CN105949281A - 一种荧光共振能量转移探针及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种荧光共振能量转移探针及其制备方法和应用。本发明中将荧光基团7‑(N,N‑二乙基氨基)香豆素‑3‑羧酸琥珀酰亚胺酯通过能够被基质金属蛋白酶II(MMP‑2)切割的多肽链连接淬灭基团4‑[4‑(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸N‑丁二酰亚胺酯，构建荧光共振能量转移探针。以人肝癌7402细胞和人正常肝细胞LO‑2为研究对象，通过细胞成像实验检测7402和LO‑2细胞的MMP‑2表达水平。体外实验(MMP‑2,MMP‑1及其他物种对探针的荧光响应)显示了探针对MMP‑2的靶向性，细胞成像结果显示人肝癌细胞7402细胞的MMP‑2表达水平高于人正常肝细胞LO‑2。

Description

一种荧光共振能量转移探针及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及肝癌细胞检测技术，具体涉及荧光共振能量转移探针及其制备方法和应用。
背景技术
肝癌的发病率在全球恶性肿瘤中占第5位，死亡率居第三位，在我国是最常见的恶性肿瘤之一。肝癌起病隐匿、发展速度快，死亡率较高，严重威胁人们的生命健康。手术切除治疗是目前最为有效的治疗方式，但是大部分患者在确诊时已是晚期，从而失去了手术治疗的机会。目前肝癌的主要筛查方法有甲胎蛋白AFP和实时超声检查，但是漏诊率高且价格昂贵。肝癌的早期诊断能够很大程度上提高患者的5年生存率。因此，发展灵敏度高、特异性强的早期诊断方法以及开发价格更为低廉、检测更加方便的荧光探针已经成为目前癌症研究的热点，这对癌症的早期诊断和预后有着重要的意义。本发明中将荧光基团7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯(Coumarin-Osu)通过能够被MMP-2切割的多肽链(GPLGVRGKGG)连接淬灭基团4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸N-丁二酰亚胺酯(Dabcyl-Osu)，构建荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)探针。通过细胞成像实验进行肝癌的检测，将有望用于肝癌的筛查、诊断和预后判断。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明提供了荧光共振能量转移探针及其制备方法和应用。
本发明的技术方案是：制备荧光共振能量转移探针的制备方法，荧光基团7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸酯连接淬灭基团4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸N-丁二酰亚胺酯，构建荧光共振能量转移探针。具体合成路线如下：
本发明的进一步改进包括：
所述荧光基团7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸酯通过能够被MMP2切割的多肽链连接淬灭基团4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸N-丁二酰亚胺酯。
本发明的另一目的在于提供按照上述方法制得的探针。
所述的探针，探针中甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-赖氨酸-(甘氨酸-甘氨酸)多肽链可被聚乙二醇等官能团修饰，是以MMP-2为靶向的FRET荧光探针。
本发明进一步提供了上述的探针在制备检测肝癌药物中的应用。
本发明进一步提供了上述的探针在制备检测肝癌试剂中的应用。
综上所述，本发明证明了以MMP-2为靶向的FRET荧光探针能够对人正常肝细胞LO-2和人肝癌7402细胞进行荧光识别，该探针在生物检测、细胞组织成像乃至活体研究方面表现出潜在的应用前景。
附图说明
图1以MMP-2为靶向的荧光探针的ESI-MS谱图。
图2以MMP-2为靶向的荧光探针的HPLC谱图。
图3探针对MMP-2的荧光响应。
图4 MMP-2、MMP-1及其他相关物种对探针的荧光响应。
图5a是人肝癌7402细胞的荧光图。
图5b是人肝癌7402细胞的明场。
图5c是人肝癌7402细胞的叠加图。
图5d是人正常肝细胞LO-2的荧光图。
图5e是人正常肝细胞LO-2的明场。
图5f是人正常肝细胞LO-2的叠加图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做详细说明。
实施例
1 材料与方法
1.1 细胞系及培养条件
人肝癌细胞7402和人正常肝细胞LO-2购自中科院上海细胞库，用含10％FBS和青/链霉素(青霉素100U/mL，链霉素100μg/mL)的RPMI-1640培养基，于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养。
