CN105943473A - 一种玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种利用双水相萃取技术同步高收率提取玉竹多糖和平菇多糖的方法，以得到一种玉竹多糖和平菇多糖萃取液，以及用所述萃取液直接制备的保湿面膜。

Description

一种玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液及其应用
技术领域
本发明属于天然产物提取及化妆品技术领域，具体涉及一种从玉竹和平菇中同步提取玉竹多糖和平菇多糖的混合萃取液及其应用。
背景技术
保湿剂广泛应用于化妆品中，对保持皮肤水分和修复皮肤屏障功能有重要作用。保湿剂的种类多种多样，例如常用的天然保湿剂透明质酸（HA）、甲壳素及其衍生物、植物多糖等，化学合成的保湿剂如甘油、丙二醇、山梨醇、聚乙二醇等。然而，在这些保湿剂中，例如透明质酸来源较为缺乏，限制了其应用，而甘油虽然吸湿效果显著，但是保湿效果则一般。与化学合成的保湿剂相比，天然产物用于化妆品中可降低各种化学物质造成的皮肤刺激，因此，人们致力于开发能用于化妆品原料的天然成份。
现有技术已经表明，多糖的保湿作用在于：1）多糖分子中的羟基、羧基和其他极性基团可与水分子形成氢键而结合大量的水分，同时多糖分子链还相互交织成网状，加之与水的氢键键合，起到很强的保水作用。此外，在胞外基质中，多糖与皮肤中的其他多糖组分及纤维状蛋白质共同组成含大量水分的胞外胶状基质，为皮肤提供水分。2）多糖具有良好的成膜性能，可在皮肤表面形成一层均匀的薄膜，减少皮肤表面的水分蒸发，使得水分从基底组织弥散到角质层，诱导角质层进一步水化，保存皮肤自身的水分，完成润肤作用（“多糖-一种新型的化妆品保湿剂，刘敏等，《中国洗涤用品工业》，第1期，2010）。
玉竹多糖和平菇多糖均具有较强的吸水保湿作用。现有技术中已经公开了玉竹多糖作为保湿剂成份的复合多糖类保湿护肤剂（参见CN102525838A,20120704; CN105168062A,20151223）,而复合菌类多糖应用于保湿化妆品现有技术也有报道（CN103536455A,20140129）。杨海龙等人的研究表明，平菇多糖对超自由基平均抵制率可达36%-60%，在低浓度下(<300mg/L)时仍具有一定的清除作用（“平菇多糖的纯化及其对超氧自由基的效应”，杨海龙等，《食品科学》，1999，(10):16）。
目前，玉竹多糖和平菇多糖的提取采用的是超声波或者微波辅助的水溶醇沉法。由于分离沉淀后获得的多糖提取物中,常会有蛋白质、色素等杂质,必须继续采用吸附法做进一步分离纯化，这种提取方法操作复杂，对设备的性能要求高，生产成本也高。此外，目前天然多糖开发层次低，其药用价值及化妆品方面价值缺乏深入和全面的研究。据发明人所知，目前尚未有关于玉竹多糖和平菇多糖同步提取，以及两者可以协同增效保湿效果的报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺点与不足，提供一种利用双水相萃取技术同步高收率提取玉竹多糖和平菇多糖的方法，以玉竹和平菇为原料得到玉竹和平菇的混合粗提取液，将其经过低分子醇/盐双水相体系提取分离，再经分离纯化得到玉竹多糖和平菇多糖萃取液。
本发明的另一目的在于提供所述玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液直接应用于保湿面膜的制备，克服了已有面膜制备技术中溶解多糖操作的繁琐。
所述的一种同步分离纯化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于：室温下配制低分子醇与盐双水相体系并绘制相图，根据成相稳定性确定适宜的双水相体系。
所述的一种同步分离纯化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于：绘制双水相图所用的低分子醇类为C1-C5的直链或支链的烷基醇。特别优选为乙醇、异丙醇或丙醇，所述的盐类为碱土金属盐、碱金属盐或铵盐。可以选自钾盐、钠盐和铵盐。具体而言，所述钾盐可以为：碳酸钾、磷酸氢二钾；钠盐为柠檬酸三钠、碳酸钠、硫酸钠；铵盐为硫酸铵、碳酸铵。
所述的一种同步分离纯化玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于：室温下配制低分子醇与无机盐双水相体系，将玉竹和平菇混合粗提取液加入到该双水相体系，在10～50℃，300r/min条件下恒温磁力搅拌30～60min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置60～100min，经1000～2000rpm离心20～40min，分离出玉竹多糖和平菇多糖富集相，将双水相萃取的多糖液经4℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。
所述的玉竹和平菇按质量比0.01:1～100：1配比进行粗提；优选为按0.1:1～20:1配比。
本发明利用低分子醇/盐双水相萃取技术同步分离纯化玉竹和平菇混合粗提取液，经分离纯化后得到玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。该方法不仅开创了双水相萃取技术同步提取玉竹多糖和平菇多糖的应用，而且操作简单，绿色高效，经济省时，易于放大。
按上述方法得到的含有保湿功效的混合多糖萃取液可以作为面膜添加成分使用，取 5 ～ 50g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 15 ～ 45 分钟后，温水洗干净即可。
本发明协同增效作用明显，玉竹多糖具有较强的吸水能力和抗氧化能力，并且协同平菇多糖增强保湿效果，补充皮肤水分。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例 1
将玉竹和平菇按质量比1:1（玉竹和平菇共100g）混合进行粗提并浓缩至50mL，室温下按碳酸钠与乙醇质量百分比10%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（10℃，300r/min）40min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置80min，经1500rpm离心30min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液；取 10g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 15 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量为11.6%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为30.7%。
实施例 2
将玉竹和平菇按质量比10:1（玉竹和平菇共100g）混合进行粗提并浓缩至50mL，室温下按碳酸钠与异丙醇质量百分比30%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（35℃，300r/min）30min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置60min，经1000rpm离心20min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液；取 10g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量为16.1%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为41.6%。
实施例 3
将玉竹和平菇按质量比4:1（玉竹和平菇共100g）混合进行粗提并浓缩至50mL，室温下按硫酸铵与异丙醇质量百分比30%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（50℃，300r/min）60min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置100min，经2000rpm离心40min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液；取 10g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量为15.8%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为36.2%。
实施例 4
将玉竹和平菇按质量比10:1（玉竹和平菇共100g）混合进行粗提并浓缩至50mL，室温下按磷酸氢二钾与丙醇质量百分比30%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（35℃，300r/min）30min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置60min，经1000rpm离心20min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液；取 10g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液中多糖含量为12.9%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为29.7%。
进行单组分对照，分别设置玉竹多糖单品、平菇多糖单品作为对照。
对照例 1
将玉竹100g洗净进行粗提并浓缩至50mL，室温下按-碳酸钠与乙醇质量百分比10%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（50℃，300r/min）60min，使玉竹多糖富集，静置100min，经2000rpm离心40min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖萃取液；取 10 g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，萃取液中玉竹多糖含量为9.5%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为21.2%。
对照例 2
将平菇100g洗净进行粗提并浓缩至50mL，室温下按柠檬酸钠与异丙醇质量百分比10%配制双水相体系20mL，将浓缩的粗提液5mL加入到该双水相体系，恒温磁力搅拌（50℃，300r/min）60min，使平菇多糖富集，静置100min，经2000rpm离心40min，分离出多糖混合物富集相，将双水相萃取的多糖液经4 ℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得平菇多糖混合萃取液；取 10 g萃取液，加入面粉、鸡蛋等调制成糊状；初步温水洗干净面部后，均匀涂抹于面部，保留 30 分钟后，温水洗干净即可。
经苯酚-浓硫酸法测定，萃取液中平菇多糖含量为10.3%，将萃取液经浓缩冷冻干燥得多糖固体，提取率为28.1%。
保湿效果的检测：测量受试者皮肤角质层水合率，测试原理是以电容器为仪器探头，由于水是皮肤上介质常数最大的物质，当皮肤水分含量发生变化时，皮肤的电容值也发生变化，所以可以通过测定皮肤电容值，分析皮肤表面水分含量；常用的仪器是CorneometerCM825水分测试仪，通过测量使用产品前后皮肤角质层电容值的变化来衡量角质层含水量的变化，从而来评价化妆品的保湿功效，此种方法对皮肤角质层的水分含量进行定量化，能够灵敏地反应皮肤水分含量的变化，且重现性好，是目前保湿化妆品功效评价常用的方法之一。
实验方法
按照自愿原则选择 20-40 岁之间无皮肤病史及化妆品过敏史的人员作为受试者。
试验样品如上述所示共6个，每个样品随机选用10名受试者，每名受试者只使用一个样品，每次使用样品约 20 g均匀涂抹于面部，试验期间不再使用其他保湿产品，采用定位膜标记好测试点位置。
用水分测试仪测定受试者使用样品前和连续使用 15d 后的含水量变化，每个测试点平行测 5 次取平均值，结果用水分含量表示，单位为 a.u.。
保湿效果的检测结果，如表1所示：
表1
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 对照例1 对照例2
使用前 46.52 40.84 43.09 43.56 41.94 43.11
15d后 84.93 89.22 88.30 85.66 60.00 66.30
由表1可以看出，本发明玉竹多糖和平菇多糖单品单独使用时，对皮肤具有一定的保湿作用（对照例1-2），而本发明所得的组合样品（实施例1-4）显示出协同保湿效果明显增强。
试验过程均无过敏等不良反应。

