CN105754982B - 固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法 - Google Patents
固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105754982B CN105754982B CN201410769087.9A CN201410769087A CN105754982B CN 105754982 B CN105754982 B CN 105754982B CN 201410769087 A CN201410769087 A CN 201410769087A CN 105754982 B CN105754982 B CN 105754982B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- immobilized lipase
- present
- amount
- immobilized
- weight
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法。固定化脂肪酶包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物。固定化脂肪酶的制备方法，包括：（1）提供脂肪酶酶液；（2）将阴离子交换树脂载体加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，在步骤（1）和/或步骤（2）中添加保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物，所述固定化酶不进行干燥处理。本发明的固定化脂肪酶不需要干燥也不需要任何物质处理，可直接用于酯化反应，反应速度快，酯化效果突出。本发明的制备方法中，载体不需要任何处理可直接用来吸附酶。
Description
技术领域
本发明提供固定化脂肪酶，其用于酯化反应。本发明还提供固定化脂肪酶的制备及其应用。
背景技术
脂肪酶是一种生物催化剂，它除了能在油/水界面催化水解脂肪酸甘油酯外也广泛地用于催化酯化和酯交换反应。游离的脂肪酶虽然用途广泛，催化技术比较成熟，但其容易受到pH、温度等条件的影响而不稳定，分离困难，大多数情况下只能使用一次，不是工业应用中理想的催化剂。酶固定化技术是提高酶使用效率、实现连续操作、降低生产成本的有效手段之一。
现在可以得到的固定化脂肪酶，如诺维信出售的脂肪酶RM IM、脂肪酶TL IM以及Novozyme 435等，都以干燥物的形态提供。特别对于酯化反应，当固定化酶水分超过一定量时，酯化活力会降低而表现为较高的水解活力，所以理论上更需要反应所用的固定化酶以干燥物的形式存在。但是，固定化酶进行减压、真空或加热等的干燥过程中，易引起吸附的酶失活，大多数情况下，实际的活性没有显现出吸附时的最大活力。
专利CN 100347295 C描述了一种将脂肪酶用载体吸附后不进行干燥，通过与脂肪酸、脂肪酸甘油三酯或脂肪酸部分甘油酯接触，调节水分，酯化反应用固定化酶的制备方法。该方法处理时间久，并且调节水分过程中需要用到大量的脂肪酸、脂肪酸甘油三酯或脂肪酸部分甘油酯，对资源造成了极大的浪费，因而没有太大的实用价值。
日本特开2000-166589号公报提出了脂肪酶被载体吸附后，不进行干燥，迅速直接与反应底物接触，进行酯化反应的方法。但是该方法中，载体在吸附酶之前需要进行多步处理，处理方法非常复杂，并且需要用脂溶性的脂肪酸或脂肪酸类似物处理载体，对资源也造成极大的浪费，提高了生产成本。按照该方法，酶经吸附后要与反应底物迅速接触，反应压强要求非常苛刻，需要在13Pa或更低压强下进行反应，对设备要求高，并且初期反应进行非常缓慢，反应4h后甘油二酯（DG）与甘油三酯（TG）的含量之和才可达到63%。
发明内容
本发明提供了一种用于酯化反应的固定化脂肪酶及其制备方法和其用途。
本发明涉及固定化脂肪酶，其主要包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂。
本发明的一个目的是提供固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物。
根据所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以30%～75%的量存在，优选40%～57%的量存在。
根据所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以1%～50%的量存在，优选14%～30%的量存在。
根据所述的固定化脂肪酶，其中所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以10%～50%的量存在，优选10～40%的量存在，优选22%～32%的量存在，和/或所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.1%～2%的量存在，优选0.5%～1.5%的量存在。
根据所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂是低分子量的多羟基化合物，所述低分子量的多羟基化合物选自分子量小于500的多羟基化合物中的至少一种，优选选自丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇、乳糖、糊精、麦芽糖、甘露糖中的至少一种。
本发明的另一个目的是提供固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供脂肪酶酶液；（2）将阴离子交换树脂载体加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，在步骤（1）和/或步骤（2）中添加保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物，所述固定化酶不进行干燥处理。
根据所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述保护剂相对于脂肪酶酶液，按重量计以0.1%～50%的量添加；优选按重量计以1%～48%的量添加。
根据所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述低分子量的多羟基化合物选自分子量小于500的多羟基化合物中的至少一种，优选选自丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇、乳糖、糊精、海藻糖、麦芽糖、甘露糖中的至少一种。
根据所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:20～20:1，优选1:10～10:1，更优选1:5～5:1，进一步优选1:2～3:1，最优选1:1。
本发明的一个目的是提供酯化方法，其特征在于使用所述的固定化脂肪酶或通过所述的固定化脂肪酶的制备方法制备得到的固定化脂肪酶。
发明效果