1.2 主要试剂和材料
4-(N,N-二乙基氨基)水杨醛，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、石油醚(60-90℃)、四氢呋喃(THF)、色谱纯二甲基亚砜(DMSO)等。其余所用化学试剂均为分析纯。DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶、青霉素、链霉素等均有商业途径获得。
1.3 主要仪器
紫外可见分光光度计(UV-2550，日本岛津公司)，荧光光谱仪(FS5，爱丁堡公司，英国)，磁力加热搅拌器(78-1，常州国华电器有限公司)，AscendTM400核磁共振波谱仪(Bruker，美国)，Microtof-QIIITM质谱仪(Bruker，美国)，精密pH计(上海雷磁仪器厂)，高速台式冷冻离心机(Heraeus，德国)，CO2细胞培养箱(SHELLAB5215-2，美国)，多功能电子天平(FA1004A，上海精天电子仪器有限公司)，-80℃超低温冰箱(702REL#3，Forma公司，美国)，超净工作台(SW-CJ-1F，苏州净化设备有限公司)，恒温振荡培养箱(SD-1238HA2-B，上海福玛设备有限公司)，共聚焦显微镜(FV10SW，Olympus,日本)。
1.4 荧光探针的制备
1.4.1 7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯(产物3)的制备
将3.8648g 4-(N,N-二乙基氨基)水杨醛(化合物1，0.02mol，分子量＝193.24)、6.4068g丙二酸二乙酯(0.04mol，分子量＝160.17)和2mL哌啶溶解于60mL无水乙醇，回流6小时。旋蒸除去乙醇溶剂，再加入60mL 10％NaOH溶液，回流15分钟。冷却到室温，反应液用pH＝2的盐酸在冰浴的条件下酸化，得到桔黄色晶状沉淀。过滤，洗涤，真空干燥，得到4.1652g的7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸(化合物2)，产率79.71％。Rf＝0.6(乙酸乙酯)。m.p.:220-221℃。
0.2876g的EDC(1.5mmol)、0.1611g的NHS(1.4mmol)溶于4mL的DMF中。0.2560g的香豆酸(0.98mmol)也溶于4mL的DMF中，逐滴加入到上述溶液中。室温搅拌48小时，倒到150mL冰水中，抽滤，得到0.3060g的化合物3，产率87.13％。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.800(1H,s),7.729(1H,d),6.854(1H,d),6.602(1H,s),3.530(4H,q),2.873(4H,s),1.158(6H,t).ESI-MS:理论值[M+Na]+:381.1063,实测值:381.1073；理论值[2M+Na]+:739.2227,实测值739.2224.
1.4.2 以MMP-2为靶向的FRET荧光探针(化合物9)的制备
以MMP-2为靶向的FRET荧光探针的制备过程如式1所示。首先通过偶联和去保护反应制备化合物4，Fmoc肽在DMF/DIEA溶液在TBTU催化下通过标准固相多肽合成化合物5。化合物5通过Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Lys(dde)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH和Fmoc-Leu-OH系列反应后，再与Dabcyl-Osu反应4小时，得到化合物6。然后，加入5％的水合肼的DMF溶液，再与化合物3反应4小时，得到化合物7。通过以TFA/TIS/H2O(95:5:5)试剂裂解化合物7，得到化合物8。化合物8再与氨基修饰的水溶性的PEG通过EDC/NHS反应偶联，得到以MMP-2为靶向的FRET荧光探针(化合物9)。
化合物1-9的具体为：
化合物1：4-(N,N-二乙基氨基)水杨醛
化合物2：7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸
化合物3：7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯
化合物4：甘氨酸-氯化三苯甲基树脂
化合物5：甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸(2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基)-甘氨酸-赖氨酸-(甘氨酸-甘氨酸-氯化三苯甲基树脂)-2-(4,4-二甲基-2,6-二羰基环己亚基)甲基
化合物6：4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸(2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基)-甘氨酸-赖氨酸-(甘氨酸-甘氨酸-氯化三苯甲基树脂)-2-(4,4-二甲基-2,6-二羰基环己亚基)甲基
