CN106085944B - 一种促进微生物快速生长的培养液及使用方法 - Google Patents

一种促进微生物快速生长的培养液及使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种促进微生物快速生长的培养液及使用方法。将巴氏芽孢杆菌(Bacilluspasteurii)接种于含多种营养物质的培养基中，在25～30℃下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右，培养12～24小时，培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线，观察得到于18小时左右就进入稳定期，相比于前人研究菌种生长速度明显加快；本发明具有可以充分利用培养液中物质，工艺简单，效率高，用时短，环境清洁，成本低廉，同时还提高了微生物诱导碳酸钙的效率，可以缩短混凝土裂缝修补时间等优点。

Description

一种促进微生物快速生长的培养液及使用方法
技术领域
本发明涉及一种培养液的配制方法，特别是涉及一种促进微生物快速生长的培养液的配制方法。
背景技术
生物矿化作用是一种很普遍的自然现象，几乎每一种生物都能合成矿物。其中近三分之二是钙矿，并且相当一部分具有胶结功能。它们通过其自身的生命活动，与周围环境介质之间不断发生着酶化作用，逐渐形成碳酸钙。利用微生物制备碳酸钙具有环境清洁，绿色环保，工艺简单，成本低的优点，该技术得到了广泛的应用。同时巴氏芽孢杆菌是制备碳酸钙的常用菌，但由于其在一般培养条件下需要近48小时才能到达稳定期，因此，用于裂缝修补、混凝土胶结等实际工程中具有耗时较长，效率较低等缺点。
巴氏芽孢杆菌的生长特征与培养液成分、培养温度、PH值、氧气供给等因素有关，可以通过对这些条件进行控制，得到最适宜的培养条件，可以促进菌种快速生长，缩短培养周期，从而提高制备碳酸钙的效率。
发明内容
技术问题：本发明的目的是提供一种利用培养液中的营养成分来促进微生物快速生长的培养液及使用方法。
技术方案：本发明所采用的一种促进微生物快速生长的培养液中加入了酪蛋白胨、豆粉蛋白胨和酵母浸膏三种营养物质，其中，酪蛋白胨、豆粉蛋白胨和酵母浸膏的含量为g/L：酪蛋白胨为13-17g/L，豆粉蛋白胨为4-6g/L，酵母浸膏为5-6g/L，NaCl为4-6g/L，尿素为18-22g/L，琼脂为18-22g/L，余量为蒸馏水。
酪蛋白胨、豆粉蛋白胨在早中期提供氮源、生长因子，酵母浸膏在中后期提供氮源、生长因子，促进微生物快速生长，稳定期减小一半。
本发明的促进微生物快速生长的培养液的使用方法为：将巴氏芽孢杆菌Bacilluspasteurii接种于所述的培养液中，在25～30℃下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右，培养12～24小时，培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线，观察得到于18小时左右就进入稳定期，相比于前人研究菌种生长速度明显加快。
本发明将巴氏芽孢杆菌(Bacillus pasteurii)接种至培养基中，培养基中含有尿素，以其为营养源，可以产生脲酶，不断分解尿素，从而使溶液中的PH值适当的升高，更利于菌体的生长繁殖，同时培养液中含有酪蛋白胨和豆粉蛋白胨，两者为菌种生长提供氮源和碳源，同时两者之间的相互影响可以共同促进菌种生长繁殖，而酵母浸膏在提供氮源和碳源的基础上还能提供无机盐与NaCl相互配合进一步促进细菌生长。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明可以充分利用培养液中的营养物质，相比于前人研究菌种生长速度明显得到加快，观察到于18小时左右就进入了菌种生长的稳定期，而且具有工艺简单，效率高，用时短，环境清洁，成本低廉，同时还提高了后续制备碳酸钙的效率，可以缩短裂缝修补、混凝土胶结的时间等优点。同时在25～30℃下恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右为最优培养条件，培养12～24小时即可进行后续的试验。
附图说明
图1为室温下菌种培养24小时内的生长OD600曲线图。
图2为室温下在只有酪蛋白胨作为营养源的培养液中培养48小时的生长OD600曲线图。
图3为室温下在只有豆粉蛋白胨作为营养源的培养液中培养48小时的生长OD600曲线图。
图4为室温下在只有NaCl提供无机盐的培养液中培养48小时的生长OD600曲线图。
图5为室温下在只有酵母浸膏提供无机盐的培养液中培养48小时的生长OD600曲线图。
具体实施方式
实施案例1
一种促进微生物快速生长的培养液的配制方法，将巴氏芽孢杆菌(Bacilluspasteurii)接种于含多种营养物质的培养基中，在25～30|下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右，培养12～24小时，在培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线，在本实施案例中，恒温振荡的温度可选择25、27或30℃，控制初始PH值为5.5、6或6.5，培养时间可选择12、15、17、20或24小时。此外，本实施例可以只加酪蛋白胨不加豆粉蛋白胨作为主要营养物质；本实施例也可以只加豆粉蛋白胨不加酪蛋白胨作为主要营养物质；本实施例还可以只加NaCl提供无机盐或者只加酵母浸膏提供无机盐。
实施案例2
将巴氏芽孢杆菌(Bacillus pasteurii)接种于含多种营养物质的培养基中(培养基成分如表1所示)，在25～30℃下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右，培养12～24小时，得到浑浊的培养基，24小时后取出菌液在显微镜下观察，在培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线(图1)，观察得到于18小时左右就进入稳定期。
表1培养基成分
实施案例3
将巴氏芽孢杆菌(Bacillus pasteurii)接种于在案例1培养基的基础上只加酪蛋白胨不加豆粉蛋白胨作为主要营养物质的培养基中，在25～30℃下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右，培养48小时，在培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线(图2)，观察得到于40小时左右进入稳定期。
实施案例4
将巴氏芽孢杆菌(Bacillus pasteurii)接种于在案例1培养基的基础上只加豆粉蛋白胨不加酪蛋白胨作为主要营养物质的培养基中，在25～30℃下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右，培养48小时，在培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线(图3)，观察得到于44小时左右进入稳定期。
实施案例5
将巴氏芽孢杆菌(Bacillus pasteurii)接种于在案例1培养基的基础上只用NaCl不加酵母浸膏提供无机盐的培养基中，在25～30|下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右，培养30小时，在培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线(图4)，观察得到于26小时左右进入稳定期。
实施案例6
将巴氏芽孢杆菌(Bacillus pasteurii)接种于在案例1培养基的基础上只用酵母浸膏不加NaCl提供无机盐的培养基中，在25～30℃下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为6左右，培养30小时，在培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线(图5)，观察得到于24小时左右进入稳定期。

Claims (2)

1.一种促进巴氏芽孢杆菌快速生长的培养液，其特征在于该培养液的组成为：
2.一种如权利要求1所述的促进巴氏芽孢杆菌快速生长的培养液的使用方法，其特征在于：将巴氏芽孢杆菌Bacillus pasteurii接种于所述的培养液中，在25～30℃下进行恒温振荡培养，并控制初始PH值为5.5-6.5之间，培养12～24小时，培养过程中每隔两小时取出部分菌液，利用分光光度计测量吸光度OD600，得到菌种生长曲线，观察得到于18小时左右就进入稳定期，相比于其它菌种生长速度明显加快。
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