CN106047773B - 一株乳酸乳球菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株乳酸乳球菌及其应用，属于食品生物技术领域。本发明分离得到的菌株命名为乳酸乳球菌WH101(Lactococcus lactis WH101)，在pH 4.5的条件下，OD600值达到0.527，相比较诱变前提高了4.5倍；在pH 4.0的乳酸中胁迫2h，存活率为4.04％；在pH 4.0的乳酸中胁迫3h，存活率是同等处理条件下诱变前菌株的22.4倍。其具有较好的酸耐受性，在食品、发酵等领域具有巨大的应用价值。

Description

一株乳酸乳球菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株乳酸乳球菌及其应用，属于食品生物技术领域。
背景技术
作为工业化的微生物细胞工厂，乳酸乳球菌已广泛应用于食品，发酵等领域。在开展上述领域中所需工业产品的发酵法生产过程中，产酸特性成为微生物必不可少的组成部分。一方面代谢产酸可帮助促进细胞能量转化、维持细胞内外渗透压平衡、增强本体细胞的环境竞争性。另一方面，随着胞内产酸的积累，导致微生物菌体细胞内的pH持续下降，胞内维持细胞正常生理功能的相关酶类活性受到抑制，进而影响细胞的代谢活性及其生产效率，并为生产成本、下游加工及后续工业排放物环境治理埋下诸多隐患。同时，作为益生菌中的一种，在人体胃肠道中也会遭受酸胁迫、胆盐胁迫等环境胁迫。因此，提高微生物菌株的酸胁迫耐受性，成为学术界和产业界亟待解决的重要问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一株乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)WH101，其于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2016233，地址：中国，武汉，武汉大学。
所述乳酸乳球菌CCTCC NO:M 2016233是以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000为出发菌株，以硫酸二乙酯为诱变剂诱变得到，在pH 4.5的条件下，OD600值达到0.527，相比较诱变前提高了4.5倍；在pH 4.0的乳酸中胁迫2h，存活率为4.04％；在pH 4.0的乳酸中胁迫3h，存活率是同等处理条件下诱变前菌株的22.4倍；可见，乳酸乳球菌CCTCCNO:M 2016233具有更好的生长性能和酸耐受性。
生物材料保藏
乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)WH101，已于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2016233。
具体实施方式
GM17培养基：葡萄糖5.0g.L-1,胰蛋白胨5.0g.L-1，大豆蛋白胨5.0g.L-1，牛肉浸膏5.0g.L-1，酵母提取物2.5g.L-1，维生素C 0.5g.L-1，硫酸镁0.25g.L-1，甘油磷酸二钠19.0g.L-1。
pH 4.5的GM17培养基为25％的乳酸调节的pH值为4.5的GM17培养基。其他pH的GM17培养基以同样方法得到。
实施例1乳酸乳球菌(CCTCC NO:M 2016233)的选育方法
以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis NZ9000)为出发菌株，将其在GM17培养基中培养至对数生长期，调整菌液浓度1*107个/CFU，取样离心(5000rpm；10min)后去上清，用0.85％的生理盐水洗涤重悬，重复两次。加入含0.5％v/v硫酸二乙酯(DES)的GM17培养基等体积重悬，100rpm，30℃处理30min后立即用0.85％的生理盐水洗涤重悬，重复5次，加入等体积的GM17培养基重悬后在30℃下静置培养1.5h。
在2.2ml的96深孔板中加入1ml的GM17(pH 5.0)培养基，取上述后培养的培养液以2％的接种量转接到96深孔板中，30℃下静置培养48h，考察诱变菌株在酸性培养基中的生长情况，根据生物量的大小筛选出突变混合菌株，然后将混合菌株经适当稀释涂布pH 5.0的平板，挑选单菌落，将单菌落于pH 5.0条件下发酵，根据生物量大小筛选出突变菌株，出发菌株OD600达到0.076，突变菌株WH101OD600达到0.612)，命名为乳酸乳球菌WH101(Lactococcus lactisWH101)，于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2016233。
实施例2乳酸乳球菌(CCTCC NO:M 2016233)酸胁迫条件下的生长性能
将保藏于-80℃甘油管中的出发菌株乳酸乳球菌(Lactococcus lactis NZ9000)及选育到的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis WH101)以2％的接种量接入GM17培养基，在30℃静置培养12h。
以2％的接种量分别取活化好的乳酸乳球菌NZ9000和乳酸乳球菌WH101转接到pH4.5的GM17培养基中，于30℃下静置培养48h，发酵结束后测定发酵液的菌浓。在pH 4.5的条件下，突变菌株OD600值达到0.527，相比较选育前提高了4.5倍。结果如表1所示。
表1酸胁迫条件下菌体生长性能
菌株 Lactococcus lactis NZ9000 Lactococcus lactis WH101
OD<sub>600</sub> 0.081 0.527
实施例3酸耐受性实验
将保藏于-80℃甘油管中的出发菌株乳酸乳球菌(Lactococcus lactis NZ9000)及选育到的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis WH101)以2％的接种量接入GM17培养基，在30℃静置培养12h。
以2％的接种量分别取活化好的乳酸乳球菌NZ9000和乳酸乳球菌WH101到GM17培养基中，30℃静置培养至对数生长期。
取对数生长期的细胞，经5000rpm离心10min收集菌体，菌体经0.85％的生理盐水洗涤离心2次后，等体积重悬于GM17(pH 4.0)培养基中胁迫不同的时间取样，重新用相同的生理盐水离心洗涤细胞2次，并重悬于等体积的生理盐水中，取100μl的菌液经适当稀释后涂布平板，于30℃静置培养24h，分别计算存活率大小(如表2所示)。突变菌株WH101在pH4.0的乳酸中分别胁迫1h,2h,3h，存活率分别是同等处理条件下下选育前菌株的1.2倍，4.1倍，22.4倍。
表2酸耐受性实验

Claims (4)

1.一株乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)WH101，其特征在于，于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2016233，保藏地址为中国武汉武汉大学。
2.权利要求1所述的乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)WH101在制备发酵食品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵食品是泡菜。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述发酵食品是酸奶。
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