CN106377768A - 一种慢性咽炎膜剂及其制备方法 - Google Patents

一种慢性咽炎膜剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种慢性咽炎膜剂及其制备方法，慢性咽炎膜剂由以下含量的原料制备而成：聚乙烯醇3‑10g、羧甲基纤维素钠4‑10g、甘油1‑5ml、冰片0.1‑3g、乳铁蛋白6‑10g、乳免疫球蛋白5‑8g、乳过氧化物酶 5‑10g、维生素C 0.1‑1g、甜蜜素0.005‑0.15g、乙醇1‑10ml、蒸馏水100‑150ml。本发明制出的膜剂外观完整光洁，厚度一致，色泽均匀，无明显气泡，且添加了天然活性成分，放入口中后，能够紧密的粘附在口腔内表面，且没有明显的异物感，有效地隔离咽炎面与口腔环境，使药物在较长时间内以较高浓度缓慢释放发挥作用，对治疗慢性咽炎十分有效。

Description

一种慢性咽炎膜剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药制备技术领域，特别涉及一种含天然活性成分提取物的慢性咽炎膜剂及其制备方法。
背景技术
咽是人体与外界相通的要道，具有重要的防御、呼吸、吞咽、发声共鸣等功能。咽的急、慢性咽炎导致的病理改变，不仅造成咽局部的功能障碍，也可波及邻近器官组织，甚至影响全身其他系统，损害人体健康。影响情绪、 影响生活、 影响身边的人、 严重后会导致发展为慢性萎缩型咽炎， 会导致一些器官发生萎缩。慢性咽炎的病因有屡发急性咽炎、长期粉尘或有害气体刺激、烟酒过度或其它不良生活习惯、鼻窦炎分泌物刺激、过敏体质或身体抵抗力减低等。 慢性咽炎也可以是某些全身性疾病的局部表现，如贫血、糖尿病、肝硬化及慢性肾炎等。慢性咽炎的治疗一般选用抗生素合类固醇激素，治疗周期长，容易引起依赖性和产生副作用。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种含天然活性成分的慢性咽炎膜剂及其制备方法；本发明制备的口腔膜剂添加了几种有效的天然活性成分，改善了慢性咽炎的治疗情况。
本发明的一种慢性咽炎膜剂，由以下含量的原料制备而成 ：
聚乙烯醇 3-10g
羧甲基纤维素钠 4-10g
甘油 1-5ml
冰片 0.1-3g
乳铁蛋白 6-10g
乳免疫球蛋白 5-8g
乳过氧化物酶 5-10g
维生素C 0.1-1g
甜蜜素 0.005-0.15g
乙醇 1-10ml
蒸馏水 100-150ml。
上述慢性咽炎膜剂进一步优选由以下含量的原料制备而成 ：
聚乙烯醇 3-5g
羧甲基纤维素钠 5-7g
甘油 2-3ml
冰片 0.1-0.4g
乳铁蛋白 6-8g
乳免疫球蛋白 6-8g
乳过氧化物酶 6-7g
维生素C 0.1-1g
甜蜜素 0.005-0.008g
乙醇 1-2ml
蒸馏水 100-150ml。
进一步的，所述乳铁蛋白为铁饱和度为5~8%的低铁饱和度乳铁蛋白。
进一步的，所述低铁饱和度乳铁蛋白的制备步骤为：
第1步，使用阳离子交换树脂对牛乳中的乳铁蛋白进行吸附、解析；所述解析过程是采用二级解析，第一级解析是采用1～2.5%的盐溶液解析，解析液是乳过氧化物酶蛋白，弃去；第二级解析是采用3.5～7%的盐溶液解析，解析液送入第2步处理；所述的盐溶液是指钠盐、钾盐或者钙盐溶液；
第2步，对第1步得到的解析液采用分离膜进行浓缩；所述的分离膜是截留分子量在1000～30K的超滤膜；
第3步，第2步得到的浓缩液采用不溶性Fe3+螯合树脂进行吸附，再采用分离膜对浓缩液进行浓缩；所述吸附操作时需要在浓缩液中加入醋酸、醋酸盐以及枸橼酸盐，配制其吸附环境中枸橼酸盐浓度为0.1mol/L~0.5mol/L,并调节pH至5.0～6.7；所述的分离膜是截留分子量在1000～30K的超滤膜。
