CN106282053B - 一株耐酸乳酸乳球菌及其应用 - Google Patents

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    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
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    • AHUMAN NECESSITIES
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    • A23Y2240/00Streptococcus, lactococcus
    • A23Y2240/41Lactis

Abstract

本发明公开了一株耐酸乳酸乳球菌及其应用,属于食品生物技术领域。本发明分离得到的菌株命名为乳酸乳球菌WH102,在pH 4.5的条件下,OD600值达到0.371,相比较诱变前提高了2.6倍;在pH 4.0的乳酸中胁迫2h,存活率为6.09%;在pH 4.0的乳酸中胁迫2h,存活率是同等处理条件下诱变前菌株的6.1倍。具有较好的酸耐受性,在食品、发酵等领域具有巨大的应用价值。

Description

一株耐酸乳酸乳球菌及其应用
技术领域
本发明涉及一株耐酸乳酸乳球菌及其应用,属于食品生物技术领域。
背景技术
作为工业化的微生物细胞工厂,乳酸乳球菌已广泛应用于食品,发酵等领域。在开展上述领域中所需工业产品的发酵法生产过程中,产酸特性成为微生物必不可少的组成部分。一方面代谢产酸可帮助促进细胞能量转化、维持细胞内外渗透压平衡、增强本体细胞的环境竞争性。另一方面,随着胞内产酸的积累,导致微生物菌体细胞内的pH持续下降,胞内维持细胞正常生理功能的相关酶类活性受到抑制,进而影响细胞的代谢活性及其生产效率,并为生产成本、下游加工及后续工业排放物环境治理埋下诸多隐患。同时,作为益生菌中的一种,在人体胃肠道中也会遭受酸胁迫、胆盐胁迫等环境胁迫。因此,提高微生物菌株的酸胁迫耐受性,成为学术界和产业界亟待解决的重要问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一株乳酸乳球菌WH102(Lactococcus lactisWH103),其于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2016234,地址:中国,武汉,武汉大学。
所述乳酸乳球菌WH102是以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis NZ9000)为出发菌株,以硫酸二乙酯(DES)为诱变剂诱变得到的,在pH 4.5的条件下,OD600值达到0.371,相比较诱变前提高了2.6倍;在pH 4.0的乳酸中胁迫2h,存活率为6.09%;在pH 4.0的乳酸中胁迫2h,存活率是同等处理条件下诱变前菌株的6.1倍。
本发明选育得到的乳酸乳球菌WH102(CCTCC NO:M 2016234)在较低pH条件下能够更好地生长,而出发菌株不能在较低pH条件下生长,突变菌株WH102具有更好的生长性能和酸耐受性。本发明提供的选育方法,操作简单易行,且效果较明显。
生物材料保藏
一株乳酸乳球菌WH102(Lactococcus lactis WH103),其于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2016234,地址:中国,武汉,武汉大学。
具体实施方式
GM17培养基为:葡萄糖5.0g.L-1,胰蛋白胨5.0g.L-1,大豆蛋白胨5.0g.L-1,牛肉浸膏5.0g.L-1,酵母提取物2.5g.L-1,维生素C 0.5g.L-1,硫酸镁0.25g.L-1,甘油磷酸二钠19.0g.L-1
pH 4.5的GM17培养基为25%的乳酸调节的pH值为4.5的GM17培养基。其他pH的GM17培养基以同样方法得到。
实施例1乳酸乳球菌(CCTCC NO:M 2016234)的选育方法
以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis NZ9000)为出发菌株,将其在GM17培养基中培养至对数生长期,调整菌液浓度1*107个/CFU,取样离心(5000rpm;10min)后去上清,用0.85%的生理盐水洗涤重悬,重复两次。加入含0.5%v/v硫酸二乙酯(DES)的GM17培养基等体积重悬,100rpm,30℃处理30min后立即用0.85%的生理盐水洗涤重悬,重复5次,加入等体积的GM17培养基重悬后在30℃下静置培养1.5h。
在2.2ml的96深孔板中加入1ml的GM17(pH 5.0)培养基,取上述后培养的培养液以2%的接种量转接到96深孔板中,30℃下静置培养48h,考察诱变菌株在酸性培养基中的生长情况,根据生物量的大小筛选出突变混合菌株,然后将混合菌株经适当稀释涂布pH 5.0的平板,挑选单菌落,将单菌落于pH为5.0条件下发酵,根据生物量大小筛选出突变菌株,出发菌株OD600达到0.076,突变菌株乳酸乳球菌WH102的OD600达到0.441,于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2016234。
实施例2乳酸乳球菌(CCTCC NO:M 2016234)酸胁迫条件下的生长性能
将保藏于-80℃甘油管中的出发菌株乳酸乳球菌(Lactococcus lactis NZ9000)及选育到的乳酸乳球菌WH102以2%的接种量接入GM17培养基,在30℃静置培养12h。
以2%的接种量分别取活化好的乳酸乳球菌NZ9000和乳酸乳球菌WH102转接到GM17(pH 4.5)培养基中,于30℃下静置培养48h,发酵结束后测定发酵液的菌浓。在pH 4.5的条件下,突变菌株OD600值达到0.527,相比较选育前提高了4.5倍。结果如表1所示。
表1酸胁迫条件下菌体生长性能
菌株 Lactococcus lactis NZ9000 Lactococcus lactis WH102
OD<sub>600</sub> 0.081 0.371
实施例3酸耐受性实验
将保藏于-80℃甘油管中的出发菌株乳酸乳球菌(Lactococcus lactis NZ9000)及选育到的乳酸乳球菌WH102以2%的接种量接入GM17培养基,在30℃静置培养12h。
以2%的接种量分别取活化好的乳酸乳球菌NZ9000和乳酸乳球菌WH102到GM17培养基中,30℃静置培养至对数生长期。
取对数生长期的细胞,经5000rpm离心10min收集菌体,菌体经0.85%的生理盐水洗涤离心2次后,等体积重悬于GM17(pH 4.0)培养基中胁迫不同的时间取样,重新用相同的生理盐水离心洗涤细胞2次,并重悬于等体积的生理盐水中,取100μl的菌液经适当稀释后涂布平板,于30℃静置培养24h,分别计算存活率大小(如表2所示)。突变菌株在pH 4.0的乳酸中分别胁迫1h,2h,3h,存活率分别是同等处理条件下下选育前菌株的0.9倍,6.1倍,2.2倍。
表2酸耐受性实验

Claims (4)

1.一株乳酸乳球菌,其特征在于,于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M 2016234,保藏地址为中国武汉武汉大学。
2.权利要求1所述的乳酸乳球菌在制备发酵食品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述发酵食品是泡菜。
4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述发酵食品是酸奶。
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