具有跨种属诱导成骨能力，因而其临床应用前景十分广阔。申请人使用了一种人工修饰的BMP-2，即在其末端添加了一个胶原蛋白结合结构域(CBD)，同时使用了骨修复材料，可以显著增加BMP-2的治疗效果。
目前针对骨修复材料中BMP-2蛋白含量的直接测定无较好方法，现有技术中的检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量的方法误差比较大。现有技术中一般采用先将骨材料中BMP-2洗脱再测定洗脱液的方法，一方面BMP-2洗脱不完全或者很难洗脱下来，造成检测不准确；另一方面，洗脱液中测定BMP-2的含量，洗脱液会干扰检测结果。或者通过测定结合前后溶液的BMP-2蛋白浓度来计算，但成品制成之后就无法准确测定BMP-2的含量。这种方法结合后蛋白浓度过低，低于相关检测方法的检测下限，不仅操作繁琐，而且误差比较大。目前急需一种检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了BMP-2抗体在制备检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量产品中的应用；其中，所述BMP-2抗体为由在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP-2单克隆抗体细胞株44F5分泌的抗体。
为解决上述技术问题，本发明还提供了保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP-2单克隆抗体细胞株44F5在制备检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量产品中的应用。
为解决上述技术问题，本发明还提供了与所述BMP-2抗体相关的生物材料在制备检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量产品中的应用；所述生物材料为B1)至B10)中的任一种：
B1)编码所述BMP-2抗体的核酸分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；
B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；
B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；
B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；
B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；
B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；
B9)含有B1)所述核酸分子的细胞系；
B10)含有B2)所述表达盒的细胞系。
为解决上述技术问题，本发明还提供了所述BMP-2抗体。
为解决上述技术问题，本发明还提供了所述生物材料。
为解决上述技术问题，本发明还提供了保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP-2单克隆抗体细胞株44F5。
为解决上述技术问题，本发明还提供了包括下述P1或P2的产品：
P1、检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量的产品，包括P11、P12和P13：
P11、所述BMP-2抗体；
P12、不含BMP-2的骨修复材料或骨组织；
P13、BMP-2蛋白质；
P2、检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量的产品，包括P21和P22：
P21、所述BMP-2抗体；
P22、含有BMP-2的骨修复材料或骨组织。
上述产品还可包括进行酶联免疫吸附所需的试剂和/或仪器。
上述产品可仅为上述P1或P2，上述产品还可由上述P1或P2与进行酶联免疫吸附所需的试剂和/或仪器组成。
上述产品中，所述含有BMP-2的骨修复材料或骨组织中BMP-2的含量是已知的。
上述产品可为试剂或试剂盒，如酶联免疫吸附试剂盒。
上述产品中，所述不含BMP-2的骨修复材料或骨组织具体可为烟台正海生物科技股份有限公司产品。所述含有BMP-2的骨修复材料或骨组织具体可为烟台正海生物科技股份有限公司产品。
为解决上述技术问题，本发明还提供了检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量的方法，所述方法包括将所述BMP-2抗体与待测样品进行反应，确定待测样品中BMP-2蛋白含量。
上述方法中，所述待测样品可为直接得到的骨修复材料或骨组织，还可为将骨修复材料或骨组织粉碎得到的骨修复材料或骨组织粉末。
上述方法还可包括利用所述BMP-2抗体与含有BMP-2蛋白的骨修复材料或骨组织标准品进行反应制备标准曲线，所述标准品中BMP-2蛋白的含量是已知的。所述待测样品的BMP-2蛋白含量可以及依据所述BMP-2抗体与待测样品反应的结果与标准曲线得出。
上述方法可通过酶联免疫吸附技术检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量。
为解决上述技术问题，本发明还提供了下述X1或X2或X3：
X1、所述BMP-2抗体在检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量中的应用；
X2、所述生物材料在检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量中的应用；
X3、保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP-2单克隆抗体细胞株44F5在检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量中的应用。