本发明中采用添加保护剂的酶液作为固定化的酶液来源，载体不需要任何处理可直接用来吸附酶，简化了操作过程，省时省力，节省成本。本发明惊奇地发现将阴离子交换树脂、保护剂、水分与脂肪酶一起配制所得到的固定化脂肪酶产品，该产品不需要干燥也不需要任何物质处理，可直接用于酯化反应，过程简单，并且酯化反应条件要求宽松、容易实现，反应速度快，酯化效果突出，所达到的效果是吸附酶经过干燥、未加保护剂的固定化酶以及其它类型的载体无法达到的。本发明的制备方法中，载体不需要任何处理可直接用来吸附酶，酶固定化后不进行干燥也不需进行任何处理可直接用于酯化反应。本发明方法所获得的固定化脂肪酶不需要干燥也不需要任何物质处理，可直接用于酯化反应，简化操作过程的同时，提高其应用到酯化反应的效率。
具体实施方式
固定化脂肪酶
本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物。
在本发明的优选实施方式中，所述阴离子交换树脂载体没有特别的限定，只要能够实现本发明的目的即可，可以为IMAC HP661、Amberlite IRA958Cl、Amberlite IRA-400、Amberlite IRA-401、Amberlite IRA-900、BSD-816、D213FC、D213、213FC、D301FC、D301-F、D301-G、D301-FD、BSD-92、BSD-96 、EL-4200Cl、Dowex 1×4、D201GF、Duuolite A-161、Lewatit-600、D290等。
在本发明的优选实施方式中，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以10%～50%的量存在，优选15%～45%的量存在，更优选20%～40%的量存在，进一步优选22%～32%的量存在，特别优选24%～30%的量存在。在本发明的具体实施方式中，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以18.7%、21.1%、23.4%、24.7%、25.3%、27.8%、28.5%、42.2%、47.3%的量存在。
在本发明的优选实施方式中，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.1%～2%的量存在，优选0.2%～1.9%的量存在，更优选0.5%～1.7%的量存在，进一步优选0.5%～1.5%的量存在，特别优选0.7%～1.4%的量存在，最优选0.8%～1.2%的量存在。在本发明的具体实施方式中，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.7%、0.8%、1.0%、1.2%、1.7%、1.9%的量存在。
在本发明的优选实施方式中，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以30%～75%的量存在，优选35%～70%的量存在，更优选35%～65%的量存在，进一步优选40%～57%的量存在，特别优选45%～55%的量存在。在本发明的具体实施方式中，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以33%、35%、40.7%、44.5%、45.6%、49.8%、50.0%、56.2%、62.2%的量存在。
在本发明的优选实施方式中，所述水分相对于载体干重，按重量计以70%～750%的量存在，优选90%～610%的量存在，更优选120%～500%的量存在，进一步优选140～300%的量存在，特别优选170%～240%的量存在。
在本发明中，所述保护剂选自低分子量的多羟基化合物中的至少一种。所述低分子量的多羟基化合物选自丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇、乳糖、糊精、海藻糖、麦芽糖、甘露糖中的至少一种。所述低分子量多羟基化合物可以是分子量小于500的多羟基化合物。
在本发明的优选实施方式中，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以1%～50%的量存在，优选5%～40%的量存在，更优选10%～35%的量存在，进一步优选14%～30%的量存在，特别优选18%～28%的量，最优选20%～25%的量存在。在本发明的具体实施方式中，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以13.1%、15.8%、18.1%、19.6%、24.5%、26.9%、28.1%、28.4%、29.6%的量存在。
本发明的固定化脂肪酶可以通过下述固定化脂肪酶的制备方法制备。本发明的固定化脂肪酶可以用于下述本发明的油脂的脱酸方法以及本发明的酯化方法。在本发明中，上述固定化脂肪酶有时称为“本发明的固定化脂肪酶”或“固定化脂肪酶”或“固定化酶”。本发明中上述固定化脂肪酶中的“载体”或“阴离子交换树脂”或“阴离子交换树脂载体”指的是不含水分的干重，其它无特殊情况说明可以为含有一定水分或不含水分。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以24.7%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以1.0%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以49.8%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以24.5%的量存在，所述保护剂是丙二醇。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以27.8%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.8%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以44.5%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以26.9%的量存在，所述保护剂是山梨醇。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以21.1%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.8%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以50.0%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以28.1%的量存在，所述保护剂是甘油。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以47.3%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以1.9%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以35.0%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以15.8%的量存在，所述保护剂是甘露醇。