CN105943523A

CN105943523A - 石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中的应用

Info

Publication number: CN105943523A
Application number: CN201610290521.4A
Authority: CN
Inventors: 王伟; 徐忠东; 陈金武; 耿明; 董姗姗
Original assignee: Hefei Normal University
Current assignee: Hefei Normal University
Priority date: 2016-04-29
Filing date: 2016-04-29
Publication date: 2016-09-21

Abstract

本发明公开了石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中的应用，属于医药领域。通过体外抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡活性检测了石斛酚抗子宫颈癌细胞的抑癌作用，并分析其抑癌浓度，证明了石斛酚对子宫颈癌细胞具有明显的抑制作用，以便开发出一类治疗人子宫颈癌的新型药物。所述人子宫颈癌细胞为Hela细胞。所述石斛酚能够抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡的有效浓度范围为25～200μmol/L。

Description

石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，特别涉及石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中的应用。

背景技术

宫颈癌对于人类尤其是女性而言，是一种发病率仅次于乳腺癌的恶性癌瘤，它在女性癌症死亡率中高居第二。其发病原因包括性生活不健康、生育年龄过早、思想轻视、营养元素不均衡、吸烟、病毒感染(如HPV等)等。

目前针对宫颈癌的检查和诊断方法包括细胞学诊断、病毒检测以及特异性标志物的检测。临床上多采用放疗、化疗、手术、药物等方法进行治疗，目前，基因疗法尚在兴起中。近年来，研究人员将目光转向中国传统中药，希望能够筛选出对抗宫颈癌及其他癌症的有效成分，目前为止已取得了初步成果。

据报道：水飞蓟(Silybum marianum L.)果实提取物水飞蓟宾对Hela细胞有诱导自噬和凋亡的作用，表现出一定的细胞毒和细胞增长抑制效应。姜黄(Curcuma longa L)提取物姜黄素及其类似物对宫颈癌细胞的作用表现在细胞增殖的抑制、细胞周期的阻滞、凋亡的促进、细胞分化的诱导、肿瘤转移的遏制等方面。此外，枸杞多糖、青蒿素、白花蛇舌草等中药提取物也可通过激活人体免疫系统或抑制端粒酶活性等机制干预宫颈癌的发生与发展。

石斛属(Dendrobium)作为兰科第二大属，目前在世界范围内确定的种类共有1000到1400种。其踪迹遍布于赤道的亚洲区域以及大洋洲，在国内主要分布在偏南地区，如广东、广西、云南、贵州、台湾等地。石斛属于多年生草本，具有观赏价值，还有少数种(如铁皮石斛、马鞭石斛等)存在药用价值，早在中国古代著名医书《神农本草经》中就有记载。作为传统中药，石斛被认为具有清热、健胃、润肺等作用，而近些年的研究证明其还具有提高人体免疫功能、抗衰和抗癌等作用。石斛中的化学成分因其种类的不同而有所差异，包括生物碱类、多糖类、氨基酸类、醇类、联苄类、醌类和多种其他成分。

石斛酚(Dendrophenol，Den)，一种联苄类酚性物质，提取于金石斛(Dendrobium nobile)的根部，是石斛的药用有效成分之一。分子式C17H20O5。熔点87～89℃，常温下呈白色晶体状，对光敏感，温度升高、光照或暴露在空气中都会对其有效成分产生影响。

目前已发现一些证据阐明了石斛具有多种生物学活性，包括增强机体免疫力、帮助胃部消化、抗白内障、调节血糖、抗肿瘤等作用。石斛的成分中具有药用价值的不多，有研究发现，石斛酚可以通过抑制诱导型一氧化氮合酶及其特异结合位点的活性从而达到抗白内障的效果。刁红星与方花等人也对石斛酚的抗白内障机理进行了研究，结果发现当它与丁香酸联合使用时可以很好地抑制醛糖还原酶的活性及其相关活动，达到良好的对抗白内障的效果。

