CN105999236A - 一种治疗牛乳房炎的药剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

一种治疗牛乳房炎的药剂及其应用，包括乳房注射剂和乳房喷雾剂；所述乳房注射剂中乳铁蛋白质量浓度为1.5%~8.0%，所述乳房喷雾剂中乳铁蛋白质量浓度为1.0%~5.0%。本发明是采用注射剂和喷雾剂相结合从而达到治疗目的，采用天然乳汁提取物乳铁蛋白取代抗生素治疗牛乳房炎的药物，具有广谱高效抑菌、不产生耐药性，见效快且无药物残留，奶牛无停奶期等特点。并且药物原料来源广泛，原料丰富，用药安全，无毒副作用，制备的药物具有个体及群体防治的双重作用，具有双向调节作用，不产生抗药性，且效果持久，无残留。

Description

一种治疗牛乳房炎的药剂及其应用
技术领域
本发明涉及牛乳房炎治疗药物领域，一种以低铁饱和度乳铁蛋白为有效成分的治疗牛乳房炎的药剂及其应用。
背景技术
牛乳房炎是一种牛常见多发病，发病率达40%，是世界范围内奶牛易患并给牛奶生产企业造成巨大经济损失的疾病。牛乳房炎是由多种非特定的病原微生物感染引起的，其中80%~90%以上是由金黄色葡萄球菌、大肠杆菌引起。治疗牛乳房炎的方法目前国内主要采用抗生素局部注射法，国外主要采用疫苗预防加抗生素治疗的方法。由于国内和国外奶牛饲养方法的不同，国外集中规模化养殖疫苗作用相对明显，国内分散养殖感染源相对复杂，疫苗推广还需进一步研究，且疫苗研究目前依然处于探索阶段，价格昂贵，周期长，作用慢，专属性强。而长期使用抗生素或滥用抗生素使受体产生很强的抗药性，治疗效果下降，如采用加大剂量将进入新的恶性循环。牛乳中残留抗生素会对人体产生很大危害。长期饮用含抗生素乳制品，会使人体积累抗生素，造成生理紊乱，使细菌对抗生素产生耐药性，给疾病防治造成困难；对抗生素敏感者，还会造成过敏性休克，甚至危及生命。2008年9月，农业部更新发布实施《无公害食品生鲜乳》行业标准，对新鲜牛乳的卫生指标明确了“抗生素不得检出”。我国已开始逐步严格这一行业标准。国外欧美国家多年前即已法规禁止抗生素残留超限量的牛奶上市（对青霉素类药物残留的限量为0.4ppm至1ppm左右）。如何减少经济损失，如何有效解决牛乳及乳制品中抗生素残留问题，世界一直在寻找可取代抗生素治疗牛乳房炎的药物。
发明内容
针对现有抗生素药物治疗牛乳房炎的缺陷，本发明提供一种用天然乳汁提取制备的低铁饱和度乳铁蛋白（blf）取代抗生素治疗牛乳房炎的药物，其通过采用注射剂和喷雾剂相结合从而达到治疗目的，其具有广谱高效抑菌、不产生耐药性、见效快且无药物残留、奶牛无停奶期等特点。
本发明中治疗牛乳房炎的药剂，包括乳房注射剂和乳房喷雾剂；
所述乳房注射剂中乳铁蛋白质量浓度为1.5%~8.0%，其中各组分配比如下：
乳铁蛋白 2.25~16g
碳酸氢钠 1.5g~2.0g
去离子水 182~196ml
所述乳房喷雾剂中乳铁蛋白质量浓度为1.0%~5.0%，其中各组分配比如下：
乳铁蛋白 1.5g~10g
碳酸氢钠 1.5g~2.0g
去离子水 188~197ml。
进一步的，所述乳房注射剂和乳房喷雾剂中的乳铁蛋白均为铁饱和度为5~8%的低铁饱和度乳铁蛋白。
进一步的，所述乳房注射剂和乳房喷雾剂的pH均控制为5-7。
进一步的，所述所述乳房注射剂和乳房喷雾剂中碳酸氢钠浓度控制为100mmol/L。
进一步的，所述低铁饱和度乳铁蛋白是通过以下工艺获得的低饱和度乳铁蛋白，其步骤为：
第1步，使用阳离子交换树脂对牛乳中的乳铁蛋白进行吸附、解吸；所述解吸过程是采用二级解吸，第一级解吸是采用1～2.5%的盐溶液解吸，解吸液是乳过氧化物酶蛋白，弃去；第二级解吸是采用3.5～7%的盐溶液解吸，解吸液送入第2步处理；所述的盐溶液是指钠盐、钾盐或者钙盐溶液；
第2步，对第1步得到的解吸液采用分离膜进行浓缩；所述的分离膜是截留分子量在1000～30K的超滤膜；
第3步，第2步得到的浓缩液采用不溶性Fe3+螯合树脂进行吸附，再采用分离膜对浓缩液进行浓缩；所述吸附操作时需要在浓缩液中加入醋酸、醋酸盐以及枸橼酸盐，配制其吸附环境中枸橼酸盐浓度为0.1mol/L~0.5mol/L,并调节pH至5.0～6.7；所述的分离膜是截留分子量在1000～30K的超滤膜。
