CN106074557B - D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用 - Google Patents

D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106074557B
CN106074557B CN201610411428.4A CN201610411428A CN106074557B CN 106074557 B CN106074557 B CN 106074557B CN 201610411428 A CN201610411428 A CN 201610411428A CN 106074557 B CN106074557 B CN 106074557B
Authority
CN
China
Prior art keywords
alanine
guanine
liver cancer
type
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201610411428.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106074557A (zh
Inventor
徐存拴
丁一
孟竺
徐霆
赵茜怡
杨刚刚
张全义
史世会
吕中原
王绪洋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
HENAN XINXING HUA XING PHARMACEUTICAL FACTORY
Henan Normal University
Original Assignee
HENAN XINXING HUA XING PHARMACEUTICAL FACTORY
Henan Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by HENAN XINXING HUA XING PHARMACEUTICAL FACTORY, Henan Normal University filed Critical HENAN XINXING HUA XING PHARMACEUTICAL FACTORY
Priority to CN201610411428.4A priority Critical patent/CN106074557B/zh
Publication of CN106074557A publication Critical patent/CN106074557A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106074557B publication Critical patent/CN106074557B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A61K31/522—Purines, e.g. adenine having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. hypoxanthine, guanine, acyclovir

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗癌药物中的应用，属于药物新用途技术领域。其中D型鸟嘌呤丙氨酸的化学结构式，并且具体公开了该D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用。本发明制得的D型鸟嘌呤丙氨酸对肝癌细胞具有显著的抑制作用，可用于抗肝癌药物的开发，也可以考虑用于作为化疗辅助药物，从而为改善肝癌等恶性肿瘤的临床治疗提供一种新的有效的治疗方法，具有良好的开发应用前景。

