CN106117279A - 一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法 - Google Patents

Abstract

一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，涉及天然产物的提取分离领域，包括如下步骤：预先在提取装置的分离纯化室加入硅胶；枇杷果核粉末置于成分提取反应室，在溶剂池中加入4～8倍枇杷果核粉末重量的碳酸二甲酯与乙醇混合溶剂，加热搅拌回流，提取多酚类物质；然后将提取液从溶剂池放出，得到多酚类提取液；往溶剂池中注入3～9倍枇杷果核粉末重量的40％～90％的乙醇水溶液，继续加热搅拌回流，提取苦杏仁苷类物质；将提取液从溶剂池放出，得到苦杏仁苷提取液；本发明先后依次提取了多酚类和苦杏仁苷，将分离与提纯集合为一体，工艺简单，纯度高。

Description

一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法

技术领域

本发明涉及天然产物的提取分离领域，具体涉及一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法。

背景技术

枇杷，又名芦橘，金丸、芦枝，是蔷薇科中苹果亚科的一个属，常绿小乔木，因其果实的形状似琵琶而得名，同时枇杷也因其各种功效被称为“果之冠”。枇杷具有丰富的营养价值和极高的医疗价值，枇杷的果实、种子、花、叶均可以入药。中国是最主要的枇杷生产国，主产区为江苏、福建和浙江，栽培面积和产量占世界的2/3以上，果肉部分被拿来鲜食或加工之后，果核一般被当做废弃物丢掉，而枇杷果核约占整个枇杷鲜重的20％，所以枇杷果核的丢弃是对资源的一种浪费。因此，对枇杷核进行深度开发利用，对综合利用枇杷资源，开发新产品，提高枇杷的经济价值，具有十分重要的经济效益和社会效益。

枇杷果核营养丰富，研究表明枇杷核富含淀粉、蛋白质、脂肪酸等营养成分，并含有苦杏仁苷、多酚、三萜类物质、皂苷或水溶性多糖等多种生物活性物质，具有增强免疫功能、抗氧化、抗炎、降血糖等功效。因此，对枇杷果核中苦杏仁苷和多酚类物质的提取具有明显的经济价值与社会效益。

目前，枇杷果核中苦杏仁苷和多酚类物质的提取方法有一些专利和文献报道。一般均是以不同浓度的乙醇或甲醇等亲水性溶剂进行提取，有的还辅之以超声或微波提取。一般提取完还需进一步进行大孔树脂富集和重结晶等过程进行纯化。现有提取方法只提取其中苦杏仁苷或多酚其中一类物质，且提取完后还要进行进行纯化，耗时较长且工艺繁琐。

目前没有同时提取两种生物活性物质的报道。而且，对比多酚类和苦杏仁苷的提取方法可以发现，由于所使用的提取溶剂性质极为相似，往往提取一类物质时会混有大量的另一类物质，这为后续分离和提纯带来相应的困难。因此，寻找一种集成式阶梯提取方法，可以使枇杷果核中多酚类和苦杏仁苷依次被提取和分离纯化出来，对于枇杷果核的综合利用极具经济价值和社会效益。

发明内容

针对现有的枇杷果核中生物活性物质的提取方法只提取一类物质、提取与分离分开进行耗时长且工艺繁琐的缺点，本发明的目的是提供一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，将分离与提纯集合为一体，同时得到高纯度的多酚和苦杏仁苷。

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为，一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，包括如下步骤：

1)预先在提取装置的分离纯化室加入硅胶；

2)将枇杷果核粉末加入成分提取反应室；

3)在溶剂池中加入4～8倍枇杷果核粉末重量的碳酸二甲酯与乙醇混合溶剂，加热搅拌回流2～4小时，提取多酚类物质；然后将提取液从溶剂池放出，得到多酚类物质提取液；

4)往溶剂池中注入3～9倍枇杷果核粉末重量的40％～75％的乙醇水溶液，继续加热搅拌回流2～4小时，提取苦杏仁苷类物质；将提取液从溶剂池放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)将步骤3)得到的多酚类提取液进行浓缩后，往浓缩物中加入0.5～4倍于枇杷果核粉末重量的5％～30％的乙醇水溶液，冷却、析出固体、过滤得到高纯度的多酚类物质；

6)将步骤4)得到的苦杏仁苷提取液进行浓缩后，加入0.5～4倍于枇杷果核粉末重量的5％～40％的乙醇水溶液，调pH值至7，在4～10℃下冷藏、静置析晶，过滤得到高纯度的苦杏仁苷白色晶体。

进一步地，步骤1)中所述硅胶为市面所售100～200目的普通硅胶；所述硅胶的重量为所述枇杷果核粉末重量的1～5倍；所述枇杷果核粉末以漳州云霄出产的新鲜枇杷果核为原料，经水洗、风干、粉碎后过20-30目筛获得。