本发明首先通过动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化获得细胞株，进一步纯化获得鼠抗人BMP-2单克隆抗体(所述BMP-2抗体)，再建立相应的检测方法来对骨修复材料中BMP-2蛋白含量进行定量。本发明可以利用BMP-2抗体直接在骨修复材料上反应，避免蛋白洗脱后变性及洗脱不完全；本发明的BMP-2抗体特异性高，灵敏度高，可以提高检测结果的准确性。利用鼠抗人BMP-2单克隆抗体对骨修复材料中BMP-2的含量进行检测，回收率(即BMP-2含量检测值与BMP-2含量实际值的比值)为106.4％，精密度为5.2％，并且建立的检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量的方法比较稳定，准确性高，适用于作为常规方法来检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量。本发明建立的检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量的方法有利于骨修复材料产品的研究开发，质量控制和临床应用，具有较高的应用价值。该方法有如下优点：(1)操作简便，不需要进行蛋白洗脱等操作；(2)无需对骨修复材料中蛋白进行洗脱，减少洗脱不完全、蛋白变性以及洗脱过程中骨修复材料中其他杂质带来的交叉污染，提高了实验结果的准确性；操作简便快速，不需要进行组织分离等操作；(3)结果较客观可靠，准确度高，变异小。
生物材料保藏说明
生物材料的分类命名：rhBMP-2单克隆抗体细胞株
生物材料的菌株编号：44F5
生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
生物材料的保藏单位简称：CGMCC
生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101
生物材料的保藏日期：2016年04月06日
生物材料的保藏中心登记入册编号：CGMCC No.12257
附图说明
图1为不同稀释比例的Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibodyproduced in rabbit的实验结果。
图2为不同稀释比例的鼠抗人BMP-2单克隆抗体的实验结果比较。
图3为最佳鼠抗人BMP-2单克隆抗体与Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit稀释比例的下的结果。
图4为市售单克隆抗体(Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse)的检测结果。
图5为市售多克隆抗体(Santa cruz公司的Goat polyclonal IgG，货号为SC6895与SC6895P)的检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、骨修复材料中BMP-2蛋白含量的检测
1、研究对象：骨修复材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量为85.0μg/g骨修复材料)，该骨修复材料为将空白骨修复材料(烟台正海生物科技股份有限公司的骨修复材料，本文中称为空白骨修复材料)与BMP-2对照品(BMP-2对照品为由两个序列表中序列1所示的蛋白质单体组成的蛋白质)的水溶液复合，经冻干所得产品。
2、BMP-2对照品：由两个序列表中序列1所示的蛋白质单体组成的蛋白质
3、试剂：
生长培养基：DMEM(GIBCO，#11995)+10％(质量百分比浓度)胎牛血清(GIBCO，#10099)
样品稀释液：PBS+1％(质量百分比浓度)BSA(生工生物工程(上海)股份有限公司，AR2440)
Goat polyclonal IgG：Santa cruz，SC6895
Goat polyclonal IgG：Santa cruz，SC6895P
Anti-Goat IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit：sigma，A5420
Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced inrabbit：sigma，A9044
Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse：sigma，WH0000650M2
洗液：PBS+1％(质量百分比浓度)Tween-20(sigma，P9416)
TMB(3,3,5,5-四甲基联苯胺)：sigma，1001774375
终止液：2M硫酸水溶液
96孔板：costar，42592
结合缓冲液：20mM磷酸钠，0.15M NaCl，pH 7.0
洗脱缓冲液：0.1M盐酸化甘氨酸，0.15M NaCl，pH3.0
pH调节溶液：1M Tris-HCI，pH8.0
4、仪器：
purifier100层析系统
层析柱(XK26m×250mm)，预装MabSect SuRe(GE制造)填料，柱体积100ml
酶标仪，MULTISKAN MK3
5、骨修复材料中BMP-2蛋白含量的检测
5.1BMP-2单克隆抗体的制备
5.1.1动物免疫：取BLAB/C小鼠，用BMP-2(BMP-2由两个单体组成，每个单体的序列为序列表中序列1)三次免疫后再经过一次加强免疫，取脾融合。
5.1.2细胞融合：将骨髓瘤细胞与脾细胞按照1:10的比例混合，离心后加入PEG4000(生工生物工程(上海)股份有限公司，货号为A620431)，使用不完全培养液终止。
5.1.3杂交瘤细胞的筛选与单抗检测：使用HAT选择培养液(南京生兴生物技术有限公司，货号：21060-017)筛选得到杂交瘤细胞系，使用ELISA的方法检测，该杂交瘤细胞细胞系已于2016年04月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号：CGMCC No.12257。
5.1.4杂交瘤细胞的克隆化获得细胞株：使用有限稀释法克隆获得杂交瘤细胞CGMCC No.12257细胞株。
5.1.5进一步纯化获得鼠抗人BMP-2单克隆抗体
将杂交瘤细胞CGMCC No.12257细胞株置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，得到细胞培养上清液。其中，细胞培养基为向DMEM(高糖)培养基中添加小牛血清得到的细胞培养基，小牛血清在细胞培养技术中的体积百分比浓度为10％，细胞培养基的pH为7.4。
用purifier100层析系统及预装MabSect SuRe(GE制造)填料的层析柱(XK26m×250mm)进行抗体的纯化，步骤如下：
1.平衡层析柱：用结合缓冲液平衡层析柱，平衡体积500mL，平衡流速200cm/h；