化合物7：4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸(2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基)-甘氨酸-赖氨酸-(甘氨酸-甘氨酸-氯化三苯甲基树脂)-7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸
化合物8：4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-赖氨酸-(甘氨酸-甘氨酸)-7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸
化合物9：4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸-甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-赖氨酸-(甘氨酸-甘氨酸-聚乙二醇)-7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸
式1以MMP2为靶向的FRET荧光探针即化合物9的制备
1.5 MMP-2,MMP-1及其他物种对MMP-2靶向探针的响应
1.5.1 MMP-2的激活及荧光响应
将75μL APMA(5mM)和75μL MMP-2(160mM)混合并于37℃反应3小时，以激活MMP2的活性。然后将150μL已激活的MMP-2(80mM)加入到150μL探针溶液中(20μM)于37℃反应180分钟。每次测试后混合溶液立即放于恒温振荡器中。
1.5.2 MMP-1的激活及荧光响应
将75μL APMA(5mM)和75μL MMP-1(160mM)混合并于37℃反应3小时，以激活MMP-1的活性。然后将150μL已激活的MMP-1(80mM)加入到150μL探针溶液中(20μM)于37℃反应180分钟。每次测试后混合溶液立即放于恒温振荡器中。
1.5.3 MMP-2的选择性实验
MMP-2(10nM)及其他相关的可能引起干扰的生物学物种如MMP-1(10nM),Mg2+,Na+,Fe3+,Cu2+,L-cysteine,L-tyrosine,L-glutathiose,NO3 -,ClO4 -,Cl-和Br-(都是10mM)与20nM的探针在37℃反应3小时，之后于荧光仪上开始检测。
1.6 细胞成像
将MMP-2为靶向的荧光探针溶于PBS缓冲溶液中，配成2μM的探针溶液。将人肝癌细胞7402，人正常肝细胞LO-2接种到共聚焦培养皿中，当细胞饱和度超过80％后，加入探针溶液，放入CO2培养箱孵育3小时，然后用预冷的PBS溶液洗3次，接下来每个孔都加入1mL的PBS缓冲溶液，最后于共聚焦显微镜下观察荧光。
2.结果
2.1 以MMP-2为靶向的荧光探针的表征
制备的MMP-2荧光探针通过电喷雾质谱(ESI-MS)和高效液相色谱法(HPLC)表征(图1和图2)。高效液相色谱法(HPLC)表明探针在11.287分钟出峰，纯度为95.7512％。
2.2 MMP-2,MMP-1及其他物种对靶向MMP-2探针的响应
2.2.1 MMP-2对探针的响应
为了探讨MMP-2对探针的荧光响应，测试了MMP-2和探针作用时随着时间变化的荧光光谱。如图3所示，开始时探针在480nm处的荧光很弱。然而，随着反应时间延长，探针的荧光强度明显增强，在反应时间约3小时时荧光强度约增加了10倍并趋于平衡。
2.3 MMP-2的选择性
如图4所示，MMP-2探针(20nM)与其他相关的生物学物种如MMP-1(10nM)、Mg2+、Na+、Fe3+、Cu2+、L-cysteine、L-tyrosine、L-glutathiose、NO3 -、ClO4 -、Cl-和Br-(都是10mM)孵育3小时后，其荧光光谱没有明显的变化，基本没有响应，只有MMP2的荧光明显增加，增强了约10倍。
2.4 细胞成像结果
将人正常肝细胞LO-2和人肝癌7402细胞分别与荧光探针在37℃孵育3小时后，于共聚焦显微镜下观察细胞成像。如图5所示，图5A-C：人肝癌7402细胞的荧光图、明场和叠加图；图5D-F：人正常肝细胞LO-2的荧光图、明场和叠加图。人肝癌7402细胞表现出强烈的绿色荧光，而人正常肝细胞LO-2几乎没有荧光，说明人肝癌7402细胞中的MMP-2高于人正常肝细胞LO-2。
3.结论
肝癌是最常见的癌症之一，严重威胁着人类的健康。肝癌的发生发展是多因素、多途径、多阶段、长时间作用的结果。导致肝癌发生的危险因素主要是肝硬化，HBV、HCV病毒感染、酗酒、吸烟、黄曲霉毒素、氯乙烯、糖尿病和遗传疾病等，研究显示这些因素均显著提升肝癌的风险。