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以23.4%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.8%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以56.2%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以19.6%的量存在，所述保护剂是乳糖。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以18.7%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以1.0%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以62.2%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以18.1%的量存在，所述保护剂是麦芽糊精。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以42.2%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以1.7%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以33.0%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以13.1%的量存在，所述保护剂是海藻糖。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以25.3%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.7%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以45.6%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以28.4%的量存在，所述保护剂是麦芽糖。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以28.5%的量存在，所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以1.2%的量存在，所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以40.7%的量存在，所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以29.6%的量存在，所述保护剂是甘露糖。
固定化脂肪酶的制备方法
本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供脂肪酶酶液；（2）将阴离子交换树脂载体加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，在步骤（1）和/或步骤（2）中添加保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物。
在本发明的优选实施方式中，所述脂肪酶酶液可以为市售的酶液，也可为自行发酵的酶液，或者为将酶粉溶解于缓冲液的酶液。所述的脂肪酶可使用来自动物、植物的脂肪酶，也可以使用来自微生物的脂肪酶，如来自疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)、米根霉(Rhizopus oryzae) 、米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)、南极假丝酵母(Candida antarctica)、黑曲霉(Aspergillus niger)、伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa) 、产碱杆菌(Alcaligenes sp.)、爪哇毛霉(Mucor javanicus)、雪白根霉(Rhizopus niveus)、白地霉(Cryytococcus neoformans)等中的任何一种或其基因改造菌种。
在本发明的优选实施方式中，所述阴离子交换树脂载体没有特别的限定，只要能够实现本发明的目的即可，可以为IMAC HP661、Amberlite IRA958Cl、Amberlite IRA-400、Amberlite IRA-401、Amberlite IRA-900、BSD-816、D213FC、D213、213FC、D301FC、D301-F、D301-G、D301-FD、BSD-92、BSD-96 、EL-4200Cl、Dowex 1×4、D201GF、Duuolite A-161、Lewatit-600、D290等。
在本发明的优选实施方式中，所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比可以为1:20~20:1，优选1:10~10:1，更优选1:5~5:1，进一步优选1:2~3:1。在本发明的具体实施方式中，所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明中，在上述步骤（2）中，将阴离子交换树脂载体加入酶液中并进行混合，也就是将酶吸附固定于阴离子交换树脂载体。混合的方式没有特别限定，只要能够均匀混合即可。例如可以使用振荡混合、气浴摇床等，在4～40℃（优选25℃）下进行0.5～10小时、优选1～5小时，例如2小时。通过混合，使得酶吸附固定于阴离子交换树脂载体上。
在本发明中，所述保护剂选自低分子量的多羟基化合物中的至少一种。所述低分子量的多羟基化合物选自丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇、乳糖、糊精、海藻糖、麦芽糖、甘露糖中的至少一种。所述低分子量多羟基化合物可以是分子量小于500的多羟基化合物。
所述保护剂可以在上述步骤（1）和/或步骤（2）中添加。所述保护剂在上述步骤（1）中添加或在上述步骤（2）中添加时，所述保护剂相对于脂肪酶酶液，按重量计以0.1%～50%的量添加，优选按重量计以1%～48%的量添加，更优选按重量计以10%～40%的量添加，进一步优选按重量计以20%～30%的量添加。在本发明的具体实施方式中，所述保护剂相对于脂肪酶酶液，按重量计以10%、25%、30%、40%的量添加。
所述保护剂在上述步骤（1）中添加和在上述步骤（2）中添加时，所述保护剂的添加总量相对于脂肪酶酶液，按重量计为0.1%～50%，优选按重量计为1%～48%，更优选按重量计为10%～40%，进一步优选按重量计为20%～30%。在本发明的具体实施方式中，所述保护剂的添加总量相对于脂肪酶酶液，按重量计为10%、25%、30%、40%。
在本发明的优选实施方式中，从所得的混合物中分离得到固定化酶。分离固定化酶可以采用常规的抽滤、过滤、离心等方法。