进一步的，所述的第2步得到的浓缩液在送入第3步之前，可再经过一次弱酸型阳离子树脂的吸附、解附和超滤膜的浓缩处理；所述的弱酸型阳离子树脂是指CM树脂；所述的不溶性Fe3+螯合树脂是指D403螯合树脂。
进一步的，所述的第3步中，所述的第3步中，树脂的吸附时间20～120分钟，吸附时搅拌桨转速速率为20～150rpm，吸附温度在3～30℃。
进一步的，所述第1步中，阳离子交换树脂的制备步骤为：
第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体PS-acyl-Cl，加入60ml四氢呋喃溶胀12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比PS-acyl-Cl：乙二胺：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；
第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺3g、丙烯酸双环戊烯基酯、K2CO3 5g、四丁基溴化铵12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。
本发明中的慢性咽炎膜剂的制备方法，包括以下步骤：
a)取聚乙烯醇，加蒸馏水溶胀过夜，在75-95℃水浴加热，得第一胶浆；
b）取羧甲基纤维素钠，加蒸馏水溶解，在75-95℃水浴加热，得第二胶浆；
c）取冰片，加入乙醇溶解，得第一溶液；
d）取乳铁蛋白、乳免疫球蛋白、乳过氧化物酶，加入蒸馏水溶解，得第二溶液；
e)将第一胶浆、第二胶浆混合，加入甘油，放入75-95℃水浴加热，得第三胶浆；
f）将第一溶液和第二溶液加入第三胶浆，再加入维生素C、甜蜜素，加入蒸馏水使得水总量为100-150ml；混合均匀后，放入40-65℃水浴保温，静置脱泡或负压脱泡；
g）脱泡后的浆料送制膜机制膜，即得慢性咽炎膜剂。
进一步的，所述步骤g）成膜厚度为0.15-0.4mm,面积为3-6 cm2。
本发明中的主要有效成为为乳铁蛋白、乳免疫球蛋白和乳过氧化物酶，均为从牛乳清中分离得到的天然活性成分：作用机理以及功能分别如下：
乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白。其高度铁结合亲和性使它具有良好的抑菌杀菌作用。铁元素对绝大多数微生物来说是生存必需的，而乳铁蛋白可通过与其竞争铁元素而从根本上抑制细菌生长。另外，乳铁蛋白还可以与细菌的细胞壁结合，破坏细胞壁结构，从而导致细菌死亡。乳铁蛋白可以有效地调节人体内部代谢，调节内分泌，提高人体免疫力，从根本上解决由代谢紊乱引起的慢性咽炎。除此之外，乳铁蛋白通过激发黏膜免疫系统，可以有效的促进黏膜修复，从而缩短发病时间，减少患者痛苦。乳铁蛋白代谢产物在人体内具有可利用性与无刺激性，因此可以作为治疗慢性咽炎的理想药剂。
乳免疫球蛋白，其中以丙种免疫球蛋白为主，它能和相应抗原特异性结合，抗原可以是细菌、病毒和毒素，它们被免疫球蛋白结合后，便失去了破坏机体健康的能力，它可以激活补体，与相应的抗原结合后，最终发生细菌、病毒、肿瘤细胞被溶解作用。它还起调理作用，促进吞噬细胞对细胞等抗原的吞噬，或病毒感染的靶细胞结合吞噬和触发吞噬细胞对肿瘤细胞各种病毒的杀伤破坏作用。所以对感冒、反复呼吸道感染、支气管炎、肺炎、哮喘性支气管炎、流行性感冒、腮腺炎、水痘、麻疹、肾病综合症、过敏性鼻炎、湿疹、癫痫、红斑狼疮、关节炎、内风湿性关节炎等能全面调节人体免疫力，激活免疫功能，帮助机体免疫系统彻底杀灭入侵的病毒、细菌。
乳氧化酶蛋白，它能破坏细菌、病毒的细胞，是一种抵御入侵的细菌、病毒的机体保护性蛋白，是天然的抗菌素，强力的抑菌抗菌，而不会伤及有益菌，不会产生抗体，无副作用。