Description

D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用
技术领域
本发明属于药物新用途技术领域，具体涉及D型鸟嘌呤丙氨酸的新用途，即D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用。
背景技术
恶性肿瘤一直是危害人类健康的严重问题之一，其原因是细胞内原癌基因和抑癌基因表达失控的结果，一般都会经历一段漫长的致病过程。细胞内癌基因表达失调，使细胞不受控制地生长和繁殖，并且能够随机体体液运输转移。细胞凋亡机制对保持自身平衡十分重要，肿瘤的生长速率很难控制，这与凋亡能力的减弱和增殖能力的提升密切相关。
肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球性第五大常见肿瘤，具有预后恶劣和死亡率高等特点，严重威胁人类的生命与健康。尽管近年来随着影像诊断与手术技术的不断进步以及以索拉非尼为代表的肝癌靶向治疗药物的面世，为肝癌的早期诊断与治疗提供了可能与更多且更有效的治疗选择，使肝癌的治疗水平得到了一定的提高。然而，综观目前肝癌临床治疗现状，现今尚缺乏真正有效且副作用少的肝癌治疗药物，肝癌术后复发转移率仍高居不下，术后5年生存率仍徘徊在30％左右，严重制约了肝癌总体治疗水平的提高，无法使之得到根本性的改善。
目前对恶性肿瘤的治疗方法中，化疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一。随着化疗药的广泛使用以及随之而来的多药抗性现象的出现，肿瘤对化疗药物的敏感性越来越低，某些化疗药的抗肿瘤作用日益下降，导致患者的救治率进一步降低。有鉴于此，目前亟待开发特异性靶向的能够抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡的药物。目前临床上用于治疗肝癌的化疗药物毒副作用较大。因此，研制和开发新型高效低毒的抗肝癌药物已经成为治疗和攻克癌症的新希望。
发明内容
本发明的目的是提供D型鸟嘌呤丙氨酸的新用途，即D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用。
本发明的技术方案为，D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用，其中D型鸟嘌呤丙氨酸的化学结构式
进一步优选，所述的D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用。
进一步优选，所述的药物为化疗辅助药物。
进一步优选，所述的D型鸟嘌呤丙氨酸的具体合成过程为：
(1)导入氨基保护基的D-丝氨酸在偶氮二羧酸二乙酯和三苯基膦的作用下被亲核试剂取代，同时与羟基所连的碳原子构型发生瓦尔登翻转生成N-(叔-丁氧羰基)-D-丝氨酸-内酯；
(2)在有机碱催化剂的作用下，2-氨基-6-氯嘌呤与N-(叔-丁氧羰基)-D-丝氨酸-内酯化合反应生成鸟嘌呤的丙氨酸衍生物；
(3)将步骤(2)反应所得产物脱去氨基保护基，经过滤，洗涤，干燥得到D型鸟嘌呤丙氨酸。
进一步优选，步骤(1)中的氨基保护基为芐氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)、芴甲氧基(Fmoc)、烯丙氧羰基(Alloc)、三甲基硅乙氧羰基(Teoc)、甲氧羰基或乙氧羰基。
进一步优选，步骤(2)中的有机碱催化剂为1,8-二氮杂二环(5,4,0)-7-烯(DBU)或四甲基胍(TMG)。
本发明用MTT方法检测D型鸟嘌呤丙氨酸对BRL-3A和RH35成活的影响，结果表明受D型鸟嘌呤丙氨酸处理的RH35的活性比对照下降65％，受处理的BRl-3A活性比对照下降30％，统计分析表明D型鸟嘌呤丙氨酸对RH35的活性有明显的抑制作用，而对BRL-3A活性的抑制作用不显著。
用不同浓度的D型鸟嘌呤丙氨酸(2-8mmol/L)分别处理BRL-3A和RH35细胞48h后，用酶联免疫检测仪在570nm波长下测定吸光度值(OD)，并计算出细胞增殖抑制率。经测定，D型鸟嘌呤丙氨酸在浓度为1-8mmol/L之间对BRL-3A细胞生长具有显著的抑制作用，且这种抑制作用呈剂量依赖关系。
用SPSS软件分析D型鸟嘌呤丙氨酸的半致死量表明D型鸟嘌呤丙氨酸对RH35的半致死量为2.3mM，对BRL-3A的半致死量为15mM(如图1所示)，结果表明D型鸟嘌呤丙氨酸对肝癌细胞有较高的毒性和选择性。
本发明制得的D型鸟嘌呤丙氨酸对肝癌细胞具有显著的抑制作用，可用于抗肝癌药物的开发，也可以考虑用于作为化疗辅助药物，从而为改善肝癌等恶性肿瘤的临床治疗提供一种新的有效的治疗方法，具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1是本发明D型鸟嘌呤丙氨酸对细胞的毒性作用曲线；
图2是本发明D型鸟嘌呤丙氨酸对细胞周期的影响曲线，其中A为D型鸟嘌呤丙氨酸处理的BRL-3A细胞，B为对照BRL-3A细胞，C为D型鸟嘌呤丙氨酸处理的RH35细胞，D为对照RH35细胞；
图3是本发明D型鸟嘌呤丙氨酸对细胞调亡的影响曲线，其中A为D型鸟嘌呤丙氨酸处理的BRL-3A细胞，B为对照BRL-3A细胞，C为D型鸟嘌呤丙氨酸处理的RH35细胞，D为对照RH35细胞；
图4是本发明D型鸟嘌呤丙氨酸对CCND1、BAX和BCL2表达的影响曲线。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
D型鸟嘌呤丙氨酸的合成