迄今为止，尚未见以石斛酚为抗癌药物治疗子宫颈癌的相关报道。

发明内容

发明目的：提供石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中。

技术方案：

石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中的应用在本发明的保护范围之内。

其中，所述子宫颈癌细胞为Hela细胞。

其中，有效浓度范围为25～200μmol/L。

石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖药物中的应用在本发明的保护范围之内。

其中，所述子宫颈癌细胞为Hela细胞。

其中，有效浓度范围为25～200μmol/L。

石斛酚在制备诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中的应用在本发明的保护范围之内。

其中，所述子宫颈癌细胞为Hela细胞。

其中，效浓度范围为25～200μmol/L。

本发明所采用的实验方法如下：

1、设置石斛酚的浓度梯度对Hela细胞给药。

于给药后不同时间点，通过噻唑蓝染色法检测石斛酚对Hela细胞增殖的抑制作用。实验结果说明DEN对Hela的增殖具有阻抑作用，且作用效果呈剂量和时间效应的。

2、应用流式细胞术对Hela细胞进行细胞周期以及凋亡的检测。

结果显示了石斛酚可能具有阻滞S期和G2/M期的作用，并且这种效果具有时间和剂量效应。

3、应用流式细胞术对Hela细胞进行凋亡检测。

当药物浓度达到200μmol/L时，细胞凋亡情况较对照组有极显著差异。实验证明石斛酚有诱导Hela细胞生凋亡的作用，且与给药时间呈正相关。

4、利用转染荧光蛋白基因GFP-LC3的Hela细胞，分别在给药后不同时间点进行荧光镜检并拍照，观察自噬体的形成与位置，计算各组细胞自噬率。

随着石斛酚浓度的升高，细胞的自噬更加活跃，自噬细胞数和每个自噬细胞所含自噬体的量均在增多。该结果说明了药物诱导了Hela的自噬活性，存在剂量依赖效应。

5、蛋白质印记法检测石斛酚对人宫颈癌Hela细胞自噬相关蛋白LC3-||及p62表达的影响。

结果显示随着药物浓度增大，LC3II/I表达量上调，p62蛋白的表达量明显下调，说明石斛酚确实诱导了Hela细胞的自噬。

6、DCFH-DA标记法测定药物对细胞活性氧水平的影响。

实验结果显示ROS含量与石斛酚的浓度呈正相关关系，说明了石斛酚对海拉细胞活性氧水平的上升具有浓度效应。

7、数据处理与统计分析

所有实验结果用Mean.±S.E.M.表示。选用One-way ANOVA结合Post-Hoc(LSD法)方法进行组间差异分析。以P＜0.05表示统计学差异显著性。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明提供的石斛酚，能够以剂量依赖性和时间依赖性的方式抑制Hela细胞增殖，诱导细胞周期阻滞、凋亡和自噬的发生，因而为抗人类宫颈癌提供了一类新型治疗药物。

2、由于石斛酚为石斛中天然小分子化合物，可以通过提取或直接化学合成的方法获得，因而生产成本较低，有利于工业化生产。

附图说明

图1实施例2所述石斛酚抑制Hela细胞增殖图谱，图中，Control：对照组；25～200μM：给予不同浓度石斛酚组，浓度范围为25～200μmol/L。给药24h组；给药48h组；给药72h组。

图2实施例3所述石斛酚对Hela细胞周期的影响图谱，图中，Control：对照组；50～200μmol/L：分别给予50、100、200μmol/L石斛酚组。G0/G1期细胞；S期细胞；G2/M期细胞。图3上半部分为流式细胞仪检测细胞细胞周期图；下半部分为细胞周期分布柱状图。

图3实施例4所述石斛酚对Hela细胞凋亡的影响图谱，图中，Control：对照组；50～200μmol/L：分别给予50、100、200μmol/L石斛酚组。给药24h组；

给药48h组。图3上半部分为流式细胞仪检测细胞斑点图；下半部分为细胞凋亡柱状图。

图4实施例5所述石斛酚诱导Hela细胞自噬的影响示意图，其中，Control：对照组；50～200μmol/L：分别给予50、100、200μmol/L石斛酚组。给药24h组；

