CN106074703A - 一种用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物组合物，由鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素、厚皮树黄酮组成，具有抑菌、抗病毒、解热、抗炎等作用。用于用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌。

Description

一种用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物组 合物

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体的涉及一种用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物组合物。

背景技术

人乳头瘤病毒是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。表现为寻常疣、生殖器疣(尖锐湿疣)等症状。随着性病中尖锐湿疣的发病率急速上升和宫颈癌、肛门癌等的增多，人乳头瘤病毒(HPV)感染越来越引起人们的关注。皮肤型的HPV人群感染率非常普遍，如上述常见的寻常疣、趾疣、扁平疣等，无法得到具体的感染率，妇科领域越来越关注高危型的HPV感染和外生殖器的低危型HPV感染造成的生殖器疣和宫颈癌，据统计在全球的性病中，HPV感染引起的生殖器疣占15-20％。

关于女性生殖道感染HPV的流行情况，据2003-2004年来自美国的国家健康和营养研究课题的一个调查结果显示，14-59岁的HPV总感染率为26.8％，所以HPV感染在女性造成的负担超出之前的估计。我国的HPV感染的流行病学筛查未见大样本的报告，但是由HPV感染造成的性病中的尖锐湿疣的发病率在迅速上升，估计发病率应该是性病中最多的，因为存在大量的漏报和不报。我国每年约有13.15万新发现的宫颈癌，报告中发病率和死亡率有增加趋势，且宫颈癌发病年龄年轻化，可以预见HPV感染给我国造成的巨大损失。

目前用于治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物很多，包括复方中药制剂和含有单一有效部位的中药制剂。但是，目前大部分的抗炎和抗病毒中药制剂，以复方混合物制剂较多，以有效部位组合而成的组合物制成的制剂较少。造成这种局面的重要原因是依据当前的技术手段，难以从复方药物制剂当中寻找到能够代表全方方剂功效的具体有效成分，以致于很多以从中药当中提取的有效部位为活性成分制备的制剂不能够保留原方的功效，甚至还不如原方混合物制剂的疗效。因此，如何以科学的方法和手段寻找复方药物制剂当中有代表性的有效部位，将其配伍组合，能够保留原方功效，且因活性成分的纯度提高而疗效增加，是目前复方中药制剂研究的重要课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物组合物。

本发明药物组合物的组成按照重量份为：

鸦胆子油50-130、乌药叶黄酮50-130、紫草素50-130、厚皮树黄酮50-130。

本发明上述药物组合物的优选配比为：

鸦胆子油80-110、乌药叶黄酮80-110、紫草素80-110、厚皮树黄酮80-110。

本发明上述药物组合物的优选配比为：

鸦胆子油100、乌药叶黄酮100、紫草素100、厚皮树黄酮100。

本发明的药物组合物按照常规的制剂工艺，可以制备成常用的药物剂型，如、凝胶剂、片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂等。本发明药物制剂当中可以含有常用的赋形剂，例如，填充剂、崩解剂、润滑剂、调味剂、稀释剂、粘合剂等。

本发明用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物凝胶剂的制备方法如下：

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素和厚皮树黄酮加入适量溶解好的卡波姆溶液中，85℃搅拌溶解，降温即得凝胶剂。

本发明用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物胶囊剂的制备方法如下：

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素和厚皮树黄酮加入适量淀粉制粒，85℃干燥后，装胶囊即得。

本发明用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物颗粒剂的制备方法是：

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素和厚皮树黄酮加入适量淀粉制粒，85℃干燥后，即得颗粒剂。

本发明用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物片剂的制备方法是：

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素和厚皮树黄酮加入适量淀粉制粒，85℃干燥后，打片即得。

