CN105861615A - 一种水产用氨基酸活性肽的生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物发酵技术和特种水产饲料的生产技术，具体的说是一种用微生物发酵方法生产氨基酸活性肽。以鱼精膏、豆粕、花生粕、玉米浆干粉为发酵原料，以枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母菌、海洋红酵母和嗜酸乳杆菌为微生物发酵菌群，五种微生物液体种子分别采用摇瓶种子培养和发酵罐发酵培养。固体与液体按比例均匀混合后，放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵，再经烘干、粉碎、过筛得到水产用氨基酸活性肽。本发明具有原料来源广泛、发酵工艺成熟，产品蛋白含量高、氨基酸组份合理、肽转化率高、酶系产物多、诱食效果好等特点，在海淡水鱼、虾、蟹和观赏鱼畜等水产动物中应用，可以防病治病，提高成活率和免疫力，提高生长速度和提高品质，还可以改善养殖环境,净化水质，水产用氨基酸活性肽是一种绿色的功能性的饲料添加剂。

Description

一种水产用氨基酸活性肽的生产方法

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术和特种水产饲料的生产技术，具体的说是一种用微生物发酵方法生产水产用氨基酸活性肽。

背景技术

我国是全球最大的水产养殖国，水产养殖产量约占全球的70％以上。2015年我国水产品总产量达6600万吨，其中养殖产量5600万吨，淡水鱼类产量3000万吨，海水鱼类产量2600万吨。随着人们膳食结构的改变，对水产品的消费量快速增加，水产养殖业在全球消费中的地位越来越重要。目前，我国水产饲料产业已进入快速、稳步发展时期。我国养殖鱼虾的总产量约2600万吨，饲料系数以1.5计，理论上需要3900万吨饲料，但2015年我国的水产配合饲料产量仅2000万吨，水产饲料具有巨大发展空间。近年来，我国饲料工业发展很快，取得了巨大成就，同时，应更加注重新饲料资源的开发利用，饲料安全和食品安全。促进我国饲料工业的可持续健康发展。

目前，在我国的水产养殖和饲料行业面临的问题是：缺地、缺水、缺蛋白、缺品牌。缺地、缺水控制不住，缺蛋白、缺品牌是我们为之努力的方向。

近年来，在研究和生产实践中，人们采用豆粕、麸皮、米糠为发酵原料，用微生物发酵法和酶解法生产氨基酸和小肽。众所周知，动物消化道吸收顺序是：小肽、氨基酸、蛋白质。蛋白质在消化道中最终产物大部分是小肽，少部分是氨基酸，在后期的发酵中，也会降解成肽类物质。小肽能够穿过动物的肠壁被吸收入循环系统，小肽比氨基酸更利于促进动物的消化吸收、生长发育和增强抗病抗力。目前，国内外特种水产饲料发展很不均衡，国外快，精养虾和海水鱼80％使用特种饲料，国内慢，精养虾和海水鱼只有30％左右使用特种饲料，其它大部分还是饲喂鲜鱼虾等鲜活饵料，鲜活饵料极易破坏了水质，使虾鱼的发病率大幅度提高，所以特种水产饲料在水产养殖中有非常大的上升空间，目前，国内每年能有1000万吨的需求量，产值可达千亿元以上，市场潜力巨大，市场前景非常广阔。

发明内容

本发明要解决的上述技术问题,提供一种水产用氨基酸活性肽的生产方法，以鱼精膏、豆粕、花生粕、玉米浆干粉为发酵原料，以枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母菌、海洋红酵母和嗜酸乳杆菌为微生物发酵菌群，各种原料的重量比为；鱼精膏20～30份、豆粕60～70份、花生粕10～15、玉米浆干粉10～15份；各种菌液的重量比为：枯草芽孢杆菌5～10份、纳豆芽孢杆菌5～10份、酿酒酵母菌5～10份、海洋红酵母5～10份、嗜酸乳杆菌5～10份；发酵原料与液体种子重量比为：100～120：20～40；均匀混合后，放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵，发酵起始温度为20℃～30℃，控制温度为50℃～60℃，发酵时间为100小时～120小时；发酵料开始降温，温度降低到20℃～30℃，发酵达到终点；经流化床进风温度80℃～60℃，出风温度40℃～30℃，流化时间8分钟～12分钟，烘干到含水量10％～12％，粉碎60目～100目过筛，得到水产用氨基酸活性肽；

上述发酵原料中:鱼精膏含水量为30％～40％、豆粕含水量为10％～13％、花生粕含水量为10％～13％、玉米浆干粉含水量为10％～13％。其中所述发酵原料的总质量含水量为13.60％～19.58％。

上述发酵所得产品中，粗蛋白50％～60％，其中含短链肽20％～30％以上(短链肽分子量为2000个道尔顿以下)、赖氨酸3.0％～4.0％、蛋氨酸1.0％～2.0％、苏氨酸1.0％～2.0％、色氨酸0.5％～0.9％；