给药48h组；给药72h组；图4上半部分为荧光显微镜下捕捉到细胞内形成的绿色的荧光斑点图；下半部分为细胞自噬柱状图。

图5实施例6所述石斛酚对Hela细胞中LC3-||与p62蛋白表达的影响图谱，其中，

Control：对照组；50～200μmol/L：分别给予50、100、200μmol/L石斛酚组。图5左侧为蛋白Western Blot检测图谱；右侧为蛋白含量柱状图。

图6是实施例7所述石斛酚对海拉细胞活性氧水平的影响示意图，其中，Control：对照组；50～200μmol/L：分别给予50、100、200μmol/L石斛酚组。

图6上半部分为流式细胞仪检测DCFH-DA荧光图谱；下半部分为ROS合成柱状图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：细胞的培养

1、细胞的复苏

(1)提前在超净台内放入已灭菌移液枪头(10μL、200μL、1mL、5mL)与离心管、小牛血清(WISENT INC公司)、DMEM培养液(WISENT INC公司)，紫外灭菌大于2h。操作时穿实验工作服，戴一次性橡胶手套。

(2)预先准备37℃的热水(冬季38℃)，从超低温冰箱中取出冻存的人宫颈癌Hela-LC 3细胞(冻存管)(由中国科技大学生命科学学院温龙平教授惠赠)即刻丢入水浴中并以玻璃棒不断搅动，使其快速通过0℃，待完全融化后喷酒精放入超净工作台。

(3)血清、培养基均过火开启，将血清以体积比1/9的量加入到DMEM中，制成细胞培养液。吹打数次使之均匀混合后分装至提前灭菌的玻璃瓶中，瓶口过火拧紧，贴好标签，标记名称与时间。

(4)取15mL的离心管，吸取适量新鲜培养液于其中。将冻存管中的细胞悬液吹匀后转入离心管培养基中充分吹匀，1000rpm离心5min。

(5)去上清后以适量培养液重悬细胞，将吹匀后的细胞悬液转移至新培养瓶中，标记细胞名称与时间。喷酒精后口向内平放入CO₂培养箱中，左右晃动，使细胞均匀平铺，培养24h后换液一次以去除未贴壁的死亡细胞。

2、细胞的传代培养

(1)75％乙醇和紫外灭菌，所需试剂与仪器提前放入超净工作台。光学显微镜下观察培养瓶中细胞，长至近铺满单层时即可传代。

(2)所有物品均过火开盖；弃去旧培养基，加入适量PBS溶液洗涤细胞1～2次，后加入胰酶(WISENT INC公司)进行消化。

(3)显微镜下观察细胞形态，待细胞大部分变圆，可见明显细胞间隙时立起培养瓶，使胰酶与细胞分离；

(4)弃去胰酶消化液，并加入适量DMEM培养基以终止消化，将瓶壁上的细胞吹下并反复吹打制成单细胞悬液。弃去1/2～4/5的悬液，以培养基补足，摇匀。

(5)镜检细胞分散良好，放回培养箱，来回晃动后静置，约24h镜检一次，注意细胞生长速度与换液。

实施例2：MTT检测细胞增殖

1、细胞铺板

(1)准备96孔细胞培养板、血球计数板，所需耗材提前灭菌。

(2)镜检Hela细胞，长至近单层时分别将细胞消化制成单细胞悬液。

(3)用血球计数板进行计数，显微镜下观察到的一个发亮的小圆点即是一个细胞；分别将八个计数区的细胞数目记为N₁、N₂～N₈，则算得悬液中每毫升细胞数为N＝[(N₁+N₂+…+N₈)/8]×10⁴。Hela细胞采取100μL/孔，5×10⁴/mL的细胞量来铺板。

(4)取适量细胞悬液稀释成所需密度的铺板悬液，剩余悬液用于传代培养。

铺板完成后，标记细胞名称与接种时间。

(5)放回CO2培养箱，各个方向分别平行晃动数次，使细胞均匀平铺，静置培养。

2、同步化

(1)镜检，96孔板的板孔中细胞平铺面积约占孔的1/2时可进行同步化操作。

(2)所需耗材提前高温高压灭菌，弃去培养板中原培养基。

(3)按照每孔100μL给细胞加入无血清DMEM培养基。

(4)培养箱继续培养(记录时间)。

3、给药

(1)配药：用细胞级二甲基亚砜(DMSO，细胞级，合肥博美生物)溶解DEN(四川省维克奇生物科技有限公司，HPLC＞95％)，制成200mmol/L的母液，用孔径0.22μM的滤器除菌后4℃贮存备用，同步化24h后对细胞给药。

