CN106032389A - 组织保护活性多肽sl6及其应用 - Google Patents

Abstract

组织保护活性多肽SL6及其应用，本发明公布了一系列用于治疗奶牛乳腺炎的多肽。本发明多肽可作为一种饲料添加剂。本发明多肽喂饲奶牛，对奶牛乳腺炎症，具有良好的治愈和预防作用。

Description

组织保护活性多肽SL6及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一组织保护活性多肽。

背景技术

奶牛乳腺炎是当前危害奶牛业发展，制约奶牛生产的一种重要疾病，值得奶牛生产者及畜牧工作者的高度重视和关注。发病情况及发病率的发生已成为一个世界性的问题。我国奶牛的发生更高，中国农业科学院兰州中研究所对我国西北、华北、东北、中南、西南地区22个城市32个奶牛场的10371头成年泌乳牛进行了调查，临床型平均发病率为33.41％(9.7％～55.6％)，并对其中5个地区20个奶牛场的3384头泌乳期奶牛进行了隐性检查。结果表明隐性头平均阳性检出率73.91％(62.07％～93.95％)，乳区平均阳性检出率为44.74％(35.29％～72.81％)，两类的发病率均高于国外报道。

目前国内外对牛乳腺炎的治疗主要是抗生素和疫苗，但抗生素在治疗牛乳腺炎症中存在诸多不利的因素。

现有技术中，ZL201110235105.1提供了一种对牛乳腺炎具有治疗作用的蛋白，为了提高蛋白的活性，针对蛋白的活性位点进行特异性的突变和取代，从而寻找活性更高的变体是常规的做法。为了进一步提高该蛋白的生物活性，申请人通过大量的实验，针对该申请的蛋白氨基酸序列中特定的位点进行了点突变，从而获得了一系列比该多肽本身具有更高生物学活性的治疗牛乳腺炎的多肽。

发明内容

本发明涉及的多肽，具有下列结构:

（SL1）：Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val；

（SL2）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val；

（SL3）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly ValSer；

（SL 4）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly ValPro；

（SL 5）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly ValPro；

（SL 6）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val；

（SL 7）：Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val；

（SL 8）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val；

（SL 9）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ile Asp Ala Leu Gly ValSer；

（SL 10）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ile Asp Ala Leu Gly ValSer；

（SL 11）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ile Asp Ala Leu Gly Val；

（SL 12）：Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser；

（SL 13）：Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ser Asp Ala Leu Gly ValSer Ser；

（SL 14）：Ile Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val SerSer；

对照1：Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val;

对照2：Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ser Asp Asp Ala Leu Gly Val。

本发明的多肽合成后，可以做成游离态形式，也可以做成阳离子盐，如：TFA盐(三氟乙酸盐)，HCl盐(盐酸盐)，醋酸盐形式。

采用本发明多肽配制奶牛饲料添加剂具有对于奶牛乳腺的保护作用和对乳腺炎的治疗，预防作用。

本发明的多肽，可以选择和一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，用于治疗。这些药物剂型涵盖：注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身给药。剂量优选在10-5～10-2mg/kg体重的范围内，以0.1％-0.5％的较高浓度全身或局部给药。对于具体治疗的最佳剂量的确定是本领域技术人员熟知的。

具体实施方式

实施例1：多肽的化学合成及稳定性和毒性试验：

采用本领域常用的Fmoc固相法化学合成SL1-SL14以及对照1和对照2所述的多肽。

将本发明多肽于40℃保温76天和120天测试其稳定性。稳定性试验采用HPLC方法进行测定。水溶液中多肽的浓度为0.2％(w/v)：柱，Kromasil100，5u，250x 4.6mm；流动相，0.1％三氟乙酸的水/乙睛溶液(0至50vol.％)，在25分钟内梯度洗脱，流速1ml/min；检测：UV，218nm。通过检测可以表明，本发明多肽稳定性非常高。其溶液在40度，120天后依然具有98％以上的目标物质。 对照肽1和2也在120天后分别具有96％和90%的目标物质

