发明内容
本发明的目的在于提供一种高效、安全、速效的用于提高畜禽免疫力和预防疾病的紫贯柏根药物组合物,从而解决上述问题,组合物中还含有维生素C、柠檬酸,进一步克服了现有防治手段的不足。
本发明的另一目的是提供该用于提高免疫力和预防疾病的紫贯柏根药物组合物的制备方法及其应用。
本发明还提供了包含该紫贯柏根药物组合物的预混料、浓缩料或配合料。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
本发明提供一种用于提高畜禽免疫力和预防疾病的紫贯柏根药物组合物,包括下述重量份组分:中药组分30-80份、维生素C 1-20份、柠檬酸5-50份,其中,所述中药组分按重量份计由紫锥菊2-80份、玛卡2-80份、山茱萸1-50份、贯众1-30份、山豆根1-30份、侧柏叶1-30份制成。
在一个优选的实施方案中,本发明的用于提高畜禽免疫力和预防疾病的紫贯柏根药物组合物包括下述重量份组分:中药组分40-75份、维生素C 5-15份、柠檬酸10-45份,其中,所述中药组分按重量份计由紫锥菊20-70份、玛卡20-70份、山茱萸5-40份、贯众5-25份、山豆根5-25份、侧柏叶5-25份制成。
在进一步优选的实施方案中,本发明的用于提高畜禽免疫力和预防疾病的紫贯柏根药物组合物包括下述重量份的组分:中药组分50-70份、维生素C 8-12份、柠檬酸20-40份,其中,所述中药组分按重量份计由紫锥菊40-60份、玛卡40-60份、山茱萸10-30份、贯众10-20份、山豆根10-20份、侧柏叶10-20份制成。
在更进一步优选的实施方案中,本发明的用于提高畜禽免疫力和预防疾病的紫贯柏根药物组合物包括下述重量份组分:中药组分60份、维生素C 10份、柠檬酸30份,其中,所述中药组分按重量份计由紫锥菊50份、玛卡50份、山茱萸20份、贯众15份、山豆根15份、侧柏叶15份制成。
其中,所述的紫贯柏根药物组合物可为散剂、粉剂、预混剂、颗粒剂、片剂或其他可接受的剂型。
本发明还提供了该紫贯柏根药物组合物的制备方法,它包括如下步骤:
1)按重量配比分别称取紫锥菊、玛卡、山茱萸、贯众、山豆根、侧柏叶各味中药,分别粉碎成粗粉,加8-10倍量水煎煮2-3次,每次1-2小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至浸膏状,干燥,即为中药组分,备用;
2)按重量配比分别称取中药组分、维生素C、柠檬酸,混合均匀,加入相应的药学可接受的载体或者辅料制成相应的剂型。
本发明所述的紫贯柏根药物组合物可用于制备提高畜禽免疫力和预防疾病的药物。
本发明紫贯柏根药物组合物中的中药药物组分及其用量是通过大量反复实践得来的。本发明紫贯柏根药物组合物可用于提高畜禽免疫力和预防疾病。
本发明紫贯柏根药物组合物还可加入饲料中,用于制备促生长的饲料,如:本发明提供的预混料,也可用于制备浓缩料、配合料等饲料。
本发明采用中药与维生素、有机酸等添加剂组合方法提高免疫力和预防疾病,发挥协同功效,取得显著功效。中药提高免疫力,抗病毒抗菌、抗炎、解热镇痛,方中紫锥菊、玛卡激活免疫细胞,增强免疫力,提高体质,为君药;山茱萸收敛固脱,壮元气,为臣药;贯众清热解毒,凉血止血,山豆根清热解毒,消肿祛痰止咳,侧柏叶清热解毒,利五脏,为佐使药。诸药共用,共奏固本培元、扶正祛邪、清热解毒之功。维生素C具有促进细胞代谢,提高免疫力的功能,柠檬酸具有提高机体抗病力、提高成活率、促生长、抗菌抗病毒的特点,二者与中药共用,可发挥协同作用,从而达到更好的提高免疫力、预防疾病的效果。
本发明的用于提高畜禽免疫力和预防疾病的紫贯柏根药物组合物的优点和有益效果在于:
(1)本发明为中药与维生素、有机酸等组成的复方制剂,辨证论治,标本兼治,发挥协同作用,功效显著;
(2)本发明的紫贯柏根药物组合物组方合理、科学;
(3)本发明紫贯柏根药物组合物疗效好、疗效确切,见效快、使用方便、安全性高;
(4)本发明紫贯柏根药物组合物制剂稳定、制备工艺简单、成本低廉,产品质量稳定、可控,具有较强的市场竞争力。
实施例9
(1)称取下述重量的中药材:紫锥菊55份、玛卡55份、山茱萸30份、贯众20份、山豆根20份、侧柏叶20份,分别粉碎成粗粉,备用。
(2)取紫锥菊、玛卡、山茱萸、贯众、山豆根、侧柏叶,加10倍量水煎煮3次,每次2小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至浸膏状,干燥,即为中药组分,备用。
