CN105803019A - 一种自制酶液生产壳寡糖的方法 - Google Patents

一种自制酶液生产壳寡糖的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105803019A
CN105803019A CN201511009052.6A CN201511009052A CN105803019A CN 105803019 A CN105803019 A CN 105803019A CN 201511009052 A CN201511009052 A CN 201511009052A CN 105803019 A CN105803019 A CN 105803019A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chitosan
liquid
enzyme
oligochitosan
enzyme liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201511009052.6A
Other languages
English (en)
Inventor
徐文中
莫锦宏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhuahi Jinlong Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Zhuahi Jinlong Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhuahi Jinlong Biotechnology Co Ltd filed Critical Zhuahi Jinlong Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201511009052.6A priority Critical patent/CN105803019A/zh
Publication of CN105803019A publication Critical patent/CN105803019A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C12N9/80—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/01—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in linear amides (3.5.1)
    • C12Y305/01041—Chitin deacetylase (3.5.1.41)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种酶法生产壳寡糖的技术领域；特别是提供一种自制酶液生产壳寡糖的方法的低成本方法。所述的方法包括酶液发酵培养一种高产脱乙酰酶的真菌构巢曲霉，得到用于甲壳素脱乙酰制备壳聚糖的酶液A；液体发酵培养一种高产含纤维素酶、淀粉酶的酶液B。用于壳聚糖酶解制备壳寡糖；采用两步酶解工艺，甲壳素先通过与酶液A反应得到壳聚糖，再通过与酶液B反应得到壳寡糖。本发明方法优势在于通过自产的酶液满足脱乙酰和酶解壳聚糖的需要，避免外购商品酶因干燥、保存、运输环节太多而造成的酶失活风险；提供一种非专一性的廉价酶源，降低生产成本，从而提高企业的自主能力，保证壳寡糖产业的稳定发展。