在本发明的优选实施方式中，所述固定化酶不进行干燥处理。
本发明的固定化脂肪酶的制备方法可以用于制备上述本发明的固定化脂肪酶。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入30%丙二醇保护剂；（2）将阴离子交换树脂载体IMAC HP661加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入25%山梨醇保护剂；（2）将阴离子交换树脂载体Amberlite IRA958Cl加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入40%甘油保护剂；（2）将阴离子交换树脂载体BSD-816加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入10%甘露醇保护剂；（2）将阴离子交换树脂载体Amberlite IRA-900加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入30%乳糖保护剂；（2）将阴离子交换树脂载体D213FC加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入30%麦芽糊精；（2）将阴离子交换树脂载体BSD-816加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供白地霉(Cryytococcus neoformans)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入30%海藻糖保护剂；（2）将阴离子交换树脂载体Lewatit-600加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入30%麦芽糖保护剂；（2）将阴离子交换树脂载体BSD-816加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：（1）提供疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶酶液，并且相对于酶液，加入30%甘露糖保护剂；（2）将阴离子交换树脂载体BSD-816加入（1）所提供的酶液中并进行混合；（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，其中所述阴离子交换树脂载与脂肪酶酶液的重量（g）/体积（mL）比为1:1。
酯化方法
本发明的酯化方法，其特征在于使用上述固定化脂肪酶或通过上述固定化脂肪酶的制备方法制备得到的固定化脂肪酶。
所述酯化反应可以是脂肪酸与醇及醇的酯化物（如甘油一酯、甘油二酯）的酯化，包括油脂脱酸、生物柴油合成等。
在本发明的酯化方法中，将下述本发明的脂肪酸与醇混合后，在一定温度下加入本发明的固定化脂肪酶并搅拌，在减压下进行反应。
本发明的脂肪酸可以是纯脂肪酸也可以是含有脂肪酸的下述油脂或脂肪酸酯。
本发明的醇可以是纯的醇也可以是含有醇的下述油脂或脂肪酸酯。
所述油脂可以是植物源油或动物源油。所述植物源油选自稻米油、葵花籽油、菜油、棕榈油、棕榈仁油、花生油、菜籽油、大豆油、棉籽油、红花籽油、紫苏籽油、茶籽油、棕榈果油、橄榄油、可可豆油、乌桕籽油、扁桃仁油、杏仁油、油桐籽油、橡胶籽油、玉米油、小麦胚油、芝麻籽油、蓖麻籽油、月见草籽油、榛子油、南瓜籽油、胡桃油、葡萄籽油、玻璃苣籽油、沙棘籽油、番茄籽油、澳洲坚果油、椰子油、可可脂、藻类油等中的至少一种，优选选自大豆油、玉米油、菜油、葵花籽油、稻米油或棕榈油中的至少一种油。所述动物源油是深海鱼油，例如三文鱼油、沙丁鱼油等。
所述油脂可以是毛油，也可以是进行了脱胶和/或脱蜡的油脂。
所述脂肪酸可以是至少一种碳原子数1～30的直链或支链、饱和或不饱和脂肪酸。优选选自碳原子数8～22的饱和或不饱和脂肪酸中的至少一种，可以举出辛酸、壬酸、癸酸、月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、十八碳四烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸等。
所述醇可以是至少一种碳原子数1～30的直连或支链、饱和或不饱和醇。优选甲醇、乙醇、丙二醇、甘油、赤藓糖醇。所述醇可以是未经过酯化的醇，也可以是其中的1个或以上的羟基被酯化得到的醇酯化物（不包括醇的全部羟基被酯化的酯化物）。例如，丙二醇单酯、甘油一酯、甘油二酯、赤藓糖醇一酯、赤藓糖醇二酯、赤藓糖醇三酯等。
所述醇的酯化物可以是上述本发明的醇的碳原子数1～20的烷基酯、碳原子数2～20的烯基酯、碳原子数6～20的芳基酯、碳原子数7～20的芳烷基酯等。
所述烷基酯可以举出甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、戊酯、己酯、庚酯、辛酯、壬酯、癸酯、十一烷基酯、十二烷基酯、十六烷基酯、十八烷基酯等。所述烯基酯可以举出乙烯酯、丙烯酯、丁烯酯、戊烯酯、己烯酯、庚烯酯、辛烯酯、壬烯酯、癸烯酯、十一烯基酯、十二烯基酯、十六烯基酯、十八烯基酯等。所述芳基酯可以举出苯基酯、萘基酯等。所述芳烷基酯可以举出苄基酯等。优选甲酯或乙酯。
本发明所述脂肪酸酯可以为上述脂肪酸和上述醇的酯化物。在本发明的优选实施方式中，所述脂肪酸酯是所述脂肪酸的甲酯或乙酯。
所述醇的加入量，相对于本发明的脂肪酸1摩尔，为0.1～2摩尔、优选0.2～1摩尔。在本发明的具体实施方式中，所述多元醇的加入量，相对于本发明的脂肪酸1摩尔，为0.45、0.33和0.25摩尔。
在本发明优选的实施方式中，本发明的脂肪酸与醇混合优选进行高速剪切，例如在10000～20000rpm下进行剪切1～10分钟。在本发明的具体实施方式中，在13000rpm下进行剪切2分钟。剪切后，优选进行搅拌加热，加热至温度为50～90℃、优选60～80℃。在本发明的具体实施方式中，所述加热至温度为75℃。
所述的在一定温度下加入本发明的固定化脂肪酶并搅拌，优选在50～90℃、更优选60～80℃加入本发明的固定化脂肪酶并搅拌。在本发明的具体实施方式中，在75℃加入本发明的固定化脂肪酶并搅拌。
在本发明优选的实施方式中，所述本发明的固定化脂肪酶的加入量，相对于本发明的底物的总量100重量份，为1～100重量份、优选2～50重量份、更优选5～20重量份。在本发明的具体实施方式中，所述固定化脂肪酶的加入量，相对于本发明的底物的总量100重量份，为10重量份。
上述底物包括反应体系中的脂肪酸、醇、油脂、脂肪酸酯。
在本发明优选的实施方式中，减压下进行脱酸在0.1～5KPa、优选在0.2～2KPa下进行。在减压反应后，每隔一定时间测定反应化合物的酸价，并计算酯化率（也可以说是酸价降低率）。
酯化率=（AV0-AV1）/AV0（其中：AV0为酯化前酸价；AV1为酯化反应后酸价）。对未干燥的酶，其加入量为换算成干重的添加量。
在本发明的油脂脱酸的具体实施例中，本发明的酯化方法可以显著地降低油脂的酸价（AV）。在减压反应后2小时，酯化率为35～70％。在减压反应后4小时，酯化率为75～88％。在减压反应后6小时，酯化率为80～92％。