(3)再分别称取下述重量成分:中药组分65份、维生素C 15份、柠檬酸35份,再加入适量蔗糖和少量粘合剂,混合均匀,制粒,干燥,即得颗粒剂。
为进一步证明本发明紫贯柏根药物组合物的效果,申请人对本紫贯柏根药物组合物进行了临床疗效观察试验,以下通过试验例来进一步阐述本发明紫贯柏根药物的有益效果。
试验例1本发明紫贯柏根药物组合物对小鼠碳廓清能力的影响试验
通过观察本发明紫贯柏根药物组合物对小鼠碳廓清能力的影响,考察本发明紫贯柏根药物组合物的免疫增强效果。
1材料
试验药物:本发明实施例1、3、5、7制备的紫贯柏根药物组合物;对照药物:黄芪多糖提取物。
试验动物:BALB/C小鼠,雄性,60只,购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
2方法
试验共设6组,每组10只小鼠。灌胃给药,连续给药7天,分组情况及给药情况具体见表1。试验期间自由采食饮水,试验第8天,每组小鼠称体重,从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁,按每10g体重0.1ml计算。待墨汁注入,立即计时。注入墨汁后2、10分钟,分别从内眦静脉丛取血30μl,并立即将其加到3ml 0.1%Na2CO3溶液中。用751型分光光度计在600nm波长处测光密度值(OD),以0.1%Na2CO3溶液作空白对照。
试验结束后,将小鼠处死,取肝脏和脾脏,用滤纸吸干脏器表面血污,称重。以吞噬指数表示小鼠碳廓清的能力。按下式计算吞噬指数a:
表1 试验分组与用药情况
序号 |
组别 |
数目/只 |
药物 |
剂量 |
1 |
第1组 |
10 |
本发明实施例1,灌胃给药,连用7天 |
0.25g/kg |
2 |
第2组 |
10 |
本发明实施例3,灌胃给药,连用7天 |
0.25g/kg |
3 |
第3组 |
10 |
本发明实施例5,灌胃给药,连用7天 |
0.25g/kg |
4 |
第4组 |
10 |
本发明实施例7,灌胃给药,连用7天 |
0.25g/kg |
6 |
第5组 |
10 |
黄芪多糖提取物,灌胃给药,连用7天 |
0.5g/kg |
7 |
第6组 |
10 |
生理盐水,灌胃,连用7天 |
|
3结果与分析
具体结果见表2。在吞噬指数a方面,与第6组空白对照相比,第1-4组有极显著差异(P<0.01),第5组有显著差异(P<0.05)。第1-4组之间均没有显著差异(P>0.05)。第1-4组与第5组有显著差异(P<0.05)。在脾脏指数方面,与第6组空白对照相比,其它各组均没有显著差异(P>0.05),但第4组高于第6组;在肝脏指数方面,各组之间均没有显著差异(P>0.05)。
表2 试验结果
组别 |
吞噬指数a值 |
脾脏指数 |
肝脏指数 |
第1组 |
7.09±0.22A |
0.4061±0.0790 |
5.6655±0.5007 |
第2组 |
7.01±0.14A |
0.3909±0.0381 |
5.6817±0.4868 |
第3组 |
7.06±0.18A |
0.4049±0.1228 |
5.6604±0.4123 |
第4组 |
7.11±0.15A |
0.4257±0.0605 |
5.5783±0.4608 |
第5组 |
6.77±0.23b |
0.3835±0.0776 |
5.6653±0.2538 |
第6组 |
6.35±0.21c |
0.3810±0.0909 |
5.7419±0.4842 |
注:1)不同小写字母之间表示差异显著,不同字母大小之间表示差异极显著;2)吞噬指数a上,与第6组空白对照组相比,第1-5组P值分别为:0.000,0.000,0.000,0.000,0.013;与第5组黄芪多糖相比,第1-4组P值分别为:0.032,0.021,0.025,0.011。
4结论
本发明紫贯柏根药物组合物能显著提高小鼠碳廓清能力,且显著优于对照药物黄芪多糖提取物,其中本发明实施例7的紫贯柏根药物组合物效果最好。说明本发明实施例1、3、5、7的紫贯柏根药物组合物能提高小鼠单核-巨噬细胞功能,且与对照药物黄芪多糖提取物相比,在较低剂量下即可达到显著增强小鼠免疫力的效果,节约药物。
试验例2本发明紫贯柏根药物组合物对小鼠的免疫增强效果试验
