CN109748945A - 四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物及其制备抗肿瘤药物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药现代化领域，涉及由绞股蓝皂苷Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化产生的四种具有抗肿瘤活性的化合物：6′‑acetyl‑gypenoside L、6′‑acetyl‑gypenoside LI、4′‑acetyl‑gypenoside L、4′‑acetyl‑gypenoside LI，以及这四种乙酰化衍生物在制备治疗肿瘤药物中的用途，所述的癌症选自：肺癌，肝癌，胃癌，前列腺癌。
Description
技术领域
本发明涉及四种由绞股蓝皂苷Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化产生的化合物，以及这四种乙酰化衍生物在制备治疗肿瘤药物中的用途，属于中药现代化领域。
背景技术
“绞股蓝”(Gynostemma Pentaphyllum(Thunb.)Makino.)，为葫芦科绞股蓝属草质多年生攀援植物，壮族医学称为“国虾薄”，为我国中医及壮医常用药材[1]。其分布广泛，易于种植管理，在我国秦岭以南地区均可种植，以陕西，福建，广西，湖北居多。绞股蓝叶中具有丰富的与人参皂苷结构相似的绞股蓝皂苷成分，且一年内可多次采集，相对于人参而言，绞股蓝皂苷更加廉价易得，故其极具经济开发价值[2]。
经高温高压方法处理后，绞股蓝热处理产物与原植物相比，具有更强的抗肿瘤活性。热处理过程中产生了原药材中没有的Gypenoside L和Gypenoside LI两种皂苷类化合物，并具有良好的抗肿瘤细胞活性[3]。不同肿瘤细胞所处环境不同对于药物分子的吸收效率不同，如脑部肿瘤由于血脑屏障的用对于脂溶性大的分子吸收效率更高，故对于有较强活性的抗肿瘤化合物而言，如何提高生物利用率成为现代药学研究的重点之一[4]。
利用乙酰化方法，产生的四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物与Gypenoside L和Gypenoside LI分子相比，具有更强的脂溶性，而仍保留抗肿瘤活性。乙酰化产生的 Gypenoside L和Gypenoside LI衍生物为抗癌药物提供了新的备选方案。
参考文献：
[1]梁启成，钟鸣.中国壮药学[M].广西民族出版社，2005.
[2]张涛，袁弟顺.中国绞股蓝种植资源研究进展[J].云南农业大学学报，2009，23(3)： 459-469.
[3]Xiang-Lan Piao，Qian Wu，JingYang，et al.Dammarane-type saponins fromheat-processed Gynostemma pentaphyllum show fortified activity against A549cells[J].Archives of Pharmacal Research，2013，Vol.36(7)：874-879.
[4]Denora N，Trapani A，Laquintana V，et al.Recent advances in medicinalchemistry and pharmaceutical technology-strategies for drug delivery to thebrain[J].Curr Top Med Chem，2009， 9：182-196.
发明内容
本发明的目的在于合成四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物，该乙酰化衍生物的制备方法，以及这四种乙酰化衍生物在制备治疗肿瘤药物中的用途。
本发明的四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物的制备方法如下：
取Gypenoside L和Gypenoside LI混合物，加入100倍量冰醋酸，105℃条件下加热3小时。将反应后的混合物减压浓缩，干燥得到Gypenoside L和Gypenoside LI及其乙酰化衍生物的混合物。
所述的四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物的分离及鉴定如下：
将干燥的Gypenoside L和Gypenoside LI及其乙酰化衍生物的混合物用甲醇超声溶解后，过0.45μm微孔滤膜，通过半制备液相色谱分离。分离得到4个化合物，用NMR及MS技术手段，根据文献，最终被鉴定为6′-acetyl-gypenoside L、6′-acetyl-gypenoside LI、4′-acetyl-gypenoside L、4′-acetyl-gypenoside LI(表1、表2、附图1、附图2)。
表1.四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物1H NMR数据表(600MHz，溶剂CD3OD)
表2.四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物13C NMR数据表(150MHz，溶剂CD3OD)
我们还发现，本发明制备得到的四种化合物对于肝癌、肺癌、胃癌和前列腺癌细胞均具有抑制作用，因此，本发明还提供这四种化合物在制备治疗肿瘤药物中的用途。
附图说明
1.附图1为四种四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物质谱图，由这四种化合物的质谱信息可以发现，四种化合物可能是在绞股蓝皂苷Gypenoside L和Gypenoside LI的化学结构基础之上发生乙酰化，增加了一个乙酰化基团。
2.附图2为四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物结构图，通过结合这四种乙酰化衍生物的质谱信息和核磁信息，可推断其发生乙酰化的位置为4’位和6’位，按化学命名法，这四种化合物命名为6′-acetyl-gypenoside L、6′-acetyl-gypenoside LI、4′-acetyl-gypenoside L、4′-acetyl-gypenoside LI。