(2)给板子做好标记，划出组别与分区，写上药品浓度与作用时间(24h、48h、72h)。

(3)DEN设定对照组和5个实验组，分别为CK、25、50、100、150、200μmol/L，对照组加入DMSO(终浓度＜0.1％)。

(4)弃去无血清培养基，药液充分混匀后以每孔200μL对细胞给药。

(5)摞好培养板，CO₂培养箱继续培养(记录时间)。

4、MTT染色与测定

配制MTT染液(奕源生物有限公司，5mg/mL，需过滤除菌，避光保存)，于给药后24h时进行第一次MTT实验。

(1)提前将冻存的MTT(5mL装)在37℃融化。

(2)计算MTT用量：一块板所需V＝20μL×96孔；吸取所需量的MTT备用，多余染液放回冰箱4℃保存，融化后的MTT保质期为2周。

(3)一次实验做一块板，按每孔20μL的量加入MTT。

(4)CO₂培养箱37℃孵育4h。

(5)孵育完成后，吸出所有液体，注意不要戳坏细胞平铺面。

(6)按150μL/孔加入DMSO，再次孵育20min。

(7)酶标仪提前开机预热(37℃)，细胞中速震荡30s后，570nm测定吸光度值，将结果导出并保存。

(8)给药48h和72h时重复(1)～(7)的工作。

实验结果(见图1)说明了石斛酚对Hela细胞的增殖是有明显的阻碍作用的：100、150、200μmol/L的该药物在24h即可明显遏制细胞的增长，50μmol/L及以上浓度的石斛酚在48h时均对Hela细胞的增殖出现了显著性的抑制，而25μmol/L给药组于72h呈现出明显的抑制作用。本实验结果说明DEN对Hela的增殖具有阻抑作用，且作用效果呈剂量和时间效应的。

实施例3：细胞周期检测

1、细胞样品的准备

(1)提前准备好离心管(2mL)、PBS、胰酶(不含EDTA，0.25％)、预冷的70％乙醇溶液；

(2)石斛酚作用后的Hela细胞，将标记24h的六孔板取出，每浓度三孔，分别做好标记C(1、2、3)、50(4、5、6)、100(7、8、9)、200μmol/L(10、11、12)；

(3)将孔中的细胞培养液吸出盛装于提前备好的对应编号的12只离心管(2mL)，PBS洗涤细胞1次；弃去PBS后，以新鲜配制的胰酶消化液(0.25％，不含EDTA)消化细胞；

(4)弃去胰酶，将上述收集的细胞培养液加回至对应孔中终止消化并分别吹制成单细胞悬液，再次转移回对应的离心管中；

(5)离心5min(1000rpm)，弃上清，PBS重悬后，再次离心(1000rpm，5min)，弃上清。

(6)取预冷的70％乙醇，再次重悬细胞，4℃固定2h。

2、染色

(1)配制PI染色液：使用“细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒”(碧云天生物技术公司)，按照试剂盒说明书配制可测定12个样品的碘化丙啶染色液。4℃放置，仅限当日使用。

(2)固定完成后，将细胞1000rpmin离心5min，弃上清，加PBS重悬后，弃上清。

(3)避光条件下，向细胞中加入配好的PI染色液，充分混匀后，静置于37℃孵育半小时。

(4)过滤：孵育完成后，若不能及时检测，可放于冰箱4℃保存24h；若需要立即检测，则先准备12只1.5mL的EP管，标记1～12，将染色完成的细胞吹匀后过滤到对应编号的12只离心管中，避光上机检测。