通过观察本发明的紫贯柏根药物组合物对小鼠免疫指标力的影响,考察本发明的紫贯柏根药物组合物的免疫增强效果。
1材料
试验药物:本发明实施例2、4、6制备的紫贯柏根药物组合物;对照药物:黄芪多糖提取物。
试验动物:BALB/C小鼠,雄性,150只,16~18g。购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
2方法
试验共设5组,每组20只小鼠。第1-3组为试验药物组,依次给予本发明实施例2、4、6制备的药物组合物,给药剂量为0.25g/kg体重;第4组为药物对照组,给予黄芪多糖提取物,给药剂量0.5g/kg体重;第5组为空白对照组,灌胃生理盐水。连用7天。试验期间自由采食饮水,每天观察记录小鼠状况。试验分组情况见表3。
表3 试验分组情况
组别 |
药物 |
给药方式及剂量 |
数量 |
第1组 |
本发明实施例2 |
灌胃给药,0.25g/kg,连用7天 |
20 |
第2组 |
本发明实施例4 |
灌胃给药,0.25g/kg,连用7天 |
20 |
第3组 |
本发明实施例6 |
灌胃给药,0.25g/kg,连用7天 |
20 |
第4组 |
黄芪多糖提取物 |
灌胃给药,0.5g/kg,连用7天 |
20 |
第5组 |
生理盐水 |
灌胃,连用7天 |
20 |
3测定指标
脏器指数测定:试验第8天,每组随机取10只小鼠断颈处死,取胸腺及脾脏称重,计算脏器指数,比较各组小鼠脏器指数的差异。
胸腺指数=胸腺重/体重×100%
脾脏指数=脾脏重/体重×100%
细胞免疫功能测定
脾脏淋巴细胞转化率测定:试验第8天,每组随机取6只小鼠断颈处死,无菌取脾脏放入盛有适量无菌Hank’s液平皿中,轻轻将脾脏研碎,制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤,用Hank’s液洗涤2次,离心(1000r/分钟,10分钟),然后将细胞悬浮于2ml的完全培养液中,用全自动细胞计数仪计数脾细胞,调整细胞浓度为3×106/ml。
将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1ml,一孔加75μlConA液,另一孔作为对照,置5%CO2,37℃CO2孵箱中培养72h。每组设3个平行。培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7ml,加入0.7ml不含小牛血清的RPMI16 40培养液,同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1ml酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中,每个孔分装3孔作为平行样,用酶联免疫检测仪,以570nm波长测定光密度值。
4结果与分析
4.1脏器指数测定结果
脏器系数测定结果见表4。用Spss 18.0软件对各组数据进行单因素方差分析。试验结果显示,小鼠胸腺指数方面,各组均没有显著差异(P>0.05);脾脏指数方面,与第5组空白对照相比,各组有显著差异(P<0.05)。说明连续给药本发明实施例2、4、6的药物组合物能提高小鼠的脾脏指数。
表4 胸腺指数和脾脏指数数据统计
组别 |
胸腺指数 |
脾脏指数 |
第1组 |
0.2689±0.0491 |
0.4398±0.1011a |
第2组 |
0.2864±0.0398 |
0.4821±0.0954A |
第3组 |
0.2754±0.0462 |
0.4526±0.0897a |
第4组 |
0.2534±0.0498 |
0.4268±0.0678a |
第5组 |
0.2521±0.0521 |
0.3621±0.0554b |
注:(1)相同的字母代表各组间没有差异,不同的小写字母表示各组间差异显著(P<0.05),不同字母大小写表示差异极显著(P<0.01);(2)与第5组相比,第1-4组脾脏指数P值分别0.031、0.008、0.019和0.28。
4.2细胞免疫功能测定结果
脾脏淋巴细胞转化率试验结果见表5。用Spss 18.0软件对各组光密度差值(OD差值)进行单因素方差分析。试验结果显示,第1-4组与第5组在OD差值上均存在极显著差异(P<0.01);第1-3组与第4组对照药物组相比,也均存在极显著差异(P<0.01)。说明给予本发明实施例2、4、6的药物组合物后,小鼠脾脏淋巴细胞增值能力增强,且显著优于对照药物黄芪多糖提取物。说明给予本发明实施例2、4、6的药物组合物能显著提高小鼠的细胞免疫功能,且显著优于对照药物黄芪多糖提取物。