进一步的，所述的弱酸型阳离子树脂是指CM树脂；所述的不溶性Fe3+螯合树脂是指D403螯合树脂。
进一步的，所述的第2步得到的浓缩液在送入第3步之前，需要再经过一次弱酸型阳离子树脂的吸附、解吸和超滤膜的浓缩处理。
进一步的，所述的第3步中，根据权利要求1所述的从牛乳中提取高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第3步中，树脂的吸附时间20～120分钟，吸附时搅拌桨转速速率为20～150rpm，吸附温度在3～30℃。
进一步的，所述第1步中，阳离子交换树脂的制备步骤为：
第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体PS-acyl-Cl，加入60ml四氢呋喃溶胀12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比PS-acyl-Cl：乙二胺：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；
第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺3g、丙烯酸双环戊烯基酯、K2CO3 5g、四丁基溴化铵12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。
所述牛乳房炎的药剂在治疗牛乳房炎药物中的应用；所述药物被制备为乳腺管注射、肌肉注射、皮下注射、口服、外喷给药的形式；所述牛乳房炎为急性牛乳房炎或慢性牛乳房炎。
所述牛乳房炎为急性牛乳房炎或慢性牛乳房炎。
本发明是采用注入剂和喷雾剂相结合从而达到治疗目的，采用天然乳汁提取制备的低铁饱和度乳铁蛋白取代抗生素治疗牛乳房炎的药物，具有广谱高效抑菌、不产生耐药性，见效快且无药物残留，奶牛无停奶期等特点。并且药物原料来源广泛，原料丰富，用药安全，无毒副作用，制备的药物具有个体及群体防治的双重作用，具有双向调节作用，不产生抗药性，且效果持久，无残留。本发明提供的乳铁蛋白制备方法具有乳铁蛋白提取与制备纯度高的优点，同时能够降低乳铁蛋白中Fe3+离子含量，使铁饱和度降低至5-8%，从而明显提高了乳铁蛋白的抗菌活性。此外通过调整Fe3+螯合树脂吸附的时间、搅拌速度以及媒介的浓度、pH，可以对乳铁蛋白处理后的铁饱和度进行控制，以满足不同产品应用对乳铁蛋白铁饱和度的要求。
附图说明
图1是金黄色葡萄球菌的乳铁蛋白杀菌曲线；
图2是大肠杆菌的乳铁蛋白杀菌曲线；
图3是不同NaHCO3浓度下乳铁蛋白抑菌曲线。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步的描述。
实施例1
一种治疗牛乳房炎的药剂，包括乳房注射剂和乳房喷雾剂；
乳房注射剂中乳铁蛋白质量浓度为1.5%~8.0%，其中各组分配比如下：
乳铁蛋白 2.25~16g
碳酸氢钠 1.5g~2.0g
去离子水 182~196ml
乳房喷雾剂中乳铁蛋白质量浓度为1.0%~5.0%，其中各组分配比如下：
乳铁蛋白 1.5g~10g
碳酸氢钠 1.5g~2.0g
去离子水 188~197ml。
实施例2
根据实施例1提供的药剂组成，分别选择铁饱和度7%的乳铁蛋白、铁饱和度20%的乳铁蛋白配置为乳房注射剂或者乳房喷雾剂样品进行体外抑菌试验；具体步骤如下：实验菌种为金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大肠杆菌（ATCC25922），将其制备浓度为106/ml菌悬液。 采用滤纸法进行抑菌试验，平皿内底层均匀铺平琼脂，菌液加入琼脂后涂布均匀，将铁饱和度7%的乳铁蛋白、铁饱和度20%的乳铁蛋白的blf试验浓度分别为5.0mg/ml、2.5mg/ml、2.25mg/ml、2.0mg/ml、1.75mg/ml、1.5mg/ml进行点种试验培养24小时,用以进行金黄色葡萄球菌抑菌试验；将铁饱和度7%的blf、铁饱和度20%的blf试验浓度分别为3.0mg/ml、1.5mg/ml、1.35mg/ml、1.2mg/ml、1.05mg/ml、0.9mg/ml、0.75mg/ml进行点种试验培养24小时,用以进行大肠杆菌抑菌试验用直尺测量抑菌圈大小。结果如下：