2.上样：细胞培养上清液，直接上样，上样流速200cm/h，上样体积200mL；
3.淋洗：用结合缓冲液淋洗层析柱，淋洗流速200cm/h，淋洗体积500mL；
4.洗脱：以洗脱缓冲液进行0-100％的梯度洗脱，接收洗脱峰，并用pH调节溶液将条整pH至7.0，即为经纯化的鼠抗人BMP-2单克隆抗体溶液；
5.2骨修复材料中BMP-2蛋白含量测定方法建立：
5.2.1Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced inrabbit最佳稀释比例的筛选
以上述经纯化的鼠抗人BMP-2单克隆抗体溶液按照1∶1000的体积比稀释后得到的鼠抗人BMP-2单克隆抗体工作液包被酶标板，将Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit分别按照1∶2000(即2000倍稀释)，1∶5000(即5000倍稀释)，1∶8000(即8000倍稀释)和1∶15000(即15000倍稀释)的体积比稀释后得到的Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit工作液，确定Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit的最佳稀释比例，Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced inrabbit工作液的使用体积为100μl，具体操作步骤同步骤5.2.3中(1)-(10)。
结果如图1所示，由结果可以初步确定：将Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit按照1∶8000的体积比稀释后，结果较好。
5.2.2鼠抗人BMP-2单克隆抗体最佳稀释比例的筛选
将鼠抗人BMP-2单克隆抗体分别按照1∶500和1∶1000的体积比稀释后包被酶标板，然后将Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit按照1∶8000的体积比稀释后检测鼠抗人BMP-2单克隆抗体的最佳稀释比例，鼠抗人BMP-2单克隆抗体工作液的使用体积为100μl，具体操作步骤同步骤5.2.3中(1)-(10)。
结果如图2所示，由结果可以初步确定：鼠抗人BMP-2单克隆抗体按照1∶500的体积比稀释后，结果较好。
5.2.3根据多次试验，确定骨修复材料中BMP-2蛋白含量测定方法步骤如下：
(1)制备骨修复材料(含活性蛋白)标准品
准确称取0.1g空白骨修复材料，置入24孔板内，加入已知含量的BMP-2对照品水溶液，超净台过夜吹干，使每克骨修复材料中BMP-2含量分别为0μg、10μg、20μg、40μg、60μg、80μg、100μg、120μg的骨修复材料标准品；将骨修复材料(BMP-2的含量为85.0μg/g骨修复材料)作为待检样品加至该24孔板的2个空白孔中，每孔0.1g；
(2)第二天，配制3％BSA-PBS封闭液(即向PBS中加入BSA得到的BSA的质量百分比浓度为3％的溶液)，将骨修复材料标准品及待检样品中每孔加入1mL新鲜配制的3％BSA-PBS封闭液，37℃孵育2h；
(3)吸取24孔板中的封闭液，用洗液1.5mL/孔，清洗3次；向24孔板中加入鼠抗人BMP-2单克隆抗体工作液，500μl/孔，37℃孵育2h，其中，鼠抗人BMP-2单克隆抗体工作液为用样品稀释液按1∶500的体积比稀释鼠抗人BMP-2单克隆抗体得到的液体；
(4)吸取24孔板中的液体，用洗液1.5mL/孔，清洗3次；
(5)向24孔板中加入Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibodyproduced in rabbit工作液，500μl/孔，37℃孵育2h，其中，Anti-Mouse IgG(wholemolecule)–Peroxidase antibody produced in rabbit工作液为用样品稀释液按1∶8000的体积比稀释Anti-Mouse IgG(whole molecule)–Peroxidase antibody produced inrabbit得到的液体；
(6)吸取24孔板中的液体，用洗液1.5mL/孔，清洗5次；
(7)加入TMB 500μl/孔，反应约10min；
(8)从24孔板吸取溶液转移至96孔板中，100μl/孔；
(9)向96孔板中加入终止液100μl/孔；
(10)酶标仪在450nm波长下进行检测，数据分析。
通过上述骨修复材料标准品建立标准曲线(图3)，标准曲线为y＝0.0053x+0.1462，R2＝0.9965，待检样品中BMP-2的含量两个检测值分别为87.1μg/g和93.8μg/g，平均值为90.5μg/g，标准差为4.7μg/g，回收率(即BMP-2含量检测值与BMP-2含量实际值的比值)为106.4％，精密度为5.2％，说明该方法比较稳定，准确性高，适用于作为常规方法来检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量。使用鼠抗人BMP-2单克隆抗体检测骨修复材料中BMP-2的含量的特异性好，灵敏度高，极大地提高了实验的准确性，对于骨修复材料中BMP-2的结合量及临床使用具有指导意义。
对比例1、利用现有技术检测骨修复材料中BMP-2蛋白的含量
1、不同洗脱液洗脱骨修复材料中BMP-2蛋白
1.1使用PBS进行洗脱
将骨修复材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量为85.0μg/g骨修复材料)置入PBS溶液中，震荡清洗，分别于2h、4h、6h、8h、20h取样，分别采用HPLC及elisa(采用SIGMA的Human BMP2ELISA Kit进行检测，产品编号RAB0028)的方法检测，结果无BMP-2蛋白被洗脱下来，说明活性蛋白BMP-2与骨修复材料结合比较牢固。
1.2使用2M尿素进行蛋白洗脱后检测结果
使用2M尿素水溶液对骨修复材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量为85.0μg/g骨修复材料)进行洗脱，分别于2h、4h、6h、8h、20h进行取样检测，采用HPLC的方法检测，发现仅有不到30％的BMP-2蛋白被洗脱下来，使用2M尿素不能完全将BMP-2洗脱下来，表明仅利用对洗脱液中的BMP-2蛋白含量进行检测无法准确检测骨修复材料中BMP-2含量，而洗脱过程中引入的尿素以及骨修复材料中杂质，对常规方法测定BMP-2蛋白含量造成干扰。