本发明制出的膜剂外观完整光洁，厚度一致，色泽均匀，无明显气泡，且添加了天然活性成分，放入口中后，能够紧密的粘附在口腔内表面，且没有明显的异物感，有效地隔离咽炎面与口腔环境，使药物在较长时间内以较高浓度缓慢释放发挥作用，对治疗慢性咽炎十分有效。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明做进一步的描述。
实施例 1
1、称取聚乙烯醇17-88 3.2g加入40ml水溶胀过夜，放入90℃水浴至溶解，得胶浆1；
2、称取羧甲基纤维素钠6.8g加入70ml水溶解，放入90℃水浴至溶解，得胶浆2；
3、称取0.2g冰片加入1.5ml乙醇溶解；
4、将胶浆1、胶浆2混合，加入3ml甘油混合均匀，放入90℃水浴至混合均匀；
5、称取Vc 0.5g，甜蜜素0.008g，乳铁蛋白6g，乳免疫球蛋白6g、乳过氧化物酶6g用水溶解，得溶液；
6、步骤4得到的混合物温度降低后，加入步骤5溶液与步骤3已溶解的冰片，搅拌均匀后放置65℃恒温环境下，静置脱泡或负压脱泡；
7、将脱泡后的浆料送制膜机制膜，控制厚度为0.1-0.4mm为好；剪切成面积约3-6 cm2的膜片。
实施例 2
1、称取聚乙烯醇17-88 4.5g加入40ml水溶胀过夜，放入90℃水浴至溶解，得胶浆1；
2、称取羧甲基纤维素钠5.5g加入70ml水溶解，放入90℃水浴至溶解，得胶浆2；
3、称取0.3g冰片加入1.5ml乙醇溶解；
4、将胶浆1、胶浆2混合，加入2.5ml甘油混合均匀，放入90℃水浴至混合均匀；
5、称取Vc 0.5g，甜蜜素0.008g，乳铁蛋白8.5g，乳免疫球蛋白8g，乳过氧化物酶7g用水溶解，得溶液；
6、步骤4得到的混合物温度降低后，加入步骤5溶液与步骤3已溶解的冰片，搅拌均匀后放置65℃恒温环境下，静置脱泡或负压脱泡；
7、将脱泡后的浆料送制膜机制膜，控制厚度为0.1-0.4mm为好。剪切成面积约3-6 cm2的膜片。
实施例 1、2 的理化指标如下
性状
本发明制出的膜剂为外观完整光洁，厚度一致，色泽均匀，韧性较好，柔软度适中，无明显气泡的透明片状膜剂。
厚度检测法
取实施例1-2制备的膜用千分表测量膜的四面，其厚度公差均符合 ± 0.05mm的规定。
重量检查法
取实施例 1 -2制备的膜，精密称定，均符合 210+20％ mg 的规定。
溶解时间检查法
取实施例1-2制备的宽2.5cm，长5cm的薄膜，用一夹口宽于2.5cm的夹子夹住，连夹一起浸入水中，到溶解断离时间均不大于 50 秒，符合规定。
pH 值测定
取实施例 1 -2制备的 (5cm*5cm) 药膜 3 片 , 加纯化水 100ml, 超声 45min, 滤过。滤液用 pH 计测定，得 pH 值为 6.5-7.0。
膜剂在口腔内溶解时间对比，取药店购买的口腔膜剂与本产品比较
样品 溶解时间（min）
购买口腔膜剂 10
实施例1样品 35
实施例2样品 40
膜剂刺激性
实施例 1、2制备的膜剂贴附于 30 名志愿者口腔颊膜上 ,30 分钟不脱落 , 粘膜局部未出现红斑和水肿 , 自觉无刺激性。
该膜剂治疗慢性咽炎效果考察
以下利用试用感觉来评价实施例 1、2制造出的膜剂的功效。采用民意调查评分法，选取30名有慢性咽炎的人作为试用对象，任意分成三组，分别用实施例1、2制备的膜剂贴于舌根处。每天使用两次，使用时间为一周。各项使用效果总分为 5 分 ：5 分为最高分，表示很好，非常满意 ；4 分为较好 ；3 分为可以接受 ；3 分以下为不好，不能接受。以下为各项平均得分。结果见表 1 ：
表 1 治疗慢性咽炎效果考察
使用效果 实例1各项平均得分 实例2各项平均得分
口感 4.6 4.8
治疗慢性咽炎效果 4.5 4.7
外观 4.9 4.8
由表可知，本发明中由实施例2制得的膜剂治疗效果更好。
综上所述，本发明所制的该慢性咽炎膜剂外观完整光洁，厚度一致，色泽均匀，韧性较好，柔软度适中，口感较好，治疗慢性咽炎的效果较好。