表1对金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的抑菌圈直径结果：
表2对大肠杆菌（ATCC25922）的抑菌圈直径结果：
通过表1和表2可见，铁饱和度7%的乳铁蛋白的抑菌效果比铁饱和度20%的乳铁蛋白更好，在一定范围内，blf浓度浓度高抑菌效果也更好。
实施例3
根据实施例1提供的药剂组成，分别选择铁饱和度7%的乳铁蛋白、铁饱和度20%的乳铁蛋白配置为乳房注射剂或者乳房喷雾剂样品进行抑菌试验
（1）实验菌株为金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，并制备浓度为106/ml的菌悬液。采用平板计数法进行抑菌试验，分别配置浓度为6.0mg/ml，5.0mg/ml，4.0mg/ml，3.0mg/ml的铁饱和度7%的乳铁蛋白溶液，然后与平皿内琼脂混匀铺平，使菌液划线接种于平皿中，37℃培养，然后于15min、30 min、45 min、60 min、75 min、90 min、105 min和120 min各时间点，计数平板上的菌落数（取三块平皿的平均值），结果见表3。并绘制金黄色葡萄球菌经不同浓度bLf作用后，不同时间点的杀菌曲线，见图1。
表3 金黄色葡萄球菌
（2）实验菌株为大肠杆菌（ATCC25922），并制备浓度为106/ml的菌悬液。采用平板计数法进行抑菌试验；分别配置浓度为6mg/ml，5mg/ml，4mg/ml，3mg/ml的铁饱和度为7%blf溶液，然后与平皿内琼脂混匀铺平，使菌液划线接种于平皿中，37℃培养，然后于15min、30min、45 min、60 min、75 min、90 min、105 min和120 min各时间点，计数平板上的菌落数（取三块平皿的平均值），见表4。并绘制大肠杆菌经不同浓度bLf作用后，不同时间点的杀菌曲线，见图2。
表4 大肠杆菌菌株
实施例4
根据实施例1提供的药剂组成，选择铁饱和度7%的乳铁蛋白配置为浓度为5%的乳房注射剂或者乳房喷雾剂样品进行抑菌试验，将其pH分别调整至5、7、9三种pH值，然后与培养基混合，测定该药物平板对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌菌株的最小抑菌浓度（MIC）变化，见表5；结果在pH 5和7时，乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC均为2.0 mg/ml，乳铁蛋白对大肠杆菌的MIC均为1.2 mg/ml；当pH 9时，乳铁蛋白对金黄色葡萄球菌的MIC增高至4 mg/ml，对大肠杆菌的MIC增高至3 mg/ml，表明乳铁蛋白对Hp的抑菌作用受pH影响。
表5 不同pH值对MIC 的影响
实施例5
根据实施例1提供的药剂组成，将铁饱和度为20%、15%、10%、7%的乳铁蛋白均配制成浓度为2.5mg/ml的乳铁蛋白溶液，其中NaHCO3浓度分别控制为25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L，测定对S. aureus的抑菌圈直径，结果见图3。图3表明HCO3-的浓度为100mmol/L时，产生的抑菌圈直径几乎是对照组的1.8~2倍。这证明HCO3-的浓度增加会提高blf铁结合能力。
实施例6
根据实施例1提供的药剂组成，将乳铁蛋白10g、碳酸氢钠2.0g、去离子水188ml配置为乳铁蛋白溶液，分成两部分分别作为乳房注射剂和乳房喷雾剂；将上述药剂对80例临床型牛乳房炎患者进行治疗观察。
试验奶牛选择娟姗、荷斯坦两品种奶牛，临床诊断为无全身性反应临床型急、慢性牛乳房炎，均为一个乳区患病。设乳房注射剂治疗组、乳房注射喷雾混合治疗组和抗生素对照组。其中：