上述发酵结束所得产品的pH值为4.0～5.0，总酸为200～300°T，发酵料中有酵母酒香味和乳酸味。

所述的发酵结束所得产品的pH值为5.0，总酸为200°T，发酵料中有酵母酒香味和乳酸味；

所述发酵原料中:鱼精膏含水量为40％、豆粕含水量为10％、花生粕含水量为10％、玉米浆干粉含水量为10％、所述发酵原料含水量为16.0％；

上述发酵所得产品中，粗蛋白50％，其中含短链肽20％以上(短链肽分子量为2000个道尔顿以下)、赖氨酸3.0％、蛋氨酸1.0％、苏氨酸1.0％、色氨酸0.5％。

所述的液体种子是分别经过摇瓶种子培养，再经过发酵罐培养得到的液体种子。

所述发酵原料中各种原料的重量比为；鱼精膏20份、豆粕60份、花生粕10份、玉米浆干粉10份；液体种子中各种菌液的重量比为：枯草芽孢杆菌7份、纳豆芽孢杆菌7份、酿酒酵母菌7份、海洋红酵母7份、嗜酸乳杆菌7份。

所述发酵原料与液体种子重量比为：100:35；即发酵原料100份，枯草芽孢杆菌7份、纳豆芽孢杆菌7份、酿酒酵母菌7份、海洋红酵母7份、嗜酸乳杆菌7份。

所述枯草芽孢菌种子液、纳豆芽孢杆菌液体种子中每毫升含活菌数为≥100个亿；酿酒酵母菌液体种子和海洋红酵母液体种子中每毫升含活菌数为≥30个亿，嗜酸乳杆菌液体种子中每毫升含活菌数为≥50个亿。

发酵原料放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵，发酵起始温度为20℃，控制温度为50℃，发酵时间为100小时；发酵结束后，温度降低到30℃，pH值为5.0，总酸200°T发酵料中有酵母酒香味和乳酸味产生，发酵达到终点；再经流化床进风温度80℃，出风温度30℃，流化时间10分钟，烘干、粉碎到含水量10％，100目过筛，得到水产用氨基酸活性肽。

所述枯草芽孢菌种子罐和纳豆芽孢杆菌种子罐的培养基和培养条件为：枯草芽孢菌种子罐和纳豆芽孢杆菌种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖0.5～1.5％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:80～100:120vvm、转速100～200rpm、温度28℃～32℃；时间48～64h；

所述酿酒酵母菌种子罐和海洋红酵母种子罐的培养基和培养条件为：酿酒酵母菌和海洋红酵母种子罐的培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0～4.0％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:150vvm、转速180～220rpm、温度28℃～36℃；时间48～64h；

所述嗜酸乳杆菌种子罐的培养基和培养条件为：嗜酸乳杆菌的种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.0～2.0％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:0～100:100vvm、转速0～100rpm、温度28℃～36℃；时间48～72h(乳酸菌24小时后为静置培养，其它时间为通气培养)。

所述枯草芽孢菌种子罐和纳豆芽孢杆菌种子罐的培养基和培养条件为：枯草芽孢菌种子罐和纳豆芽孢杆菌种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％、余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.10MPa、121℃、20min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:100vvm、转速150rpm、温度30℃、时间48h；

所述酿酒酵母菌种子罐和海洋红酵母种子罐的培养基和培养条件为：酿酒酵母菌和海洋红酵母种子罐的培养基以重量百分比计为：葡萄糖3.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08MPa、115℃、18min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:150vvm、转速200rpm、温度28℃、时间48h；

所述嗜酸乳杆菌种子罐的培养基和培养条件为：嗜酸乳杆菌种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.5％,玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08MPa、115℃、18min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:50vvm、转速50rpm、温度36℃、时间为64h(乳酸菌24小时后为静置培养)。

枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌是能够产生芽孢的好氧微生物。在分类学上属原核生物、真细菌，单个细胞(0.7～0.8×2～3μm)，革兰氏阳性，无荚膜，周生鞭毛，能运动。芽孢大(0.6～0.9×1.0～1.5μm)，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏。芽孢形成后菌体不膨大，菌落表面粗糙，污白色或微黄色，在液体培养时，常形成皱醭。主要分布在海洋、江河、湖泊、活性污泥和土壤中。枯草芽孢杆菌繁殖速度快、容易培养，能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、多种氨基酸、多种维生素、抗菌肽和生物促长因子，具有生物好氧、调整菌群、抑制病菌、生物拮抗等功能，所以在提高动物机体免疫力、增强消化系统酶活性、防病治病和促进生长中起着重要作用。其芽孢抗逆性强、耐高温、耐酸碱、耐挤压，产品适用范围广泛，并且它能作为模式菌株在生物芯片上进行有效的DNA扩增和蛋白质、氨基酸分离。国内外许多学者研究表明，枯草芽孢杆菌在医药保健、水产养殖、禽畜养殖和生态环保等方面有较高的研究价值和应用价值。纳豆芽孢杆菌主要是分解蛋白能力强。

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，也是面包酵母或叫出芽酵母，是与人类关系最广泛的一种酵母。传统上用于制作面包及酿酒，现代分子生物学和细胞生物学中用作真核生物的模式生物菌。酿酒酵母的细胞形态为球形或者卵球形，直径5–10μm。细胞大小为2.5～10μm×4.5～21μm。繁殖的方式为出芽生殖，其碳源氮源利用广泛，能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、琥珀酸、柠檬酸、木糖、山梨醇、果糖、乙醇和甘油；酿酒酵母可以大量的合成酵母蛋白，可以代谢出各种酶系，降解纤维素和蛋白质。有肠道益生作用。海洋红酵母主要能产生虾青素和多种维生素。

嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidoPHilus)属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，杆的末端呈圆形，主要存在小肠中。具有酸甜芳香味，能分泌乳酸、乙酸可以使PH值下降，调整肠道菌群平衡，产生肽类抗菌素，抑制肠道不良微生物的增殖，对致病微生物有拮抗作用。还可以改善适口性，促进生长，提高饲料转化率，降低抗生素和酸化剂的使用量，降低成本。特别是对胃肠功能失调和服用抗菌素而引起胃肠功能失调等症状有特效，可以迅速使肠道内的菌群恢复正常平衡，抑制腐败菌的增殖，具有很好的营养保健作用。近年来，嗜酸乳杆菌的应用很广泛。

采用的鱼精膏和玉米浆干粉为发酵原料，其主要思考是：鱼精膏和有丰富的氨基酸和小肽，并且有诱食性；玉米浆干粉有丰富氮源、有机磷鱼精和微量元素，有助于微生物的繁殖和生长。

鱼精膏是鱼粉家族中的重要成员，同鱼粉一样，含有动物性蛋白质50％以上，2000道尔顿短肽链达到50％以上,胱氨酸盐酸盐1.0～3.0％,甘氨酸0.5～1.0％,丙氨酸0.5～1.0％。含有多种动物必须氨基酸、不饱和脂肪酸、多种维生素及微量有机矿物质和未知的生物素及促生长因子；含有极易吸收的生物活性钙、牛磺酸、鱼胶等；并且具有极好的水溶性、小分子多肽容易被消化道吸收或吸附。具有增强免疫力、抗病力的保健功效，是各种微生物生长最好的培养基，特别是水溶性维生素B复合物和各种氨基酸,能被微生物充分吸收和利用。近年来人们对鱼精膏的研究日臻完善，其氨基酸和肽类物质及次生长因子很多，具有维持生命体的生长发育、新陈代谢等生命活动的正常运转功能，促进和维持正常生长发育，提高和调节免疫等功能。在饲料中添加，可以增强免役力营养补充剂和诱食剂。

玉米浆干粉以鲜玉米浆为原料经低温瞬间加热喷雾干燥而成，其水溶性蛋白质保存完好，保持了玉米浆液的所有特性，加热方式为蒸汽加热，产品无杂质。玉米浆干粉用途广泛用于抗生素工业，维生素，氨基酸等发酵工业，在生物发酵过程中作水溶性植物蛋白及水溶性维生素等营养元素补充剂。

该方法以鱼精膏、豆粕、花生粕、玉米浆干粉为发酵原料，以枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母菌、海洋红酵母和嗜酸乳杆菌为微生物发酵菌群，五种微生物液体种子分别采用摇瓶种子培养和发酵罐发酵培养。固体与液体按比例均匀混合后，放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵，控制温度为50℃～60℃，若是超过50℃，则进行翻倒降温。再经烘干、粉碎、过筛得到水产用氨基酸活性肽。

本发明优点是：在种子液体培养中，发酵罐可为1吨罐或2吨罐，为三条(芽孢菌、酵母菌、乳酸菌)深层发酵生产线；在固体发酵中，可采用车阵式、履带式、槽式、塔式等发酵方式，烘干可采用负压流化床、震动流化床；固液混合、铺料、发酵、传送、烘干、粉碎、计量、包装等生产环节，采用自动化、程序化控制，属于规模化生产。

本发明特点是：1)五种微生物互补性好，生长繁殖速度快、容易培养、菌体及代谢产物营养丰富等。2)鱼精膏含有丰富的蛋白质、18种氨基酸和小肽等营养物质。3)玉米浆干粉含有非蛋白氮和有机磷，发酵过程中可以充分利用并将其降解，代谢为动物性蛋白。4)发酵得到的产品营养丰富，含有蛋白质、氨基酸、有机酸、维生素、不饱和脂肪酸、微量元素和肽类抗生素等生物活性物质。5)在水产养殖中应用,诱食性、适口性、消化吸收率、免疫力、抗病力好，可以明显提高养殖动物的繁殖和存活能力，增强皮肤肌肉色泽，可以促进生长和品质改善。还可以分解有机物、硫化氢、氨化物等污染物，改善养殖环境，净化水质，水产用氨基酸活性肽是一种绿色的功能性的饲料添加剂，具有广阔的市场前景。

具体实施例方式

本发明采用的纳豆芽孢杆菌、海洋红酵母和嗜酸乳杆菌菌种由中国科学院微生物所提供，鱼精膏由山东渔工生物科技有限公司提供、玉米浆干粉由山东鹤伴山生物科技有限公司提供。

本发明各实施例采用的酵母菌为：中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，CICC编号为1355；枯草芽孢杆菌为中国工业微生物菌种保藏管理中心保藏的枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)，CICC编号为20822。

原料制备步骤如下：

(1)鱼精膏的制备：

将购置的鲜鱼进行清洗去除杂质,倒入鱼浆粉碎机中，将其粉碎打磨成浆糊状，将糊状鱼浆注入到密闭的容器中，通入蒸汽，进行熟化和灭菌处理，熟化过程技术参数为：熟化压力为：0.5-0.8MPa，熟化时间为：15-18分钟，泄压后，鱼油和鱼浆分离，分离后将鱼浆在离心机中在线离心，离心转数为：1000-1200转/分钟，底部大颗粒为鱼粉，上部为鱼精膏。鱼精膏含水量为：30％～40％；

(2)发酵原料制备：按所需比例将发酵原料中的鱼精膏、豆粕、花生粕、玉米浆干粉充分混合：发酵原料中各种原料的重量比为：鱼精膏20～30份、豆粕60～70份、花生粕10～15、玉米浆干粉10～15份；