由于低铁饱和度乳铁蛋白的抗菌活性比高铁饱和度乳铁蛋白的抗菌活性高，因此本发明中慢性咽炎膜剂优选采用铁饱和度为5-8%的低铁饱和度乳铁蛋白；以下提供一种从牛乳中提取与制备高纯度低铁饱和度乳铁蛋白的方法，它分别用放置阳离子交换树脂的搅拌罐来吸附、解附牛乳中乳铁蛋白，并辅以膜分离技术将其分离、浓缩，可以实现对乳铁蛋白的高度纯化；接下来，将所得乳铁蛋白浓缩液放置不溶性Fe3+螯合树脂（如D403螯合等系列树脂）的搅拌罐来吸附铁离子使其失去铁离子变为不饱和状态，并辅以膜分离将其浓缩纯化。
在使用阳离子交换树脂对乳铁蛋白进行吸附、解析时，搅拌罐可调搅拌桨转速速率为20～100rpm;罐内侧壁有增涡流挡板，罐底设置带过滤板的树脂床，在树脂床上的树脂层上方8～12cm高度处设置快速导流抽滤管。罐内设置供自动控制的各种传感器pH计，重量计，电导率计及温度计，罐内液体保温温度为3～60℃。乳铁蛋白吸附树脂为阳离子交换树脂，树脂吸附解附的次数和条件可以根据不同产品和产品纯度的要求设定；树脂的吸附时间为20～120分钟，吸附温度在3～30℃。树脂的解附采用两级盐浓度分别解附乳过氧化物酶蛋白、乳铁蛋白。第一级盐浓度为1～2.5%，解附乳过氧化物酶蛋白，解附时间为20～120分钟；第二级盐浓度为3.5～7%，解附乳铁蛋白，解附时间为20～120分钟；解附的搅拌速率为20～150rpm。树脂解附的时间为20～120分钟，树脂解附所用的盐为钠盐、钾盐、钙盐；乳铁蛋白解附液通过0.05～1.4微米的微滤膜将乳铁蛋白解附液除菌，去残余的脂肪与其他小颗粒；再用1K～50K分子截留量的超滤膜进行脱盐和浓缩。
在一个实施方式中，为了提高乳铁蛋白的纯度，可以对经上述工艺吸附解附脱盐浓缩的乳铁蛋白浓液再经过一次弱酸型阳离子树脂（如CM树脂）的吸附、解附和超滤膜的浓缩获得的。
上述得到的浓缩液再放置于不溶性Fe3+螯合树脂如D403螯合树脂，加入醋酸溶液、醋酸盐、枸橼酸盐作为媒介，配制其吸附环境浓度为0.05mol/L～1.0mol/L，调pH4.0～6.7，加以搅拌吸附乳铁蛋白中铁离子，树脂吸附搅拌时间、媒介浓度、转速、pH可根据产品对铁饱和度的要求设定（经实验测定，吸附时间对铁饱和度影响最大，拟取10～150分钟）；树脂的吸附时间10～150分钟，搅拌桨转速速率为10～150rpm，吸附温度在3～30℃。吸附后清液用1K-50K分子截留量的超滤膜进行脱盐和浓缩。将乳铁蛋白浓液进行真空冷冻干燥制成冻干粉。
树脂经吸附工艺过程后，所吸附的铁离子用1mol/L～3mol/L盐酸浸泡即可将树脂解附再生，再用RO水冲洗即可供下一批次吸附之用。
实施例3 阳离子交换树脂的制备
本发明所使用的阳离子交换树脂可以通过如下的方法制备得到：
第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体(PS-acyl-Cl)，加入60ml四氢呋喃溶胀12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比(PS-acyl-Cl)：乙二胺（EDA）：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；
第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸(AMPS)16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺(NBMA)3g、丙烯酸双环戊烯基酯（DCPA）、K2CO3 5g、四丁基溴化铵（TBAB） 12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。
实施例4阳离子交换树脂的制备
与实施例3的区别在于第2步中未加入NBMA。
本发明所使用的阳离子交换树脂可以通过如下的方法制备得到：