乳房注射剂治疗组，急、慢性牛乳房炎各20例，采用导乳针导入乳池后注射，每日2次。
乳房注射喷雾混合治疗组，急、慢性牛乳房炎各20例，先用乳房喷雾剂对乳房局部喷洒进行抑菌杀菌，再用导乳针导入乳池后注射，每日2次。
试验结果如下：
单独使用注射剂治疗急性牛乳房炎20例，平均用药7日，治愈18例，治愈率90%；治疗慢性牛乳房炎20例，平均用药8日，治愈17例，治愈率85%。
使用注射剂和喷雾剂联合治疗急性牛乳房炎20例，平均用药7日，治愈20例，治愈率100%；治疗慢性牛乳房炎20例，平均用药8日，治愈20例，治愈率100%。
通过以上对比可见，同时实用注射剂和喷雾剂，治疗效果最佳，比单一的注射治疗效果有明显改进。本方法乳房注射剂和乳房喷雾剂用药剂量小，使用方便，见效快，不产生耐药性且治愈率高，未见任何不良反应；治愈后跟踪观察15天，未见复发。
以下的实施例提供一种低饱和度乳铁蛋白的制备工艺；它分别用放置阳离子交换树脂的搅拌罐来吸附、解附牛乳中乳铁蛋白，并辅以膜分离技术将其分离、浓缩，可以实现对乳铁蛋白的高度纯化；接下来，将所得乳铁蛋白浓缩液放置不溶性Fe3+螯合树脂（如D403螯合树脂）的搅拌罐来吸附铁离子使其失去铁离子变为不饱和状态，并辅以膜分离将其浓缩纯化。
在使用阳离子交换树脂对乳铁蛋白进行吸附、解吸时，搅拌罐可调搅拌桨转速速率为20～100rpm;罐内侧壁有增涡流挡板，罐底设置带过滤板的树脂床，在树脂床上的树脂层上方8～12cm高度处设置快速导流抽滤管。罐内设置供自动控制的各种传感器pH计，重量计，电导率计及温度计，罐内液体保温温度为3～60℃。乳铁蛋白吸附树脂为阳离子交换树脂，树脂吸附解附的次数和条件可以根据不同产品和产品纯度的要求设定；树脂的吸附时间为20～1200分钟，吸附温度在3～30℃。树脂的解附采用两级盐浓度分别解附乳过氧化物酶蛋白、乳铁蛋白。第一级盐浓度为1～2.5%，解附乳过氧化物酶蛋白，解附时间为20～120分钟；第二级盐浓度为3.5～7%，解附乳铁蛋白，解附时间为20～120分钟；解附的搅拌速率为20～150rpm。树脂解附的时间为20～120分钟，树脂解附所用的盐为钠盐、钾盐、钙盐；乳铁蛋白解附液通过0.05～1.0微米的微滤膜将乳铁蛋白解附液除菌，去残余的脂肪与其他小颗粒；再用1K～30K分子截留量的超滤膜进行脱盐和浓缩。
在一个实施方式中，为了提高乳铁蛋白的纯度，可以对经上述工艺吸附解附脱盐浓缩的乳铁蛋白浓液再经过一次弱酸型阳离子树脂（如CM树脂）的吸附、解吸和超滤膜的浓缩获得的。
上述得到的浓缩液再放置于不溶性Fe3+螯合树脂如D403螯合树脂，加入醋酸溶液、醋酸盐、枸橼酸盐作为媒介，配制其吸附环境浓度为0.1mol/L～0.5mol/L，调pH5.0～6.7，加以搅拌吸附乳铁蛋白中铁离子，树脂吸附搅拌时间、媒介浓度、转速、pH可根据产品饱和度的要求设定；树脂的吸附时间20～120分钟，搅拌桨转速速率为20～150rpm，吸附温度在3～30℃。吸附后清液用1K-30K分子截留量的超滤膜进行脱盐和浓缩。将乳铁蛋白浓液进行真空冷冻干燥制成冻干粉。
树脂经吸附工艺过程后，所吸附的铁离子用1mol/L～3mol/L盐酸浸泡即可将树脂解附再生，再用RO水冲洗即可供下一批次吸附之用。
实施例7 阳离子交换树脂的制备
本发明所使用的阳离子交换树脂可以通过如下的方法制备得到：
第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体(PS-acyl-Cl)，加入60ml四氢呋喃溶胀12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比(PS-acyl-Cl)：乙二胺（EDA）：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；