发酵原料中的各物质的质量含水量为鱼精膏30％～40％、豆粕10％～13％、花生粕10％～13％、玉米浆干粉10％～13％，所述发酵原料的总质量含水量为13.60％～19.58％。

(3)液体种子制备：分别经过摇瓶种子培养，再经过发酵罐培养得到的液体种子，具体制备步骤见(6)(7)(8)(9)(10)。按所需比例将液体种子中的枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母菌、海洋红酵母、嗜酸乳杆菌充分混合；液体种子中各种菌液的重量比为：枯草芽孢杆菌5～10份、纳豆芽孢杆菌5～10份、酿酒酵母菌5～10份、海洋红酵母5～10份、嗜酸乳杆菌5～10份。

枯草芽孢杆菌种子液和纳豆芽孢杆菌种子液活菌数为100个亿/ml、酿酒酵母菌种子液和海洋红酵母种子液活菌数为30个亿/ml、嗜酸乳杆菌种子液活菌数为50个亿/ml；

(4)固体发酵阶段：

发酵原料与液体种子按100～120与20～40比例均匀混合，放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵。

发酵起始温度为20℃～30℃，控制温度为50℃～60℃，发酵时间为100小时～120小时；发酵结束后，温度降低到20℃～30℃，PH值为4.0～5.0，酸度值200℃～300℃，发酵料中有酵母酒香味和乳酸味产生，发酵达到终点。

(5)烘干粉碎阶段：

再经流化床进风温度60℃～80℃，出风温度40℃～30℃，流化时间8分钟～12分钟，烘干、粉碎到含水量10％～12％，60目～100目过筛，得到水产用氨基酸活性肽。

(6)枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏蛋白胨培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、24小时培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白胨培养基的1000ml摇瓶中接种，在恒温摇床中30℃、24小时震荡培养，得到枯草芽孢杆菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌摇瓶种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖0.5～1.5％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件，0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；液体种子培养条件，罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:150vvm、转速100～200rpm、温度28℃～32℃、时间24～36h；枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿/ml；

(7)纳豆芽孢杆菌种子液的制备：

同(6)枯草芽孢杆菌种子液的制备方法一致，所不同的是菌种不一样。

(8)酿酒酵母菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的酿酒酵母菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、48小时培养，得到酿酒酵母单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：酿酒酵母单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的1000ml摇瓶中接种，在恒温摇床中30℃、48小时培养，得到酵母菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将酿酒酵母摇瓶种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到酵母菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0～4.0％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：罐压0.08～0.10MPa、温度115～121℃、时间18～20min；液体种子培养条件：罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:150vvm、转速180～220rpm、温度28℃～36℃、时间48～64h；酿酒酵母菌种子液中含酿酒酵母活菌数≥30亿/ml。

(9)海洋红酵母菌种子液的制备：

同(8)酿酒酵母菌种子液的制备方法一致，所不同的是菌种不一样。

(10)嗜酸乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的嗜酸乳杆菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、48小时培养，得到嗜酸乳杆菌单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：嗜酸乳杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的1000ml摇瓶瓶中接种，在恒温培养箱中30℃、48小时培养，得到嗜酸乳杆菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将嗜酸乳杆菌摇瓶种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到嗜酸乳杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0～4.0％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；二级种子罐灭菌条件：罐压0.08～0.10MPa、温度115～121℃、时间18～20min；二级液体种子培养条件：罐压0.01～0.10MPa、风量100:50～100:100vvm、转速100～150rpm、温度28℃～36℃(优选32℃)、时间48～64h；嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿/ml。

(11)优选的步骤(1)中，鱼精膏的制备：

将购置的鲜鱼进行清洗去除杂质,倒入鱼浆粉碎机中，将其粉碎打磨成浆糊状，将糊状鱼浆注入到密闭的容器中，通入蒸汽，进行熟化和灭菌处理，熟化过程技术参数为：熟化压力为：0.5-0.8MPa，熟化时间为：15-18分钟，泄压后，鱼油和鱼浆分离，分离后将鱼浆在离心机中在线离心，离心转数为：1000-1200转/分钟，底部大颗粒为鱼粉，上部为鱼精膏。鱼精膏含水量为：30％～50％；优选的步骤(2)中，按所需比例将发酵原料中的鱼精膏、豆粕、花生粕、玉米浆干粉充分混合：发酵原料中各种原料的重量比为：鱼精膏20份、豆粕60份、花生粕10份、玉米浆干粉10份；

发酵原料中的各物质的质量含水量为鱼精膏40％、豆粕10％、花生粕10％、玉米浆干粉10％，所述发酵原料含水量为16.0％。

优选的步骤(3)中，按所需比例将液体种子中的枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母菌、海洋红酵母、嗜酸乳杆菌充分混合；液体种子中各种菌液的重量比为：枯草芽孢杆菌7份、纳豆芽孢杆菌7份、酿酒酵母菌7份、海洋红酵母7份、嗜酸乳杆菌7份。

枯草芽孢杆菌种子液和纳豆芽孢杆菌种子液活菌数为100个亿/ml、酿酒酵母菌种子液和海洋红酵母种子液活菌数为30个亿/ml、嗜酸乳杆菌种子液活菌数为50个亿/ml；

优选的步骤(4)中，发酵原料与液体种子按100与35比例均匀混合，放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵。

发酵起始温度为20℃，控制温度为50℃，发酵时间为100小时；发酵结束后，温度降低到30℃，PH值为5.0，酸度值200℃℃，发酵料中有酵母酒香味和乳酸味产生，发酵达到终点。