2、利用现有BMP-2抗体检测骨修复材料中BMP-2蛋白的含量
2.1使用Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse检测骨修复材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量为85.0μg/g骨修复材料)中BMP-2蛋白含量
按照实施例1中5.2.3的骨修复材料中BMP-2蛋白含量测定方法，将鼠抗人BMP-2单克隆抗体替换为Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse，其他步骤均不变，进行BMP-2蛋白含量的检测，结果见图4。利用不同骨修复材料中BMP-2蛋白含量下测得的数值得到标准曲线，然而各测得的数值均散落在图4中标准曲线周围，没有很好的落在曲线上，表明利用Monoclonal Anti-BMP2antibody produced in mouse检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量时的特异性差，本底高。
2.2使用市售多克隆抗体检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量
分别使用Santa cruz公司生产的两种抗BMP-2蛋白的Goat polyclonal IgG，货号为SC6895以及SC6895P，以下分别简称SC6895和SC6895P，检测骨修复材料(含活性BMP-2蛋白，BMP-2的含量为85.0μg/g骨修复材料)中BMP-2蛋白含量。
按照实施例1中5.2.3的骨修复材料中BMP-2蛋白含量测定方法，将鼠抗人BMP-2单克隆抗体分别替换为SC6895和SC6895P，其他步骤均不变，进行BMP-2蛋白含量的检测，结果见图5。结果显示，使用SC6895检测时，利用不同骨修复材料中BMP-2蛋白含量下测得的数值得到标准曲线，然而各测得的数值均散落在图5中标准曲线周围，没有很好的落在曲线上，表明利用SC6895检测骨修复材料中BMP-2蛋白含量时的特异性差(R2＝0.7669)，本底高(在0.4附近)；表明利用SC6895检测时的回收率低，结果可靠性不高。使用SC6895P检测时，发现该SC6895P不与BMP-2相结合，无显色。

Claims (10)

1.BMP-2抗体在制备检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量产品中的应用；所述BMP-2抗体为由保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP-2单克隆抗体细胞株44F5分泌的抗体。
2.保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP-2单克隆抗体细胞株44F5在制备检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量产品中的应用。
3.与权利要求1中所述BMP-2抗体相关的生物材料在制备检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量产品中的应用；所述生物材料为B1)至B10)中的任一种：
B1)编码权利要求1中所述BMP-2抗体的核酸分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；
B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；
B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；
B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；
B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；
B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；
B9)含有B1)所述核酸分子的细胞系；
B10)含有B2)所述表达盒的细胞系。
4.权利要求1中所述BMP-2抗体。
5.权利要求3中所述生物材料。
6.保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP-2单克隆抗体细胞株44F5。
7.包括下述P1或P2的产品：
P1、检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量的产品，包括P11、P12和P13：
P11、权利要求1中所述BMP-2抗体；
P12、不含BMP-2的骨修复材料或骨组织；
P13、BMP-2蛋白质；
P2、检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量的产品，包括P21和P22：
P21、权利要求1中所述BMP-2抗体；
P22、含有BMP-2的骨修复材料或骨组织。
8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于：所述产品还包括进行酶联免疫吸附所需的试剂和/或仪器。
9.检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量的方法，包括将权利要求1中所述BMP-2抗体与待测样品进行反应，确定待测样品中BMP-2蛋白含量。
10.下述X1或X2或X3：
X1、权利要求1中所述BMP-2抗体在检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量中的应用；
X2、权利要求3中所述生物材料在检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量中的应用；
X3、保藏编号为CGMCC No.12257的rhBMP-2单克隆抗体细胞株44F5在检测骨修复材料或骨组织中BMP-2蛋白含量中的应用。
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