第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体(PS-acyl-Cl)，加入60ml四氢呋喃溶胀12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比(PS-acyl-Cl)：乙二胺（EDA）：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；
第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸(AMPS)16g、丙烯酸双环戊烯基酯（DCPA）、K2CO3 5g、四丁基溴化铵（TBAB） 12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。
实施例5乳铁蛋白的吸附、解附试验
配备3份100ml 1.6wt%乳铁蛋白溶液于250ml烧杯中，各取20μl进高效液相色谱仪检测，峰面积分别为1240.0034（万）、1241.6533（万）和1240.0535（万），分别将100gSPC70树脂、实施例1和实施例2中的阳离子交换树脂分别100g置于上述盛有250ml乳铁蛋白溶液的烧杯中，吸附搅拌速率为60rpm，每10min取样一次进行检测，实验数据如下表看出实施例4和5中阳离子树脂提高生产回收率，改善吸附解附所消耗的时间。另外，再经过盐溶液淋洗、解附后计算蛋白含量。
淋洗、解附的操作是：采用两级盐浓度分别解附乳过氧化物酶蛋白、乳铁蛋白。第一级盐浓度为1.5%，采用的是NaCl水溶液，解附乳过氧化物酶蛋白，解附时间为70分钟；第二级盐浓度为5.0%，采用的是NaCl水溶液，解附乳铁蛋白，解附时间为80分钟；解附的搅拌速率为100rpm。乳铁蛋白解附液通过0.2微米的微滤膜将乳铁蛋白解附液除菌，去残余的脂肪与其他小颗粒；再用2000分子截留量的超滤膜进行脱盐和浓缩。
从上表可以看出，采用SPC70树脂、实施例4和实施例5中的阳离子交换树脂都可以较好地获得乳铁蛋白的吸附、解附效果，不过回收率上还是有所区别。
实施例6 乳铁蛋白的提取与制备试验
半脱脂牛奶1890L，pH6.7，总蛋白为3.38g/L，乳铁蛋白浓度为126mg/L，将SPC70树脂加入搅拌罐，吸附80min，搅拌速率为60rpm，收集已吸附后的牛奶并用RO水冲洗树脂，加入第一级100L 2.5%NaCl水溶液解附40min，搅拌转速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集；加入第二级100L 5.5%NaCl水溶液解附40min，搅拌转速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集树脂3次。第二级的解吸液以及第二次RO淋洗液合并收集共180L，输送到0.1μm的微滤膜设备中进行除菌、除杂；用30K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，取样检测其铁饱和度为20%；将乳铁蛋白浓液输入到装有CM树脂罐中除去杂蛋白，收集已吸附杂蛋白后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，将其中的少量浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.1%，总蛋白为96.3%，铁饱和度20%；再将剩余的乳铁蛋白浓液输入到装有放置D403螯合树脂罐中进行脱铁，加入0.1mol/L枸橼酸盐，并醋酸-醋酸钠缓冲液调pH至6.0，加以搅拌吸附铁离子，树脂吸附时间120分钟，搅拌桨转速速率60rpm。收集以吸附铁离子后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，收集浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.0%，总蛋白为96.3%，铁饱和度7%。