步骤1)合成N-(叔-丁氧羰基)-D-丝氨酸-内酯2：在三苯基膦(Ph3P)(6.3g，24.00mmol)中逐滴加入无水四氢呋喃(THF)(100mL)，在-78℃氩气氛围下，搅拌超过10min，再逐滴加入偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)，搅拌10min。在N-(叔-丁氧羰基)-D-丝氨酸(5g，24.36mmol)中逐滴加入上述四氢呋喃混合溶液，搅拌超过20min。得到的溶液在-78℃条件下搅拌20min。然后常温条件下进一步搅拌2.5h。除去溶剂，用层析柱(洗脱液为体积比为3:1的乙烷和乙酸乙酯)纯化粗制品。最后在乙酸乙酯/正已烷中重结晶进一步纯化，得到白色固体化合物2(2.4g，产率53％)。
步骤2)合成N-Boc-β-(2-氨基-6-氯-9-嘌呤)-D-丙氨酸3：在二氮杂二环(DBU)(0.43g，2.85mmol)中加入2-氨基-6-氯嘌呤(化合物5)(10.55g，3.35mmol)的二甲基甲酰胺(DMF)(10mL)悬浮液。15min后加入化合物2(0.5g，2.6mmol)溶解在上述反应液中，室温搅拌3h。反应完成后在真空条件下除去溶剂，用硅胶层析柱进行纯化(洗脱液为体积比乙酸乙酯/甲醇/冰乙酸＝9:1:0.1的混合溶液)获得白色固体产物3(0.58g，产率63％)。
步骤3)合成D型鸟嘌呤丙氨酸4：把化合物3(0.3g，0.6mmol)加入到TFA/H2O混合溶液(TFA与H2O的体积比为3:1，4mL)中搅拌48h。反应完成后，加入甲苯，再使溶液蒸发。通过溶剂法(盐酸摩尔浓度为1mol/L)进行反离子交换。将得到的沉淀物过滤，再用乙醚洗涤得到白色固体D型鸟嘌呤丙氨酸4(90mg，产率40％)。
D型鸟嘌呤丙氨酸的合成路线如下：
实施例2
细胞培养：配制含10％的胎牛血清、100mg/L的链霉素和1×105U/L青霉素的完全培养液于37℃、饱和湿度、含体积分数5％的CO2的培养箱中进行培养。
实施例3
MTT检测：采用MTT(四唑盐)比色法。将对数生长期的大鼠正常肝细胞BRL-3A和大鼠肝癌细胞RH35调整浓度至1×104个/mL，接种于96孔板，每孔100μL，于孵箱中培养24h；加入终浓度分别为0、1、2、3、4、6、8mmol/L的D型鸟嘌呤丙氨酸，每孔100μL，并设空白对照，每组设5个复孔；作用48h后，每孔加入MTT 20μL，继续培养4h，离心弃去孔内液体，每孔加入150μL DMSO，振荡10min。用酶联免疫检测仪在570nm处测定各孔的吸光度(A)值，并计算抑制率。抑制率(％)＝(1-实验组A570值/对照组A570值)×100％。
实验结果表明受4mmol/L的D型鸟嘌呤丙氨酸处理的RH35的活性比对照下降65％，BRl-3A活性比对照组下降30％，统计分析表明D型鸟嘌呤丙氨酸对RH35活性的抑制作用明显，而对BRL-3活性的抑制作用差异不显著，其作用效果受试剂剂量的线性影响(结果见表1)。
表1DMTT法检测的D型鸟嘌呤丙氨酸作用
实施例4
流式细胞术检测细胞周期：用胰酶消化收集，经0、1、2、3、4、6、8mmol/L的D型鸟嘌呤丙氨酸作用48h的BRL-3A和RH35细胞。用10mM PBS洗涤细胞两次，弃去上清，向其中按体积比为1:3的比例加入PBS和无水乙醇，充分混匀，于4℃固定18h后离心收集细胞，用预冷的PBS洗涤细胞2次，向悬液中加入500μL PI染液，再加入RnaseA(使其终浓度为0.25mg/mL)，于37℃避光孵育30min后进行流式细胞仪的上机检测。结果表明D型鸟嘌呤丙氨酸处理RH35后，G0/G1期细胞比对照下降39％，处理BRL-3A后，G0/G1期细胞比对照下降37％。统计分析表明D型鸟嘌呤丙氨酸对两种细胞周期有显著影响(p≤0.05)。分析D型鸟嘌呤丙氨酸影响两种细胞周期的具体时间表明D型鸟嘌呤丙氨酸主要抑制细胞G0/G1期进程(如图2所示)。
实施例5
Annexin V-FITC/7-AAD法检测细胞凋亡：取对数生长期细胞接种于6孔板，每孔2×105个细胞，孵育24h后，更换含4mM D型鸟嘌呤丙氨酸的完全培养液。培养48h，胰酶消化收集细胞，预冷PBS洗两遍，用Binding buffer重悬并调整细胞密度至(0.25×107)-(1.0×107)个细胞/毫升，取100μL细胞悬液加入5μL Annexin V-FITC混匀后加入5μL 7-AAD混匀，室温避光反应5-10min，样品补加Binding buffer至500μL，1h内用流式细胞仪检测细胞凋亡，数据用Flowjo软件分析。结果表明D型鸟嘌呤丙氨酸处理RH35后，细胞凋亡率比对照上升35％，处理BRL-3A后，细胞凋亡率比对照上升0.5％。统计分析表明D型鸟嘌呤丙氨酸化合物诱导肝癌细胞凋亡的作用显著(p≤0.05)(如图3所示)。
实施例6
实时定量PCR检测基因表达变化：BRL-3A和RH35细胞经0、1、2、3、4、6、8mmol/L的D型鸟嘌呤丙氨酸作用48h后提取总RNA，并反转录成cDNA。反应体系为25μL Hotstart Fluo-PCR mix、21μL ddH2O、2μL cDNA和上下游引物各1μL(用Primer 5.0进行引物设计)。结果表明D型鸟嘌呤丙氨酸处理RH35后，它们的CCND1、BAX和BCL2表达依次比对照上升138％、351％和939％，处理BRL-3A后，它们的CCND1、BAX和BCL2表达依次比对照上升19％、23％和28％(如图4所示)。通过PCR检测，结果表明同样用药物处理的情况下，大鼠正常肝细胞BRL-3A与细胞凋亡有关的CCND1、BAX和BCL2三种基因的表达与对照组无明显差别，而大鼠肝癌细胞PH35这三种基因的表达量明显增高，说明药物对癌细胞有选择性地诱导凋亡的作用。
以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。