第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸(AMPS)16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺(NBMA)3g、丙烯酸双环戊烯基酯（DCPA）、K2CO3 5g、四丁基溴化铵（TBAB） 12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。
实施例8阳离子交换树脂的制备
与实施例7的区别在于第2步中未加入NBMA。
本发明所使用的阳离子交换树脂可以通过如下的方法制备得到：
第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体(PS-acyl-Cl)，加入60ml四氢呋喃溶胀12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比(PS-acyl-Cl)：乙二胺（EDA）：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；
第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸(AMPS)16g、丙烯酸双环戊烯基酯（DCPA）、K2CO3 5g、四丁基溴化铵（TBAB） 12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。
实施例9 乳铁蛋白的吸附、解附试验
配备3份100ml 1.6wt%乳铁蛋白溶液于250ml烧杯中，各取20μl进高效液相色谱仪检测，峰面积分别为1240.0034（万）、1241.6533（万）和1240.0535（万），分别将100gSPC70树脂、实施例1和实施例2中的阳离子交换树脂分别100g置于上述盛有250ml乳铁蛋白溶液的烧杯中，吸附搅拌速率为60rpm，每10min取样一次进行检测，实验数据如下表看出实施例1和2中阳离子树脂提高生产回收率，改善吸附解附所消耗的时间。另外，再经过盐溶液淋洗、解附后计算蛋白含量。
淋洗、解附的操作是：采用两级盐浓度分别解附乳过氧化物酶蛋白、乳铁蛋白。第一级盐浓度为1.5%，采用的是NaCl水溶液，解附乳过氧化物酶蛋白，解附时间为70分钟；第二级盐浓度为5.0%，采用的是NaCl水溶液，解附乳铁蛋白，解附时间为80分钟；解附的搅拌速率为100rpm。乳铁蛋白解附液通过0.2微米的微滤膜将乳铁蛋白解附液除菌，去残余的脂肪与其他小颗粒；再用2000分子截留量的超滤膜进行脱盐和浓缩。
从上表可以看出，采用SPC70树脂、实施例1和实施例2中的阳离子交换树脂都可以较好地获得乳铁蛋白的吸附、解吸效果，不过回收率上还是有所区别。
实施例10乳铁蛋白的提取试验
半脱脂牛奶1890L，pH6.7，总蛋白为3.38g/L，乳铁蛋白浓度为126mg/L，将SPC70树脂加入搅拌罐，吸附80min，搅拌速率为60rpm，收集已吸附后的牛奶并用RO水冲洗树脂，加入第一级100L 2.5%NaCl水溶液解附40min，搅拌转速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集；加入第二级100L 5.5%NaCl水溶液解附40min，搅拌转速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集树脂3次。第二级的解吸液以及第二次RO淋洗液合并收集共180L，输送到0.1μm的微滤膜设备中进行除菌、除杂；用30K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，取样检测其铁饱和度为20%；将乳铁蛋白浓液输入到装有CM树脂罐中除去杂蛋白，收集已吸附杂蛋白后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，将其中的少量浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.1%，总蛋白为96.3%，铁饱和度20%；再将剩余的乳铁蛋白浓液输入到装有放置D403螯合树脂罐中进行脱铁，加入0.1mol/L枸橼酸盐，并醋酸-醋酸钠缓冲液调pH至6.0，加以搅拌吸附铁离子，树脂吸附时间120分钟，搅拌桨转速速率60rpm。收集以吸附铁离子后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，收集浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.0%，总蛋白为96.3%，铁饱和度7%。
