CN105838636B - 一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法 - Google Patents

一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，属于生物工程技术领域。本发明是将经过4℃低温预处理的种子液，接入含有12%NaCl的发酵培养基中培养96小时，生物量比未经低温预处理的细胞有所提高。本发明方法简单、便于操作，可用于乳酸菌的发酵生产。

Description

一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法
技术领域
本发明涉及一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，属于生物工程技术领域。
背景技术
嗜盐四联球菌（Tetragenococcus halophilus）属于乳酸菌科中的四联球菌属，广泛存在于酱油、豆瓣和鱼酱等盐渍食品中。嗜盐四联球菌使这些传统发酵食品的色泽更加光亮，掩盖食品咸味，促进香味成分的生成，对发酵调味品的风味起着重要作用。但是，在传统发酵产品中，高盐环境严重抑制了菌体的生长性能和代谢活力，影响了细胞的生理活性，使产品的品质受到严重影响。因此，提高嗜盐四联球菌在高盐条件下的存活率具有重要意义。
嗜盐四联球菌在食品工业中的应用，所遭遇到的胁迫环境是多重和复杂的。适应性反应是乳酸菌常见的一种应激保护方式，当细胞处于胁迫环境中时，由一种适应性反应所诱导的保护作用，可以保护细胞抵御更为恶劣的环境胁迫，这些反应可以用于提高乳酸菌在胁迫条件下的存活。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用低温预处理提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法。
所述的低温预处理条件为4℃，5-15 h。
菌株：嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)CGMCC 3792，实验室从酱油醪中分离，经形态、生理生化特性试验和16S rDNA测序鉴定，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological CultureCollectionCenter,CGMCC),保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所；保藏日期为2010年4月29日，保藏编号为CGMCC NO.3792，并分类命名为嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)。
种子培养方法：种子培养基为5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白胨，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗坏血酸，0.25 g/L MgSO4.7H2O，19 g/Lβ-甘油磷酸钠，pH为7.0。取-80℃保藏的乳酸菌甘油管储存液以5% （V/V）的接种量接种于种子培养基中，30℃静置培养24 h。
低温预处理方法：将培养好的种子液以10000 r/min（4℃）离心5 min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中进行4℃低温预处理5-15 h。
高盐发酵培养方法：高盐发酵培养基为5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白胨，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗坏血酸，0.25 g/L MgSO4.7H2O，19 g/L β-甘油磷酸钠，NaCl浓度调至为12%，pH为7.0。取经过低温预处理的种子液以5%（V/V）的接种量接种于高盐发酵培养基中，30℃静置培养96 h。
生物量的测定：取发酵结束后的菌悬液离心收集菌体，用无菌水洗涤3次后稀释适当的倍数，摇匀，用TU-1901双束光紫外可见分光光度计，于600 nm处比浊测定OD值的大小。
本发明的有益效果：本发明提供的在发酵培养基中接入经过4℃低温预处理的种子液，嗜盐四联球菌CGMCC NO.3792在高盐（12%NaCl）胁迫条件下，比对照组（未经过4℃低温预处理）具有更好的生长性能。本发明提供一种基于低温预处理提升嗜盐四联球菌盐胁迫抗性的方法，简单易行，可探索乳酸菌应对外界不同胁迫环境时启动自适应机制的协同作用方式。
具体实施方式
实例1：种子液未经过4℃低温预处理（对照组），T.halophilusCGMCC NO.3792的生长情况（表1）
取-80℃保藏的甘油储存液以5%的接种量接种于种子培养基中，30℃静置培养24h至对数中后期（以下简称种子液）。将种子液10000 r/min（4℃）离心5 min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中，以5%的接种量接种至高盐发酵培养基中培养96 h，测定OD600值为2.03。
实例2：种子液经过4℃低温预处理5-15 h（实验组），T.halophilusCGMCC NO.3792的生长情况（表1）
将种子液10000 r/min（4℃）离心5 min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中分别进行4℃低温预处理5 h，10 h和15 h后，以5%的接种量接种至高盐发酵培养基中培养96 h，测定OD600值分别为2.26，2.20和2.86，与对照组相比生物量分别提高了11.3%，8.4%和40.9%。
表1 高盐发酵培养基中菌体生物量

Claims (5)

1.一种提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，包含以下步骤：
（1）低温预处理一种乳酸菌种子液；其中，低温预处理的处理温度为4℃；
（2）将所述乳酸菌种子液接入一种高盐发酵培养基中培养；
所述乳酸菌为保藏编号为CGMCC NO.3792的嗜盐四联球菌（Tetragenococcushalophilus）。
2.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述低温预处理时间为5小时至15小时。
3.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述乳酸菌的接种量按体积百分比计为5%。
4.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述乳酸菌种子液的制备及低温预处理，包含以下步骤：
（1）种子培养基为：5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白胨，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗坏血酸，0.25 g/LMgSO4.7H2O，19 g/L β-甘油磷酸钠，pH为7.0；
（2）取-80℃保藏的乳酸菌甘油管储存液，以体积百分比为5%的接种量接种所述乳酸菌甘油管储存液于种子培养基中，30℃静置培养24 h；
（3）将种子液以10000 r/min、4℃离心5 min收集菌体，将菌体重悬于新鲜的种子培养基中，于4℃条件下预处理。
5.根据权利要求1所述提高乳酸菌在高盐条件下生物量的方法，其特征在于：所述高盐发酵培养基制备及培养条件，包含以下步骤：
（1）高盐发酵培养基为：5 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆蛋白胨，5 g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母膏，0.5 g/L抗坏血酸，0.25 g/LMgSO4·7H2O，19 g/L β-甘油磷酸钠，NaCl浓度调至12%，pH为7.0；
（2）培养条件为：以体积百分比为5%的接种量接种所述种子液于高盐发酵培养基中，30℃静置培养96 h。
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