3.附图3为乙酰化反应完成后Gypenoside L和Gypenoside LI与其乙酰化化合物的混合物半制备液相分离图，从色谱图可发现，发生乙酰化后生成的这四种化合物相比Gypenoside L 和Gypenoside LI而言，保留时间延长，及说明乙酰化产物极性更小，脂溶性更大。
具体实施方式
实施例1 Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物制备实验
4.Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化实验
取Gypenoside L和Gypenoside LI混合物，加入100倍量冰醋酸，105℃条件下加热3h。将所得混合物减压浓缩至干燥状态，即得Gypenoside L和Gypenoside LI与其乙酰化化合物的混合物。
5.Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物分离及鉴定实验
将获得的Gypenoside L和Gypenoside LI与其乙酰化化合物的混合物加入适量甲醇溶液溶解，过0.45μm微孔滤膜，利用半制备色谱仪进行分离，具体色谱条件如下：
HPLC型号：岛津6AD
检测器：UV检测器
检测波长：203nm
色谱柱：Thermo C18色谱柱(250×10mm，5μm)
柱温：30℃
流速：5mL/min
流动相：纯水(A)-乙腈(B)
洗脱条件：47％(B)等度洗脱
Gypenoside L和Gypenoside LI与其乙酰化化合物的混合物，分离结果见附图3。
获得四个乙酰化衍生物单体，利用NMR，MS检测获得其核磁数据和质谱数据。
实施例2抗肿瘤实验
1.细胞系及细胞培养
人肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2、胃癌细胞SGC7901、前列腺癌细胞PC-3，以含10％胎牛血清的DMEM培养基，与37℃、饱和湿度下、5.0％CO2的培养箱中培养，细胞呈单层贴壁生长。实验取对数生长期细胞。
2.CCK8法药物肿瘤活性抑制实验
取对数生长期的癌细胞，0.25％胰酶消化，10％胎牛血清的DMEM培养基重悬成单细胞悬液。调细胞液浓度为5×104个/mL，接种导96孔板，100μL/孔。24h细胞贴壁后，弃去原有培养基；加入用DMEM培养基稀释的质量浓度梯度(0、6.25、12.5、25、50、100μg/mL) 的6′-acetyl-gypenoside L、6′-acetyl-gypenoside LI、4′-acetyl-gypenoside L、 4′-acetyl-gypenoside LI 100μL/孔，每个质量浓度设5个复孔。孵育24h后，弃去原培养基，按100μL/孔加入含10％CCK8的DMEM培养基，导37℃，5％CO2培养箱孵育3h，用酶标仪于450nm检测吸光度。进行三次平行实验。计算肿瘤细胞半数抑制浓度IC50.计算公式如下：
寇氏改良法计算半数：IgIC50＝Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)
1)实验材料及仪器
培养基：DMEM培养基(GIBCO，美国)；
FBS(GIBCO，美国)；
胎牛血清(GIBCO，美国)；
胰酶(1∶250，活性＞250U/mg)(GIBCO，美国)；
96孔板(Corning，USA)；
CCK8试剂盒(东仁化学科技，上海)；
倒置显微镜(OPTEC，重庆光电仪器有限公司)
酶标仪(伯乐，美国)
XP205电子天平(梅特勒，瑞士)
细胞培养箱(Thermo Forma，美国)
人肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2、胃癌细胞SGC7901、前列腺癌细胞PC-3(北京协和细胞资源中心)
2)实验方法
人肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2、胃癌细胞SGC7901、前列腺癌细胞PC-3的抑制活性实验实验均采用CCK8法。
3)供试样品
阳性对照药物选用人参皂苷Rg3；四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物 6′-acetyl-gypenoside L、6′-acetyl-gypenoside LI、4′-acetyl-gypenoside L、4′-acetyl-gypenoside LI。
4)实验结果
对人肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2、胃癌细胞SGC7901、前列腺癌细胞PC-3均具有不同程度抑制活性，实验结果见表3
表3四种四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物IC50值
Claims (2)
1.四种Gypenoside L和Gypenoside LI乙酰化衍生物制备治疗肿瘤药物的用途，其特征在于该皂苷类化合物具有一下结构的一种：
。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤选自：肝癌、肺癌、胃癌、前列腺癌。
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|---|---|---|---|---|
| CN115477680A (zh) * | 2021-05-31 | 2022-12-16 | 中央民族大学 | 一种绞股蓝皂苷gypenoside L和gypenoside LI的制备方法 |
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2017
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| CN115477680A (zh) * | 2021-05-31 | 2022-12-16 | 中央民族大学 | 一种绞股蓝皂苷gypenoside L和gypenoside LI的制备方法 |
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