CN106035078B

CN106035078B - 一种陕西卫矛种子的萌发方法

Info

Publication number: CN106035078B
Application number: CN201610361768.0A
Authority: CN
Inventors: 张丹; 张茂; 张家勋; 王东超
Original assignee: HENAN HONGFENG INDUSTRY Co Ltd
Current assignee: Henan Hongfeng Biological High Tech Ltd By Share Ltd; Tianjin Tianxu Forest Seeds Co ltd
Priority date: 2016-05-27
Filing date: 2016-05-27
Publication date: 2017-10-17
Anticipated expiration: 2036-05-27
Also published as: CN106035078A

Abstract

本发明涉及农业技术领域，特别涉及一种陕西卫矛种子的萌发方法。该萌发方法包括：将陕西卫矛种子进行消毒处理，切除远离种脐端的部分胚乳，然后进行生根培养；生根培养包括：将切除胚乳的种子接种到生根培养基中进行培养，待种子生根后转接到炼苗培养基中进行培养；生根培养基包括KT和NAA。本发明具有的有益效果为：采用本发明方法进行陕西卫矛种子萌发诱导，实现了陕西卫矛种子萌发率从不足10％提高到了90％以上，炼苗成活率在85％左右，对于实现陕西卫矛的规模化种子繁殖具有非常重要的作用。

Description

一种陕西卫矛种子的萌发方法

技术领域

本发明涉及农业技术领域，特别涉及一种陕西卫矛种子的萌发方法。

背景技术

陕西卫矛(Euonymus schensianus Maxim)又名金丝吊蝴蝶，是卫矛科卫矛属翅果系，果实具翅4～5，成熟后为红色，翅长可达2.5～3cm，宽1.5～2cm，吊在绿叶之间，犹如振翅欲飞的蝴蝶，是一种园林观赏价值极高的树种。

陕西卫矛的繁殖方法包括播种和嫁接。播种方法为：秋天果实成熟后采收，日晒待果皮开裂后收集种子并晾干、收藏。翌年1月将种子用30℃温水浸种24小时，然后湿沙背阴处贮藏。3月中旬移至背风向阳处并保持20～25℃温度催芽，待胚根出现后即可播种。采取条播，行距35cm，株距3～5cm，覆土厚度2～3cm，播种量l0kg/亩。嫁接方法为：可用丝棉木作砧木，3月中下旬砧木萌动时即可嫁接。采用劈接和切接方法进行，有很高的观赏价值。

陕西卫矛种子在自然条件下萌发率极低，常规播种试验证明其萌发率几乎为零，而经过一定浓度的赤霉素、细胞分裂素等激素处理之后，萌发率依然很低，萌发率不足10％。由于种子萌发条件的限制，现在陕西卫矛快繁技术多是以带芽茎段作为外植体，但是组培苗生长较慢，炼苗不易成活。目前，园林上多采用丝棉木作为砧木进行嫁接繁殖，虽然可以实现陕西卫矛的规模化繁殖，但嫁接属于无性繁殖，无法实现陕西卫矛的基因重组和品种改良。因此，只有实现陕西卫矛的种子顺利成苗，才能实现亲本到子代的延续，杂交培育新品种才具有可行性，突破陕西卫矛的种子萌发技术，对于实现该品种的种质保存和品种改良具有非常重要的意义。因此，提供一种促进陕西卫矛种子萌发的方法具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种陕西卫矛种子的萌发方法。采用本发明方法进行陕西卫矛种子萌发诱导，实现了陕西卫矛种子萌发率从不足10％提高到了90％以上，炼苗成活率在85％左右，对于实现陕西卫矛的规模化种子繁殖具有非常重要的作用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种陕西卫矛种子的萌发方法，包括：将陕西卫矛种子进行消毒处理，切除远离种脐端的部分胚乳，然后进行生根培养；