Description

一种自制酶液生产壳寡糖的方法
技术领域
本发明涉及一种酶法生产壳寡糖的技术领域，特别是提供一种自制酶液生产壳寡糖的低成本生产方法。
背景技术
甲壳素，又称几丁质(chintin)。化学名(1，4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖，是自然界仅次于纤维素的第二大类生物材料，壳聚糖(chitosan)又称脱乙酰甲壳素，他是甲壳素脱乙酰的产物，使其最重要的衍生物，甲壳素脱乙酰酶(chintindeacetzlaseEC。3.5.1.41.简称CDA)则是一种催化甲壳素中N-乙酰基-D-葡聚糖胺的乙酰水解的酶。目前常使用化学方法(40％以上氢氧化钠)生产壳聚糖。存在诸多问题：如反应时间长、能耗大、产品质量不稳定、尤其严重的排放物，造成巨大的环境污染，对周边生态环境破坏严重，酶法制备解决上述问题，因此该酶具有巨大的工业应用价值，目前培养和优化甲壳素脱乙酰酶菌株成为近年来研究的热点。
壳寡糖是甲壳素和壳聚糖经降解生成的一类聚合度为2-20的可溶于水的氨基糖类化合物，其化学结构由N-乙酰-D-氨基葡萄糖和D-氨基葡萄糖通过β-1，4糖苷键连接起来的均聚或杂聚低聚糖。甲壳素、壳聚糖在水中溶解性差，导致应用受到限制，通过降解反应制备低分子的壳寡糖是目前研究的热点。常用制备壳寡糖的方法主要有物理法、化学法(酸解法、氧化法)、酶解法等。其中酶降解法可特异性选择性地切断壳聚糖的糖苷键，降解过程和降解的产物的聚合度可控，具有其他方法无法比拟的优势。酶降解法根据酶的作用机制可分为专一性酶水解，即甲壳素酶和壳聚糖酶。非专一性酶水解如蛋白酶、脂肪酶、果胶酶等，由于非专一性酶价格昂贵，难以商业化，故采用非专一性酶制备壳寡糖是很有潜力的发展方向。纤维素和壳聚糖结构相似，纤维素酶对对两者的作用也相似。有文献报道了纤维素酶对壳聚糖有明显的降解作用，如：谭佩毅等[纤维素酶法制备壳寡糖工艺的研究]《中国调味品》2012.37(12)79-83、中国专利CN201110405284.9也公开了一种包含纤维素酶、溶菌酶、淀粉酶、脂肪酶、葡萄糖酶、木瓜蛋白酶的复合酶，并应用此复合酶制备壳寡糖的方法。
尽管在此公开的生产壳寡糖的方法中，包括了物理法、化学法、酶降解法。酶降解法包括了专一性酶降解法和非专一性酶降解法以及复合酶降解法，且酶降解法已成为生产壳寡糖的主流技术方向。但在应用酶降解技术生产壳寡糖的实际过程之中，仍面临酶生产成本高、产品质量不稳定、工艺选择性不强等问题。其根本原因是壳寡糖生产企业不能掌握酶解工艺核心技术：酶的自产自用。众所周知，酶是有生物活性的物质，大部分适合低温保存。商品酶在干燥、运输、保藏过程中均有失活的可能。因此，很有必要提供一种自培自用的专用酶高产菌株及其发酵方法，使壳寡糖生产企业摆脱对商品酶的依赖，减少运输环节，避免酶失活风险。从而降低生产成本，使壳寡糖产品应用到更多领域。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种微生物发酵自制酶液，两种酶液分别含甲壳素脱乙酰酶和纤维素、淀粉酶，满足甲壳素脱乙酰基→壳聚糖→酶降解→壳寡糖工艺流程的酶需求。
本发明的第二个目的在于一种以甲壳素为原料，通过二次酶解生产壳寡糖的方法，代替传统酸碱法。
本发明的第三个目的，是提供一种采用上述方法生产的壳寡糖粉体。
为达到上述的第一个目的，本发明采用下述技术方案：
一种自制酶液生产壳寡糖的方法，自制酶液的制备：
一，甲壳素脱乙酰酶酶液的制备，包括以下步骤：
1)高产甲壳素脱乙酰酶菌种的筛选；出发菌种采用中国微生物菌种保藏中心的一株真菌构巢曲霉，保藏号为：CICC20604。
扩培后筛选出15株高产甲壳素脱乙酰酶的菌株，再复筛选出一株特异高产甲壳素脱乙酰酶的菌株，斜面培养后，保藏备用。
2)一级培养，液体发酵，培养基为壳聚糖1.5％、酵母粉0.5％、磷酸氢二钾0.1％、磷酸二氢钾0.1％、无水硫酸镁0.05％、CoCl2适量。
3)二级培养，液体发酵培养的最佳条件为发酵初始pH值5.5-6.5，发酵时间72-100h，培养温度30-40℃，种量浓度为5-10％。
4)过滤，分离菌丝体，得到含有甲壳素脱乙酰酶的酶液，活性＞300U/ml，冷藏条件下保存20天，酶活性不降低。在本发明中简称酶液A，备用。
2、纤维素酶、淀粉酶复合酶液的发酵制备：
1)高产纤维素酶、淀粉酶的筛选：
2)一级培养，液体发酵，培养基为酵母提取物0.5％、NaCl0.5％、蛋白胨1％、羧甲基纤维素钠1％、磷酸二氢钾0.1％、琼脂1.7％，其余为纯水。
3)二级培养，液体发酵培养的最佳条件为发酵初始pH值5.5-6.5，培养温度30-40℃，转速150-180r/min，发酵时间30-40h，液体发酵培养基：玉米淀粉1％、豆粕粉1％、NaCl0.4％、K2HPO40.05％、KH2PO40.05％、MgSO4.7H2O、CaCl20.02％种量浓度为5-10％。
4)过滤，分离菌丝体，得到含有纤维素酶、淀粉酶的酶液，纤维素酶活性＞200U/ml，淀粉酶活性＞2300U/ml，冷藏条件下保存20天，酶活性不下降，在本发明中简称酶液B，备用。
为达到本发明的第二个目的，本发明采用如下技术方案：
一种自制酶液生产壳寡糖的方法，两次酶解工艺，包括如下步骤：
第一步甲壳素脱乙酰基；
甲壳素脱乙酰基具体操作方法如下：
1、采用市售甲壳素，质量标准：甲壳素含量＞95％，灰分＜1％，
2、配置甲壳素微粉混悬液，在均质乳化剂中，甲壳素微粉与水的比例为1∶10，高速均质乳化使其分散成混悬液。