进一步优选地，在步骤3)之前，在溶剂池中加入2～3倍枇杷果核粉末重量的石油醚或乙醚搅拌回流1～2小时后，弃去提取液。

进一步地，步骤3)中所述碳酸二甲酯与乙醇混合液的重量比(w/w)可为9:1～1:9，在提取过程中，可往溶剂池中加入乙醇调节混合液的极性，如加热回流1小时后将碳酸二甲酯与乙醇混合液的体积调制5:1～1：5，在某些实施方案中，所述碳酸二甲酯与乙醇混合液的重量比(w/w)可为1:1。

所述多酚类物质包括黄酮类和非黄酮类，主要包括绿原酸、没食子酸、咖啡酸、儿茶素、表儿茶酸、单宁酸、阿魏酸等一种或几种化合物；所述多酚类物质的纯度可采用福林酚法分光光度计测定或高效液相色谱法测定，纯度在90％以上，或95％以上。

进一步优选的，步骤4)往溶剂池中注入4～5倍枇杷果核粉末重量的50％～60％的乙醇水溶液。

进一步地，步骤5)所述苦杏仁苷白色晶体的纯度可采用苦杏仁苷标准品分光光度计测定或高效液相色谱法测定，所述高纯度是指苦杏仁苷的含量在99％以上。

本发明采用碳酸二甲酯与乙醇混合液不仅能有效提取多酚类物质，而且改变碳酸二甲酯与乙醇的比例调节混合溶剂极性，恰好能有效地将多酚类物质从硅胶层洗脱下来，而极性更大的苦杏仁苷不被洗脱。当多酚类物质洗脱完毕，改用极性更大的乙醇水溶液进行提取并洗脱，可以顺利将苦杏仁苷洗脱下来。因此，利用不同溶剂极性不同的特点，达到多酚类和苦杏仁苷分别被洗脱下来的目的，这一过程将分离和提纯合并在一起，依次提取了两种生物活性物质。

本发明的优点是：

1)将分离与纯化集合于一体，工艺简单，节时省能；所提取的多酚类物质经过一次结晶或沉淀的纯度高于95％，苦杏仁苷经过一次结晶或沉淀的纯度在99％以上，提取率在90％以上。

2)选择性的在众多活性成分中先后依次提取了多酚类和苦杏仁苷，而极少参杂其他活性成分。

3)所用的提取溶剂为碳酸二甲酯与乙醇混合溶液和乙醇水溶液，无毒无害，符合绿色环保标要求。

说明书附图

图1是本发明所述提取装置的纵向剖面示意图；

图1中，1是常规的水冷式冷凝管；2是水冷式冷凝管1的低位进水口；3是溶剂蒸汽向上输送的溶剂蒸汽输送管的进气室；4是成分提取室，本图所示的成分提取反应室由两个抽屉构成；5是抽屉支撑滑轨；6是分离纯化室，本图所示的成分提取反应室由三个抽屉构成；7是抽屉的面板；8是控制阀门A；9是溶剂回收室；10是检测取样口；11是溶剂添加管；12是用于更换另一种溶剂后溶剂池清洗的进水管；13是加热水浴池；14是位于加热水浴池13内待加热的溶剂池；15是溶剂排出管；16是用于为加热水浴池供热源的蒸汽管；17是水冷式冷凝管1的高位出水口；18是溶剂蒸汽向上输送的溶剂蒸汽输送管；19是控制阀门B；20是用于控制溶剂温度平衡的磁力搅拌器。所述提取装置已在专利ZL200920138048.3公开。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对发明做进一步说明。

实施例1

参见图1：

1)在提取装置的分离纯化室6中加入100g 100-200目硅胶；

2)以漳州云霄出产的新鲜枇杷果核为原料，经水洗、风干、粉碎后过20-30目筛得枇杷果核粉末，将100g枇杷果核粉末置于提取装置的成分提取反应室4中；

3)通过溶剂添加管11在溶剂池14中注入500g碳酸二甲酯与乙醇混合液(重量比1:1)，通入蒸汽对水浴加热池13进行加热至回流，搅拌，开始提取多酚类物质；加热循环回流提取3小时，然后将提取液从溶剂池14放出，得到多酚类提取液；

4)通过溶剂添加管11在溶剂池14中注入500g 60％的乙醇水溶液，加热循环回流提取3小时，然后将提取液从溶剂池14放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)将步骤3)得到的多酚类提取液真空浓缩，往浓缩液加入150g的15％的乙醇水溶液，4～10℃下静置析晶，过滤得到多酚类物质1.6g，采用福林酚法分光光度计测定，多酚类物质的纯度为95.4％；

6)将得到的苦杏仁苷提取液真空浓缩，加入18％的乙醇水溶液溶解，用1MHCl溶液和氢氧化钠溶液调pH值至7，4～10℃下静置析晶，过滤得到苦杏仁苷白色晶体2.0g，提取率为92％，经HPLC测定苦杏仁苷白色晶体的纯度为99.5％。

实施例2

参见图1：

1)在提取装置的分离纯化室6中加入200g 100-200目硅胶；

2)以漳州云霄出产的新鲜枇杷果核为原料，经水洗、风干、粉碎后过20-30目筛得枇杷果核粉末，将300g枇杷果核粉末置于提取装置的成分提取反应室4中；

3)通过溶剂添加管11在溶剂池14中注入500g碳酸二甲酯与乙醇混合液(重量比9:1)，通入蒸汽对水浴加热池13进行加热至回流，搅拌，开始提取多酚类物质；加热循环回流提取1小时后，往溶剂池中加入50g乙醇，继续加热回流2.5小时，然后将提取液从溶剂池14放出，得到多酚类提取液；