本发明原料药的生产工艺包括：

鸦胆子油生产工艺

选适量鸦胆子果实粉碎成粗粉，将所述粗粉用石油醚提取，提取液回收石油醚得鸦胆子粗油，再将所得鸦胆子粗油加热后加入重量为所述鸦胆子粗油体积的1～15％经干燥的活性炭，搅拌充分后减压抽提得黄色粗油，其特征在于再将所述黄色粗油用重量为所述黄色粗油体积的2～10％经干燥的高岭土，搅拌充分后减压抽提得鸦胆子油；再将上步得到的鸦胆子油在90～120℃条件下减压通氮0.5～2小时，得鸦胆子油。

乌药叶黄酮生产工艺

包含以下步骤：

(1)将乌药叶药材粉碎成粗粉，加水浸泡，所用的提取液水的用量是所用药材的重量的10-100倍，浸泡时间是1-24小时，煎煮提取1-10次，每次0.2-2小时，过滤、冷却、合并提取液；

(2)将步骤(1)中的提取液过大孔树脂或聚酰胺柱，用10％～95％(重量)的乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥干去溶剂后蒸干得到乌药叶总黄酮浸膏。

紫草素生产工艺

取紫草根粉，按溶剂与紫草粉的体积重量比(L/kg)10:1用正己烷回流提取2-3次，每次1-3小时，过滤。提取液回收部分溶剂。用0.6M的NaOH溶液萃取，碱溶液与石油醚提取物溶液的体积比为1:1，静置、分离出碱层溶液。用稀硫酸酸化碱溶液萃取物至pH 1～2，有沉淀析出，静置，抽滤，蒸馏水洗沉淀至中性，于50℃减压干燥得紫草素。

厚皮树黄酮生产工艺

将厚皮树树皮粉碎至40-100目，以固液比1∶6-1∶30加入碱性稀醇浸泡后，用频率2450MHz，功率为100-750W的微波照射5-30分钟，再在水浴中回流浸提0.5-1.5h，过滤，同法操作重复2-4次，合并提取液，离子交换树脂交换，下注液减压浓缩蒸干，用硅胶与聚酰胺混合柱层析法分离洗脱，洗脱剂为不同浓度乙醇，减压浓缩干燥得到厚皮树总黄酮产品。

鸦胆子又名老鸦胆、苦参子，始载于清代赵学敏所著的《本草纲目拾遗》，味苦、有毒，为苦木科植物鸦胆子Brucea javanica(L.)Merr.的干燥成熟果实。产于我国的广东、湖南、广西、福建等地，主要功能为清热、躁湿、杀虫、解毒、腐蚀赘疣。鸦胆子所含成分可分为水溶性和脂溶性(鸦胆子油)两部分。水溶性成分主要为一系列的四环三萜类化合物，有毒。鸦胆子油含有三油酸甘油酯(水解后的产物为油酸)，其他类型的结合脂肪酸以及非酯化部分(包括油酸、亚油酸、亚麻酸、硬脂酸、棕榈酸、豆蔻酸、山嵛酸、花生烯酸等)。其中，油酸、亚油酸被认为是主要有效成分。大量的临床验证发现鸦胆子油抗癌谱广，适用于肺癌、转移性脑瘤、肝癌、消化道肿瘤、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤等多种恶性肿瘤。而且，鸦胆子油还可用于治疗胃炎、结肠炎、消化道溃疡、尖锐湿疣、前列腺增生、子宫内膜异位症及降血脂等非肿瘤疾病。

乌药为樟科山胡椒属植物乌药的膨大块根，具有温中散寒理气止痛的功效研究发现乌药的化学成分复杂，含丰富的呋喃倍半萜及其内酯黄酮挥发油等，具有抗病毒抑菌抗肿瘤抗炎镇痛调节凝血功能等诸多药理作用，其外用可使局部血管扩张，缓和肌肉痉挛性疼痛。

紫草为紫草科新疆紫草或内蒙紫草的干燥根。性味甘、咸、寒，归心、肝经。具有凉血活血、活血解毒、透疹消斑之功效。常用于血热毒盛，斑疹紫黑，麻疹不透，疮疡，湿疹，水火烫伤。