优选的步骤(5)中，经流化床进风温度60℃，出风温度30℃，流化时间10分钟，烘干、粉碎到含水量10％，100目过筛，得到水产用氨基酸活性肽。

优选的步骤(6)中，枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏蛋白胨培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、24小时培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白胨培养基的1000ml摇瓶中接种，在恒温摇床中30℃、24小时培养，得到枯草芽孢杆菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌摇瓶种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：

葡萄糖1.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％、余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.10MPa、121℃、20min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:100vvm、转速150rpm、温度30℃、时间48h。枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿/ml；

优选的步骤(7)中，纳豆芽孢杆菌种子液的制备：

同(6)枯草芽孢杆菌种子液的制备方法一致，所不同的是菌种不一样。

优选的步骤(8)中，酿酒酵母菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的酿酒酵母菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、48小时培养，得到酿酒酵母单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：酿酒酵母单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的1000ml摇瓶中接种，在恒温培养箱中30℃、48小时培养，得到酵母菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将酿酒酵母摇瓶种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到酵母菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖3.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08MPa、115℃、18min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:150vvm、转速200rpm、温度28℃、时间48h。酿酒酵母菌种子液中含酿酒酵母活菌数≥30亿/ml。

优选的步骤(9)中，海洋红酵母菌种子液的制备：

同(8)酿酒酵母菌种子液的制备方法一致，所不同的是菌种不一样。

优选的步骤(10)中，嗜酸乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的嗜酸乳杆菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、48小时培养，得到嗜酸乳杆菌单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：嗜酸乳杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的1000ml摇瓶中接种，在恒温摇床中30℃、48小时培养，得到嗜酸乳杆菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将嗜酸乳杆菌固体种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到嗜酸乳杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：

葡萄糖1.5％,玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08MPa、115℃、18min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:50vvm、转速50rpm、温度36℃、时间为64h(乳酸菌24小时后为静置培养)；嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿/ml。

实施例1

(1)鱼精膏的制备：鱼精膏的制备：

将购置的鲜鱼进行清洗去除杂质,倒入鱼浆粉碎机中，将其粉碎打磨成浆糊状，将糊状鱼浆注入到密闭的容器中，通入蒸汽，进行熟化和灭菌处理，熟化过程技术参数为：熟化压力为：0.5-0.8MPa，熟化时间为：15-18分钟，泄压后，鱼油和鱼浆分离，分离后将鱼浆在离心机中在线离心，离心转数为：1000-1200转/分钟，底部大颗粒为鱼粉，上部为鱼精膏。鱼精膏含水量为30％～40％；(2)枯草芽孢杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的枯草芽孢杆菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖牛肉膏蛋白胨培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、24小时培养，得到枯草芽孢杆菌单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：枯草芽孢杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖牛肉膏蛋白胨培养基的1000ml摇瓶中接种，在恒温摇床中30℃、24小时培养，得到枯草芽孢杆菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将枯草芽孢杆菌摇瓶种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到枯草芽孢杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：

葡萄糖1.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％、余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.10MPa、121℃、20min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:100vvm、转速150rpm、温度30℃、时间36h。枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿/ml；

4)菌数的检测及其发酵结束的评价：采用平板计数法测定枯草芽孢杆菌种子液中含枯草芽孢杆菌活菌数≥100亿/ml。显微镜下检查枯草芽孢杆菌种子液，菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(3)纳豆芽孢杆菌种子液的制备：

同(2)枯草芽孢杆菌种子液的制备方法一致，所不同的是菌种不一样。

(4)酿酒酵母菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的酿酒酵母菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、48小时培养，得到酿酒酵母单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：酿酒酵母单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨酵母膏培养基的1000ml摇瓶中接种，在恒温摇床中30℃、48小时培养，得到酵母菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将酿酒酵母摇瓶种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到酵母菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖3.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08MPa、115℃、18min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:150vvm、转速200rpm、温度28℃、时间48h。酿酒酵母菌种子液中含酿酒酵母活菌数≥30亿/ml。

4)菌数的检测及其发酵结束的评价：酵母菌细胞形态大小约为2-5×5-30μm，酵母菌多数为单细胞微生物，常呈卵圆形或者圆柱形。酿酒酵母培养皿检查：平板培养基上的酵母菌落呈白色粒状凸起，培养成熟时，有酒香味。

采用平板计数法测定酿酒酵母菌种子液中含酿酒酵母活菌数≥100亿/ml。菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(5)海洋红酵母菌种子液的制备：

同(4)酿酒酵母菌种子液的制备方法一致，所不同的是菌种不一样。

(6)嗜酸乳杆菌种子液的制备：

1)单菌落分离：将经活化的嗜酸乳杆菌斜面菌种在盛有新配制的葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的培养皿上涂布，在恒温培养箱中30℃、48小时培养，得到嗜酸乳杆菌单菌落种子；

2)摇瓶种子培养：嗜酸乳杆菌单菌落种子在盛有葡萄糖蛋白胨牛肉膏酵母膏培养基的1000ml摇瓶中接种，在恒温摇床中30℃、48小时培养，得到嗜酸乳杆菌摇瓶种子；

3)液体种子培养：将嗜酸乳杆菌摇瓶种子按质量分数为10％～20％的接种量接种到种子罐培养基中，经培养，得到嗜酸乳杆菌种子液；所述种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.5％,玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08MPa、115℃、18min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:50vvm、转速50rpm、温度36℃、时间为64h(乳酸菌24小时后为静置培养)；嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿/ml。

4)菌数的检测及其发酵结束的评价：细胞形态为在PH值5.0以下条件下，菌体呈现短杆状，菌体粗壮、两端钝圆，在PH值6.2条件下，菌体变细，杆状较长。培养皿检查：平板培养基上的嗜酸乳杆菌菌落呈无色透明，采用平板计数法测定嗜酸乳杆菌种子液中含嗜酸乳杆菌活菌数≥50亿/ml。培养成熟时，PH＝5以下，具有酸甜芳香味，菌体运动活泼，健壮，整齐，无杂菌，无异味，无污染等异常现象，发酵结束，可与其他种子液按照比例混合使用。

(7)固体与液体混合阶段：将发酵原料与液体种子按比例均匀混合，其重量比为：鱼精膏20份、豆粕60份、花生粕10份、玉米浆干粉10份、枯草芽孢杆菌7份、纳豆芽孢杆菌7份、酿酒酵母菌7份、海洋红酵母7份、嗜酸乳杆菌7份；发酵原料总质量含水量为:16.0％。

(8)固体发酵料培养：将枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母菌、海洋红酵母和嗜酸乳杆菌分别经过摇瓶种子培养，再经过发酵罐培养得到的液体种子。

按照枯草芽孢杆菌7份、纳豆芽孢杆菌7份、酿酒酵母菌7份、海洋红酵母7份、嗜酸乳杆菌7份比例混合；发酵原料按照鱼精膏20份、豆粕60份、花生粕10份、玉米浆干粉10份比例混合；发酵原料与液体种子重量比为：100：35；，经过通风发酵培养,得到水产用氨基酸活性肽。

(9)不同发酵原料配比对发酵温度的影响：

不同发酵原料配比试验设计和试验结果见表1、表2：

表1.不同发酵原料配比试验设计

表2.不同发酵原料对发酵温度的影响(℃)

序号	0h	12h	24h	36h	48h	64h	72h	90h	108h
										试验组1	20	35	45	55	55	55	40	35	30
试验组2	20	35	45	53	55	50	45	40	30
										试验组3	20	35	40	45	45	45	45	40	35
对照组1	20	35	45	55	55	55	45	40	35

起始温度20℃±1℃

通过表2可以看出，试验组1、试验组2发酵温度最好，温度上升快，持续时间长，50℃以上持续24小时。试验组3发酵不理想，可能鱼精膏太多的原因。对照组发酵也是起温快，持续时间长。

(10)不同发酵原料对发酵产品指标的影响：

不同发酵原料对发酵产品指标的测定结果见表3：

表3.不同发酵原料对发酵产品指标的影响：

通过表3可以看出，试验组1、试验组2测定指标好于试验组3和试验组4的测定指标，试验组2测定指标为：蛋白质53.0％、小肽26.0％、赖氨酸3.6％。蛋氨酸1.2％、苏氨酸1.5％、色氨酸0.6％。

在上述试验组2固体发酵料配方的情况下，试验结果表明：固体发酵在发酵床上进行通风有氧培养，起始温度为20℃～30℃，发酵过程控制温度为50℃～60℃，发酵时间应控制在100～120小时；且使发酵温度于40℃持续48小时以上后，通过翻倒、通风加氧，可使发酵料温度下降至30℃以下，物理反应和生化反应结束，发酵料有酒香和乳酸味产生，PH值为4.0～5.0，发酵达到终点；

对发酵床上发酵料进行通风，降低质量含水量到20～25％，然后传输到流化床上，在℃～60℃条件下烘干，烘干到质量含水量≤10％，粉碎、过筛。

粉碎处理条件：在无菌洁净条件下进行，粉碎后粒度100目、含水量10％，为合格产品。

(11)固体发酵阶段：

将按比例均匀混合后发酵料放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵。

发酵起始温度为20℃，控制温度为50℃，发酵时间为100小时；发酵结束后，温度降低到30℃，PH值为5.0，酸度值20℃，发酵料中有酵母酒香味和乳酸味产生，发酵达到终点。

(12)烘干粉碎阶段：

再经流化床进风温度60℃，出风温度30℃，流化时间10分钟，烘干、粉碎到含水量10％，100目过筛，得到水产用氨基酸活性肽。

实施例2

将实施例1获得的水产用氨基酸活性肽(试验组2)和氨基酸活性肽(对照组)在特种水产饲料中半量替代鱼粉和豆粕在石斑鱼中应用，并观察测定试验对饲料报酬率(FCR)、成活率和增重率效果的影响，试验设计和试验结果见表4和表5：

表4.水产用氨基酸活性肽半量替代鱼粉和豆粕在石斑鱼应用的试验设计

*基本原料量：原料中不包括蛋白量。基础蛋白量：包括鱼粉和豆粕；

表5.水产用氨基酸活性肽半量替代鱼粉和豆粕对石斑鱼增重量和成活率的影响(30天)

通过表4和表5可以看出，在正常的条件和同等的管理水平下，经过30天的喂养，试验组饲料报酬率(FCR)0.798，对照组饲料报酬率(FCR)1.062，试验组较对照组饲料报酬率(FCR)降低0.264；试验组成活率96.0％，对照组成活率93.0％，试验组较对照组成活率提高1.03％；试验组总增重2175.4g/30日，对照组总增重2168.3g/30日，试验组较对照组增重率提高109.28％。试验结果表明：水产用氨基酸活性肽特种水产饲料(发酵原料中含鱼精膏)与氨基酸活性肽(发酵原料中不含鱼精膏))肽特种水产饲料在石斑鱼中进行比较性应用试验，饲料报酬率(FCR)和提高增重率效果明显。

实施例3

将实施例1获得的水产用氨基酸活性肽在特种水产饲料中半量替代鱼粉和豆粕，在南美白对虾中进行应用试验，并观察测定试验对饲料报酬率(FCR)、成活率和增重率效果的影响，试验设计和试验结果见表6、表7和表8、表9、表10：

表6.水产用氨基酸活性肽半量替代鱼粉和豆粕对南美白对虾应用试验设计

*基本原料量：原料中不包括蛋白量。基础蛋白量：包括鱼粉和豆粕；

表7.含氨基酸活性肽特种水产饲料对南美白对虾的成活率和增重量的影响(30天)

*水温26℃；

*养殖池水体面积：长×宽×高＝5m×4m×1.5m＝30m3；池边为圆角。

*养殖地点：山东省潍坊市寒亭区大家洼孙剑雄

*试验时间：2015年8月19日到9月18日

在水温26℃时，经过30天的喂养，试验结果经过方差和T检验，其结果见表8、9、10：

表8.t-检验:饲料报酬率(FCR)成对双样本均值分析

*试验组与对照组t检验P值小于0.01差异极显著。

通过表8可以看出，t-检验:饲料报酬率(FCR)成对双样本均值分析，试验组与对照组t检验P值小于0.01差异极显著。

表9.t-检验:成活率成对双样本均值分析

*试验组与对照组t检验P值大于0.05差异不显著。

通过表9可以看出.t-检验:成活率成对双样本均值分析，试验组与对照组t检验P值大于0.05差异不显著。

表10.t-检验增重率成对双样本均值分析

*试验组与对照组t检验P值小于0.05差异显著。

通过表10可以看出，t-检验增重率成对双样本均值分析,试验组与对照组t检验P值小于0.05差异显著。

通过表6、表7和表8、表9、表10可以看出，在正常的条件和同等的管理水平下，经过30天的喂养，试验组饲料报酬率(FCR)0.88，对照组饲料报酬率(FCR)1.03，试验组较对照组饲料报酬率(FCR)降低0.15；试验组成活率96.67％，对照组成活率94.67％，试验组较对照组成活率提高1.02％；试验组总增重115.15g/30日，对照组总增重104.89g/30日，试验组较对照组增重率提高9.78％。试验结果表明：氨基酸活性肽特种水产饲料在南美白对虾中进行应用，饲料报酬率(FCR)和提高增重率效果明显。

实施例4

将实施例1获得的水产用氨基酸活性肽在特种水产饲料中半量替代鱼粉和豆粕在甲鱼中应用，并观察测定试验对饲料报酬率(FCR)、成活率和增重率效果的影响，试验设计和试验结果见表11、表12：

表11.水产用氨基酸活性肽半量替代鱼粉和豆粕对甲鱼应用试验设计

*基本原料量：原料中不包括蛋白量。基础蛋白量：包括鱼粉和豆粕

表12.水产用氨基酸活性肽半量替代鱼粉和豆粕对对甲鱼增重量的影响(30天)

通过表12可以看出，在正常的条件和同等的管理水平下，经过30天的喂养，试验组饲料报酬率(FCR)0.9707，对照组饲料报酬率(FCR)1.2019，试验组较对照组饲料报酬率(FCR)降低0.2312；试验组较对照组成活率提高1.02％；试验组总增重1217.2g/30日，对照组总增重1134.9g/30日，试验组较对照组增重率提高107.25％。试验结果表明：水产用氨基酸活性肽特种水产饲料(发酵原料中含鱼精膏)试验组与不含水产用氨基酸活性肽特种水产饲料特种水产饲料对照组在甲鱼中进行比较性应用试验，饲料报酬率(FCR)和提高增重率效果明显。

本发明具有生产工艺简单，易于操作、生产原料来源广泛,成本低易于推广、生产周期短发酵产物多，产品质量好，易于应用等特点。在水产养殖中应用，可以提高免疫力和成活率，可以加快生长发育和提高产量，可以净化水质和改善养殖环境，是一种绿色的功能性的饲料添加剂。

与实施例1－4不同之处在于，为提高产品质量，缩短生产周期，分离、纯化并鉴定的高活性微生物菌株,其应用效果更佳。

目前，经过我们生产应用，其应用效果非常好，已在山东的青岛、烟台、潍坊、菏泽，河北的秦皇岛、辽宁的葫芦岛等地区应用，取得了很好的经济效益，我们已将产品实现了商品化生产。

Claims (10)

1.一种水产用氨基酸活性肽的生产方法，其特征在于：以鱼精膏、豆粕、花生粕、玉米浆干粉为发酵原料，以枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母菌、海洋红酵母和嗜酸乳杆菌为微生物发酵菌群，各种原料的重量比为；鱼精膏20～30份、豆粕60～70份、花生粕10～15、玉米浆干粉10～15份；各种菌液的重量比为：枯草芽孢杆菌5～10份、纳豆芽孢杆菌5～10份、酿酒酵母菌5～10份、海洋红酵母5～10份、嗜酸乳杆菌5～10份；发酵原料与液体种子重量比为：100～120：20～40；均匀混合后，放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵，发酵起始温度为20℃～30℃，控制温度为50℃～60℃，发酵时间为100小时～120小时；发酵料开始降温，温度降低到20℃～30℃，发酵达到终点；经流化床进风温度80℃～60℃，出风温度40℃～30℃，流化时间8分钟～12分钟，烘干到含水量10％～12％，粉碎60目～100目过筛，得到水产用氨基酸活性肽；

上述发酵原料中:鱼精膏含水量为30％～40％、豆粕含水量为10％～13％、花生粕含水量为10％～13％、玉米浆干粉含水量为10％～13％。

2.按照权利要求1所述的生产方法，其特征在于：上述发酵所得产品中，粗蛋白50％～60％，其中含短链肽20％～30％以上(短链肽分子量为2000个道尔顿以下)、赖氨酸3.0％～4.0％、蛋氨酸1.0％～2.0％、苏氨酸1.0％～2.0％、色氨酸0.5％～0.9％；

上述发酵结束所得产品的pH值为4.0～5.0，总酸为200～300°T，发酵料中有酵母酒香味和乳酸味。

3.按照权利要求1或2所述的生产方法，其特征在于：所述的发酵结束所得产品的pH值为5.0，总酸为200°T，发酵料中有酵母酒香味和乳酸味；

所述发酵原料中:鱼精膏含水量为40％、豆粕含水量为10％、花生粕含水量为10％、玉米浆干粉含水量为10％；

上述发酵所得产品中，粗蛋白50％，其中含短链肽20％以上(短链肽分子量为2000个道尔顿以下)、赖氨酸3.0％、蛋氨酸1.0％、苏氨酸1.0％、色氨酸0.5％。

4.按照权利要求1所述的生产方法，其特征在于：所述的液体种子是分别经过摇瓶种子培养，再经过发酵罐培养得到的液体种子。

5.按照权利要求1所述的生产方法，其特征在于：所述发酵原料中各种原料的重量比为；鱼精膏20份、豆粕60份、花生粕10份、玉米浆干粉10份；液体种子中各种菌液的重量比为：枯草芽孢杆菌7份、纳豆芽孢杆菌7份、酿酒酵母菌7份、海洋红酵母7份、嗜酸乳杆菌7份。

6.按照权利要求1所述的生产方法，其特征在于：所述发酵原料与液体种子重量比为：100:35；即发酵原料100份，枯草芽孢杆菌7份、纳豆芽孢杆菌7份、酿酒酵母菌7份、海洋红酵母7份、嗜酸乳杆菌7份。

7.按照权利要求1、4、5或6所述的方法，其特征在于：所述枯草芽孢菌种子液、纳豆芽孢杆菌液体种子中每毫升含活菌数为≥100个亿；酿酒酵母菌液体种子和海洋红酵母液体种子中每毫升含活菌数为≥30个亿，嗜酸乳杆菌液体种子中每毫升含活菌数为≥50个亿。

8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：发酵原料放置到发酵床上，经通入无菌空气进行有氧固体发酵，发酵起始温度为20℃，控制温度为50℃，发酵时间为100小时；发酵结束后，温度降低到30℃，pH值为5.0，总酸200°T发酵料中有酵母酒香味和乳酸味产生，发酵达到终点；再经流化床进风温度80℃，出风温度30℃，流化时间10分钟，烘干、粉碎到含水量10％，100目过筛，得到水产用氨基酸活性肽。

9.照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述枯草芽孢菌种子罐和纳豆芽孢杆菌种子罐的培养基和培养条件为：枯草芽孢菌种子罐和纳豆芽孢杆菌种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖0.5～1.5％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:80～100:120vvm、转速100～200rpm、温度28℃～32℃；时间48～64h；

所述酿酒酵母菌种子罐和海洋红酵母种子罐的培养基和培养条件为：酿酒酵母菌和海洋红酵母种子罐的培养基以重量百分比计为：葡萄糖2.0～4.0％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:100～100:150vvm、转速180～220rpm、温度28℃～36℃；时间48～64h；

所述嗜酸乳杆菌种子罐的培养基和培养条件为：嗜酸乳杆菌的种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.0～2.0％、玉米浆干粉2.0～4.0％、硫酸铵0～0.2％、磷酸氢二钾0～0.2％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08～0.10MPa、115～121℃、18～20min；培养条件：接种量10～20％；罐压0.01～0.10MPa、风量100:0～100:100vvm、转速0～100rpm、温度28℃～36℃；时间48～72h(乳酸菌24小时后为静置培养，其它时间为通气培养)。

10.照权利要求9所述的方法，其特征在于：所述枯草芽孢菌种子罐和纳豆芽孢杆菌种子罐的培养基和培养条件为：枯草芽孢菌种子罐和纳豆芽孢杆菌种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％、余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.10MPa、121℃、20min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:100vvm、转速150rpm、温度30℃、时间48h；

所述酿酒酵母菌种子罐和海洋红酵母种子罐的培养基和培养条件为：酿酒酵母菌和海洋红酵母种子罐的培养基以重量百分比计为：葡萄糖3.0％、玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08MPa、115℃、18min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:150vvm、转速200rpm、温度28℃、时间48h；

所述嗜酸乳杆菌种子罐的培养基和培养条件为：嗜酸乳杆菌种子罐培养基以重量百分比计为：葡萄糖1.5％,玉米浆干粉3.0％、硫酸铵0.1％、磷酸氢二钾0.1％，余量为水；种子罐灭菌条件：灭菌0.08MPa、115℃、18min；培养条件：接种量20％；罐压0.05Mpa、风量100:50vvm、转速50rpm、温度36℃、时间为64h(乳酸菌24小时后为静置培养)。