实施例11 乳铁蛋白的提取试验
半脱脂牛奶1890L，pH6.7，总蛋白为3.38g/L，乳铁蛋白浓度为126mg/L，采用实施例1中描述的步骤操作生产阳离子交换树脂，将树脂加入搅拌罐，吸附80min，搅拌速率为60rpm，收集已吸附后的牛奶并用RO水冲洗树脂，加入第一级100L 2.5%NaCl水溶液解附40min，搅拌转速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集；加入第二级100L 5.5%NaCl水溶液解附40min，搅拌转速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集树脂3次。第二级的解吸液以及第二次RO淋洗液合并收集共180L，输送到0.1μm的微滤膜设备中进行除菌、除杂；用30K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，取样检测其铁饱和度为20%；将乳铁蛋白浓液输入到装有CM树脂罐中除去杂蛋白，收集已吸附杂蛋白后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，将其中的少量浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.2%，灰分1.1%，总蛋白为96.7%，铁饱和度20%；再将剩余的乳铁蛋白浓液输入到装有放置D403螯合树脂罐中进行脱铁，加入0.1mol/L枸橼酸盐，并调pH至6.0，加以搅拌吸附铁离子，树脂吸附时间120分钟，搅拌桨转速速率60rpm。收集以吸附铁离子后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，收集浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.1%，灰分1.0%，总蛋白为96.7%，铁饱和度7%。
实施例12乳铁蛋白的提取试验
与实施例10的区别在于：将剩余的乳铁蛋白浓液输入到装有放置D403螯合树脂罐中进行脱铁，加入0.5mol/L枸橼酸盐，并醋酸-醋酸钠缓冲液调pH至5.0，加以搅拌吸附铁离子，树脂吸附时间20分钟，搅拌桨转速速率150rpm。收集以吸附铁离子后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，收集浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.0%，总蛋白为96.4%，铁饱和度8%。
实施例13乳铁蛋白的提取试验
与实施例11的区别在于：将剩余的乳铁蛋白浓液输入到装有放置D403螯合树脂罐中进行脱铁，加入0.3mol/L枸橼酸盐，并醋酸-醋酸钠缓冲液调pH至6.7，加以搅拌吸附铁离子，树脂吸附时间70分钟，搅拌桨转速速率80rpm。收集以吸附铁离子后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，收集浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.0%，总蛋白为96.5%，铁饱和度7%。
本发明以生鲜乳、乳清粉为原料分离提取乳铁蛋白，根据给药途径调配不同配方制成的化学药物。用于治疗急、慢性牛乳房炎。本发明讲述两种给药途径的配方，乳房注入剂和喷雾剂抑菌能力强，对引起牛乳房炎的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑菌作用，具有高效、快速治疗作用且治疗后奶牛无停奶期特点，牛乳房直接注入，无刺激作用、无不良反应。