厚皮树属植物作为民间药物用途广泛，可治疗象皮病、麻风病、溃疡、牙痛、口腔疾病、褥疮、心脏疾病、痢疾、痛风、风湿病、阴道烦恼、阳痿等。厚皮树是海南岛盛产的药用植物，据《全展选编·内科》记载，厚皮树树皮可以治骨折，也可以解毒，用于河豚鱼中毒、木薯中毒、地菠萝中毒；五指山黎族地区用其来治疗胃炎、肠炎，白带过多。

本发明药物具有抑菌、抗病毒、解热、抗炎等作用。用于用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌。

因此，本发明还要求保护本发明所述药物组合物在制备预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌药物中的应用。

具体实施方式

鸦胆子油生产工艺

原料：鸦胆子果实；石油醚60℃～90℃AR

活性炭(药用；160℃烘烤1h)

高岭土(医药级；160℃烘烤1h)

(1)粉碎：选用成熟、干燥的鸦胆子果实剪除茎梗杂质，粉碎成粗粉(20目筛)，称取粗粉25Kg，

(2)石油醚萃取：加入石油醚200L，在密闭容器中浸泡9小时(每小时充分搅拌2次)，过滤，收集滤液，鸦胆子残渣中加石油醚150L，密闭容器浸泡9小时，(每小时充分搅拌2次)，收集滤液，合并两次滤液待用；

(3)粗油制备：蒸馏步骤(2)所得滤液，加热回收石油醚，直到无液滴流出为止，得墨绿色鸦胆子粗油10L；

(4)精制：将步骤(3)所得墨绿色鸦胆子粗油加热至82±1℃，再加入经干燥的活性炭0.4Kg，搅拌充分后减压抽提得黄色粗油8.8L，将得到的粗油加热至82±1℃，加入干燥的高岭土0.57Kg，搅拌充分后减压抽提得鸦胆子油7.48L；

(5)纯化：将上步得到的鸦胆子油再在115℃条件下700mmHg减压通氮1小时，得纯鸦胆子油体积7.1L，称重6.5Kg，总收率26％制得纯鸦胆子油在充氮条件下装瓶。

乌药叶黄酮生产工艺

将乌药叶药材粉碎成粗粉，用药材重量25倍的水煎煮提取2次，每次1小时，过滤，冷却，合并提取液。提取液过聚酰胺柱，用70％乙醇洗脱，洗脱液挥去溶剂后蒸干。得乌药叶总黄酮浸膏。

紫草素生产工艺

取紫草根粉，按溶剂与紫草粉的体积重量比(L/kg)10:1用正己烷回流提取3次，每次2小时，过滤。提取液回收部分溶剂。用0.6M的NaOH溶液萃取，碱溶液与石油醚提取物溶液的体积比为1:1，静置、分离出碱层溶液。用稀硫酸酸化碱溶液萃取物至pH 2，有沉淀析出，静置，抽滤，蒸馏水洗沉淀至中性，于50℃减压干燥得紫草素。

厚皮树黄酮生产工艺

将厚皮树树皮粉碎至80目，以固液比1∶10加入碱性稀醇浸泡后，用频率2450MHz，功率为500W的微波照射20分钟，再在水浴中回流浸提1h，过滤，同法操作重复3次，合并提取液，离子交换树脂交换，下注液减压浓缩蒸干，用硅胶与聚酰胺混合柱层析法分离洗脱，洗脱剂为不同浓度乙醇，减压浓缩干燥得到厚皮树总黄酮产品。

实施例1

鸦胆子油50、乌药叶黄酮50、紫草素50、厚皮树黄酮50。

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素和厚皮树黄酮加入适量溶解好的卡波姆溶液中，85℃搅拌溶解，降温即得凝胶剂。

实施例2

鸦胆子油130、乌药叶黄酮130、紫草素130、厚皮树黄酮130。

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素、厚皮树黄酮加入适量淀粉制粒，85℃干燥后，打片即得。

实施例3

鸦胆子油100、乌药叶黄酮100、紫草素100、厚皮树黄酮100。

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素、厚皮树黄酮加入适量淀粉制粒，85℃干燥后，打片即得。