采用小鼠灌胃和注射方式测定本发明多肽的急性毒性。 溶液配制：

采用本发明多肽25毫克，加灭菌水至20毫升，配置成浓度为1.25毫克/毫升的溶液，供口服灌胃。

采用本发明多肽25毫克，加灭菌水至10毫升，配置成浓度为2.5毫克/毫升的溶液，供腹腔注射用。给药剂量计算：

小鼠口服灌胃给药体积为40毫升/公斤体重，故给药剂量为：1.25mg/ml*40ml/kg＝50m/kg。

小鼠腹腔注射给药体积为20毫升/公斤体重，故给药剂量为：2.5mg/ml*20ml/kg＝50mg/kg。

取健康小鼠80只，分四组实验。给药后，在第7天和14天，观察，称重。并于实验结束后称重，处死，解剖观察内部器官。

结论：

1、小鼠一日一次口服灌胃给药，给药剂量50毫克/公斤体重，未见明显急性毒性反应。LD50＞50mg/kg。

2、小鼠一日一次腹腔注射给药，给药剂量50毫克/公斤体重，未见明显急性毒性反应。LD50＞50mg/kg。

由上所述，本发明多肽在50毫克每公斤体重剂量下未见明显急性毒性表现。 对照肽同样也未见明显急性毒性表现。

实施例2

含本发明多肽的饲料添加剂的制备。

配方如下：

组成	mg/份
		多肽	6
黄糊精	2000
		维生素	150
淀粉	1000
		矿物质盐	4000
蛋白粉	10000
		鱼粉	3000

具体实施过程中，先把多肽和淀粉或者黄糊精一起喷粉干燥或者冷冻干燥，然后和其他的配料混合均匀。

实施例3：含本发明多肽的饲料的制备。

组成	份
		多肽	2-4mg
常规饲料	1000g

实施例4：对牛乳腺炎症的治疗作用

材料和方法：

1.在奶牛饲养场，选取有临床症状的乳腺炎发病奶牛40头为一组，共两组。一组喂饲本发明多肽8毫克/头.天。一共21天。另一组采用常规治疗办法治疗。

2.在奶牛饲料厂，选取临界临床症状的亚健康奶牛40头为一组，共2组。其中一组喂饲本发明多肽，4毫克/头.天。一共21天。另一组采用常规喂养。

喂饲过程中，观察临床症状的改善，同时每次取乳后，计量牛乳中体细胞的数目。结果如下：

由上述结果可以看出，采用本发明多肽喂饲的奶牛组，在体细胞数目上明显小于对照组。在治愈和预防牛乳腺炎症状上，明显好于对照组。

将实施2和实施例3制备得到的产品直接添加制作为饲料用于奶牛的饲养，实验结果与上述结果相似。说明，本发明的多肽可以用于制备奶牛的饲料以及相应的药物，去用于乳腺炎的治疗。

序列表

<110> 马恒标

<120> 组织保护活性多肽SL6及其应用

<160> 16

<210> 1

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val

<210> 2

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val Ser

<210> 4

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 4

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val Pro

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 5

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Pro

<210> 6

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 6

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val

<210> 7

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 7

Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val

<210> 8

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 8

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val

<210> 9

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 9

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ile Asp Ala Leu Gly Val Ser

<210> 10

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 10

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ile Asp Ala Leu Gly Val Ser

<210> 11

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 11

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ile Asp Ala Leu Gly Val

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 12

Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser

<210> 13

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 13

Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser Ser

<210> 14

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 14

Ile Glu Pro Ser Pro Gly Lys Ile Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser Ser

<210> 15

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 15

Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val

<210> 16

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 16

Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ser Asp Asp Ala Leu Gly Val

Claims (5)

1.一种多肽，其特征是，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID No. 6所示。

2.一种药物制剂，其特征是，权利要求1记载的多肽，选择与一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，所述药物剂型涵盖：注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身给药。

3.一种饲料，其特征是，权利要求1或2记载的多肽或药物制剂，添加入饲料或以饲料添加剂等各种方式制备的饲料。

4.权利要求1或2记载的多肽或药物制剂或饲料在制备用于组织炎症的治疗的药物中的应用。

5.权利要求1、2或3记载的多肽、药物制剂或饲料在制备用于治疗奶牛乳腺炎的药物中的应用。