实施例7乳铁蛋白的提取与制备试验
半脱脂牛奶1890L，pH6.7，总蛋白为3.38g/L，乳铁蛋白浓度为126mg/L，采用实施例1中描述的步骤操作生产阳离子交换树脂，将树脂加入搅拌罐，吸附80min，搅拌速率为60rpm，收集已吸附后的牛奶并用RO水冲洗树脂，加入第一级100L 2.5%NaCl水溶液解附40min，搅拌转速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集；加入第二级100L 5.5%NaCl水溶液解附40min，搅拌转速40rpm，收集解附液后用RO水淋洗收集树脂3次。第二级的解吸液以及第二次RO淋洗液合并收集共180L，输送到0.1μm的微滤膜设备中进行除菌、除杂；用30K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，取样检测其铁饱和度为20%；将乳铁蛋白浓液输入到装有CM树脂罐中除去杂蛋白，收集已吸附杂蛋白后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，将其中的少量浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.2%，灰分1.1%，总蛋白为96.7%，铁饱和度20%；再将剩余的乳铁蛋白浓液输入到装有放置D403螯合树脂罐中进行脱铁，加入0.1mol/L枸橼酸盐，并调pH至6.0，加以搅拌吸附铁离子，树脂吸附时间120分钟，搅拌桨转速速率60rpm。收集以吸附铁离子后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，收集浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.1%，灰分1.0%，总蛋白为96.7%，铁饱和度7%。
实施例8乳铁蛋白的提取与制备试验
与实施例6的区别在于：将剩余的乳铁蛋白浓液输入到装有放置D403螯合树脂罐中进行脱铁，加入1.0mol/L枸橼酸盐，并醋酸-醋酸钠缓冲液调pH至4.0，加以搅拌吸附铁离子，树脂吸附时间20分钟，搅拌桨转速速率150rpm。收集以吸附铁离子后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，收集浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.0%，总蛋白为96.4%，铁饱和度7%。
实施例9乳铁蛋白的提取与制备试验
与实施例7的区别在于：将剩余的乳铁蛋白浓液输入到装有放置D403螯合树脂罐中进行脱铁，加入0.3mol/L枸橼酸盐，并醋酸-醋酸钠缓冲液调pH至6.7，加以搅拌吸附铁离子，树脂吸附时间70分钟，搅拌桨转速速率80rpm。收集以吸附铁离子后的乳铁蛋白溶液继续用10K分子截留量的超滤膜设备进行脱盐浓缩，收集浓液进行冷冻干燥所得淡粉色干粉。粉末含水量3.0%，灰分1.0%，总蛋白为96.5%，铁饱和度8%。
本发明提供的方法具有乳铁蛋白提取与制备纯度高的优点，同时能够降低乳铁蛋白中Fe3+离子含量，使铁饱和度降低至5-8%，从而明显提高了乳铁蛋白的抗菌活性。此外通过调整Fe3+螯合树脂吸附的时间、搅拌速度以及媒介的浓度、pH，可以对乳铁蛋白处理后的铁饱和度进行控制，以满足不同产品应用对乳铁蛋白铁饱和度的要求。

Claims (9)

1. 一种慢性咽炎膜剂，其特征在于，由以下含量的原料制备而成 ：
聚乙烯醇 3-10g
羧甲基纤维素钠 4-10g
甘油 1-5ml
冰片 0.1-3g
乳铁蛋白 6-10g
乳免疫球蛋白 5-8g
乳过氧化物酶 5-10g
维生素C 0.1-1g
甜蜜素 0.005-0.15g
乙醇 1-10ml
蒸馏水 100-150ml。