实施例4

鸦胆子油80、乌药叶黄酮80、紫草素80、厚皮树黄酮80。

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素、厚皮树黄酮加入适量淀粉制粒，85℃干燥后，装胶囊即得。

实施例5

鸦胆子油110、乌药叶黄酮110、紫草素110、厚皮树黄酮110。

取上述处方量的鸦胆子油、乌药叶黄酮、紫草素、厚皮树黄酮加入适量淀粉制粒，85℃干燥后，打片即得。

本发明对细菌的影响药效试验资料

药物与试剂：按上述实施例3制备本发明，规格：4g生药/g，头孢氨苄胶囊(哈尔滨药业集团三精制药有限公司，批号：1301072)。

菌种：溶血性乙型链球菌、金黄色葡萄球菌，由江苏省人民医院微生物室临床分离培养提供。4.5％胃膜素悬液的配制：称取胃膜素(上海市食品制药厂，批号：100808)5g，放于研钵内，加少量生理盐水研磨，随磨随加水，最后加至100ml，于68.95kPa(10磅)加压灭菌10min,用时调整pH值至7.0。

方法与结果

分组：小鼠随机分为5组，每组20只，空白对照组(等容积生理盐水)，头孢氨苄胶囊(0.2g/kg)，本发明高(16.38g生药/kg)、中(8.19g生药/kg)、低(2.73g生药/kg)三个剂量组。

方法：菌液的制备：将溶血性乙型链球菌菌种接种至含20％小牛血清的液体培养基；金黄色葡萄球菌接种于营养肉汤培养基试管内，37℃孵育箱内培养，将培养18小时的菌液用5％胃膜素悬液以10倍顺序依次稀释为10-1、10-2、10-3、10-4等不同浓度的菌液做预试验，取预试验时致小鼠死亡率达80％的菌液浓度乙型链球菌10-2、金黄色葡萄球菌10-1进行试验。各组小鼠分别灌胃给药，连续5天，第3天给药后1h给各组小鼠腹腔注射菌液，每只0.5ml(活菌计数溶血性乙型链球菌为284×108个/ml，金黄色葡萄球菌为345×108个/ml)。观察1周内各组的动物死亡情况，计算死亡率。

结果：

对腹腔感染溶血性乙型链球菌小鼠死亡率的影响：对照组死亡率为95％，头孢氨苄组死亡率为0，高剂量组死亡率为20％，中剂量组死亡率为30％，低剂量组死亡率为80％，结果表明本发明高、中剂量和阳性药均能减少腹腔注射溶血性乙型链球菌引起的小鼠死亡只数，其死亡率较对照组明显下降，差异均有高度显著性。

对腹腔感染金黄色葡萄球菌小鼠死亡率的影响：对照组死亡率为85％，头孢氨苄组死亡率为0，高剂量组死亡率为10％，中剂量组死亡率为20％，低剂量组死亡率为70％，结果表明头孢氨苄胶囊和本发明高、中剂量有减少金黄色葡萄球菌引起的小鼠死亡只数，其死亡率较对照组明显下降，差异有高度显著性，本发明低剂量虽然也能使小鼠死亡率下降，但与对照组比较差异无显著性。

结论：本发明高、中剂量对腹腔感染溶血性乙型链球菌和金黄色葡萄球菌小鼠均有保护作用，可明显降低其死亡率，增加存活只数，与对照组比较差异均有显著性。提示本发明有一定的抗感染作用。

实施例3所得组合物临床应用：

在6所医院筛选180例患者，平均年龄32.4岁，实验之前2周，对该人群进行连续观察，记录症状及其变化，随机分为两组，实验组和对照组，实验组使用本发明实施例3所得产品，对照组使用中国专利201010132748.9实施例1。使用方法为:每天1次，7天一个疗程。疗效情况判定标准:治愈:使用本品一个疗程，外阴瘙痒缓解，不适症状完全消失；有效：使用本品一个疗程，不适症状减轻或部分消失；无效：使用本品一个疗程，不适症状无变化。结果如表1所示。