Claims (10)

1.一种治疗牛乳房炎的药剂，其特征在于，包括乳房注射剂和乳房喷雾剂；
所述乳房注射剂中乳铁蛋白质量浓度为1.5%~8.0%，其中各组分配比如下：
乳铁蛋白 2.25~16g
碳酸氢钠 1.5g~2.0g
去离子水 182~196ml
所述乳房喷雾剂中乳铁蛋白质量浓度为1.0%~5.0%，其中各组分配比如下：
乳铁蛋白 1.5g~10g
碳酸氢钠 1.5g~2.0g
去离子水 188~197ml。
2.根据权利要求1所述的治疗牛乳房炎的药剂，其特征在于，所述乳房注射剂和乳房喷雾剂中的乳铁蛋白均为铁饱和度为5~8%的低铁饱和度乳铁蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的治疗牛乳房炎的药剂，其特征在于，所述乳房注射剂和乳房喷雾剂的pH均控制为5~7。
4.根据权利要求1或2所述的治疗牛乳房炎的药剂，其特征在于，所述乳房注射剂和乳房喷雾剂中碳酸氢钠浓度控制为100mmol/L。
5.根据权利要求1或2所述的治疗牛乳房炎的药剂，其特征在于，所述乳铁蛋白是通过以下工艺获得的低铁饱和度乳铁蛋白，其步骤为：
第1步，使用阳离子交换树脂对牛乳中的乳铁蛋白进行吸附、解吸；所述解吸过程是采用二级解吸，第一级解吸是采用1～2.5%的盐溶液解吸，解吸液是乳过氧化物酶蛋白，弃去；第二级解吸是采用3.5～7%的盐溶液解吸，解吸液送入第2步处理；所述的盐溶液是指钠盐、钾盐或者钙盐溶液；
第2步，对第1步得到的解吸液采用分离膜进行浓缩；所述的分离膜是截留分子量在1000～30K的超滤膜；
第3步，第2步得到的浓缩液采用不溶性Fe3+螯合树脂进行吸附，再采用分离膜对浓缩液进行浓缩；所述吸附操作时需要在浓缩液中加入醋酸、醋酸盐以及枸橼酸盐，配制其吸附环境中枸橼酸盐浓度为0.1mol/L~0.5mol/L,并调节pH至5.0～6.7；所述的分离膜是截留分子量在1000～30K的超滤膜。
6.根据权利要求5所述的治疗牛乳房炎的药剂，其特征在于，所述的弱酸型阳离子树脂是指CM树脂；所述的不溶性Fe3+螯合树脂是指D403螯合树脂。
7.根据权利要求5所述的治疗牛乳房炎的药剂，其特征在于，所述的第3步中，根据权利要求1所述的从牛乳中提取高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，其特征在于，所述的第3步中，树脂的吸附时间20～120分钟，吸附时搅拌桨转速速率为20～150rpm，吸附温度在3～30℃。
8.根据权利要求5所述的治疗牛乳房炎的药剂，其特征在于，所述第1步中，阳离子交换树脂的制备步骤为：
第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体PS-acyl-Cl，加入60ml四氢呋喃溶胀12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比PS-acyl-Cl：乙二胺：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；
第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺3g、丙烯酸双环戊烯基酯、K2CO3 5g、四丁基溴化铵12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。
9.权利要求1-8任一项所述治疗牛乳房炎的药剂在治疗牛乳房炎药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述药物被制备为乳腺管注射、肌肉注射、皮下注射、口服、外喷给药的形式；所述牛乳房炎为急性牛乳房炎或慢性牛乳房炎。
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