Claims (8)

1.一种同步提取玉竹多糖和平菇多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）室温下配制低分子醇与无机盐双水相体系；
（2）将玉竹和平菇混合粗提取液加入到该双水相体系，在10～50℃，300r/min条件下恒温磁力搅拌30～60min，使玉竹多糖和平菇多糖富集，静置60～100min，经1000～2000rpm离心20～40min，分离出玉竹多糖和平菇多糖富集相，将双水相萃取的多糖液经4℃冰箱放置一段时间，结晶析出大部分无机盐后再经透析得玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的玉竹和平菇混合粗提取液按如下方法制备获得：将玉竹和平菇按质量比0.01:1～100:1配比进行粗提；优选为按0.1:1～20:1配比进行粗提。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的低分子醇为为C1-C5的直链或支链的烷基醇。
4.如权利要求1所述的的方法，其特征在于所述的无机盐为碱土金属盐、碱金属盐或铵盐。
5.如权利要求3或4任一项所述的方法，其特征在于所述的低分子醇为乙醇、异丙醇或丙醇；所述的无机盐为钾盐、钠盐、铵盐或其混合物。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述的钾盐为：碳酸钾、磷酸氢二钾；钠盐为柠檬酸三钠、碳酸钠、硫酸钠；铵盐为硫酸铵、碳酸铵。
7.一种玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液，其由权利要求1-6任一项所述的制备方法制备获得。
8.一种具有保湿功效的面膜，其包含权利要求1-6任一项所述方法制备获得的玉竹多糖和平菇多糖混合萃取液。
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