4)通过溶剂添加管11在溶剂池14中注入1200g 50％的乙醇水溶液，加热循环回流提取3.5小时，然后将提取液从溶剂池14放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)将步骤3)得到的多酚类提取液真空浓缩，往浓缩液加入400g的20％的乙醇水溶液，冷却至析出固体，4～10℃下冷藏、静置析晶，过滤得到多酚类物质3.6g，采用福林酚法分光光度计测定，多酚类物质的纯度为95.2％；

6)将得到的苦杏仁苷提取液真空浓缩，加入300g 5％乙醇水溶液，用1M HCl溶液和氢氧化钠溶液调pH值至7，4～10℃下冷藏、静置析晶，过滤得到苦杏仁苷白色晶体4.7g，经HPLC测定苦杏仁苷白色晶体的纯度为99.1％。

实施例3

1)在提取装置的分离纯化室6中加入200g 100-200目硅胶；

2)以漳州云霄出产的新鲜枇杷果核为原料，经水洗、风干、粉碎后过20-30目筛得枇杷果核粉末，将300g枇杷果核粉末置于提取装置的成分提取反应室4中；2a)通过溶剂添加管11在溶剂池14中注入400g石油醚，回流搅拌2小时后，将溶剂池中的提取液弃去；

3)通过溶剂添加管11在溶剂池14中注入500g碳酸二甲酯与乙醇混合液(重量比9:1)，通入蒸汽对水浴加热池13进行加热至回流，搅拌，开始提取多酚类物质；加热循环回流提取1小时后，往溶剂池中加入50g乙醇，继续加热回流2.5小时，然后将提取液从溶剂池14放出，得到多酚类提取液；

4)通过溶剂添加管11在溶剂池14中注入1200g 50％的乙醇水溶液，加热循环回流提取3.5小时，然后将提取液从溶剂池14放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)将步骤3)得到的多酚类提取液真空浓缩，往浓缩液加入400g的20％的乙醇水溶液，冷却至析出固体，4～10℃下冷藏、静置析晶，过滤得到多酚类物质3.6g，采用福林酚法分光光度计测定，多酚类物质的纯度为95.2％；

6)将得到的苦杏仁苷提取液真空浓缩，加入300g 5％乙醇水溶液，用1M HCl溶液和氢氧化钠溶液调pH值至7，4～10℃下冷藏、静置析晶，过滤得到苦杏仁苷白色晶体4.6g，经HPLC测定苦杏仁苷白色晶体的纯度为99.5％。

Claims (7)

1.一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，其特征在于包括如下步骤：

1)预先在提取装置的分离纯化室加入硅胶；

2)将枇杷果核粉末加入成分提取反应室；

3)在溶剂池中加入4～8倍枇杷果核粉末重量的碳酸二甲酯与乙醇混合溶剂，加热搅拌回流2～4小时，提取多酚类物质；然后将提取液从溶剂池放出，得到多酚类物质提取液；

4)往溶剂池中注入3～9倍枇杷果核粉末重量的40％～75％的乙醇水溶液，继续加热搅拌回流2～4小时，提取苦杏仁苷类物质；将提取液从溶剂池放出，得到苦杏仁苷提取液；

5)将步骤3)得到的多酚类提取液进行浓缩后，往浓缩物中加入0.5～4倍于枇杷果核粉末重量的5％～30％的乙醇水溶液，冷却、析出固体、过滤得到高纯度的多酚类物质；

6)将步骤4)得到的苦杏仁苷提取液进行浓缩后，加入0.5～4倍于枇杷果核粉末重量的5％～40％的乙醇水溶液，调pH值至7，在4～10℃下冷藏、静置析晶，过滤得到高纯度的苦杏仁苷白色晶体。

2.如权利要求1所述一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，其特征在于步骤1)中所述硅胶为市面所售100～200目的普通硅胶；所述硅胶的重量为所述枇杷果核粉末重量的1～5倍。

3.如权利要求1所述一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，其特征在于：在步骤3)之前，在溶剂池中加入2～3倍枇杷果核粉末重量的石油醚或乙醚搅拌回流1～2小时后，弃去提取液。

4.如权利要求1所述一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，其特征在于步骤3)中所述碳酸二甲酯与乙醇混合溶剂的重量比为9:1～1:9。

5.如权利要求3所述一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，其特征在于步骤3)所述碳酸二甲酯与乙醇混合溶剂的重量比为1:1。

6.如权利要求1所述一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，其特征在于步骤4)往溶剂池中注入4～5倍枇杷果核粉末重量的50％～60％的乙醇水溶液。

7.如权利要求1所述一种枇杷果核中多酚和苦杏仁苷的连续提取方法，其特征在于所述高纯度苦杏仁苷的是指苦杏仁苷的含量在99％以上。