3、向混悬液中加入酶液A，加入量为混悬液重量比10-20％。
4、继续高速均质乳化1h，使酶液A与甲壳素充分反应。
5、结束反应，升高温度至100℃，保持15min，灭酶。
6、离心分离，得到脱乙酰度＞90％的壳聚糖膏状物，可直接用于下一步生产壳寡糖，也可干燥作为壳聚糖产品。
第二步壳聚糖酶降解生产壳寡糖。
壳聚糖酶解生产壳寡糖，具体操作如下：
1、把上述壳聚糖膏状物或干粉，分散于水中，均质，滴入乙酸使其溶解于水中形成5％的壳聚糖溶液。
调节pH值4.5-5.5，保温45℃，搅拌下加入酶液B，反应8h，得到壳寡糖溶液。
为达到本发明的第三个目的，本发明采用如下技术方案：
上述壳寡糖溶液以超滤膜和RO反渗透膜分离纯化，截留分子量500-3000道尔顿的组分。真空浓缩，冷冻干燥，得到高纯度的壳寡糖。
所述超滤膜截留分子量为3000道尔顿，保留截留液。
所述的RO反渗透膜分子截留量为500道尔顿，保留截留液。
所述的壳寡糖粉末的分子量为500-3000道尔顿，纯度＞90％，灰分＜1％。
本发明的有益效果如下：
(1)降低生产成本，在现有酶法生产壳寡糖的方法中，酶的成本占最要地位。商品酶价格偏高，如果不想办法降低成本，酶法生产就很难形成产业化，也是壳寡糖价格居高不下的原因。自制酶液减少了浓缩、干燥、运输、销售等一系列中间环节，成本降至最低。但这种技术目前只有少数厂家掌握。本发明方法的公开，将进一步推动壳寡糖产业的进一步发展。
(2)减少技术风险，酶的保藏条件苛刻，在干燥、运输、复溶的过程中容易失活，使用商品酶生产壳寡糖具有一定的技术风险和依赖性。使用自制的新酶液，效果更好，保证了产品质量的稳定性。
3)本发明的有益效果还体现在提供一种工艺简单，反应条件温和，反应时间短，节能、无污染的生产新方法，适合大规模生产。
4)本发明提供的两种高产菌种优化筛选方法，为开发更多高产菌种提供了新的思路。
具体实施方式
为更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例，对本发明作进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面具体描述的内容是说明性而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1
选用从甲壳素厂家购回的甲壳素100Kg，甲壳素含量＞95％，灰分＜1％。经过超微粉碎机粉碎至300目。投入均质乳化剂，加去离子水900Kg，均质乳化到形成均匀混悬液，加入20％的预制酶液A，继续均质1h。加热至100℃，灭酶15min。过滤，得脱乙酰度＞90％的壳聚糖膏状物。加入去离子水稀释，配成含有壳聚糖5％的混悬液，调节pH5.5，保温45℃。滴入乙酸使壳聚糖完全溶于水。形成壳聚糖水溶液。向壳聚糖溶液中加入10％的酶液B，继续搅拌，保温45℃，反应5h，得到壳寡糖溶液，经超滤膜和RO反渗透膜分离纯化，得到分子量500-3000的截留组分。真空浓缩、干燥、，得到36Kg壳寡糖粉末，纯度＞90％，灰分＜1％。
本实施例所述的酶液A是液体发酵高产甲壳素脱乙酰的真菌构巢曲霉所产酶液；所述的酶液B，是液体发酵高产纤维素酶、淀粉酶的解淀粉芽孢杆菌所产的酶液。
实施例2
选用从甲壳素厂家购回的甲壳素100Kg，甲壳素含量＞95％，灰分＜1％。经过超微粉碎机粉碎至300目。投入均质乳化剂，加去离子水900Kg，均质乳化到形成均匀混悬液，加入30％的预制酶液A，继续均质1h。加热至100℃，灭酶15min。过滤，得脱乙酰度＞90％的壳聚糖膏状物。加入去离子水稀释，配成含有壳聚糖5％的混悬液，调节pH5.5，保温45℃。滴入乙酸使壳聚糖完全溶于水。形成壳聚糖水溶液。向壳聚糖溶液中加入20％的酶液B，继续搅拌，保温45℃，反应5h，得到壳寡糖溶液，经超滤膜和RO反渗透膜分离纯化，得到分子量500-3000的截留组分。真空浓缩、干燥、，得到36Kg壳寡糖粉末，纯度＞90％，灰分＜1％。
本实施例所述的酶液A是液体发酵高产甲壳素脱乙酰的真菌构巢曲霉所产酶液；所述的酶液B，是液体发酵高产纤维素酶、淀粉酶的解淀粉芽孢杆菌所产的酶液。
实施例3
选用从甲壳素厂家购回的甲壳素100Kg，甲壳素含量＞95％，灰分＜1％。经过超微粉碎机粉碎至400目。投入均质乳化剂，加去离子水900Kg，均质乳化到形成均匀混悬液，加入25％的预制酶液A，继续均质1h。加热至100℃，灭酶15min。过滤，得脱乙酰度＞90％的壳聚糖膏状物。加入去离子水稀释，配成含有壳聚糖5％的混悬液，调节pH5.5，保温45℃。滴入乙酸使壳聚糖完全溶于水。形成壳聚糖水溶液。向壳聚糖溶液中加入15％的酶液B，继续搅拌，保温45℃，反应8h，得到壳寡糖溶液，经超滤膜和RO反渗透膜分离纯化，得到分子量500-3000的截留组分。真空浓缩、干燥、，得到51Kg壳寡糖粉末，纯度＞90％，灰分＜1％。
本实施例所述的酶液A是液体发酵高产甲壳素脱乙酰的真菌构巢曲霉所产酶液；所述的酶液B，是液体发酵高产纤维素酶、淀粉酶的解淀粉芽孢杆菌所产的酶液。
显然，本发明以上实施例仅仅是为了清楚地说明本发明所做的举例，而并非是对发明的实施方式的限定。对于此属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还不可以做出其他不同形式的变化或变动。这是无法对所有实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍在本发明的保护范围之列。

Claims (7)

1.一种自制酶液生产壳寡糖的方法，其特征在于液体培养一种高产甲壳素脱乙酰酶的真菌构巢曲霉，过滤发酵液，得到一种含甲壳素脱乙酰酶的酶液A，酶活性＞300U/ml；液体培养一种高产纤维素酶、淀粉酶的解淀粉芽孢杆菌，过滤发酵液，得到一种含纤维素酶、淀粉酶的酶液B，酶液B的纤维素酶活性＞200U/ml，淀粉酶活性＞2300U/ml；把甲壳素细粉与酶液A反应，得到壳聚糖，壳聚糖配成5％水溶液，调节pH5.5，加入酶液B，保温45℃，反应8h，得到壳寡糖溶液。以超滤膜和RO反渗透膜分离纯化，截留分子量500-3000的组分。真空浓缩，冷冻干燥，得到高纯度的壳寡糖粉末。
2.根据权利要求所述的一种自制酶液生产壳寡糖的方法，其特征在于：所述的液体培养一种高产甲壳素脱乙酰酶的真菌构巢曲霉，过滤发酵液，得到含甲壳素脱乙酰酶的酶液A，酶活性＞300U/ml；所述的构巢曲霉菌种来自中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏号GIM3.394.经筛选得到一株甲壳素脱乙酰酶的菌株。液体发酵培养的最佳条件为发酵初始pH值5.5-6.5，发酵时间72-100h，培养温度30-40℃，接种量浓度为5-10％。
3.根据权利要求1所述的一种自制酶液生产壳寡糖的方法，其特征在于：所述的液体培养一种高产纤维素酶和淀粉酶的解淀粉芽孢杆菌。过滤发酵液，得到含纤维素酶、淀粉酶的酶液B。酶液中纤维素酶活性＞200U/ml，淀粉酶活性＞2300U/ml。所述的解淀粉芽孢杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏号为CICC20604.经筛选得到一株高产纤维素酶、淀粉酶的菌株。液体发酵培养的最佳条件为发酵初始pH值5.5-6.5，培养温度30-40℃，转速150-180r/min，发酵时间30-40h，液体发酵培养基：玉米淀粉1％、豆粕粉1％、NaCl0.4％、K2HPO40.05％、KH2PO40.05％、MgSO4.7H2O、CaCl20.02％种量浓度为5-10％。
4.根据权利要求1所述的甲壳素超细粉与酶液A反应，得到壳聚糖。甲壳素细分为甲壳素脱钙、脱蛋白后，经超微粉碎机粉碎为200-1000目粉末。在均质乳化机中加入水和甲壳素微粉，配成10-20％悬浮液，加入酶液A，保持高速搅拌均质1h，高温灭酶终止反应，离心分离，洗涤、干燥得到脱乙酰度90％的壳聚糖。
5.根据权利要求1所述的壳聚糖与酶液B反应得到壳寡糖其方法为：把上述壳聚糖粉末分散于水中，配成5％悬浮水溶液，搅拌下滴入醋酸，使壳聚糖溶解，调节pH4-5.5，保温45℃，加入酶液B，反应5-8h，得到壳寡糖溶液。酶液B所含的纤维素酶、淀粉酶是非专一性降解壳聚糖的酶，但在合适的条件下，其效果不低于专一性壳聚糖酶，且成本低廉。
6.根据权利要求1所述的壳寡糖溶液，以超滤膜和RO反渗透膜分离纯化，截留分子量500-3000道尔顿的组分，真空浓缩，冷冻干燥，得到高纯度的壳寡糖，所述的超滤膜分子截留量为3000道尔顿，保留滤出液。所述的RO反渗透膜分子截留量为500道尔顿，保留截留液。
7.根据权利要求1所述的方法得到一种高纯度壳寡糖，其特征在于所述壳寡糖粉体的分子量为500-3000，纯度＞90％，灰分小于1％。
CN201511009052.6A 2015-12-31 2015-12-31 一种自制酶液生产壳寡糖的方法 Pending CN105803019A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201511009052.6A CN105803019A (zh) 2015-12-31 2015-12-31 一种自制酶液生产壳寡糖的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201511009052.6A CN105803019A (zh) 2015-12-31 2015-12-31 一种自制酶液生产壳寡糖的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105803019A true CN105803019A (zh) 2016-07-27