在本发明的脂肪酸与甘油酯化的具体实施例中，在减压反应后4小时，酯化率为70～85％。在减压反应后8小时，酯化率为76～88％。在减压反应后12小时，酯化率为80～90％。
以下结合实施例对本发明的各个方面进行详细说明，旨在使本领域技术人员本发明有更好的理解，但本发明的范围不局限于此。
下列实施例中使用本领域常规的仪器设备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。下列实施例中使用各种原料，除非另作说明，都使用常规市售产品。在本发明的说明书以及下述实施例中，如没有特别说明，“％”都表示重量百分比。
实施例
在本发明的下述实施例中，油脂酸价检测方法参照GB5530-85《动植物油脂酸值和酸价的测定方法》；水分含量测定方法，烘箱干燥法参照GB5009.3-2010, 固定化酶中酶蛋白的量测定方法，参照文献L. Mojovic, Z. Knezevic, R. Popadic, et al.Immobilization of lipase from Candida rugosa on a polymer support. ApplMicrobiol Biotechnol, 1998, 50: 676-681。固定化酶中保护剂的量测定方法：保护剂的添加量与溶液中残留的保护剂的量的差值即为最后固定化酶中保护剂的量。溶液中保护剂的残留量采用高效液相色谱法检测。固定化酶中载体的量测定方法：通过测定固定化时加入载体的水分含量，换算出所加入载体的干重即为最后固定化酶中载体的量。
制备例（固定化脂肪酶制备）
制备例1
向100mL疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法：将氨基酸序列为 NCBI 登录号059952的疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶基因克隆至pA0815 质粒，将质粒表达载体转化至宿主细胞，例如毕赤酵母GS115菌株，诱导表达，然后从宿主细胞分离并纯化疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶。）中加入100g阴离子交换树脂IMAC HP661（罗门哈斯），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，将固体放到通风良好的地方进行自然风干，干燥后得固定化酶A。
制备例2
按重量计，相对于酶液，向100 mL 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入30%丙二醇保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂IMAC HP661（罗门哈斯），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，将固体放到通风良好的地方进行自然风干，干燥后得固定化酶B。
制备例3
向100mL疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入100g阴离子交换树脂IMAC HP661（罗门哈斯），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶C。
制备例4
按重量计，相对于酶液，向100 mL 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入30%丙二醇保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂IMAC HP661（罗门哈斯），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶D。
制备例5
按重量计，相对于酶液，向100 mL 米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶液（40000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法：将氨基酸序列为 NCBI 登录号为A34959 (accession number A34959)的米黑根毛酶脂肪酶基因克隆至pA0815 质粒，将质粒表达载体转化至宿主细胞，例如毕赤酵母GS115菌株，诱导表达，然后从宿主细胞分离并纯化米黑根毛霉脂肪酶）中加入25%山梨醇保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂Amberlite IRA958Cl（罗门哈斯），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶E。
制备例6
按重量计，相对于酶液，向100 mL 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入30%丙二醇保护剂，混合均匀后加入100g大孔吸附树脂Amberlite XAD7HP（罗门哈斯），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶F。
制备例7
按重量计，相对于酶液，向100 mL 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入40%甘油保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂D301FC（安徽三星树脂科技有限公司），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶G。
制备例8
将一定量的南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶（LB2000，凯泰公司）溶解于100 mL 0.02 mol/L pH 7.0磷酸盐缓冲液，使水解活力达到42000U/mL（采用橄榄油乳化法测定），按重量计，相对于酶液，向酶液中加入10%甘露醇保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂Amberlite IRA-900（罗门哈斯），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶H。
制备例9
按重量计，相对于酶液，向100 mL 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入30%乳糖保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂D213FC（安徽三星树脂科技有限公司），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶I。
制备例10