(5)在药物处理的48h和72h时间点再次重复上述步骤，分析数据。

实验结果(见图2)显示，DEN处理Hela细胞24h后，100，200μmol/L组中处于G0/G1的细胞均有极显著下降(P＜0.001)，S期细胞比率均有显著升高(P＜0.05)，G2/M期细胞比率均有极显著增多(P＜0.001)；给药后48h后，DEN(100、200μmol/L)处理各组的细胞G0/G1占比较对照组明显减少(P＜0.001)，S期(P＜0.001)细胞明显增多，100μmol/L处理组G2/M期细胞显著增多(P＜0.01)。该实验结果提示石斛酚具有阻滞S期和G2/M期的作用，并且这种效果具有时间和剂量效应。

实施例4：石斛酚诱导细胞凋亡的测定

1、细胞的准备

(1)单细胞悬液的制备同“细胞周期的测定”。

(2)细胞离心后(1000rpmin，5min)，弃上清，PBS重悬。

(3)取15只1.5mL的离心管，分别标记1～12、双阴性(--)、Annexin V+和PI+。

(4)把步骤(2)中PBS重悬后的2～12号悬液转移到对应编号的新EP管中，1号四等分，分别装入标记为“1号、Annexin V+、PI+、双阴性(--)”四只管中，以PBS分别补足1mL，再次离心去上清。

2、染色

(1)全程避光，按照试剂盒说明对细胞进行双染。其中“双阴性(--)、Annexin V+、PI+”三管细胞分别为不染、Annexin V单染、PI单染。

(2)充分混匀后，放置于室温下(20～25℃)15min，期间再混匀一次。

(3)把细胞过滤到15只新EP管中，标记名称，即刻上机检测，测试操作同细胞周期检测。

(4)在药物处理的48h和72h时间点再次重复上述步骤，分析数据。

实验结果(见图3)显示，在0～24h内，200μmol/L组细胞凋亡情况较对照组有所升高(P＜0.05)；48h时间点检测得到，200μmol/L组细胞凋亡情况较对照组有极显著差异。本实验证明石斛酚有诱导Hela细胞生凋亡的作用，且与给药时间呈正相关。

实施例5：石斛酚诱导Hela自噬凋亡的荧光观测

1、DEN(0、50、100、200μmol/L)给药后24h取出24孔板，将其一周用封口胶封住。

2、连接电源，开启汞灯，设置显微镜，调到所需的波长的光源。使用Image-Pro拍照系统，对各组细胞进行拍照记录

3、每孔拍摄最高放大倍数1张，低倍3张(选取不同最佳视野)的细胞图片，以对应名称保存图像。

4、使用结束后，关闭所有电源，整理台面；培养板去封口胶后于培养箱继续培养。

5、给药后48h和72h时重复(1)～(4)的工作。

6、将连续3天的照片导出并整理后，运用ImageJ 1.48u软件对每张照片中所有及发生自噬的细胞(细胞中出现五个以上的亮点)数进行统计，分别计算每张照片中的自噬细胞比率。

实验结果(见图4)可得，Hela细胞的自噬率随着给药浓度的升高而增大。在24h检测点上，各处理组(50、100、200μmol/L)的细胞自噬率均较对照组有极显著差异(P＜0.001)，且随着DEN浓度的增大，细胞自噬率升高；在48h时，50μmol/L组细胞自噬率较对照组有显著差异(P＜0.01)而其他各给药组细胞自噬率均较对照组有极显著升高(P＜0.001)；在48～72h内连同对照组在内，各组细胞自噬率均发生明显下降(P＜0.01)。实验结果说明石斛酚诱导了Hela的自噬活性，且存在剂量依赖效应，于处理后48h细胞自噬活动最为强烈。

