CN105985398A - 一种四环三萜化合物及其医药用途 - Google Patents

Abstract

发明人追踪研究了三七(：Panax pseudoginseng Wall.var.notoginseng(Burkill)Hoo et Tseng)抗肿瘤的活性，从活性部位(皂苷)中分离得到一个四环三萜单体化合物(代号：Y1218)，并用现代光谱技术鉴定了它的分子结构。该单体化合物具有抗癌效果。

Description

一种四环三萜化合物及其医药用途

技术领域：

本发明属于新医药研究领域。本发明涉及一个具有抗癌效果的化合物，具体涉及它的提取分离方法和体外抗癌的效果，还具体涉及它与药物载体(按一定比例)配物后的制剂及其应用。

技术背景：

三七叶(拉丁学名：Panax pseudoginseng Wall.var.notoginseng(Burkill)Hoo et Tseng)是五加科人参属多年生草本植物，也是名贵中药三七的枝叶部分。三七具有止血散瘀，消肿定痛等功效，近年发现具有一定的抗肿瘤作〈参考文献1.尚西亮，傅华群，刘佳等.三七总皂苷对入肝癌细胞的抑制作用[J]中国临床康复，2006.10(23)：121〉。

发明人在系统追踪研究三七抗肿瘤的活性部位(皂苷)的抗癌活性成分的过程中，从三七叶中分离得到一个四环三萜单体化合物(代号：Y1218，下同)，并用现代光谱技术鉴定了它的分子结构(如式1)。该单体化合物具有抗癌效果。经过检索，国内外均没有发现化合物Y1218及其抗癌活性的相关文章、专利和报道。

发明内容：

本发明的目的，是用现代国内外最为先进的分离、鉴定和药物评价体系、技术，对传统名贵中药三七抗癌的物质基础进行系统的研究，以求发现新的具有成药前景的抗癌化合物单体，为抗癌新药的研究提供基础物质。

本发明目的另一目的，是阐述Y1218制备方法及其分子结构确证。

本发明目的另一目的，是Y1218的抗癌作用及其医药用途。

本发明原料药三七产自我国云南文山，经过鉴定为人工种植的五加科人参属多年生草本植物三七(拉丁学名：Panax pseudoginseng Wall.var.notoginseng (Burkill)Hoo et Tseng)的枝叶(俗称：三七叶)。

本发明涉及的化合物Y1218，是为式1.所表示的分子结构，其中文名称为：达玛烷-[12-羟基-20，25-环氧基]-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。英文名：Dammarane-[12-o1-20，25-epoxy]-3-O-beta-D-glucopyranside。代号为：Y1218。

本发明涉及的化合物Y1218，是将三七叶，用当今的植物化学手段提取、分离得到的，并用当谱技术得以确证分子结构。具体地说，是原料药经过水或50-100％醇类，(可以是乙醇，丙醇或丁醇)的提取，将提取物浓缩至干燥，再用其他有机溶剂(可以是石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮)等提取，经过柱层析分离(柱层析洗脱剂可以是上述醇类和其他有机溶剂的任意组合)，再经过重结晶得到Y1218。发明人的结构鉴定手段，包括熔点、红外、质谱和核磁(¹H MNR，¹³C NMR，HMBC，HMQC)等。提取分离和结构鉴定的具体实施过程，将在实施例中进行详细阐述。

本法明还涉及Y1218及其组合物对癌症细胞的作用。具体的实施过程也将在实施 例中进行详细阐述

本发明还涉及Y1218及其组合物，作为治疗和预防癌症的医药用途。

本发明还涉及Y1218及药用载体，以及该药物化(组)合物可通过注射、口服或局部途径给药，给药剂型可以是例如片剂，胶囊、缓释和注射液等。根据本发明，本发明药物组合物可按本领域已知方法制备，例如将该化合物与药用载体混合。

具体实施方式：现结合实例，对本发明做进一步的说明，但本发明的范围不限于以下的实施例。

实施例1

Y1218的制备。

将干品三七叶原料药60kg常规粉碎，用乙醇提取，每次用乙醇1升，提取5次，合并。减压蒸发至恒重。得到乙醇提取物2.17kg。将乙醇提取物用热水溶解，并依次用正己烷、乙酸乙酯和正丁醇进行分配提取。得到正丁醇提取物0.73kg。将正丁醇取物反复经硅胶H(10～40μm)柱层析层分离，用正丁醇∶醋酸∶水＝(2～8)∶(1～4)∶(3～7)梯度洗脱，得到Fr1。将Fr1反复经硅胶柱层析，用氯仿∶甲醇＝(2～20)∶1洗脱，得到Y1218 0.78g(万分之0.013)。

实施例2

Y1218的结构鉴定。

Y1218为白黄色粉末。mp166-167；IR(cm^-1)3400，2971，1450，1386；[α]²⁰ _D+3.83°(MeOH；C＝0.5)；FAB-MS(m/z)，623[M+H]⁺，主要碎片峰495[623-128(C₈H₁₆O，侧链)]⁺，461[623-162(Glc)]⁺，提示有一个6碳糖，据此推测其分子量为622，分子式为C₃₆H₆₂O₈；Y1218的¹³C NMR谱数据与人参皂苷Rh2相比较除了C₂₀-C₂₇不同外，其他的数据基本一致。表明Y1218的基本骨架与Rh2是相同的，即为达玛烷型基本结构。 ¹H MNR出现δ4.96(1H，d，J＝7.84Hz)，表明Y1218分子中含有1个β构型的吡喃糖，将Y1218经盐酸水解后得到D-吡喃葡萄糖，确证糖基为葡糖。也就进一步证实Y1218 与Rh2除了C₂₀～C₂₇的连接方式不同外，其他完全相同。

