CN105929084A - 高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法,将含有苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的苯甲酸阿格列汀原料药溶于稀释液至浓度0.1~2mg/mL;以硅胶表面共价键合有纤维素‑三(3,5‑二氯苯基氨基甲酸酯)为固定相,以正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇和三乙胺混合溶液为流动相,用高效液相色谱系统拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体;所述的稀释液选自乙腈、甲醇、乙醇中一种或者几种组成的混合物。本发明方法有效实现了苯甲酸阿格列汀和其对映异构体的分离和测定,保证了苯甲酸阿格列汀产品的有效性和安全性。
Description
技术领域
本发明涉及一种苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的拆分方法,属于医药技术领域。
背景技术
苯甲酸阿格列汀 (Alogliptin benzoate) 是日本武田Takeda公司研发的丝氨酸蛋白酶二肽基肽酶IV (DPP-4)抑制剂,能维持体内胰高血糖素样肽1 (GLP-1) 和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽 (GIP) 的水平,促进胰岛素的分泌,从而发挥降糖疗效。
苯甲阿格列汀存在立体异构现象,由于C18位上的氨基存在,使其产生R、S两种构型,市售的强活性物质为R构型,S-异构体有报道也有拮抗DDP-4的活性,但活性比R构型低1000多倍,且无拮抗其他家族的活性。在生产过程中,苯甲酸阿格列汀原料药中往往会存在少量的S-异构体,为了控制R构型中的S异构体,研发对苯甲酸阿格列汀及其手性异构体进行拆分方法,对R构型中的S异构体进行控制,可以保证苯甲酸阿格列汀产品的有效性和安全性。
R,S-构型苯甲酸阿格列汀结构式如下:
。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足,提供一种新的高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法。
本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下:一种高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法,其特征在于:将含有苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的苯甲酸阿格列汀原料药溶于稀释液至浓度0.1~2mg/mL;以硅胶表面共价键合有纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为固定相,以正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇和三乙胺混合溶液为流动相,用高效液相色谱系统拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体;所述的稀释液选自乙腈、甲醇、乙醇中一种或者几种组成的混合物。
本发明所述的方法,其进一步优选的技术方案是:所述的纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IC。
本发明所述的方法,其进一步优选的技术方案是:所述的稀释液为乙腈、甲醇、乙醇组成的混合物,且乙腈:甲醇:乙醇的体积比为20:20:60。
本发明所述的方法,其进一步优选的技术方案是:所述的流动相流速为0.5~2.0mL/min,色谱柱温度为25~45℃,检测波长为220~254 nm 或者270~310nm。所述色谱柱温度进一步优选为30℃~40℃。
本发明所述的方法,其进一步优选的技术方案是:所述流动相中,按体积比计算,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为30~50 : 5~15 : 40~60 : 0.1~0.5。进一步优选为,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为35~45 :8~12 : 45~55 : 0.3~0.4。最优选为,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为40 :10 : 50 : 0.3。
本发明所述的方法,其进一步优选的技术方案是:所述的进样量为0.1μL ~50μL。
本发明方法中,拆分所用仪器为高效液相色谱仪。
本发明方法采用高效液相色谱系统对苯甲酸阿格列汀及其对映异构体进行拆分,填料为硅胶表面共价键合有纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯),以正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇及三乙胺的混合溶剂为流动相,有效实现了苯甲酸阿格列汀和其对映异构体的分离和测定,保证了苯甲酸阿格列汀产品的有效性和安全性。
附图说明
图1 是苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的分离色谱图;
图2 是苯甲酸阿格列汀中对映异构体含量检测色图。
具体实施方式
下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述,但并不限制本发明。
实施例1,一种高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法:将含有苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的苯甲酸阿格列汀原料药溶于稀释液至浓度0.1mg/mL;以硅胶表面共价键合有纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为固定相,以正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇和三乙胺混合溶液为流动相,用高效液相色谱系统拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体;所述的稀释液选自乙腈、甲醇、乙醇中一种或者几种组成的混合物。所述的纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IC。所述的流动相流速为0.5mL/min,色谱柱温度为25℃,检测波长为220nm。所述的进样量为0.1μL。所述流动相中,按体积比计算,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为30 : 5 : 40 : 0.1。
实施例2,一种高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法:将含有苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的苯甲酸阿格列汀原料药溶于稀释液至浓度2mg/mL;以硅胶表面共价键合有纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为固定相,以正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇和三乙胺混合溶液为流动相,用高效液相色谱系统拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体;所述的稀释液选自乙腈、甲醇、乙醇中一种或者几种组成的混合物。所述的纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IC。所述的流动相流速为2.0mL/min,色谱柱温度为45℃,检测波长为254 nm。所述的进样量为50μL。所述流动相中,按体积比计算,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为50 : 15 : 60 : 0.5。