Family

ID=56466229

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201511009052.6A Pending CN105803019A (zh) 2015-12-31 2015-12-31 一种自制酶液生产壳寡糖的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105803019A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112646849A (zh) * 2020-12-10 2021-04-13 上海应用技术大学 一种微生物源壳寡糖的制备方法
CN113583149A (zh) * 2021-08-13 2021-11-02 上海应用技术大学 以蟹壳为原料联产壳寡糖和海鲜风味料基料的生产方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1396185A (zh) * 2001-07-13 2003-02-12 武汉东湖生物技术发展有限公司 一种半纤维素酶及其在制备壳寡糖中的应用
CN101144097A (zh) * 2007-09-18 2008-03-19 重庆百奥帝克微生态科技有限公司 一种制备甲壳素及其壳聚糖和壳寡糖的方法
CN101200711A (zh) * 2006-12-12 2008-06-18 华东理工大学 壳聚糖降解复合酶制剂及其制备方法
CN101818181A (zh) * 2010-04-07 2010-09-01 烟台绿云生物化学有限公司 酶解制备农用壳寡糖的方法及含有壳寡糖的作物营养制剂
CN102492664A (zh) * 2011-12-08 2012-06-13 海南正业中农高科股份有限公司 一种应用复合酶制备壳寡糖的方法
CN102851239A (zh) * 2012-08-22 2013-01-02 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一株壳聚糖酶生产菌株及应用该菌株生产壳寡糖的方法
CN104046666A (zh) * 2013-09-29 2014-09-17 天津天狮生物发展有限公司 一种发酵酶解制备几丁聚糖的方法
CN104059953A (zh) * 2013-09-29 2014-09-24 天津天狮生物发展有限公司 一种几丁聚糖酶解方法
CN104450832A (zh) * 2013-09-13 2015-03-25 浙江树人大学 一种利用嗜热芽孢杆菌(Thermophilic Bacillus)酶高效脱乙酰基降解甲壳素的技术
CN104911125A (zh) * 2015-05-28 2015-09-16 威海斯瑞海洋生物科技有限公司 一种壳聚糖酶生产菌及其应用

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1396185A (zh) * 2001-07-13 2003-02-12 武汉东湖生物技术发展有限公司 一种半纤维素酶及其在制备壳寡糖中的应用
CN101200711A (zh) * 2006-12-12 2008-06-18 华东理工大学 壳聚糖降解复合酶制剂及其制备方法
CN101144097A (zh) * 2007-09-18 2008-03-19 重庆百奥帝克微生态科技有限公司 一种制备甲壳素及其壳聚糖和壳寡糖的方法
CN101818181A (zh) * 2010-04-07 2010-09-01 烟台绿云生物化学有限公司 酶解制备农用壳寡糖的方法及含有壳寡糖的作物营养制剂
CN102492664A (zh) * 2011-12-08 2012-06-13 海南正业中农高科股份有限公司 一种应用复合酶制备壳寡糖的方法
CN102851239A (zh) * 2012-08-22 2013-01-02 黄河三角洲京博化工研究院有限公司 一株壳聚糖酶生产菌株及应用该菌株生产壳寡糖的方法
CN104450832A (zh) * 2013-09-13 2015-03-25 浙江树人大学 一种利用嗜热芽孢杆菌(Thermophilic Bacillus)酶高效脱乙酰基降解甲壳素的技术
CN104046666A (zh) * 2013-09-29 2014-09-17 天津天狮生物发展有限公司 一种发酵酶解制备几丁聚糖的方法
CN104059953A (zh) * 2013-09-29 2014-09-24 天津天狮生物发展有限公司 一种几丁聚糖酶解方法
CN104911125A (zh) * 2015-05-28 2015-09-16 威海斯瑞海洋生物科技有限公司 一种壳聚糖酶生产菌及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
平向莉 等: "纤维素酶制备壳寡糖工艺研究", 《纤维素酶制备壳寡糖工艺研究》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112646849A (zh) * 2020-12-10 2021-04-13 上海应用技术大学 一种微生物源壳寡糖的制备方法
CN112646849B (zh) * 2020-12-10 2024-01-16 上海应用技术大学 一种微生物源壳寡糖的制备方法
CN113583149A (zh) * 2021-08-13 2021-11-02 上海应用技术大学 以蟹壳为原料联产壳寡糖和海鲜风味料基料的生产方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2560424C2 (ru) Способ получения состава ферментационного бульона
Shah et al. Xylanase production by a newly isolated Aspergillus foetidus strain and its characterization
Shah et al. Xylanase production under solid-state fermentation and its characterization by an isolated strain of Aspergillus foetidus in India
Uyar et al. Production and optimization of process parameters for alkaline protease production by a newly isolated Bacillus sp. under solid state fermentation
CN100575483C (zh) 制备耐热木聚糖酶、耐热β-木糖苷酶或耐热β-葡萄糖苷酶的方法
Negi et al. Optimization of culture parameters to enhance production of amylase and protease from Aspergillus awamori in a single fermentation
Andersson et al. α-Amylase production in aqueous two-phase systems with Bacillus subtilis
Nagar et al. Hyper production of alkali stable xylanase in lesser duration by Bacillus pumilus SV-85S using wheat bran under solid state fermentation
Vishnu et al. Direct conversion of starch to L (+) lactic acid by amylase producing Lactobacillus amylophilus GV6
Andrade et al. Production of extracellular proteases by Mucor circinelloides using D-glucose as carbon source/substrate
CN102559506A (zh) 一种草酸青霉菌及其应用
Faria et al. Production of xylanolytic enzymes by Moesziomyces spp. using xylose, xylan and brewery’s spent grain as substrates
Pareek et al. Penicillium oxalicum SAEM-51: a mutagenised strain for enhanced production of chitin deacetylase for bioconversion to chitosan
Saha Purification and characterization of an extracellular β-xylosidase from a newly isolated Fusarium verticillioides
CN105803019A (zh) 一种自制酶液生产壳寡糖的方法
Amin et al. Exo-polygalacturonase production from agro-waste by Penicillium fellutanum and insight into thermodynamic, kinetic, and fruit juice clarification
CN105039271A (zh) 一种提高多种酶制剂产量的方法
CN108795819A (zh) 一种复合微生物培养物及其在生产类胡萝卜素中的应用
Spier et al. Production and characterization of amylases by Aspergillus niger under solid state fermentation using agro industrials products
CN101532028A (zh) 一种高产糖化酶工业生产菌株的选育方法
Thirumale et al. Control of cellulase formation by trehalose in Clostridium papyrosolvens CFR-703
Sandhu et al. Production of α-amylase by Saccharomycopsis fibuligera (Syn. Endomycopsis fibuligera)
JP4257403B2 (ja) 酵素処理方法
Pashova et al. Physiological aspects of immobilised Aspergillus niger cells producing polymethylgalacturonase
CN102876646A (zh) 一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法及其所用培养基

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
DD01 Delivery of document by public notice
DD01 Delivery of document by public notice

Addressee: ZHUAHI JINLONG BIOTECHNOLOGY CO., LTD.

Document name: Notification that Application Deemed to be Withdrawn

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160727