生根培养包括：将切除胚乳的种子接种到生根培养基中进行培养，待种子生根后转接到炼苗培养基中进行培养；生根培养基包括激动素(KT)和萘乙酸(NAA)。

KT是一种非天然的细胞分裂素，化学名称为6-糖基氨基嘌呤(或N6-呋喃甲基腺嘌呤)，分子式C₁₀H₉N₅O。不溶于水，溶于强酸、碱及冰醋酸中；除具有促进细胞分裂的作用外，还具有延缓离体叶片和切花衰老，诱导芽分化和发育及增加气孔开度的作用。

NAA，中文名称1-萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid)，是一种有机化合物，化学式：C₁₀H₇CH₂CO₂H，是一种易溶于有机溶剂的无色固体。它是一种植物激素生长素，常用于商用的发根粉或发根剂中，在植物使用扦插法繁殖时使用。它也可用于植物组织培养。

本发明采用包含KT和NAA的培养基对陕西卫矛种子进行萌发培养，结果显示本发明培养基可显著促进陕西卫矛种子的萌发，萌发率可达95％以上。

作为优选，KT的浓度为0.8～1.0mg/L，NAA的浓度为0.08～0.1mg/L。

优选地，KT的浓度为1.0mg/L，NAA的浓度为0.1mg/L。

作为优选，生根培养的条件为：光照时间为8～12h/d，光照强度为2500～3500lx，培养温度为24～26℃，相对湿度为45％～50％。

在本发明提供的实施例中，生根培养的条件为：光照时间为12h/d，光照强度为2500～3500lx，培养温度为24～26℃，相对湿度为45％～50％。

作为优选，生根培养基为包括KT、NAA、蔗糖和琼脂的固体培养基，蔗糖的浓度为25～30g/L，琼脂的浓度为5～7g/L。

在本发明提供的实施例中，生根培养基中蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为7g/L。

作为优选，炼苗培养基为包括蔗糖和琼脂的固体培养基，蔗糖的浓度为15～20g/L，琼脂的浓度为5～7g/L。

在本发明提供的实施例中，炼苗培养基中蔗糖的浓度为20g/L，琼脂的浓度为7g/L。

在本发明提供的实施例中，固体培养基为MS固体培养基。

作为优选，陕西卫矛种子的采摘时间为9月11日～10月1日之间。和传统的等待果实成熟炸开后采收种子不同，申请人在9月中旬至10月上旬之间进行种子采收，此时果实由青转红，胚已经发育成熟，具有很高的活力。本申请经试验发现，9月11之前，胚过于幼嫩而无法成活，10月1日之后，种子接种后染菌率高达80％以上。

作为优选，消毒处理为：在次氯酸溶液中浸泡10～20min，然后依次用酒精和氯化汞各消毒5～10min，无菌水冲洗，将假种皮剥离，放入双氧水中。

在本发明提供的实施例中，消毒处理为：在0.1％次氯酸溶液中浸泡10min，然后依次用75％酒精和0.1％氯化汞各消毒5min，无菌水冲洗5～6遍，将假种皮剥离，放入1％双氧水中。

在消毒处理之前，还包括种子的前处理。种子的前处理包含以下步骤：用加有洗涤剂的清水浸泡清洗，去除果皮上残留的虫卵、污渍，再用流水冲洗2h，晾干水份。用刀片切去果翅、上部的果蒂和下部的脐，不要伤到内部的种子。

作为优选，切除远离种脐端的部分胚乳为切除远离种脐端的1/4～1/3体积的胚乳。

作为优选，生根培养后还包括炼苗。

炼苗包含以下步骤：

(1)选取生长健壮的瓶苗，先开瓶炼苗2～3d，使幼苗适应外界环境；

(2)将苗小心取出，不要伤到根系，流水冲净植株上附着培养基，洗不净则容易导致根系发霉腐烂最终死亡；

(3)将苗栽到事先准备好已灭菌的培养土中，培养土采用蛭石：泥炭＝1：1的比例进行配制；

(4)栽好后喷洒多菌灵溶液，然后覆薄膜，放置阴凉处；

(5)待新叶、新根长出后放置向阳处培养，注意保持湿度，可白天覆膜，夜晚揭膜，温度保持在15～25℃，逐步加强通风；

(6)待幼苗长势健壮再进行露天栽植。

本发明提供了一种陕西卫矛种子的萌发方法。该萌发方法包括：将陕西卫矛种子进行消毒处理，切除远离种脐端的部分胚乳，然后进行生根培养；生根培养包括：将切除胚乳的种子接种到生根培养基中进行培养，待种子生根后转接到炼苗培养基中进行培养；生根培养基包括KT和NAA。本发明具有的有益效果为：采用本发明方法进行陕西卫矛种子萌发诱导，实现了陕西卫矛种子萌发率从不足10％提高到了90％以上，炼苗成活率在85％左右，对于实现陕西卫矛的规模化种子繁殖具有非常重要的作用。