表1:实施例3所得产品效果验证

	实验组	对照组
			例数	100	80
临床治愈例数	74	22
			有效例数	23	34
无效例数	3	24
			总有效率	97％	70％

治疗效果：治愈74例(74％)，有效23例(23％)，无效3例(3％)，总有效率97％。效果明显优于对照组。

使用期间自感症状变化如表2所示：

表2

由表2可知，使用4天，56％以上的患者症状改善，外阴瘙痒减轻，白带减少；使用6天，75％以上的患者白带减少，异味、血丝消失；使用8天，96％以上的患者外阴瘙痒减轻，白带减少，不适症状改善，部分患者自感痊愈。实验组中使用8天，有效率可达96％，对照组仅为76％。

以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (10)

1.一种用于预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌的药物组物技术领域，其特征在于，该组合物含有下述重量比的组分：鸦胆子油50-130、乌药叶黄酮50-130、紫草素50-130、厚皮树黄酮50-130。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，该组合物含有下述重量比的组分：鸦胆子油80-110、乌药叶黄酮80-110、紫草素80-110、厚皮树黄酮80-110。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，该组合物含有下述重量比的组分：鸦胆子油100、乌药叶黄酮100、紫草素100、厚皮树黄酮100。

4.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述鸦胆子油制备方法如下：选适量鸦胆子果实粉碎成粗粉，将所述粗粉用石油醚提取，提取液回收石油醚得鸦胆子粗油，再将所得鸦胆子粗油加热后加入重量为所述鸦胆子粗油体积的1～15％经干燥的活性炭，搅拌充分后减压抽提得黄色粗油，其特征在于再将所述黄色粗油用重量为所述黄色粗油体积的2～10％经干燥的高岭土，搅拌充分后减压抽提得鸦胆子油；再将上步得到的鸦胆子油在90～120℃条件下减压通氮0.5～2小时，得鸦胆子油。

5.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述乌药叶黄酮制备方法如下：(1)将乌药叶药材粉碎成粗粉，加水浸泡，所用的提取液水的用量是所用药材的重量的10-100倍，浸泡时间是1-24小时，煎煮提取1-10次，每次0.2-2小时，过滤、冷却、合并提取液；

(2)将步骤(1)中的提取液过大孔树脂或聚酰胺柱，用10％～95％(重量)的乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥干去溶剂后蒸干得到乌药叶总黄酮浸膏。

6.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述紫草素制备方法如下：取紫草根粉，按溶剂与紫草粉的体积重量比(L/kg)10:1用正己烷回流提取2-3次，每次1-3小时，过滤。提取液回收部分溶剂。用0.6M的NaOH溶液萃取，碱溶液与石油醚提取物溶液的体积比为1:1，静置、分离出碱层溶液。用稀硫酸酸化碱溶液萃取物至pH 1～2，有沉淀析出，静置，抽滤，蒸馏水洗沉淀至中性，于50℃减压干燥得紫草素。

7.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物，其特征在于，厚皮树黄酮制备方法如下：将厚皮树树皮粉碎至40-100目，以固液比1∶6-1∶30加入碱性稀醇浸泡后，用频率2450MHz，功率为100-750W的微波照射5-30分钟，再在水浴中回流浸提0.5-1.5h，过滤，同法操作重复2-4次，合并提取液，离子交换树脂交换，下注液减压浓缩蒸干，用硅胶与聚酰胺混合柱层析法分离洗脱，洗脱剂为不同浓度乙醇，减压浓缩干燥得到厚皮树总黄酮产品。

8.根据权利要求1-7任一项所述的药物组合物，其特征在于，还含有药物赋形剂。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，该药物的剂型是凝胶剂、片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或者注射剂当中的一种。

10.根据权利要求1-9任一项所述的药物组合物制备预防和治疗人乳头瘤病毒感染和宫颈癌药物中的应用。