按重量计，相对于酶液，向100 mL 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入30%麦芽糊精（DE值16~20，河南豫中生物科技有限公司）保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂D301FC（安徽三星树脂科技有限公司），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2h，抽滤收集固体，得固定化酶J。
制备例11
将一定量的白地霉(Cryytococcus neoformans)脂肪酶（Amano GC-20，Amano国际酶制剂公司）溶解于100 mL 0.02 mol/L pH 7.0磷酸盐缓冲液，使水解活力达到39000U/mL（采用橄榄油乳化法测定），按重量计，相对于酶液，向酶液中加入30%海藻糖保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂Lewatit-600（德国拜耳朗盛树脂），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶K。
制备例12
按重量计，相对于酶液，向100 mL 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入30%麦芽糖保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂D301FC（安徽三星树脂科技有限公司），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶L。
制备例13
按重量计，相对于酶液，向100 mL 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)脂肪酶液（41000U/mL，采用橄榄油乳化法测定；酶液制备方法同制备例1）中加入30%甘露糖保护剂，混合均匀后加入100g阴离子交换树脂D301FC（安徽三星树脂科技有限公司），气浴摇床120 rpm，25 ℃吸附固定2 h，抽滤收集固体，得固定化酶M。
所制备的固定化脂肪酶各组分的含量如表1所示。
表1 固定化酶各组分含量
实施例1 （固定化脂肪酶用于脱胶脱蜡稻米油脱酸）
将50 g脱胶脱蜡稻米油（酸价19.13 mgKOH/g）和0.7g甘油（稻米油中的脂肪酸与甘油摩尔比为1: 0.45）13000rpm剪切2 min（高速分散剪切机，Fluko，德国）后水浴加热至75 ℃，加入5.1g固定化酶A，于75 ℃、200rpm机械搅拌、4KPa减压下进行稻米油脱酸，每隔2h取样测定产物酸价，并计算酯化率，酯化率=（AV0-AV1）/AV0（其中：AV0为酯化前酸价；AV1为酯化反应后酸价），其它固定化酶考查方式同固定化酶A（对未干燥的酶，其加入量为换算成干重的添加量），结果如表2所示。
表2 固定化酶用于脱胶脱蜡稻米油脱酸的效果
由表2可见，属于本发明范围内的固定化酶D、E、G～M应用到脱胶脱蜡稻米油脱酸中效果非常突出。
实施例2（固定化酶用于稻米油毛油脱酸）
将50g稻米油毛油（酸价18.51 mgKOH/g，含磷量521ppm）和0.5g甘油（稻米油中脂肪酸与甘油摩尔比为1: 0.33）13000rpm剪切2 min（高速分散剪切机，Fluko，德国）后水浴加热至75 ℃，按与实施例1相同的条件反应和检测，结果如表3所示。
表3 固定化酶用于稻米油毛油脱酸的效果
由表3可见，属于本发明范围内的固定化酶D、E、G～M应用于稻米油毛油脱酸也具有非常突出的效果。
实施例4 （固定化酶用于脂肪酸与甘油的酯化）
将23.1g油酸和1.9g甘油（摩尔比1: 0.25）13000rpm剪切2 min（高速分散剪切机，Fluko，德国）后加热至75 ℃（平行合成仪，radleys，英国），加入2.5g固定化酶A，400rpm磁力搅拌，0.2KPa减压下反应，每隔4h取样测定产物酸价并计算酯化率，其它固定化酶考查方式同固定化酶A，结果如表4所示。
表4 固定化酶用于脂肪酸与甘油的酯化效果
由表4可见，属于本发明范围内的固定化酶D、E、G～M应用于纯脂肪酸与甘油的酯化反应中同样具有显著效果。
从以上实施例可以看出，符合本发明的固定化酶酯化效果非常明显，固定化酶D、E、G～M酯化效果虽有差异，但酯化率均在80%以上。固定化酶A不含保护剂，并且固定化后经过了干燥，导致固定化酶酯化效果非常差；固定化酶B虽有保护剂，但其固定完后也经过了干燥，使其酯化效果不如本发明所涉及的固定化酶；固定化酶C虽固定化后未进行干燥，其中不含有保护剂，大大降低了其酯化效果；固定化酶F既含有保护剂固定化后也未进行干燥，但其所用载体为大孔吸附树脂，也未达到本发明所涉及的效果。
Claims (43)
1.一种不需要干燥也不需要任何物质处理，可直接用于酯化反应的固定化脂肪酶，其包含阴离子交换树脂载体、酶蛋白、水分和保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物，
所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以30%～75%的量存在，
所述水分相对于载体干重，按重量计以70%～750%的量存在。
2.根据权利要求1所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以35%～70%的量存在。
3.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以35%～65%的量存在。
4.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以40%～57%的量存在。
5.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于固定化脂肪酶，按重量计以45%～55%的量存在。
6.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以1%～50%的量存在。
7.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以5%～40%的量存在。
8.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以10%～35%的量存在。
9.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以14%～30%的量存在。
10.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以18%～28%的量存在。
11.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂相对于固定化脂肪酶，按重量计以20%～25%的量存在。
12.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以10%～50%的量存在。
13.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以15%～45%的量存在。
14.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以20%～40%的量存在。