实施例3,一种高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法:将含有苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的苯甲酸阿格列汀原料药溶于稀释液至浓度1mg/mL;以硅胶表面共价键合有纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为固定相,以正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇和三乙胺混合溶液为流动相,用高效液相色谱系统拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体;所述的稀释液选自乙腈、甲醇、乙醇中一种或者几种组成的混合物。1所述的流动相流速为1.0mL/min,色谱柱温度为35℃,检测波长为270nm。所述的进样量为10L。所述流动相中,按体积比计算,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为45 : 12 : 22 : 0.4。
实施例4,一种高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法:将含有苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的苯甲酸阿格列汀原料药溶于稀释液至浓度0.5mg/mL;以硅胶表面共价键合有纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为固定相,以正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇和三乙胺混合溶液为流动相,用高效液相色谱系统拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体;所述的稀释液选自乙腈、甲醇、乙醇中一种或者几种组成的混合物。所述的纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IC。所述的流动相流速为1.5mL/min,色谱柱温度为40℃,检测波长为310nm。所述的进样量为30μL。所述流动相中,按体积比计算,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为40 :10 : 50 : 0.3。
实施例5,苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的拆分实验一:
取苯甲酸阿格列汀及其对映体各25mg,同置50ml量瓶中,加稀释液(乙腈:甲醇:乙醇=20:20:60)使溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液,作为供试品溶液;用硅胶表面共价键合纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为填充剂;以正己烷:乙酸乙酯:乙醇:三乙胺(40:10:50:0.2)为流动相;检测波长278nm,柱温35℃。精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,洗脱时间为20min。
色谱分离结果见图1所示,从图1 中可以看出,R构型阿格列汀色谱峰保留时间为13.571min,S-构型的阿格列汀色谱峰保留时间为12.163min,R-构型和S-构型的阿格列汀两者分离度为2.18。
实施例6,苯甲酸阿格列汀中对映异构体的含量测定实验二:
取本品适量,精密称定,加稀释液(乙腈:甲醇:乙醇=20:20:60)使溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取1ml,置100ml量瓶中,加稀释液稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录V D)测定。用硅胶表面共价键合纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为填充剂;以正己烷:乙酸乙酯:乙醇:三乙胺(40:10:50:0.2)为流动相;检测波长278nm,柱温35℃。精密量取对照溶液和供试品溶液各10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,洗脱时间为20min。
苯甲酸阿格列汀中异构体含量结果见图2所示,从图2中可以看出,阿格列汀中异构体与阿格列汀良好分离,并能被较好的检出。
综上所述,本发明的一种苯甲酸阿格列汀及其对映体高效液相色谱拆分方法可以有效的将R -构型和S-构型的对映体很好的分离。
以上所述仅是本发明的实施方式的举例,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和变型,这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种高效液相色谱拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的方法,其特征在于:将含有苯甲酸阿格列汀及其对映异构体的苯甲酸阿格列汀原料药溶于稀释液至浓度0.1~2mg/mL;以硅胶表面共价键合有纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为固定相,以正己烷、乙酸乙酯、无水乙醇和三乙胺混合溶液为流动相,用高效液相色谱系统拆分苯甲酸阿格列汀及其对映异构体;所述的稀释液选自乙腈、甲醇、乙醇中一种或者几种组成的混合物。
2. 如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述的纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)型手性柱为键合型手性色谱柱CHIRALPAK IC。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述的稀释液为乙腈、甲醇、乙醇组成的混合物,且乙腈:甲醇:乙醇的体积比为20:20:60。
4. 如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述的流动相流速为0.5~2.0mL/min,色谱柱温度为25~45℃,检测波长为220~254 nm 或者270~310nm。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于:所述色谱柱温度为30℃~40℃。
6. 如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述流动相中,按体积比计算,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为30~50 : 5~15 : 40~60 : 0.1~0.5。
7. 如权利要求6所述的方法,其特征在于:所述流动相中,按体积比计算,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为35~45 :8~12 : 45~55 : 0.3~0.4。
8. 如权利要求6所述的方法,其特征在于:所述流动相中,按体积比计算,正己烷:乙酸乙酯:无水乙醇:三乙胺为40 :10 : 50 : 0.3。
9. 如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述的进样量为0.1μL ~50μL。
10.如权利要求1所述的方法,其特征在于:拆分所用仪器为高效液相色谱仪。
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