表5 脾脏淋巴细胞转化率测定结果(MMT法)
组别 |
不加ConA OD值 |
加ConA OD值 |
OD差值 |
第1组 |
0.2562±0.0034 |
0.3741±0.0092 |
0.1179±0.0103A |
第2组 |
0.2498±0.0051 |
0.3735±0.0085 |
0.1237±0.0128A |
第3组 |
0.2621±0.0042 |
0.3871±0.0069 |
0.1250±0.0098A |
第4组 |
0.2661±0.0032 |
0.3612±0.0098 |
0.0951±0.0101B |
第5组 |
0.3102±0.0052 |
0.3142±0.0062 |
0.0040±0.0061C |
注:(1)相同的字母代表各组间没有差异,不同的小写字母表示各组间差异显著(P<0.05),不同字母之间表示差异极显著(P<0.01);(2)与第5组相比,第1-4组OD差值P值分别为:0.000、0.000、0.000和0.000;与第4组相比,第1-3组OD差值P值分别为:0.000、0.000和0.000。
5结论
本发明的紫贯柏根药物组合物能显著提高小鼠脾脏淋巴细胞转化率,显著优于对照药物黄芪多糖提取物,说明本发明的紫贯柏根药物组合物对小鼠具有极好的免疫增强效果,且使用剂量小。
试验例3本发明紫贯柏根药物组合物对大肠杆菌感染雏鸡的预防效果试验
为了观察本发明紫贯柏根药物组合物对雏鸡感染大肠杆菌的预防效果,我们对海蓝灰雏鸡进行人工感染大肠杆菌预防试验。
1材料
试验药物:本发明实施例5-7制备的紫贯柏根药物组合物;对照药物:黄芪多糖提取物。
试验动物:1日龄雏鸡,180只,海兰灰,购自北京京密种鸡孵化场。
攻毒菌种:鸡源大肠杆菌O1型标准菌株(CVCC249),购自中国兽药监察所。
2方法
试验共设6组,每组30只。第1-3组依次给予本发明实施例5-7的药物组合物,饮水给药,剂量为1g/L;第4组给予黄芪多糖提取物,饮水给药,剂量为2g/L;第5组为阳性对照组,攻毒不给药;第6组为阴性对照组,不攻毒不给药。试验分组情况具体见表6。连续给药5天,第6天除阴性对照组外,其它各组腹腔注射大肠杆菌悬液,每只0.5ml(1×106cfu/ml)。攻毒感染后持续观察14天,每天观察记录雏鸡发病死亡情况。试验期间,自由采食饮水。
表6 试验分组
3结果及分析
3.1存活情况
存活情况见表7。经卡方检验(SPSS 18.0)统计分析发现,在成活率方面,与第5组阴性对照组相比,第1-3组均有显著差异(P<0.05),其中第1组有极显著差异(P=0.004<0.01)。第4组存活数量高于第5组,第1-4组各组之间没有显著差异,但第1-3组成活率要高于第4组。
表7 存活情况表
组别 |
初始数/羽 |
存活数/羽 |
成活率% |
第1组 |
30 |
20 |
66.67a |
第2组 |
30 |
21 |
70.00a |
第3组 |
30 |
23 |
76.67A |
第4组 |
30 |
19 |
63.33 |
第5组 |
30 |
12 |
40.00b |
第6组 |
30 |
30 |
100.00 |
注:1)相同的字母代表各组间没有差异,不同的小写字母表示各组间差异显著(P<0.05),不同字母大小写表示差异极显著(P<0.01)。2)与第5组相比,第1-4组P值分别为:0.038,0.020,0.004,0.071。
3.2病变情况
试验结束后,我们对剩余雏鸡全部处死,解剖观察病理变化,统计分析病变情况,具体结果见表8。经SPSS 18.0统计分析发现,病变综合得分方面,与第5组阳性对照组相比,第1-4组均有极显著差异(P<0.01);心脏病变得分方面,与第5组阳性对照组相比,第1-4组均有显著差异(P<0.05),其中第2-4组有极显著差异(P<0.01);肝脏病变得分方面,与第5组阳性对照组相比,第1-4组均有显著差异(P<0.05);肺脏和气囊病变得分方面,与第5组阳性对照组相比,第1-4组均没有显著差异(P>0.05)。
表8 病变情况
组别 |
数量/ |
综合得分 |
心 |
肝 |
肺 |
气囊 |
第1 |
2羽0 |
4.11±3.12A |