Claims (4)

1.D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用，其中D型鸟嘌呤丙氨酸的化学结构式为
2.根据权利要求1所述的D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：所述的药物为化疗辅助药物。
3.根据权利要求1所述的D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于所述的D型鸟嘌呤丙氨酸的具体合成过程为：
(1)导入氨基保护基的D-丝氨酸在偶氮二羧酸二乙酯和三苯基膦的作用下被亲核试剂取代，同时与羟基所连的碳原子构型发生瓦尔登翻转生成N-(叔-丁氧羰基)-D-丝氨酸-内酯；
(2)在有机碱催化剂的作用下，2-氨基-6-氯嘌呤与N-(叔-丁氧羰基)-D-丝氨酸-内酯化合反应生成鸟嘌呤的丙氨酸衍生物；
(3)将步骤(2)反应所得产物脱去氨基保护基，经过滤，洗涤，干燥得到D型鸟嘌呤丙氨酸。
4.根据权利要求3所述的D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用，其特征在于：步骤(2)中的有机碱催化剂为1,8-二氮杂二环(5,4,0)-7-烯或四甲基胍。
CN201610411428.4A 2016-06-14 2016-06-14 D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用 Expired - Fee Related CN106074557B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610411428.4A CN106074557B (zh) 2016-06-14 2016-06-14 D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610411428.4A CN106074557B (zh) 2016-06-14 2016-06-14 D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106074557A CN106074557A (zh) 2016-11-09
CN106074557B true CN106074557B (zh) 2019-07-05