实施例6：石斛酚诱导Hela自噬凋亡的蛋白质免疫印迹(Western blot)检测

1、蛋白质的提取

(1)提前准备PBS溶液、现配的细胞裂解液以及其他耗材，并参照实施例5进行给药。

(2)取出给药后24h的细胞，吸去其中培养液，用PBS溶液洗涤细胞。

(3)除净PBS后，将裂解液每孔等量吹加在细胞表面，使二者充分接触，冰上裂解1min；

(4)把所有孔中裂解后的溶液全部转移到对应编号离心管中，低温冷冻离心5min，12000g/min，转移等量上清液到新EP管中。

(5)按一定体积比加入上样缓冲液(溴酚蓝溶液)，使其终浓度为1×。

(6)在通风橱中将等量巯基乙醇加入上述所得溶液，使之终浓度为1×。

(7)离心5s，沸水中煮5min，放于4℃保存。

(8)培养至48h、72h时，重复上述步骤，即完成了蛋白提取流程。

2、蛋白质的丙烯酰胺凝胶电泳

(1)配置SDS-PAGE凝胶，分离胶浓度为10％，浓缩胶浓度5％，并对上述蛋白样品进行电泳。

(2)1～2h后蛋白质电泳充分，暂停电泳，将胶板小心取出电泳槽。

(3)剪取适当大小的PVDF膜(MILLMPOREG公司)，仔细将胶条取下后与PVDF膜压夹到一起，放到横向电泳槽继续电泳，使分离的蛋白条带转到膜上(1～2h)。

3、抗体的处理

(1)将TBS(10×，称取Trizma base 12.1g、氯化钠43.8g，去离子水溶解后调pH7.5，加水定容到500mL，室温放存)稀释到1×后将之配成5％脱脂奶粉溶液即成封闭液。电泳完成后，将膜放入封闭液中封闭1h。

(2)根据膜的大小计算所需抗体的量，用封闭液配制一抗GAPDH(GAPDH，sc-25778，Santa Cruz Biotechnology公司)、LC3(NB100-2220，novusbio公司)、p62LC3B(p62，NBP1-48320，novusbio公司)，稀释倍数分别为200、1000和4000倍。

(3)做好标记后加入一抗，使膜与抗体充分接触后，4℃过夜。

(4)抗体可收集再利用，而薄膜则以1×的洗膜液置水平摇床上洗三遍，每次10min。

(5)与一抗的方法相同，加入二抗后，孵育2h。

(6)重复洗膜步骤，3遍后，将膜取出置于铺好PE膜的曝光盒上。

4、曝光与显影

(1)等体积混匀ECL(GE公司)的A、B液后稀释10倍，在曝光盒中将PVDF膜铺于PE薄膜上，把显色液涂于膜上，加盖PE膜。

(2)压好胶片后，关闭曝光盒，1h后将曝光的胶片先在显影后在定影液中各洗3min。

(3)清水冲洗，扫描图片，保存分析。

实验结果(见图5)显示，石斛酚作用48h后，50μmol/L组的LC3II/I的值明显升高(P＜0.01)，p62蛋白的表达量有所降低(P＜0.05)；100、200μmol/L组细胞中，LC3II/I的值均极显著升高(P＜0.001)，p62蛋白的表达量极显著降低(P＜0.001)。表明了石斛酚确实诱导了Hela细胞的自噬。

实施例7：石斛酚提高细胞活性氧ROS含量的检测

(1)给药后48h的细胞制成单细胞悬液，离心后，PBS清洗重悬。

(2)按照ROS试剂盒(碧云天生物技术公司)说明将DCFH-DA探针以无血清DMEM培养基配制应用液，探针终浓度为10μmol/L。

(3)所获细胞再次离心去上清后，对细胞加入DCFH-DA应用液，37℃孵育20min。

(4)由于多余的探针会影响实验准确性，所以细胞要再进行3次的离心、PBS重悬、去上清。

(5)最终向各管分别加入PBS溶液200μL，充分重悬后上机检测。

实验结果(见图6)显示，DEN(50、100、200μmol/L)处理Hela细胞48h后，与对照组相比，给药组Hela细胞内活性氧的水平明显升高，且呈典型的剂量效应50μmol/L组(P＜0.05)，100μmol/L组(P＜0.01)，200μmol/L组(P＜0.001)，且ROS含量与石斛酚的浓度呈正相关关系。该实验结果反映了石斛酚对海拉细胞活性氧水平的上升具有浓度效应。

Claims

1.石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖和诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述宫颈癌细胞为人子宫颈癌细胞Hela细胞。

3.石斛酚在制备抑制子宫颈癌细胞增殖药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述宫颈癌细胞为人子宫颈癌细胞Hela细胞。

5.石斛酚在制备诱导子宫颈癌细胞自噬凋亡药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述宫颈癌细胞为人子宫颈癌细胞Hela细胞。