经¹H MNR，¹³C NMR，HMBC和HMQC综合解析，首先确定了Y1218分子中C₂₀～C₂₇的碳氢归属，并比对Rh2的碳氢归属，进一步确定了Y1218整个分子的碳氢归属及其结构(如式2)。与先前赵平等人报道的化合物1结构一致〈参考文献2：赵平，刘玉清，杨崇仁等.三七根的微量成分(1)[J]云南植物研究1993，15(4)，409-412〉。Y1218的碳氢主要归属如下：

¹³C NMR(NO.)：δ39.2(C₁)，26，7(C₂)，88.8(C₃)，40.1(C₄)，56.4(C₃)，18.5(C₆)，35，2(C₇)，37.0(C₈)，50.1(C₉)，39.7(C₁₀)，31.2(C₁₁)，70.2(C₁₂)，49.8(C₁₃)，51.3(C₁₄)，31.3(C₁₅)，25.4(C₁₆)，55.0(C₁₇)，16.8(C₁₈)，16.5(C₁₉)，76.9(C₂₀)，27.3(C₂₁)，35.8(C₂₂)，30.0(C₂₃)，36.5(C₂₄)，73.0(C₂₅)，33.2(C₂₆)，19.6(C₂₇)，28.2(C₂₈)，15.8(C₂₉)，17.2(C₃₀)，106.9(C_{1 ’})，75.8(C_{2 ’})，78.8(C_{3 ’})71.8(C_{4 ’})，78.4(C_{5 ’})，63.1(C_{6 ’})

¹H MNR(NO.)：δ4.96(1H，d，J＝7.84Hz，Glc H-1)，3.63(1H-C₁₂)，1.94(1H-C₁₇)，1.63(1H-C₁₃)，1.27(1H-C₉)，1.16(3H-C₂₆)，1.10(3H-C₂₇)，1.10(3H-C₂₁)，0.86(3H-C₁₈)0.78(3H-C₁₉)，0.78(3H-C₃₀)0.77(3H-C₂₈)，0.72(3H-C₂₉)。

实施例3 Y1218体外对肿瘤细胞的活性

在体外对肿瘤细胞的抑制作用 实验肿瘤细胞：转移性结肠癌SW620、胃腺癌BGC-823等。用MTT方法测定体外细胞毒性，取生长良好的细胞200ul加入96孔板中，CO₂培养箱中培养24小时。加入受试药物20μl/孔，培养48小时。将20μl MTT加入96孔板中，反应4小时，吸去上清液，加入20μl DMSO/孔，用酶联免疫检测仪在波长为570nm处测定每孔的吸光值，计算对细胞的杀伤作用。测定Y1218抑制50％肿瘤细胞生长的浓度(IC₅₀)，并与紫杉醇比较了作用的强弱。比较结果如表1.。

表1.Y1218体外活性(IC₅₀：μl/ml)

化合物	SW620	BGC-823	A549	MCF-7	PC-3
						紫杉醇	0.02	0.004	0.04	0.006	0.004
Y1218	0.06	0.007	0.09	0.009	0.008

SW620转移性结肠癌，BGC-823胃腺癌，A549非小细胞肺癌，MCF-7乳腺癌，PC-3前列腺癌。

Claims (7)

1.化合物Y1218(式1.)。名称：达玛烷-[12-羟基-20，25-环氧基]-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。英文名：Dammarane-[12-ol-20，25-epoxy]-3-O-beta-D-glucopyranside。

2.Y1218制备方法。乙醇提取，得到乙醇提取物。将乙醇提取物在正丁醇-水中进行分配。得到正丁醇提取物。将正丁醇取物经硅胶柱层析层分离，正丁醇/醋酸/水梯度洗脱，得到Y1218。所用的有机体溶剂包括水，醇类如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等；酮类如丙酮，丁酮等。

3.根据权利要求1含有Y1218的药物载体的组合物。

4.根据权利1和3所述的Y1218药物组合物的制剂，包括：液体制剂(注射剂，口服液，滴鼻液)、固体制剂(片剂，胶囊剂、颗粒剂和缓释剂等)，外用制剂(如：贴剂，喷雾剂等)，气溶胶剂和涂布剂等。

5.权利要求3药物载体，为构成固体药物的辅料包括崩解剂、稀释剂、黏合剂、润滑剂等和构成液体药物的辅料包括溶媒、pH调节剂、渗透压调节剂、抗氧剂、金属络合剂、防腐剂、矫味剂等。

6.根据权利要求1～5具有预防和治疗癌症的药物组合物，其特征是预防和治疗癌症，如：转移性结肠癌(SW620)、胃腺癌(BGC-823)、非小细胞肺癌(A549)、乳腺癌(MCF-7)和前列腺癌PC-3等。

7.根据权利要求6，含有Y1218的药物组合物的给药途径为口服或注射。