Family

ID=57845288

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610411428.4A Expired - Fee Related CN106074557B (zh) 2016-06-14 2016-06-14 D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106074557B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107365352A (zh) * 2017-07-26 2017-11-21 河南师范大学 一种新型含9‑腺嘌呤丙氨酸的三肽化合物及其制备方法和应用
CN107686505A (zh) * 2017-07-26 2018-02-13 河南师范大学 一种新型含1‑尿嘧啶丙氨酸的三肽化合物及其制备方法和应用
CN110384703A (zh) * 2019-07-19 2019-10-29 湖南大学 基于6-硫鸟嘌呤的金属-药物配位纳米药物及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103012405A (zh) * 2013-01-17 2013-04-03 苏春华 一种腺嘌呤类新化合物
CN103467550A (zh) * 2013-09-22 2013-12-25 河南师范大学 5-环己基阿糖尿苷、制备方法及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103012405A (zh) * 2013-01-17 2013-04-03 苏春华 一种腺嘌呤类新化合物
CN103467550A (zh) * 2013-09-22 2013-12-25 河南师范大学 5-环己基阿糖尿苷、制备方法及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Nucleo amino acids as arginine mimetics in cyclic peptides;Katrin B. Lorenz等;《Letters in Peptide Science,》;20031231;第10卷;第111–117页
鸟嘌呤-L-丙氨酸衍生物的合成及缓蚀性能;古户波等;《应用化工》;20140831;第43卷(第8期);第1423-1427页

Also Published As

Publication number Publication date
CN106074557A (zh) 2016-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105198921B (zh) 一种2-羰基-2-苯基乙酸水杨酰腙二丁基锡配合物及其制备方法和应用
CN106074557B (zh) D型鸟嘌呤丙氨酸在制备抗肝癌药物中的应用
CN105061315B (zh) 一类1,5‑二苯基吡唑‑3‑羧酸类化合物及其应用
Xu et al. Synthesis, characterization, crystal structure, and biological activity of the copper complex
CN116514777B (zh) 驱动蛋白kif18a抑制剂及其应用
CN101307038B (zh) 4-苄基哌连乙亚胺酰(亚胺甲基苯)肼类化合物、其制备方法、药物组合物和用途
CN101967142A (zh) 噻唑酰胺类化合物及其在治疗恶性肿瘤中的药物用途
CN107669686A (zh) 毛蕊异黄酮衍生物在制备治疗er阴性乳腺癌药物中的应用
CN106074556B (zh) L型胞嘧啶丙氨酸在制备抗癌药物中的应用
CN109810113A (zh) 一种生物碱化合物及其制备方法与应用
CN113402565B (zh) 一类含有泊沙康唑的四价铂配合物、制备方法及其应用
CN112245425B (zh) 一种异吲哚啉酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途
CN109705158B (zh) 一种独立双中心Ag配合物及其制备方法和抗癌活性评价
CN112812109B (zh) 化合物DaP-01及其制备方法和应用
CN105566145A (zh) 氨基酸衍生物及其应用
CN103012394B (zh) 一种罗丹宁衍生物及其制备方法
CN114853802B (zh) 一种谷内酯衍生物及其制备方法、药物组合物和应用
CN110423242A (zh) 6,7-二氯喹啉-5,8-二酮衍生物过渡金属配合物及其合成方法和应用
CN112300235B (zh) 一种苯并咪唑衍生物bi321及其制备方法和应用
CN103432123B (zh) 苦参碱在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用
JP2000212087A (ja) ニトロ―５―デアザフラビン誘導体を有効成分とする放射線増感剤。
CN115043878B (zh) 具有肿瘤靶向的生物素化金（i）配合物及其制备方法和应用
CN103980174B (zh) 取代吡咯烷氨荒酸铋(ⅲ)配合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
CN103232433A (zh) N-取代苯甲基四氢吡啶连吲哚及其制备方法和应用
Yu et al. Crude extract of J1 fermentation promotes apoptosis of cervical cancer cells

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20190705

Termination date: 20200614

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee