CN105832840A - 马甲子或其提取物在制备治疗烧烫伤的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药领域,涉及马甲子或其提取物的新用途,具体是马甲子或其提取物在制备治疗烧烫伤的药物中的用途。外用马甲子及其提取物可有效促进烧烫伤伤口愈合,起效时间和治疗效果均优于临床常用对照药物,说明外用马甲子及其提取物治疗烧烫伤在疗效上优于现有常用药物。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,涉及马甲子或其提取物的新用途,具体是马甲子或其提取物在制备治疗烧烫伤的药物中的用途。
背景技术
马甲子(Paliurus ramosissimus(Lour.)Poir)为落叶灌木,是一种常见药用植物,据报道枝叶根花果均药用。性味苦、平,无毒。能除寒活血,发表解热,消肿,治跌打损伤及心腹疼痛。但尚未见马甲子及其提取物可用于治疗烧烫伤的报道。
烧烫伤临床常见,一般指热力,包括热液(水、汤、油等)、蒸气、高温气体、火焰、炽热金属液体或固体(如钢水、钢锭)等所引起的组织损害,主要指皮肤和/或黏膜,严重者也可伤及皮下或/和黏膜下组织,如肌肉、骨、关节甚至内脏。烫伤是由热液、蒸气等所引起的组织损伤,是热力烧伤的一种。烧烫伤常分为三度:一度烧烫伤只伤及表皮层,受伤的皮肤发红、肿胀,觉得火辣辣地痛,但无水泡出现;二度烧烫伤伤及真皮层,局部红肿、发热,疼痛难忍,有明显水泡;三度烧烫伤全层皮肤包括皮肤下面的脂肪、骨和肌肉都受到伤害,皮肤焦黑、坏死,因神经损伤而疼痛不明显。较大面积的烧烫伤不及时治疗,可引起电解质紊乱、细菌感染、持续溃疡等问题。西医主要采用清创、复合伤处理、镇静止痛、抗菌、修复等方法治疗,然而,这些治疗对于组织再生修复并无明显作用,虽在肉芽增生期由过去待其自愈发展到使用生长因子,因后者对组织修复的机理尚未完全明了,各个生长因子间的关系不很清楚,起使用也受到极大限制。
本发明的发明人在研究过程中发现马甲子及其提取物具有良好的治疗烧烫伤作用。
发明内容
本发明提供的马甲子及其提取物的新用途为马甲子或其提取物在制备治疗烧烫伤的药物中的应用;具体的,所述药物为外用药物。
应用时,马甲子采用马甲子全株植物或其中任一部位的鲜品或干品;其中,药用部位可为根、茎、叶、花、果任一部位或其混合。最优选的部位为叶。
鉴于药材的采集期和保存便利性,为了便于临床用药,可以马甲子全株植物或其中任一部位的鲜品或干品为原料药,粉碎后直接制备成适宜的制剂应用,也可以制成提取物后制备成适宜的制剂应用。具体的,所述马甲子为鲜品或干品的粉碎品或提取物,粉碎品以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药,采用粉碎机或其他器械粉碎制得;提取物以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药,采用常规提取方法制备而得。
应用时,马甲子提取物是以马甲子全株植物或其中任一部位为原料药,采用常规提取方法制备而得。本发明所得马甲子提取物主要成分包括黄酮类、萜类、生物碱类、香豆素类;进一步还包括上述黄酮、萜、生物碱、香豆素的苷及其单体成分;还包括多糖类和纤维素。
本发明马甲子的粉碎品的制备方法如下:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、粉碎,过筛,即得。
所述粉碎包括粉碎机或其他器械粉碎。
采用上述方法制备的粉碎品,称为马甲子粉碎品。
本发明马甲子提取物的制备方法如下:
制备方法一:
所述马甲子的提取物的制备方法一:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、粉碎,过筛;
C、以水或有机溶剂提取、干燥、即得。
上述技术方案中,步骤C所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯或石油醚;优选乙醇。
上述技术方案中,步骤C所述提取采用浸渍、回流、渗漉或其他常规方法提取;
上述技术方案中,步骤C所述干燥为减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其他常规干燥方法。
制备方法二:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、粉碎,过筛;
C、以溶剂a提取,滤液浓缩,得浓缩液;
D、以溶剂b萃取步骤C所得浓缩液,得萃取液,干燥,即得;
或,干燥步骤C所得浓缩液得提取物1,以溶剂b固-液萃取,干燥,即得。
上述技术方案中,步骤C所述提取方法采用浸渍、回流、渗漉或其他常规方法提取;
上述技术方案中,步骤C所述溶剂a选自选自水和常规有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯或石油醚);优选乙醇。
上述技术方案中,步骤D所述溶剂b选自乙酸乙酯、石油醚或正丁醇;优选乙酸乙酯。
上述技术方案中,步骤D以溶剂b萃取步骤C所得浓缩液,得萃取液的方式属于液-液萃取;以干燥步骤C所得浓缩液得提取物1,采用溶剂b萃取的方式属于固-液萃取。
上述技术方案中,步骤D所述干燥为减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其他常规干燥方法。
制备方法三:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、以水或有机溶剂提取、干燥、即得。
上述技术方案中,步骤B所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯或石油醚;优选乙醇。
上述技术方案中,步骤B所述提取采用浸渍、回流、渗漉或其他常规方法提取;
上述技术方案中,步骤B所述干燥为减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其他常规干燥方法。
制备方法四:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、以溶剂a提取,滤液浓缩,得浓缩液;
C、以溶剂b萃取步骤B所得滤液,得液相,干燥,即得;
或,浓缩并干燥步骤B所得滤液得提取物1,以溶剂b提取,干燥提取液,即得。
上述技术方案中,步骤B所述提取方法采用浸渍、回流、渗漉或其他常规方法提取;
上述技术方案中,步骤B所述溶剂a选自选自水和常规有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯或石油醚);优选乙醇。
上述技术方案中,步骤C所述溶剂b选自乙酸乙酯、石油醚或正丁醇;优选乙酸乙酯。
上述技术方案中,步骤C以溶剂b萃取步骤B所得浓缩液,得萃取液的方式属于液-液萃取;以干燥步骤B所得浓缩液得提取物1,采用溶剂b萃取的方式属于固-液萃取。
上述技术方案中,步骤C所述干燥为减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其他常规干燥方法。
采用上述方法制备的提取物,如以方法一和三制备所得,以方法一的步骤C或方法三的步骤B所用溶剂命名为对应的提取物,如马甲子乙醇提取物,马甲子甲醇提取物、马甲子异丙醇提取物、马甲子乙酸乙酯提取物、马甲子石油醚提取物。如按方法二和四制备所得,则以方法二的步骤D或方法四的步骤C所用溶剂b命名为对应的提取物,如马甲子石油醚提取物,马甲子乙酸乙酯提取物;而方法二步骤D和方法四步骤C所得提取物1则以方法二步骤C和方法四步骤B所用溶剂a命名对应的提取物,如马甲子乙醇提取物,马甲子甲醇提取物、马甲子异丙醇提取物。
上述技术方案中,提取物的制备方法一的步骤C和制备方法三的步骤B所使用的溶剂与马甲子的用量关系为,溶剂添加量为马甲子质量的1-40倍;优选的,溶剂添加量为马甲子质量的2-20倍;更进一步的,溶剂添加量为马甲子质量的4-12倍。
上述技术方案中,提取物的制备方法二的步骤C和制备方法四的步骤B所使用的溶剂a与马甲子的用量关系为,溶剂a添加量为马甲子质量的1-40倍;优选的,溶剂a添加量为马甲子质量的2-20倍;更进一步的,溶剂a添加量为马甲子质量的4-12倍。
优选的,溶剂a采用乙醇时,乙醇添加量为马甲子质量的1-40倍;优选的,乙醇添加量为马甲子质量的2-20倍;更进一步的,优选甲醇或乙醇添加量为马甲子质量的4-12倍。
其中,所述乙醇的浓度为10-95%。优选的,采用乙醇浓度为40-95%。最优选的,采用乙醇浓度为60-95%。
本发明所述的药物为外用制剂。以马甲子或其提取物作为活性成分,加入药剂学中可接受的辅料,按常规方法制备而得的外用制剂;包括软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、涂膜剂、搽剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、糊剂或巴布剂。
其中,以马甲子为活性成分时,是鲜品或干品植物直接粉碎,加入药剂学中可接受的辅料,按常规方法制备而得的外用制剂。
其中,以马甲子提取物为活性成分时,是采用前述提取方法制备得到提取物,加入药剂学上可接受的辅料,按常规方法制备而得的外用制剂。
综上,外用马甲子及其提取物可有效促进烧烫伤伤口愈合,起效时间和治疗效果均优于临床常用对照药物,说明外用马甲子及其提取物治疗烧烫伤在疗效上优于现有常用药物。
具体实施方式
以下通过对本发明具体实施方式的描述说明但不限制本发明。
本发明的技术方案如下:
用于治疗烧烫伤的马甲子药材原粉或马甲子提取物,取马甲子叶、马甲子茎叶、马甲子全株植物鲜品或干品粉碎,或取马甲子叶、马甲子茎叶、马甲子全株植物,加入马甲子质量1-40倍的水或常规有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯或石油醚)提取;或者进一步将提取物进一步用乙酸乙酯或石油醚提取;提取液浓缩后干燥,制得马甲子提取物;马甲子提取物或马甲子药材原粉,成分包括萜类、黄酮类、生物碱类、香豆素类、多糖类和纤维素类以及萜、黄酮、生物碱、香豆素的苷类和单体。
所述的马甲子提取物或马甲子药材原粉,为马甲子用水或常规有机溶媒提取,或将马甲子鲜品或干品直接粉碎入药;有机溶媒包括甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、石油醚或其他常规溶剂;所述提取方法包括浸渍、回流、渗漉或其他常规提取方法;所述干燥方法包括减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥或其他常规干燥方法。
所述的马甲子提取物或马甲子药材原粉的制剂,包括软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、涂膜剂、搽剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、糊剂或巴布剂。
所述的马甲子提取物或马甲子药材原粉的应用,为用于制备治疗烧烫伤的外用药。
一、马甲子提取物或马甲子药材原粉的制备方法
1.全株水提取物的制备
取马甲子全株5kg粉碎,加入8倍量的水煎煮提取3次,收集提取液,减压浓缩并干燥即得马甲子水提取物。
2.全株乙醇提取物的制备
取马甲子全株5kg粉碎,加入8倍量的95%乙醇浸渍提取数次,收集提取液,减压回收乙醇至无醇味,干燥即得马甲子乙醇提取物。
3.茎叶乙醇、石油醚和乙酸乙酯提取物的制备
取马甲子茎叶5kg粉碎,加入10倍量的95%乙醇回流提取数次,收集提取液,60℃减压回收乙醇至无醇味,干燥即得马甲子乙醇提取物。将马甲子乙醇提取物加水分散后,依次用石油醚、乙酸乙酯萃取,得到马甲子石油醚提取物和乙酸乙酯提取物。
4.全株石油醚和乙酸乙酯提取物的制备
取马甲子全株5kg粉碎,加入10倍量的甲醇浸渍提取数次,收集提取液,40℃下减压回收甲醇,干燥即得马甲子甲醇提取物,将马甲子甲醇提取物加水分散后,依次用石油醚、乙酸乙酯萃取,得到马甲子石油醚提取物和乙酸乙酯提取物。
5.取马甲子全株5kg,干燥,粉碎,过80目药筛。
6.取马甲子全株鲜品1kg,粉碎,过60目药筛。
二、马甲子提取物的成分研究
样品供试液的配制:取全株乙醇提取物样品1g,溶于25ml无水乙醇中,离心。取上清液2ml,无水乙醇稀释5倍,至终浓度为0.008g/ml。
(一)成分的定性研究
1、三萜类成分的检识
(1)L-B反应
将样品溶于乙酸酐中,加浓硫酸-乙酸酐(1:20)数滴,可产生黄→红→紫→蓝等颜色变化,最后褪色,表明含有三萜类化合物。
(2)Kahlenberg反应
将样品的氯仿或醇溶液点于滤纸上,喷20%五氯化锑的氯仿溶液(或三氯化锑饱和的氯仿溶液),干燥后60-70℃加热,显蓝色,表明含有三萜类化合物。
(3)R-H反应
将样品供试液滴在滤纸上,喷出25%三氯乙酸乙醇溶液,加热至100℃,显红色,逐渐变为紫色,表明含有三萜类化合物。
(4)Salkowki反应
将样品溶于氯仿,加入浓硫酸后,在硫酸层呈现红色或蓝色,氯仿层有绿色荧光出现,表明含有三萜类化合物。
(5)Tschugaeff反应
将样品溶于冰乙酸中,加乙酰氯数滴及氯化锌结晶数粒,稍加热,则呈现淡红色或紫红色,表明含有三萜类化合物。
2、黄酮类成分的检识
(1)盐酸-镁粉还原反应(还原反应显色)
取少量样品溶于1mL乙醇中,加入少许镁粉及浓盐酸,振荡片刻,观察反应颜色呈紫红色,表明含有黄酮类化合物。
(2)三氯化铝反应(金属离子的络合反应显色)
用玻璃棒蘸取样品供试液涂于滤纸上,吹干,喷1%的三氯化铝乙醇溶液,吹干,观察现象。置紫外灯下显鲜黄色,表明含有黄酮类化合物。
(3)三氯化铁反应(金属离子的络合反应显色)
用玻璃棒蘸取供试液涂于滤纸上,吹干,在紫外灯下观察荧光后,喷3%的三氯化铁乙醇溶液,吹干,出现暗蓝色荧光斑点,再经氨熏后转变为棕色荧光斑点,表明含有黄酮类化合物。
(4)碱性试剂显色
用玻璃棒蘸取供试液涂于滤纸上,干燥后,喷以氢氧化钠水溶液或暴露于氨蒸汽中,在日光灯下观察时,氨蒸汽能使样品色点转变为亮黄色,表明含有黄酮类化合物。
3、生物碱类成分的检识
(1)改良碘化铋钾(Dragendorff)法
①次硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸与40ml水中;②碘化钾8g溶于20ml水中。试液①与试液②等量混合置棕色瓶内保存作贮备液。用前将1ml贮备液、4ml冰醋酸与12ml水混合。将样品供试液加入上述试剂中,呈红棕色溶液,加蒸馏水一摇即有沉淀产生,表明含有生物碱类化合物。
(2)碘-碘化钾(Wagner)法
碘1g与碘化钾10g溶于50ml水,加2ml乙酸,加水至100ml。取上述试剂适量,加入1ml样品供试液即显棕褐色,表明含有生物碱类化合物。
(3)硅钨酸(Bertrand)法
5g硅钨酸溶于100ml水中,加浓盐酸少量调至pH=2左右。取上述试剂适量,加入1ml样品供试液即显棕褐色,表明含有生物碱类化合物。
4、香豆素类成分的检识
(1)异羟肟酸铁反应
①a.盐酸羟胺20g溶于50ml水,用乙醇稀释至200ml,冷处保存;b.氢氧化钾50g溶于少许水中,加500ml乙醇。②氯化铁(FeCl3·6H2O)10g溶于20ml 36%盐酸溶液中,加乙醚200ml摇匀,置密闭容器内保存。使用时将试液①a.与①b.按1:2混合,滤去沉淀,滤液放冰箱保存。用玻璃棒蘸取样品供试液涂于滤纸上,先喷ab混合试液,稍干,再喷试液②,即显红色,表明含有香豆素类化合物。
(2)重氮化试剂反应
①对硝基苯胺0.35g,溶于浓盐酸5ml中,加水至50ml;②亚硝酸钠5g,加水50ml。取①、②液等量在冰水浴中混合后使用。取少量样品供试液滴加重氮化试剂,即显橙红色,表明含有香豆素类化合物。
(二)成分定量分析
1、取马甲子茎叶乙酸乙酯提取物0.1g,三份,加入10ml容量瓶内,加乙酸乙酯至刻度,再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内,挥干溶剂后,加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml,混匀,并由乙酸乙酯稀释至刻度,置70℃恒温水浴中加热15min,冷却至室温,并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,在540nm波长处测定吸收度,计算供试品溶液中总三萜含量(含三萜以美洲茶酸计)。经计算1g马甲子提取物中三萜类成分含418mg。
2、取马甲子叶鲜品粉碎品0.1g,三份,加入10ml容量瓶内,加乙酸乙酯适量,超声提取30分钟,冷却后定容至刻度,再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内,挥干溶剂后,加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml,混匀,并由乙酸乙酯稀释至刻度,置70℃恒温水浴中加热15min,冷却至室温,并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,在540nm波长处测定吸收度,计算供试品溶液中总三萜含量(含三萜以美洲茶酸计)。经计算1g马甲子提取物中三萜类成分含46mg。
3、取马甲子茎叶干品粉碎品0.1g,三份,加入10ml容量瓶内,加乙酸乙酯适量,超声提取30分钟,冷却后定容至刻度,再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内,挥干溶剂后,加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml,混匀,并由乙酸乙酯稀释至刻度,置70℃恒温水浴中加热15min,冷却至室温,并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,在540nm波长处测定吸收度,计算供试品溶液中总三萜含量(含三萜以美洲茶酸计)。经计算1g马甲子提取物中三萜类成分含85mg。
4、取马甲子全株乙醇提取物0.1g,三份,加入10ml容量瓶内,加乙酸乙酯适量,超声提取30分钟,冷却后定容至刻度,再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内,挥干溶剂后,加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml,混匀,并由乙酸乙酯稀释至刻度,置70℃恒温水浴中加热15min,冷却至室温,并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,在540nm波长处测定吸收度,计算供试品溶液中总三萜含量(含三萜以美洲茶酸计)。经计算1g马甲子提取物中三萜类成分含132mg。
5、取马甲子全株水提取物0.1g,三份,加入10ml容量瓶内,加乙酸乙酯适量,超声提取30分钟,冷却后定容至刻度,再从中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶内,挥干溶剂后,加入5%香草醛-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml,混匀,并由乙酸乙酯稀释至刻度,置70℃恒温水浴中加热15min,冷却至室温,并转移至10ml容量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,在540nm波长处测定吸收度,计算供试品溶液中总三萜含量(含三萜以美洲茶酸计)。经计算1g马甲子提取物中三萜类成分含22mg。
三、马甲子制剂的制备
1.乳膏剂的制备
取马甲子茎叶乙酸乙酯提取物,加入适宜辅料,如:十八醇、单硬脂酸甘油脂、甘油、硬脂酸等制成乳膏剂。
称取115g十八醇、115g白凡士林、70g单硬脂酸甘油酯,加热融化,得到油相,加入40g马甲子乙酸乙酯提取物;另取100g甘油、15g十二烷基硫酸钠、0.01g盐酸半胱氨酸,加入650ml水溶解,得到水相;分别加热至75℃~80℃,搅拌下将水相缓缓加入油相,然后继续搅拌15分钟,得到马甲子乙酸乙酯提取物乳膏剂。
2.马甲子乙醇提取物凝胶剂的制备
取10g卡波姆撒入420ml纯化水中,搅拌使溶胀,加入100ml丙二醇搅拌溶解,搅拌下滴加18g三乙醇胺,制成凝胶基质;另取100g马甲子乙醇提取物与2g羟苯乙酯溶解于350ml乙醇中,搅拌下加入凝胶基质中,搅匀即得。
3.马甲子乙醇提取物涂膜剂的制备
取40g聚乙烯醇124溶胀于400ml纯化水中;另取100g马甲子乙醇提取物溶于400ml乙醇中,再加入100ml甘油,搅拌均匀后缓缓加入聚乙烯醇溶液中,搅匀后过滤,再自滤器上加乙醇至1000ml,即得。
4.马甲子石油醚提取物搽剂的制备
取100g马甲子石油醚提取物细粉置于研钵中,加入500ml花生油研匀,再缓缓加入饱和氢氧化钙水溶液至1000ml,研磨至均匀白色乳状物即得。
5.马甲子水提取物洗剂的制备
取100g马甲子水提取物细粉置于研钵中,加入50ml甘油和适量纯化水,研磨成糊状,逐渐加入纯化水至全量混匀即得。
6.马甲子乙醇提取物软膏剂的制备
取马甲子乙醇提取物,粉碎成极细粉,加至经灭菌、滤过后放冷的液体石蜡20g中,搅匀,再加至已干热灭菌、滤过并冷至约50℃的凡士林900g和羊毛脂50g中,搅匀,使凝固,制成1000g,即得。
7.马甲子糊剂的制备
取羊毛脂250g、白凡士林250g置水浴加温融化并放置保持温度在60℃左右备用;将300g马甲子粉碎品加入上述基质中,不断搅拌使其混匀,再加入已过筛的淀粉125g及氧化锌细粉125g搅拌形成糊状放冷,即得。
8.巴布剂的制备
以聚丙烯酸钠200g、明胶150g、聚乙烯醇250g为粘着剂,溶于蒸馏水100ml中,加热搅拌至完全溶解静置待用。将马甲子乙醇提取物30g、甘油350g、氧化锌20g混合后一起加入到粘着剂中,加热搅拌10min后静置脱气,待气泡赶净后均匀涂布于200mm×25mm的无纺布基材上,静置至凝胶化,即得。
四、马甲子提取物对实验性烧烫伤的影响
1.试验方法
SD大鼠120只,SPF,雄性,180-220g,四川省中医药科学院实验动物中心提供。背部脱毛后以乌拉坦麻醉,取110只将直径3cm的圆筒置于背部,筒内喷入蒸气1min造成烫伤。次日根据烫伤情况将动物分层随机均分为11组,分别为模型对照组、马甲子乙酸乙酯提取物大剂量组、马甲子乙酸乙酯提取物小剂量组、马甲子乙醇提取物大剂量组、马甲子乙醇提取物小剂量组、马甲子水提物组、马甲子石油醚提取物组、马甲子鲜品粉碎品组、马甲子干品粉碎品组、金黄散对照组、莫匹罗星对照组。其余10只动物为空白对照组。上述提取物均以鲜品提取,剂量按鲜品量计算,浓度相当于1g鲜品/ml,下同。
动物全部单笼饲养,次日开始给予受试物1ml/只(鲜品及干品粉碎组按1g鲜品/只涂抹)或对照药物(金黄散按1g生药/只涂抹;莫匹罗星软膏,20mg原药/g膏,按1g膏/只涂抹),每日1次,其中一半连续9日,另一半连续19日。分别于第10日及20日测量烫伤溃疡面直径,随后处死动物,取烫伤溃疡面固定、切片,部分进行HE染色,观察组织病理改变。
2.试验结果
第9日处死动物的HE染色病理组织观察显示:模型对照组可见大量炎性细胞浸润、出血及组织坏死;马甲子乙酸乙酯及乙醇提取物大剂量组、水提物组和鲜品粉碎品组有炎性细胞浸润和出血,但未见组织坏死,二组间无明显差异;小剂量组、石油醚提取物组、金黄散组及莫匹罗星组相似,可见炎性细胞浸润及出血,部分病例有组织坏死。
第20日处死动物的HE染色病理组织观察显示:模型对照组仍可见大量炎性细胞浸润及出血;马甲子乙酸乙酯及乙醇提取物大剂量组、水提物组和鲜品粉碎品组仍有少量炎性细胞浸润,但已可见毛细血管增生,二组间无明显差异;小剂量组、金黄散组及莫匹罗星组相似,可见炎性细胞浸润。
表面伤口情况评分如表1所示,评分以10分制,分数越高,伤口损伤程度越高。
表1马甲子及提取物对烧烫伤伤口愈合的影响(n=10)
注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;与金黄散比较,a P<0.05,aa P<0.01
3.试验结论
采用蒸汽烫伤可复制烧烫伤大鼠模型,模型动物创面愈合缓慢,镜下可见大量炎性细胞浸润及出血、组织坏死。马甲子鲜品、干品及各种提取物均可有效抑制炎性反应,减少组织坏死,促进组织新生,并表现为创面较快愈合。在同等生药剂量下,其促进溃疡面愈合的效果优于中医首选的治疗药物金黄散。该结果提示,在等同生药剂量下,马甲子对烧烫伤的治疗效果优于金黄散,具有良好的临床前景。
五、抗炎作用
1.试验方法
KM小鼠100只,按体重分层随机均分为10组,分别为模型对照组、阳性对照组(醋酸可的松软膏)、乙酸乙酯提取物小剂量组、乙酸乙酯提取物大剂量组、乙醇提取物小剂量组、乙醇提取物大剂量组、马甲子石油醚提取物组、马甲子水提物组、马甲子鲜品粉碎品组、马甲子干品粉碎品组。实验当天,动物称重,于小鼠右耳两面仔细涂抹受试物(提取物按0.05ml/只涂抹,鲜品或干品按0.1g鲜品/只涂抹)或对照物(醋酸可的松软膏,10mg原药/g膏,0.1g膏/只),或溶剂。药后40min,擦除药物,于小鼠右耳两面仔细涂抹二甲苯(30ul),造型20min以后处死小鼠,沿小鼠耳廓基沿剪取左右两耳,称重,计算肿胀度(两耳差值)。
2.试验结果
结果如表2。马甲子提取物各组对二甲苯刺激所致耳肿胀均有明显抑制作用,且大剂量组优于小剂量组,乙酸乙酯提取物大剂量组效果与醋酸可的松相近。
表2马甲子及提取物对小鼠二甲苯所致耳肿胀的影响(n=10,)
与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
3.试验结论
结果如表2所示:马甲子干、鲜品及各种提取物对直接化学刺激所致炎症有明确的抗炎作用。
六、抗菌作用
采用四种标准菌株进行试验:金色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌。实验细菌的浓度为105~106CFU/ml。以乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和水提取物为受试物,以甲硝唑为阳性对照,用TSB(Tryptic Soy Broth)稀释受试物,使成二倍递减的系列提取物浓度。在96孔微量U形板上,每孔加稀释后的受试物和实验菌液各50μl,在微型震荡器上震荡混匀后培养48h测定MIC值,结果见表3。
表3马甲子提取物对常见细菌的抑制作用
实验结果:本发明组合物具有较好的抑菌效果,表明其有助于对抗烧烫伤后的细菌感染。
Claims (7)
1.马甲子或其提取物在制备治疗烧烫伤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述马甲子采用马甲子全株植物或其中任一部位的鲜品或干品;
优选的,所述部位为根、茎、叶、花、果任一部位或其混合;
最优选的,所述部位为叶。
3.根据权利要求1或2所述的用途,其特征在于:
所述马甲子为鲜品或干品的粉碎品或提取物,粉碎品以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药,采用粉碎机或其他器械粉碎制得;提取物以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药,采用常规提取方法制备而得。
4.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:
所述马甲子的粉碎品的制备方法如下:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、以粉碎机或其他器械粉碎,过筛,即得;
所述马甲子的提取物的制备方法包括以下至少四种方法:
所述马甲子的提取物的制备方法一:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、粉碎,过筛;
C、以水或有机溶剂提取、干燥、即得;
所述马甲子的提取物的制备方法二:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、粉碎,过筛;
C、以溶剂a提取,滤液浓缩,得浓缩液;
D、以溶剂b萃取步骤C所得浓缩液,得萃取液,干燥,即得;
或,干燥步骤C所得浓缩液得提取物1,以溶剂b固-液萃取,干燥,即得;
所述马甲子的提取物的制备方法三:
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、以水或有机溶剂提取、干燥、即得;
所述马甲子的提取物的制备方法四
A、以马甲子全株植物或其中任一部位鲜品或干品为原料药;
B、以溶剂a提取,滤液浓缩,得浓缩液;
C、以溶剂b萃取步骤B所得浓缩液,得萃取液,干燥,即得;
或,干燥步骤B所得浓缩液得提取物1,以溶剂b固-液萃取,干燥,即得。
5.根据权利要求4所述的马甲子提取物的制备方法,其特征在于:满足以下任意一项:
所述马甲子的粉碎品的制备方法和马甲子的提取物的制备方法一和制备方法二中,步骤B所述粉碎包括粉碎机或其他器械粉碎;
所述马甲子的提取物的制备方法一和制备方法二中的步骤C,以及所述马甲子的提取物的制备方法三和制备方法四中的步骤B,所述提取方法采用浸渍、回流、渗漉或其他常规方法提取;
所述马甲子的提取物的制备方法一的步骤C、马甲子的提取物的制备方法二的步骤D、马甲子的提取物的制备方法三的步骤B、马甲子的提取物的制备方法四的步骤C所述干燥方法采用减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥或微波等常规干燥方法;
所述马甲子的提取物的制备方法一的步骤C,以及马甲子的提取物的制备方法三的步骤B所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇;优选乙醇;所述马甲子的提取物的制备方法二的步骤C,以及马甲子的提取物的制备方法四的步骤B所述溶剂a包括水和有机溶剂;所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇;所述的有机溶剂优选乙醇;
所述马甲子的提取物的制备方法二的步骤D以及马甲子的提取物的制备方法四的步骤C所述溶剂b包括乙酸乙酯、石油醚或正丁醇,优选乙酸乙酯;
所述马甲子的提取物的制备方法一的步骤C,以及马甲子的提取物的制备方法三的步骤B所使用的溶剂与马甲子的用量关系为,溶剂添加量为马甲子质量的1-40倍;
优选的,溶剂添加量为马甲子质量的2-20倍;
进一步优选的,溶剂添加量为马甲子质量的4-12倍;
优选的,溶剂采用乙醇时,乙醇添加量为马甲子质量的2-20倍;
所述马甲子的提取物的制备方法二的步骤C,以及马甲子的提取物的制备方法四的步骤B所使用的溶剂a与马甲子的用量关系为,溶剂a添加量为马甲子质量的1-40倍;
优选的,溶剂a添加量为马甲子质量的2-20倍;
进一步优选的,溶剂a添加量为马甲子质量的4-12倍;
溶剂a为乙醇时,所述乙醇的浓度为10-95%;
优选的,采用乙醇浓度为40-95%;
最优选的,采用乙醇浓度为60-95%。
6.根据权利要求1-5任一项所述的用途,其特征在于:以马甲子全株植物或其中任一部位的鲜品/干品的粉碎品或提取物为原料,加入药剂学可接受的辅料按常规方法制备而得的外用制剂。
7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于:所述外用制剂包括软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、涂膜剂、搽剂、洗剂、喷雾剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、糊剂或巴布剂。
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王明惠,杨磊: "《健身•防病•治病小窍门丛书 食疗治病小窍门》", 31 July 2015, 中国医药科技出版社 * |
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