附图说明

图1示接种后10天，种子开始萌动，子叶呈黄色，微微露出；

图2示接种后30天，子叶明显长出，变成绿色，胚轴开始伸长；

图3示接种后60天，子叶展开，真叶开始发育，根部开始长出；

图4示接种后90天，根系发达，有2～3条主根，长可达4～6cm，真叶展开4～6片，叶片墨绿色，生长健壮。

具体实施方式

本发明公开了一种陕西卫矛种子的萌发方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的固体MS培养基的具体配方为：NH₄NO₃ 1.65g/L、KNO₃1.9g/L、CaCl₂·2H₂O 0.44g/L、MgSO₄·7H₂O 0.37g/L、KH₂PO₄ 0.17g/L、KI 0.83mg/L、H₃BO₃ 6.2mg/L、MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L、ZnSO₄·7H2O 8.6mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O0.025mg/L、CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L、FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L、Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg/L、肌醇100mg/L、IVB烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇(维生素B₆)0.5mg/L、盐酸硫胺素(维生素B₁)0.1mg/L、甘氨酸2mg/L。琼脂质量浓度7g/L，蔗糖质量浓度30g/L，pH值为6.0，所配培养基经过高压高温蒸汽灭菌，126摄氏度下5分钟。

组培室培养条件：光照时间12h/d，光照强度2500～3500lx，培养温度为24～26℃，相对湿度45％～50％，每3d用紫外灯灭菌25～30min。

本发明提供的陕西卫矛种子的萌发方法中所用培养基、激素等均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

本发明实施例陕西卫矛种子萌发方法如下：

1、种子的处理

(1)在9月11日至10月1日之间，选取果实饱满、果皮青白色、外观完整、无病虫害的陕西卫矛果实进行采集。

(2)采收后先用加有洗涤剂的清水浸泡清洗，去除果皮上残留的虫卵、污渍等，再用流水冲洗2h，晾干水份。用刀片切去果翅、上部的果蒂和下部的脐，此过程不要伤到内部的种子。

(3)种子切好后放入0.1％HClO中浸泡10min。

(4)在超净工作台内依次用75％酒精和0.1％HgCl各消毒5min。注：消毒液的使用次数不超过10次，达到后倒掉重新配制。其中，酒精使用完毕后要求密封保存，避免挥发降低消毒效果；氯化汞要求避光保存，以免失效。

(5)消毒完成后，用无菌水冲洗5～6遍，每次浸泡时间要求长于3min。

(6)清洗完成后，在超净工作台内用手术刀和镊子把果实剥开，取出种子，并将种子外面的红色假种皮剥离干净，放入1％H₂O₂中待用。

2、接种

(1)在超净工作台内，切除种子远离种脐段的胚乳1/4到1/3体积，接种到灭菌后的加有KT 1.0mg/L、NAA 0.1mg/L的MS培养基中。接种10天后，种子开始萌动，子叶呈黄色，微微露出(图1)。接种后30天后，子叶明显长出，变成绿色，胚轴开始伸长(图2)。

(2)培养45～60天后种子第一片真叶展开，根已经伸长，并长出须根。接种后60天，子叶展开，真叶开始发育，根部开始长出(图3)。

(3)在超净工作台内，将长出须根的幼苗转接到不含激素的MS固体培养基中。

(4)培养45～60天后，幼苗根系发达茎干粗壮，叶片发育正常，可以进入炼苗阶段。接种后90天，根系发达，有2-3条主根，长可达4-6cm，真叶展开4-6片，叶片墨绿色，生长健壮(图4)。