1.51±1.65A |
1.22±0.99a |
0.51±0.61 |
0.87±1.11 |
第组2 |
21 |
4.26±4.18A |
1.68±1.94A |
1.01±1.69a |
0.58±0.72 |
0.99±0.79 |
第组3 |
23 |
4.79±4.08A |
1.89±1.55A |
1.32±1.74a |
0.73±0.60 |
0.85±1.01 |
第组4 |
19 |
4.93±3.01A |
1.98±1.62a |
1.52±1.08a |
0.45±0.49 |
0.98±1.09 |
第组5 |
12 |
9.43±4.32b |
3.68±1.78b |
2.79±1.28b |
0.98±1.21 |
1.98±1.42 |
第组6 |
30 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
注:相同的字母代表各组间没有差异,不同的小写字母表示各组间差异显著(P<0.05),不同字母大小写表示差异极显著(P<0.01)。
4结论
连续给予本发明的紫贯柏根药物组合物能促进雏鸡感染大肠杆菌后的病变器官修复,显著提高疾病发生后雏鸡成活率,且显著好于对照药物黄芪多糖提取物。说明本发明的紫贯柏根药物组合物能增强雏鸡的免疫能力,提高雏鸡的抗病能力。
试验例4本发明紫贯柏根药物组合物对断奶仔猪腹泻的预防效果试验
试验在北京怀柔某养猪场进行,选自来源一致的杜×长×大三元杂交一代初生仔猪,生长发育正常,健康状况良好。根据窝别、性别、体重按配对试验原则分为试验组、药物对照组和空白对照组。每组3窝仔猪,试验前编号。断奶前,试验组给予本发明实施例7的紫贯柏根药物组合物,按0.1g/kg,饮水给药,每天一次,连用5天;药物对照组给予黄芪多糖提取物,按0.2g/kg,饮水给药,每天一次,连用5天;空白对照组不给药。停药后断奶,继续观察2周。试验期间正常饲喂,每天记录仔猪状况。
试验结果见表9。试验过程中,空白对照组-3在第2周(断奶期间)有1只小猪因腹泻严重死亡,其它各组均未出现死亡现象。在仔猪腹泻方面,试验组和药物对照组腹泻情况较轻,经卡方检验(SPSS 18.0统计软件),与空白对照组相比,试验组和药物对照组均有极显著差异(P<0.01);与药物对照组相比,试验组有显著差异(P<0.05),表明本发明紫贯柏根药物组合物能显著提高仔猪免疫力,增强抗病能力和抗应激能力,显著降低仔猪腹泻率;进一步表明本发明紫贯柏根药物组合物效果显著优于黄芪多糖提取物,且在较低剂量下即可达到显著效果。
表9 试验结果记录
注:1)腹泻头次,当天观察1只小猪有腹泻的计1头次;2)*表示有小猪因腹泻严重死亡;3)相同的字母代表各组间没有差异,不同的小写字母表示各组间差异显著(P<0.05),不同字母大小写表示差异极显著(P<0.01)。
试验例5本发明紫贯柏根药物组合物对猪病预防效果的观察
选择北京顺义某猪场进行本试验。将该猪场1500头断奶仔猪随机分成3组,分别为第1组、第2组和第3组,每组500头仔猪。第1组和第2组为药物组,第1组按照每吨饲料添加本发明实施例7的紫贯柏根药物组合物2公斤,第2组按照每吨饲料添加本发明实施例9的紫贯柏根药物组合物2公斤,连续用药14天。第3组为空白对照组,不给予任何药物。给药结束后,观察30天,试验结果见表10。
表10 猪病预防试验结果
试验结果表明,本发明的紫贯柏根药物组合物均可有效预防猪病的发生,效果最好的是实施例7的紫贯柏根药物组合物,发病率为0,有效率可达到100%,其次是实施例9,均与空白对照组相比差异显著。
试验例6本发明紫贯柏根药物组合物对猪流感预防效果的观察
选择北京怀柔某猪场进行猪流感预防试验,将育肥猪2100头随机分成3组,每组700头。第1组,按照每吨饲料添加本发明实施例8的紫贯柏根药物组合物2公斤,饲喂,连用10天;第2组,按照每吨饲料添加本发明实施例9的紫贯柏根药物组合物2公斤,饲喂,连用14天;第3组,饲料中不添加任何药物。给药结束后,观察30天。试验结果见表11。
表11 猪流感预防试验结果
试验结果表明,本发明的紫贯柏根药物组合物均可以有效地预防猪流感的发生,实施例8和实施例9的紫贯柏根药物组合物对于猪流感预防有效率分别可以达到99.3%和99%,与空白对照组相比均有差异显著。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。