2.根据权利要求1所述的慢性咽炎膜剂，其特征在于，由以下含量的原料制备而成 ：
聚乙烯醇 3-5g
羧甲基纤维素钠 5-7g
甘油 2-3ml
冰片 0.1-0.4g
乳铁蛋白 6-8g
乳免疫球蛋白 6-8g
乳过氧化物酶 6-7g
维生素C 0.1-1g
甜蜜素 0.005-0.008g
乙醇 1-2ml
蒸馏水 100-150ml。
3.根据权利要求1或2所述的慢性咽炎膜剂，其特征在于，所述乳铁蛋白为铁饱和度为5~8%的低铁饱和度乳铁蛋白。
4.根据权利要求3所述的慢性咽炎膜剂，其特征在于，所述低铁饱和度乳铁蛋白的制备步骤为：
第1步，使用阳离子交换树脂对牛乳中的乳铁蛋白进行吸附、解析；所述解析过程是采用二级解析，第一级解析是采用1～2.5%的盐溶液解析，解析液是乳过氧化物酶蛋白，弃去；第二级解析是采用3.5～7%的盐溶液解析，解析液送入第2步处理；所述的盐溶液是指钠盐、钾盐或者钙盐溶液；
第2步，对第1步得到的解析液采用分离膜进行浓缩；所述的分离膜是截留分子量在1000～30K的超滤膜；
第3步，第2步得到的浓缩液采用不溶性Fe3+螯合树脂进行吸附，再采用分离膜对浓缩液进行浓缩；所述吸附操作时需要在浓缩液中加入醋酸、醋酸盐以及枸橼酸盐，配制其吸附环境中枸橼酸盐浓度为0.1mol/L~0.5mol/L,并调节pH至5.0～6.7；所述的分离膜是截留分子量在1000～30K的超滤膜。
5.根据权利要求4所述的慢性咽炎膜剂，其特征在于，所述的不溶性Fe3+螯合树脂是指D403螯合树脂。
6.根据权利要求4所述的慢性咽炎膜剂，其特征在于，所述的第3步中，树脂的吸附时间20～120分钟，吸附时搅拌桨转速速率为20～150rpm，吸附温度在3～30℃。
7.根据权利要求4所述的慢性咽炎膜剂，其特征在于，所述第1步中，阳离子交换树脂的制备步骤为：
第1步，取10g氯乙酰化聚苯乙烯-二乙烯基苯微球载体PS-acyl-Cl，加入60ml四氢呋喃溶胀12 h，再加入40ml甲醇，然后按照重量比PS-acyl-Cl：乙二胺：碳酸氢钠为1：8：0.7，依次加入乙二胺和碳酸氢钠，在于80℃下搅拌反应24h，反应结束后，将产物倒入砂芯漏斗中，用蒸馏水洗至中性，甲醇洗滤3遍真空干燥至恒重，得到交联EDA微球载体；
第2步，称60g取交联EDA微球载体，置于三颈烧瓶中，加入二甲基甲酰胺溶胀12 h后，加入2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸16g、N-丁氧基甲基丙烯酰胺3g、丙烯酸双环戊烯基酯、K2CO3 5g、四丁基溴化铵12g，搅拌下于一定温度的油浴中回流反应，反应结束后将反应产物转移至沙芯漏斗中，用5wt%的HC1清洗4遍后用蒸馏水滤洗至中性，最后用甲醇洗滤后抽干，真空干燥至恒重，得到阳离子交换树脂。
8.权利要求1-7任一所述的慢性咽炎膜剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)取聚乙烯醇，加蒸馏水溶胀过夜，在75-95℃水浴加热，得第一胶浆；
b）取羧甲基纤维素钠，加蒸馏水溶解，在75-95℃水浴加热，得第二胶浆；
c）取冰片，加入乙醇溶解，得第一溶液；
d）取乳铁蛋白、乳免疫球蛋白、乳过氧化物酶，加入蒸馏水溶解，得第二溶液；
e)将第一胶浆、第二胶浆混合，加入甘油，放入75-95℃水浴加热，得第三胶浆；
f）将第一溶液和第二溶液加入第三胶浆，再加入维生素C、甜蜜素，加入蒸馏水使得水总量为100-150ml；混合均匀后，放入40-65℃水浴保温，静置脱泡或负压脱泡；
g）脱泡后的浆料送制膜机制膜，即得慢性咽炎膜剂。
9.根据权利要求8所述的慢性咽炎膜剂的制备方法，其特征在于，所述步骤g）成膜厚度为0.15-0.4mm,面积为3-6 cm2。
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