同时统计种子萌发率。经统计，萌发率为96％。

3、炼苗

(1)选取生长健壮的瓶苗，先开瓶炼苗2d，使幼苗适应外界环境。

(2)将苗小心取出，不要伤到根系，流水冲净植株上附着培养基，洗不净则容易导致根系发霉腐烂最终死亡。

(3)将苗栽到事先准备好已灭菌的培养土中，培养土采用蛭石：泥炭＝1：1的比例进行配制。

(4)栽好后喷洒多菌灵溶液，然后覆薄膜，放置阴凉处。

(5)1个月左右，待新叶、新根长出后放置向阳处培养，注意保持湿度，可白天覆膜，夜晚揭膜，温度保持在15～25℃，逐步加强通风。

(6)待幼苗长势健壮再进行露天栽植。栽植前统计炼苗成活率。经统计，炼苗成活率达85％。

实施例2

本发明实施例陕西卫矛种子萌发方法如下：

2、种子的处理

(3)种子切好后放入0.1％HClO中浸泡10min。

2、接种

(1)在超净工作台内，切除种子远离种脐段的胚乳1/4到1/3体积，接种到灭菌后的加有KT 0.9mg/L、NAA 0.09mg/L的MS培养基中。

(2)培养45～60天后种子第一片真叶展开，根已经伸长，并长出须根。

(4)培养45～60天后，幼苗根系发达茎干粗壮，叶片发育正常，可以进入炼苗阶段。同时统计种子萌发率。经统计，萌发率为96％。

3、炼苗

(4)栽好后喷洒多菌灵溶液，然后覆薄膜，放置阴凉处。

实施例3

本发明实施例陕西卫矛种子萌发方法如下：

3、种子的处理

(3)种子切好后放入0.1％HClO中浸泡10min。

2、接种

(1)在超净工作台内，切除种子远离种脐段的胚乳1/4到1/3体积，接种到灭菌后的加有KT 0.8mg/L、NAA 0.08mg/L的MS培养基中。

3、炼苗

(4)栽好后喷洒多菌灵溶液，然后覆薄膜，放置阴凉处。

实施例4

本发明研究了激素配比对种子生长情况的影响，试验方法同实施例1，对比结果如下：

表1激素配比对种子生长情况的影响

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种陕西卫矛种子的萌发方法，其特征在于，包括：将陕西卫矛种子进行消毒处理，切除远离种脐端的1/4～1/3体积的胚乳，然后进行生根培养；

所述生根培养包括：将切除胚乳的种子接种到生根培养基中进行培养，待种子生根后转接到炼苗培养基中进行培养；所述生根培养基包括KT和NAA。

2.根据权利要求1所述的萌发方法，其特征在于，所述KT的浓度为0.8～1.0mg/L，所述NAA的浓度为0.08～0.1mg/L。

3.根据权利要求1或2所述的萌发方法，其特征在于，所述生根培养的条件为：光照时间为8～12h/d，光照强度为2500～3500lx，培养温度为24～26℃，相对湿度为45％～50％。

4.根据权利要求1所述的萌发方法，其特征在于，所述生根培养基为包括KT、NAA、蔗糖和琼脂的固体培养基，所述蔗糖的浓度为25～30g/L，所述琼脂的浓度为5～7g/L。

5.根据权利要求1所述的萌发方法，其特征在于，所述炼苗培养基为包括蔗糖和琼脂的固体培养基，所述蔗糖的浓度为15～20g/L，所述琼脂的浓度为5～7g/L。

6.根据权利要求4或5所述的萌发方法，其特征在于，所述固体培养基为MS固体培养基。

7.根据权利要求1所述的萌发方法，其特征在于，所述陕西卫矛种子的采摘时间为9月11日～10月1日之间。

8.根据权利要求1所述的萌发方法，其特征在于，所述消毒处理为：在次氯酸溶液中浸泡10～20min，然后依次用酒精和氯化汞各消毒5～10min，无菌水冲洗，将假种皮剥离，放入双氧水中。

9.根据权利要求1所述的萌发方法，其特征在于，所述生根培养后还包括炼苗。