MMP-2位于人类染色体16q21，由13个外显子和12个内含子组成，结构基因总长度为72kD，是MMPs家族中的一个重要成员，也称IV型胶原酶或明胶酶，是一种锌离子依赖的蛋白水解酶，MMP-2的作用底物主要为IV型胶原，其次还有V、VII、IX、X型胶原及纤维连接素和弹性蛋白等，被认为在肿瘤转移机制中发挥着重要作用。MMP-2能够降解多种细胞外基质，在人体内发挥着重要的生理和病理学功能。正常条件下，MMP-2的表达较低，而在炎症刺激或病理条件下其表达才会升高，参与恶性肿瘤侵袭及转移、炎症、急性冠状动脉综合征、类风湿关节炎等多种疾病。大量研究结果显示MMP-2的高表达与肝癌相关，且其表达水平与肿瘤的恶性程度有密切的关系，参与肿瘤的侵袭与转移，癌细胞的增殖等过程。
本发明中通过体外实验，分别测试了MMP-2，MMP-1等物种对探针的荧光响应。当激活的MMP-2与探针作用时，随着时间的变化，荧光不断增强，在3小时左右趋于平衡。而同样条件下，当MMP-1与探针相互作用时，随着时间的增强，荧光几乎没有变化。其他生物学相关离子与探针反应3小时，荧光几乎无变化。上述结果显示探针只对MMP-2有响应，而对其他物种几乎没有响应。进行了以MMP-2为靶向的FRET荧光探针对人肝癌7402细胞和正常人肝细胞LO-2的细胞成像实验。人肝癌7402细胞表现出强烈的绿色荧光，而人正常肝细胞LO-2几乎没有荧光，表明人肝癌7402细胞中的MMP-2高于人正常肝细胞LO-2。上述结果说明本发明所制备的以基质金属蛋白酶II(MMP-2)为靶向的PEG修饰的荧光共振能量转移探针可用于检测肝癌细胞。
综上所述，本发明证明了以MMP-2为靶向的FRET荧光探针能够对人正常肝细胞LO-2和人肝癌7402细胞进行荧光识别，该探针在生物检测、细胞组织成像乃至活体研究方面表现出潜在的应用前景。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (8)

1.制备荧光共振能量转移探针的制备方法，其特征在于，其合成路线如下式所示：
2.制备荧光共振能量转移探针的制备方法，其特征在于，将荧光基团7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯连接淬灭基团4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸N-丁二酰亚胺酯，构建荧光共振能量转移探针。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光基团7-(N,N-二乙基氨基)香豆素-3-羧酸琥珀酰亚胺酯通过能够被MMP-2切割的多肽链连接淬灭基团4-[4-(二甲基氨基)苯偶氮]苯甲酸N-丁二酰亚胺酯。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，探针中甘氨酸-脯氨酸-亮氨酸-甘氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-赖氨酸-(甘氨酸-甘氨酸)多肽链可被聚乙二醇等官能团修饰。
5.按照权利要求1-4任一项所述方法制得的探针。
6.根据权利要求5所述的探针，其特征在于，是以MMP-2为靶向的FRET荧光探针。
7.如权利要求5所述的探针在制备检测肝癌药物中的应用。
8.如权利要求5所述的探针在制备检测肝癌试剂中的应用。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106590630A (zh) * 2016-12-07 2017-04-26 山东大学 一种空间依赖型的线粒体膜电位荧光探针及其应用
CN107843578A (zh) * 2017-09-30 2018-03-27 新乡医学院 一种基于香豆素铜离子配合物的荧光探针，制备方法及其在选择性识别焦磷酸盐中的应用
CN108956565A (zh) * 2018-06-28 2018-12-07 中山大学 一种荧光探针及在检测sirt2酶活性中的应用
CN111303865A (zh) * 2018-12-11 2020-06-19 广州中医药大学(广州中医药研究院) 荧光探针化合物及其制备方法和应用
CN113185578A (zh) * 2021-04-25 2021-07-30 中国地质大学（武汉） 一种模块化多肽-aie探针mp及其合成方法、包含其的试剂盒
CN116790136A (zh) * 2023-05-25 2023-09-22 现代纺织技术创新中心(鉴湖实验室) 羧酸丁二酰亚胺酯染料及其反应性染色方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101037710A (zh) * 2006-12-27 2007-09-19 华中科技大学 检测基质金属蛋白酶活性的多核苷酸序列
WO2008055225A2 (en) * 2006-10-31 2008-05-08 Musc Foundation For Research Development Systems and methods for in vivo measurement of interstitial biological activity, processes and/or compositions
CN104402853A (zh) * 2014-09-30 2015-03-11 天津理工大学 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用
CN104672300A (zh) * 2015-03-17 2015-06-03 武汉大学 一种双酶敏感型荧光探针及其制备方法和应用
US9388450B2 (en) * 2013-03-12 2016-07-12 University Of North Texas Health Science Center FRET based multiplex probes

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008055225A2 (en) * 2006-10-31 2008-05-08 Musc Foundation For Research Development Systems and methods for in vivo measurement of interstitial biological activity, processes and/or compositions
CN101037710A (zh) * 2006-12-27 2007-09-19 华中科技大学 检测基质金属蛋白酶活性的多核苷酸序列
US9388450B2 (en) * 2013-03-12 2016-07-12 University Of North Texas Health Science Center FRET based multiplex probes
CN104402853A (zh) * 2014-09-30 2015-03-11 天津理工大学 一种识别谷胱甘肽的特异性荧光探针的制备方法及其应用
CN104672300A (zh) * 2015-03-17 2015-06-03 武汉大学 一种双酶敏感型荧光探针及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AKERS, WJ等: "Detection of MMP-2 and MMP-9 Activity in Vivo with a Triple-Helical Peptide Optical Probe", 《BIOCONJUGATE CHEMISTRY》 *
LEE, SEULKI等: "Polymeric nanoparticle-based activatable near-infrared nanosensor for protease determination in vivo", 《NANO LETTERS》 *
王盛等: "基于荧光蛋白的荧光共振能量转移探针的构建及应用", 《中国细胞生物学学报》 *
高华: "《药理学实验方法》", 31 January 2012 *
黄瑞鑫: "《世界精细化工产品质量规格手册》", 30 April 2000 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106590630A (zh) * 2016-12-07 2017-04-26 山东大学 一种空间依赖型的线粒体膜电位荧光探针及其应用
CN107843578A (zh) * 2017-09-30 2018-03-27 新乡医学院 一种基于香豆素铜离子配合物的荧光探针，制备方法及其在选择性识别焦磷酸盐中的应用
CN107843578B (zh) * 2017-09-30 2020-12-15 新乡医学院 一种基于香豆素铜离子配合物的荧光探针，制备方法及其在选择性识别焦磷酸盐中的应用
CN108956565A (zh) * 2018-06-28 2018-12-07 中山大学 一种荧光探针及在检测sirt2酶活性中的应用
CN111303865A (zh) * 2018-12-11 2020-06-19 广州中医药大学(广州中医药研究院) 荧光探针化合物及其制备方法和应用
CN111303865B (zh) * 2018-12-11 2023-03-07 广州中医药大学(广州中医药研究院) 荧光探针化合物及其制备方法和应用
CN113185578A (zh) * 2021-04-25 2021-07-30 中国地质大学（武汉） 一种模块化多肽-aie探针mp及其合成方法、包含其的试剂盒
CN113185578B (zh) * 2021-04-25 2022-05-27 中国地质大学（武汉） 一种模块化多肽-aie探针mp及其合成方法、包含其的试剂盒
CN116790136A (zh) * 2023-05-25 2023-09-22 现代纺织技术创新中心(鉴湖实验室) 羧酸丁二酰亚胺酯染料及其反应性染色方法
CN116790136B (zh) * 2023-05-25 2024-04-02 现代纺织技术创新中心(鉴湖实验室) 羧酸丁二酰亚胺酯染料及其反应性染色方法

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