15.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以22%～32%的量存在。
16.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述阴离子交换树脂载体相对于固定化脂肪酶，按重量计以24%～30%的量存在。
17.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.1%～2%的量存在。
18.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.2%～1.9%的量存在。
19.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.5%～1.7%的量存在。
20.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.5%～1.5%的量存在。
21.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.7%～1.4%的量存在。
22.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述酶蛋白相对于固定化脂肪酶，按重量计以0.8%～1.2%的量存在。
23.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂是低分子量的多羟基化合物，所述低分子量的多羟基化合物选自分子量小于500的多羟基化合物中的至少一种。
24.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述保护剂选自丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇、乳糖、糊精、麦芽糖、甘露糖中的至少一种。
25.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于载体干重，按重量计以90%～610%的量存在。
26.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于载体干重，按重量计以120%～500%的量存在。
27.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于载体干重，按重量计以140～300%的量存在。
28.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述水分相对于载体干重，按重量计以170%～240%的量存在。
29.根据权利要求1或2所述的固定化脂肪酶，其中所述阴离子交换树脂选自IMACHP661、Amberlite IRA958Cl、Amberlite IRA-400、Amberlite IRA-401、Amberlite IRA-900、BSD-816、D213FC、D213、213FC、D301FC、D301-F、D301-G、D301-FD、BSD-92、BSD-96 、EL-4200Cl、Dowex 1×4、D201GF、Duuolite A-161、Lewatit-600、D290中的至少一种。
30.权利要求1～29任意一项所述的固定化脂肪酶的制备方法，所述方法包括以下步骤：
（1）提供脂肪酶酶液；
（2）将阴离子交换树脂载体加入（1）所提供的酶液中并进行混合；
（3）从步骤（2）所得的混合物中分离得到固定化酶，
在步骤（1）和/或步骤（2）中添加保护剂，所述保护剂是低分子量的多羟基化合物，所述固定化酶不进行干燥处理。
31.根据权利要求30所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述保护剂相对于脂肪酶酶液，按重量计以0.1%～50%的量添加。
32.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述保护剂相对于脂肪酶酶液，按重量计以1%～48%的量添加。
33.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述保护剂相对于脂肪酶酶液，按重量计以10%～40%的量添加。
34.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述保护剂相对于脂肪酶酶液，按重量计以20%～30%的量添加。
35.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述低分子量的多羟基化合物选自分子量小于500的多羟基化合物中的至少一种。
36.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述低分子量的多羟基化合物选自丙二醇、甘油、山梨醇、甘露醇、乳糖、糊精、海藻糖、麦芽糖、甘露糖中的至少一种。
37.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述阴离子交换树脂载体与脂肪酶酶液的重量/体积比为1:20～20:1，其中重量的单位是g，体积的单位是ml。
38.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述阴离子交换树脂载体与脂肪酶酶液的重量/体积比为1:10～10:1，其中重量的单位是g，体积的单位是ml。
39.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述阴离子交换树脂载体与脂肪酶酶液的重量/体积比为1:5～5:1，其中重量的单位是g，体积的单位是ml。
40.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述阴离子交换树脂载体与脂肪酶酶液的重量/体积比为1:2～3:1，其中重量的单位是g，体积的单位是ml。
41.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述阴离子交换树脂载体与脂肪酶酶液的重量/体积比为1:1，其中重量的单位是g，体积的单位是ml。
42.根据权利要求30或31所述的固定化脂肪酶的制备方法，其中所述阴离子交换树脂选自IMAC HP661、Amberlite IRA958Cl、Amberlite IRA-400、Amberlite IRA-401、Amberlite IRA-900、BSD-816、D213FC、D213、213FC、D301FC、D301-F、D301-G、D301-FD、BSD-92、BSD-96 、EL-4200Cl、Dowex 1×4、D201GF、Duuolite A-161、Lewatit-600、D290中的至少一种。
43.一种酯化方法，其特征在于使用权利要求1～29任意一项所述的固定化脂肪酶或通过权利要求30～42任意一项所述的固定化脂肪酶的制备方法制备得到的固定化脂肪酶进行酯化。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410769087.9A CN105754982B (zh) | 2014-12-15 | 2014-12-15 | 固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410769087.9A CN105754982B (zh) | 2014-12-15 | 2014-12-15 | 固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105754982A CN105754982A (zh) | 2016-07-13 |
| CN105754982B true CN105754982B (zh) | 2021-12-07 |
Family
ID=56336209
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410769087.9A Active CN105754982B (zh) | 2014-12-15 | 2014-12-15 | 固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105754982B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108486094A (zh) * | 2018-04-20 | 2018-09-04 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种固定化脂肪酶及其制备方法 |
| EP3839052A1 (de) * | 2019-12-20 | 2021-06-23 | Evonik Operations GmbH | Verfahren zur enzymatischen herstellung von zucker-estern und/oder zuckeralkohol-estern |
| CN112029754B (zh) * | 2020-08-13 | 2021-12-21 | 浙江工业大学 | 一种印迹脂肪酶及其合成蔗糖-6-乙酯的应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU8760898A (en) * | 1997-09-24 | 1999-04-12 | Enzymotec Ltd. | Surfactant-lipase complex immobilized on insoluble matrix |
| KR100985423B1 (ko) * | 2002-07-02 | 2010-10-05 | 카오카부시키가이샤 | 고정화 효소의 제조방법 |
| JP4157734B2 (ja) * | 2002-07-15 | 2008-10-01 | 花王株式会社 | 脂肪酸類の製造法 |
| JP5242230B2 (ja) * | 2008-04-21 | 2013-07-24 | 花王株式会社 | 固定化酵素の製造方法 |
-
2014
- 2014-12-15 CN CN201410769087.9A patent/CN105754982B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105754982A (zh) | 2016-07-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11781161B2 (en) | Enzymatic enrichment of n-3 fatty acids in the form of glycerides | |
| EP2175030B1 (en) | Method for producing diacylglycerol-rich fat and/or oil | |
| JP5586914B2 (ja) | ジアシルグリセロール高含有油脂の製造方法 | |
| US20220282290A1 (en) | Method for Synthesizing Diglyceride | |
| CN105754982B (zh) | 固定化脂肪酶以及固定化脂肪酶的制备方法 | |
| EP1466002A1 (en) | Process for the production of diglycerides | |
| Ghaffari-Moghaddam et al. | Application of response surface methodology in enzymatic synthesis: A review | |
| JP5782130B2 (ja) | ジアシルグリセロール富化な油又は油脂の製造プロセス | |
| JP7365202B2 (ja) | ジアシルグリセロール高含有油脂の製造方法 | |
| JP6904009B2 (ja) | 油脂の製造方法 | |
| CN106867989B (zh) | 固定化酶及其制备方法 | |
| JP6818226B2 (ja) | 油脂の製造方法 | |
| US20130053592A1 (en) | Fatty acids as co-catalysts in preparation of glycerides from ethyl esters | |
| US20120052538A1 (en) | Triglycerides with high content of unsaturated fatty acids | |
| JP6859212B2 (ja) | ジアシルグリセロール高含有油脂の製造方法 | |
| JP6194908B2 (ja) | 油脂の製造方法 | |
| US9296977B2 (en) | Method for producing fatty acid composition | |
| JP3764793B2 (ja) | ジグリセリド類の製造方法 | |
| JP2006136258A (ja) | 固定化酵素の製造方法 | |
| JP5527983B2 (ja) | ドコサヘキサエン酸高含有油脂の製造方法 | |
| WO2006043998A1 (en) | Method of producing diacylglycerides | |
| WO2024030062A1 (en) | Enzymatic process for increasing the sos triglyceride content of a vegetable oil | |
| Goswami | Recent Patents on Lipase Catalyzed Vegetable and Fish Oil Modification | |
| JP2004331607A (ja) | 共役脂肪酸のポリグリセリンエステルおよびその製造方法 | |
| WO2011075802A1 (en) | Production of diacylglycerols by lipase - catalyzed hydrolysis of palm oil |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |