CN105753689B - 胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种从胡麻油中提取纯化α‑亚麻酸的方法，经过皂化、加酸调pH值、萃取、第一次浓缩、冷冻结晶、包合除杂、第二次浓缩、再次萃取和第三次浓缩，最终获得纯度为90%以上的α‑亚麻酸；将皂化反应后的pH值调节到3~4，使γ‑亚麻酸发生立体异构化变化，转变为α‑亚麻酸，接着先冷冻结晶除去饱和脂肪酸与未能造化的脂类，再用硫脲包合法除去不饱和度小的脂肪酸，在经过萃取浓缩得到α‑亚麻酸，本发明所述的提取α‑亚麻酸的方法操作简单，成本低，纯度高，适用于大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及提取纯化α-亚麻酸的方法，尤其涉及一种从胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法。
背景技术
自上个世纪80年代以来 α-亚麻酸即被公认为人类有效的保健食品之一，人体在增加α-亚麻酸这一ω-3系多不饱和脂肪酸成分后，发现其能有效降解体内过量的饱和脂肪酸及血褐素物(即沉积物)，降解低密度脂蛋白胆固醇、高甘油三酯等人体有害病变物，增加高密度脂蛋白成分的含量，有效防治高血脂、脂肪肝、心肌梗塞及高血压的发生，抑制血栓形成及化解血栓、修复血栓疤痕、保证血管所需血氧，恢复血管弹性，达到软化血管的目的；促进胰岛素分泌，延长降糖效果，抑制并发症；抑制肿瘤的发生和转移；具有促进神经系统发育、提高记忆力和视网膜反射能力、预防老年痴呆症、预防癌症和抗过敏症等功效。
日常膳食中的食用油，如菜籽油、豆油、葵花子油、玉米油等食用油，是不饱和脂肪酸的主要来源，但α-亚麻酸的含量很少。只有亚麻籽、紫苏籽、火麻仁、核桃等极少数的食物中含有丰富的α-亚麻酸及其衍生物，紫苏子油和亚麻籽油中α-亚麻酸含量高达50%以上，核桃油、大豆油、菜籽油等中α-亚麻酸含量一般为10%，而陆地动物油中α-亚麻酸含量一般不足3%。
由于α-亚麻酸具有诸多独特的生物活性，且人类普遍缺乏，已引起世界各国的高度重视，以正己烷为溶剂的索氏提取法和螺旋压榨法进行对比，结果表明，压榨法收油率低，索氏提取的亚麻籽油含有少量的溶剂残留，精馏、尿素包合法是目前工业上常用的多价不饱和脂肪酸分离纯化方法，它们虽然具有投资少、工艺简单等优点，但采用这些方法难以获得高纯度的多价不饱和脂肪酸，且产品收率低，而采用分子蒸馏法、吸附分离法、超临界流体萃取法分离纯化多价不饱和脂肪酸得方法仅限于实验室条件不适合大规模生产。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种适合于大规模生产的从胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，产和纯度都高的新方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，包括以下步骤：
（1）皂化；将蒸馏水加入到碱中，加热升温至50℃~80℃后，加入95%的乙醇或者95%的甲醇，待温度稳定后，少量多次加入胡麻油，边加边搅拌至均匀混匀，继续恒温反应，得到皂化混合物；
（2）加酸调pH；将皂化混合物的pH用盐酸调节到3~4，恒温反应，得到酸性混合物；
（3）萃取；向酸性混合物中加入水相和有机相进行萃取，所述水相为饱和食盐水，所述有机相是乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸甲酯或石油醚中的至少一种，得到萃取后的有机相；
（4）第一次浓缩； 将萃取后的有机相浓缩，得到浓缩的有机相；
（5）冷冻结晶；将浓缩的有机相加入到冷冻溶剂中，冷冻溶剂是乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、丙酮、环己酮或苯乙酮中的至少一种溶液中，在低温条件下进行结晶，低温冷冻结晶后的固液混合物在固液分离装置中将固体杂质去除，得到含有α-亚麻酸的液体；
（6）包合除杂；将包合剂完全溶解于95%乙醇或95%甲醇溶液后，加入含有α-亚麻酸的液体，所述包合剂为尿素或硫脲，均匀搅拌60~100分钟后转移到低温环境中进行梯度降温重结晶，重结晶后用抽滤装置将晶体与母液分离，得到母液；
（7）第二次浓缩；将母液浓缩，得到浓缩的母液；
（8）再次萃取；向浓缩的母液中加入水相和有机相进行萃取，所述水相为饱和食盐水，所述有机相是乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸甲酯或石油醚中的至少一种，得到再次萃取后的有机相；
（9）第三次浓缩；将再次萃取后的有机相浓缩，得到α-亚麻酸。
最优的，所述步骤（1）皂化的全部过程保持在超声波条件下，待温度稳定在75℃后加入胡麻油，全部胡麻油加入后 在75℃的温度下恒温搅拌反应20~100分钟，所述碱是NaOH或KOH中的至少一种。
最优的，所述步骤（1）皂化中95%的乙醇或者95%的甲醇、蒸馏水、胡麻油和碱的比例为6ml：1ml：10ml：1.2g~10ml：2ml：10ml：1.8g。
最优的，所述步骤（2）加酸调pH是用6mol/L盐酸调节pH，恒温反应30~50min。
最优的，所述步骤（3）萃取和步骤（8）再次萃取中所述水相饱和食盐水的加入量为参与反应的胡麻油体积的2~3倍，所述的有机相的加入量为参与反应的胡麻油体积的2~3倍，所述的有机相是石油醚， 所述步骤（3）萃取和步骤（8）再次萃取均重复3次。
最优的，所述步骤（4）浓缩、步骤（7）第二次浓缩和步骤（9）第三次浓缩都是在减压蒸馏装置中进行浓缩。
最优的，所述步骤（5）冷冻结晶中冷冻溶剂是乙醚，是在-10℃~-35℃的温度下缓慢结晶。
最优的，所述步骤（6）包合除杂中包合剂为硫脲，所述硫脲、含有α-亚麻酸的液体和95%乙醇或95%甲醇的比例为1g：1 ml：8ml~1g：3 ml：12ml。
最优的，所述步骤（6）包合除杂中包合剂为尿素，所述尿素、含有α-亚麻酸的液体和95%乙醇或95%甲醇的比例为2g：1 ml：8ml~2g：3 ml：12ml。
最优的，所述步骤（6）包合除杂中转移到低温环境中进行梯度降温重结晶过称为：由5℃降温至0℃后保持20~40分钟，由0℃降温至-5℃后保持20~40分钟，由-5℃降温至-10℃后保持20~40分钟，由-10℃降温至-15℃后保持20~40 分钟，温度恒定在-15℃后保持6小时。
胡麻油的主要成分65%以上为亚麻酸甘油酯，包括α-亚麻酸甘油酯和γ-亚麻酸甘油酯，两者是同分异构体，传统的单一冷冻结晶法只是将饱和脂肪酸、未皂化的脂类与不饱和脂肪酸分开，但是在温度为-50℃时，不饱和脂肪酸的物理存在形式也是固态，因此冷冻结晶法不能将不饱和度不同的脂肪酸分开，制得的α-亚麻酸纯度低。传统单一的尿素和硫脲包合法，需要反复进行3~4次包合才能得到纯度较高的α-亚麻酸，操作复杂，成本高，而且包合次数越多，最终产品中尿素或硫脲的含量越多，α-亚麻酸的纯度越不能满足要求。
因此，本发明提供了一种适用于大规模生产的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，首先将皂化反应后的pH值调节到3~4，使γ-亚麻酸发生立体异构化变化，转变为α-亚麻酸，接着先冷冻结晶除去饱和脂肪酸与未能造化的脂类，再用硫脲包合法除去不饱和度小的脂肪酸，操作简单，成本低，能快捷高效的得到纯度为90%以上的α-亚麻酸。
附图说明
图1 为α-亚麻酸标准样品液相图。
图2为皂化得到的皂化混合物样品的液相谱图。
图3为冷冻结晶得到粗结晶产物样品的液相谱图。
图4 为包合除杂得到除杂后的产物样品的液相谱图。
图5为α-亚麻酸标准样品的核磁氢谱。
图6为本发明所述方法最终获得的α-亚麻酸样品的核磁氢谱。
图7为α-亚麻酸标准样品的核磁碳谱。
图8为本发明所述方法最终获得的α-亚麻酸样品的核磁碳谱。
具体实施方式
接下来对发明的技术方案做进一步的详细阐述。
实施例1：
（1）皂化；将蒸馏水加入到碱中，加热升温至50℃后，加入95%的乙醇，待温度稳定后，少量多次加入胡麻油，边加边搅拌至均匀混匀，继续恒温反应，得到皂化混合物；
（2）加酸调pH；将皂化混合物的pH用6mol/L盐酸调节到3~4，恒温反应，得到酸性混合物；
（3）萃取；向酸性混合物中加入水相和有机相进行萃取，所述水相为饱和食盐水，所述有机相是乙醚，得到萃取后的有机相；
（4）第一次浓缩； 将萃取后的有机相浓缩，得到浓缩的有机相；
（5）冷冻结晶；将浓缩的有机相加入到冷冻溶剂中，冷冻溶剂是乙醚，在低温条件下进行结晶，低温冷冻结晶后的固液混合物在固液分离装置中将固体杂质去除，得到含有α-亚麻酸的液体；
（6）包合除杂；将包合剂完全溶解于95%乙醇溶液后，加入含有α-亚麻酸的液体，所述包合剂为尿素，均匀搅拌60分钟后转移到低温环境中进行梯度降温重结晶，重结晶后用抽滤装置将晶体与母液分离，得到母液；
（7）第二次浓缩；将母液浓缩，得到浓缩的母液；
（8）再次萃取；向浓缩的母液中加入水相和有机相进行萃取，所述水相为饱和食盐水，所述有机相是乙醚，得到再次萃取后的有机相；
（9）第三次浓缩；将再次萃取后的有机相浓缩，得到α-亚麻酸。
实施例2
胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，包括以下步骤：
（1）皂化；皂化的全部过程保持在超声波条件下，将70L蒸馏水加入到70Kg NaOH粉末中，加热升温至75℃后，待NaOH完全溶解后加入95%的乙醇400L，待温度稳定在75℃后，每次加入50L的方式分10次加入胡麻油一共500L，边加边搅拌至均匀混匀，继续75℃恒温反应90分钟，得到皂化混合物；
（2）加酸调pH；将皂化混合物的pH用6mol/L盐酸调节到3~4，75℃恒温反应40分钟，得到酸性混合物；
（3）萃取；向酸性混合物中加入水相和有机相进行萃取，所述水相为饱和食盐水，所述有机相是石油醚，所述水相饱和食盐水的加入量为参与反应的胡麻油体积的2倍，也就是1000L饱和食盐水，所述的有机相的加入量为参与反应的胡麻油体积的2倍，也就是1000L石油醚，重复萃取3次后得到萃取后的有机相；
（4）第一次浓缩； 将萃取后的有机相再减压蒸馏装置中进行浓缩，得到浓缩的有机相；
（5）冷冻结晶；将浓缩的有机相加入到冷冻的乙醚溶液中，在-25℃的温度下缓慢结晶，低温冷冻结晶后的固液混合物在固液分离装置中将固体杂质去除，得到含有α-亚麻酸的液体；冷冻结晶法的原理在于，在低温环境中，饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸的物理存在形式不同，油脂类与不饱和脂肪酸类的物理存在形式也不同，饱和脂肪酸与油脂在-10~-30℃这个范围内，呈固态存在；而不饱和脂肪酸则以液态存在，故冷冻结晶法可将饱和脂肪酸、未皂化的脂类与不饱和脂肪酸分开。
（6）包合除杂；将包合剂硫脲400kg完全溶解于95%乙醇溶液4000L中后，加热升温至85℃后加入含有α-亚麻酸的液体400L，均匀搅拌90分钟后转移到低温环境中进行梯度降温重结晶，也就是温度由5℃降温至0℃后保持5~20分钟，由0℃降温至-5℃后保持5~20分钟，由-5℃降温至-10℃后保持5~20分钟，由-10℃降温至-15℃后保持5~20分钟，温度恒定在-15℃后保持6小时，重结晶后用抽滤装置将晶体与母液分离，得到母液；包合原理在于，饱和脂肪酸或饱和度小的脂肪酸分子在硫脲的溶液中，，由于硫脲分子间存在氢键作用力，当硫脲进行重结晶时，这些分子就嵌入到硫脲分子由氢键作用而形成的结构大的分子间空隙中，结晶成为固体被硫脲包合住，而不饱和度高的脂肪酸继续留在溶液中，从而将不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸分离。
（7）第二次浓缩；将母液在减压蒸馏装置中进行浓缩，得到浓缩的母液；
（8）再次萃取；向浓缩的母液中加入水相和有机相进行萃取，所述水相为饱和食盐水，所述有机相是石油醚，所述水相饱和食盐水的加入量为参与反应的胡麻油体积的2倍，也就是1000L饱和食盐水，所述的有机相的加入量为参与反应的胡麻油体积的2倍，也就是1000L石油醚，重复再次萃取3次后，得到再次萃取后的有机相；
（9）第三次浓缩；将再次萃取后的有机相在减压蒸馏装置中进行浓缩，得到α-亚麻酸。
实施例3：
在实施例1步骤（1）皂化中，加热升温至50℃用加热升温至80℃替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例4：
在实施例1步骤（1）皂化中，所用的95%的乙醇用等体积的95%的甲醇替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例5：
在实施例1步骤（3）萃取中，所用的乙醚用等体积的甲基叔丁基醚替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例6：
在实施例1步骤（3）萃取中，所用的乙醚用等体积的四氢呋喃替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例7：
在实施例1步骤（3）萃取中，所用的乙醚用等体积的乙酸乙酯替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例8：
在实施例1步骤（3）萃取中，所用的乙醚用等体积的乙酸甲酯替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例9：
在实施例1步骤（5）冷冻结晶中，所用的冷冻溶剂乙醚用等体积的甲基叔丁基醚替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例10：
在实施例1步骤（5）冷冻结晶中，所用的冷冻溶剂乙醚用等体积的四氢呋喃替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例11：
在实施例1步骤（5）冷冻结晶中，所用的冷冻溶剂乙醚用等体积的丙酮替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例12：
在实施例1步骤（5）冷冻结晶中，所用的冷冻溶剂乙醚用等体积的环己酮替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例13：
在实施例1步骤（5）冷冻结晶中，所用的冷冻溶剂乙醚用等体积的苯乙酮替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例14：
在实施例1 步骤（6）包合除杂中，所用的95%乙醇溶液用等体积的95%甲醇溶液替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例15：
在实施例1步骤（6）包合除杂中，均匀搅拌60分钟用均匀搅拌100分钟替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例16：
在实施例1步骤（8）再次萃取中，所用的乙醚用等体积的甲基叔丁基醚替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例17：
在实施例1步骤（8）再次萃取中，所用的乙醚用等体积的四氢呋喃替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例18：
在实施例1步骤（8）再次萃取中，所用的乙醚用等体积的乙酸乙酯替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例19：
在实施例1步骤（8）再次萃取中，所用的乙醚用等体积的乙酸甲酯替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例20：
在实施例2步骤（1）皂化中，所用的NaOH粉末用等质量的KOH粉末替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例21：
在实施例2步骤（1）皂化中，所述的75℃恒温反应90分钟用75℃恒温反应50分钟替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例22：
在实施例2步骤（1）皂化中，所述的75℃恒温反应90分钟用75℃恒温反应100分钟替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例23：
在实施例1或者实施例2的步骤（1）皂化中，95%的乙醇或者95%的甲醇、蒸馏水、胡麻油和碱的比例为6ml：1ml：10ml：1.2g，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例24：
在实施例1或者实施例2的步骤（1）皂化中，95%的乙醇或者95%的甲醇、蒸馏水、胡麻油和碱的比例为10ml：2ml：10ml：1.8g，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例25：
在实施例1或者实施例2的步骤（1）皂化中，95%的乙醇或者95%的甲醇、蒸馏水、胡麻油和碱的比例为7.5ml：1ml：10ml：1.4g，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例26：
在实施例1或者实施例2的步骤（3）萃取或者步骤（8）再次萃取中，所述水相饱和食盐水的加入量为参与反应的胡麻油体积的3倍，所述的有机相的加入量为参与反应的胡麻油体积的3倍，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例27：
在实施例2的步骤（5）冷冻结晶中，在-25℃的温度下缓慢结晶用-10℃的温度下缓慢结晶替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例27：
在实施例2的步骤（5）冷冻结晶中，在-25℃的温度下缓慢结晶用-35℃的温度下缓慢结晶替换，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例28：
在实施例1或者实施例2的步骤（1）皂化中，尿素或硫脲、含有α-亚麻酸的液体和95%乙醇或95%甲醇的比例为1g：1 ml：8ml，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
实施例29：
在实施例1或者实施例2的步骤（1）皂化中，尿素或硫脲、含有α-亚麻酸的液体和95%乙醇或95%甲醇的比例为1g：3 ml：12ml，该步骤的其他步骤与相应的实施例相同，其他步骤与相应的实施例相同，最终得到α-亚麻酸。
以上实施例均是发明人进行了大量实验，反复确认步骤顺序还有关键点后确定的。具体方法是先将胡麻油的分子质量按α-亚麻酸甘油酯的分子质量进行粗算，按照皂化反应的方程式计算NaOH与胡麻油的摩尔比，以10mL胡麻油为标准，分别以NaOH，过量，少量，适中进行试验，最终得出当胡麻油为10mL时，NaOH加入量为1.4g时，皂化反应产率最高，液相纯度最好，95%乙醇与蒸馏水的最佳加入比例也是经单一因素法试验得出，因此最后得出，皂化反应的最佳比例为NaOH（g）：胡麻油（mL）：95%乙醇（mL）：蒸馏水（mL）为1.4:10:7.5:1但是比例范围又可为1.2：10:6:1至1.8：10:10:2。，以下是部分试验过程以及结果：
1、确定步骤（1）皂化中95%乙醇的加入量。
步骤（1）皂化中选用95%乙醇溶液和NaOH粉末，在蒸馏水为1mL、胡麻油的量、NaOH粉末的量、温度、时间等条件相同的情况下，改变95%乙醇溶液的加入量，经过实施例2所述的步骤（1） ~步骤（5），得到冷冻结晶后含有α-亚麻酸的液体。
参照第一次浓缩后的产率、冷冻结晶后的产率、冷冻结晶后液相纯度和步骤（5）冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率这些数据，确定95%乙醇溶液的加入量。
步骤（4）第一次浓缩得到的浓缩的有机相占参与反应胡麻油量的百分比，即第一次浓缩后的产率=(浓缩的有机相的量/参与反应胡麻油的量)*100%；步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体占参与反应胡麻油量的百分比，即冷冻结晶后的产率=（冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的量/参与反应胡麻油的量)*100%；采用液相色谱仪测量步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的纯度，即冷冻结晶后液相纯度=（冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的量/冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的量)*100%；因为胡麻油中最多含有80%的不饱和脂肪酸，所以计算步骤（5）冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率=（冷冻结晶后的产率/80%）*冷冻结晶后液相纯度。
相关的部分试验结果如下表所示：
表1 95%乙醇溶液的加入量对冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的最终产率的影响
| 序号 | 胡麻油(mL) | 95%乙醇(mL) | NaOH(g) | 温度(℃) | 时间(min) | 第一次浓缩后的产率(%) | 冷冻结晶后的产率(%) | 冷冻结晶后液相纯度(%) | 冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率(%) |
| 81 | 10 | 10 | 1.6 | 75 | 90 | 77.90 | 64.58 | 78.24 | 75.11 |
| 82 | 10 | 20 | 1.6 | 75 | 90 | 72.36 | 63.40 | 76.24 | 68.96 |
| 83 | 10 | 25 | 1.6 | 75 | 90 | 83.10 | 64.61 | 51.27 | 42.15 |
| 84 | 10 | 7.5 | 1.6 | 75 | 90 | 83.57 | 74.42 | 83.98 | 78.10 |
从表1可以看出，序号81和84冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率比别的序号的高，确定步骤（1）皂化中95%的乙醇的加入量。
2、确定步骤（1）皂化中胡麻油的加入量。
步骤（1）皂化中选用95%乙醇溶液和NaOH粉末，在蒸馏水为1mL、95%乙醇溶液的量、NaOH粉末的量、温度、时间等条件相同的情况下，改变胡麻油的加入量，经过实施例2所述的步骤（1） ~步骤（5），得到冷冻结晶后含有α-亚麻酸的液体。
参照第一次浓缩后的产率、冷冻结晶后的产率、冷冻结晶后液相纯度和步骤（5）冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率这些数据，确定胡麻油的加入量。
步骤（4）第一次浓缩得到的浓缩的有机相占参与反应胡麻油量的百分比，即第一次浓缩后的产率=(浓缩的有机相的量/参与反应胡麻油的量)*100%；步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体占参与反应胡麻油量的百分比，即冷冻结晶后的产率=（冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的量/参与反应胡麻油的量)*100%；采用液相色谱仪测量步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的纯度，即冷冻结晶后液相纯度=（冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的量/冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的量)*100%；因为胡麻油中最多含有80%的不饱和脂肪酸，所以计算步骤（5）冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率=（冷冻结晶后的产率/80%）*冷冻结晶后液相纯度。
相关的部分试验结果如下表所示：
表2 胡麻油的加入量对冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的最终产率的影响
| 序号 | 胡麻油(mL) | 95%乙醇(mL) | NaOH(g) | 温度(℃) | 时间(min) | 第一次浓缩后的产率(%) | 冷冻结晶后的产率(%) | 冷冻结晶后液相纯度(%) | 冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率(%) |
| 811 | 10 | 7.5 | 1.6 | 75 | 90 | 88.31 | 67.23 | 74.98 | 63.10 |
| 812 | 12 | 7.5 | 1.6 | 75 | 90 | 91.05 | 60.94 | 74.30 | 56.60 |
| 851 | 14 | 7.5 | 1.6 | 75 | 90 | 83.41 | 66.81 | 73.58 | 61.57 |
从表2可以看出，序号811冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率比别的序号的高，确定步骤（1）皂化中胡麻油的加入量。
3、确定步骤（1）皂化中NaOH的加入量。
步骤（1）皂化中选用95%乙醇溶液和NaOH粉末，在蒸馏水为1mL、95%乙醇溶液的量、胡麻油的量、温度、时间等条件相同的情况下，改变NaOH粉末的加入量，经过实施例2所述的步骤（1） ~步骤（5），得到冷冻结晶后含有α-亚麻酸的液体。
参照第一次浓缩后的产率、冷冻结晶后的产率、冷冻结晶后液相纯度和步骤（5）冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率这些数据，确定NaOH的加入量。
步骤（4）第一次浓缩得到的浓缩的有机相占参与反应胡麻油量的百分比，即第一次浓缩后的产率=(浓缩的有机相的量/参与反应胡麻油的量)*100%；步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体占参与反应胡麻油量的百分比，即冷冻结晶后的产率=（冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的量/参与反应胡麻油的量)*100%；采用液相色谱仪测量步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的纯度，即冷冻结晶后液相纯度=（冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的量/冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的量)*100%；因为胡麻油中最多含有80%的不饱和脂肪酸，所以计算步骤（5）冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率=（冷冻结晶后的产率/80%）*冷冻结晶后液相纯度。
相关的部分试验结果如下表所示：
表3 NaOH粉末的加入量对冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的最终产率的影响
| 序号 | 胡麻油(mL) | 95%乙醇(mL) | NaOH(g) | 温度(℃) | 时间(min) | 第一次浓缩后的产率(%) | 冷冻结晶后的产率(%) | 冷冻结晶后液相纯度(%) | 冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率(%) |
| 811 | 10 | 7.5 | 1.6 | 75 | 90 | 88.31 | 67.23 | 74,98 | 63.01 |
| 832 | 10 | 7.5 | 1.4 | 75 | 90 | 92.20 | 83.73 | 75.34 | 78.85 |
| 833 | 10 | 7.5 | 1.8 | 75 | 90 | 79.11 | 64.64 | 78.72 | 63.61 |
| 834 | 10 | 7.5 | 1.2 | 75 | 90 | 83.65 | 67.52 | 76.90 | 64.90 |
从表3可以看出，序号832冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率比别的序号的高，确定步骤（1）皂化中NaOH粉末的加入量。
4、确定步骤（1）皂化的反应温度。
步骤（1）皂化中选用95%乙醇溶液和NaOH粉末，在蒸馏水为1mL、95%乙醇溶液的量、胡麻油的量、NaOH粉末的量、时间等条件相同的情况下，改变反应温度，经过实施例2所述的步骤（1） ~步骤（5），得到冷冻结晶后含有α-亚麻酸的液体。
参照第一次浓缩后的产率、冷冻结晶后的产率、冷冻结晶后液相纯度和步骤（5）冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率这些数据，确定最佳的反应温度。
步骤（4）第一次浓缩得到的浓缩的有机相占参与反应胡麻油量的百分比，即第一次浓缩后的产率=(浓缩的有机相的量/参与反应胡麻油的量)*100%；步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体占参与反应胡麻油量的百分比，即冷冻结晶后的产率=（冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的量/参与反应胡麻油的量)*100%；采用液相色谱仪测量步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的纯度，即冷冻结晶后液相纯度=（冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的量/冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的量)*100%；因为胡麻油中最多含有80%的不饱和脂肪酸，所以计算步骤（5）冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率=（冷冻结晶后的产率/80%）*冷冻结晶后液相纯度。
相关的部分试验结果如下表所示：
表4 皂化反应温度对冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体中α-亚麻酸的最终产率的影响
| 序号 | 胡麻油(mL) | 95%乙醇(mL) | NaOH(g) | 温度(℃) | 时间(min) | 第一次浓缩后的产率(%) | 冷冻结晶后的产率(%) | 冷冻结晶后液相纯度(%) | 冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率(%) |
| 850 | 10 | 7.5 | 1.4 | 50 | 90 | 81.67 | 72.72 | 78.24 | 71.12 |
| 851 | 10 | 7.5 | 1.4 | 65 | 90 | 81.48 | 72.69 | 76.24 | 69.27 |
| 852 | 10 | 7.5 | 1.4 | 75 | 90 | 92.20 | 83.73 | 75.34 | 78.85 |
| 853 | 10 | 7.5 | 1.4 | 85 | 90 | 81.00 | 66.80 | 83.98 | 71.12 |
从表4可以看出，序号852冷冻结晶得到的α-亚麻酸的最终产率比别的序号的高，确定步骤（1）皂化的反应温度。
综上所述，皂化反应之所以将无水乙醇由95%乙醇代替，一方面是因为95%乙醇价格更便宜，对胡麻油的稀释作用在加热搅拌的环境中与无水乙醇是一样的，另一方面是当反应放大实验时，由于加入的碱的量加大，95%乙醇中的水也起到对碱的溶解作用，使碱溶解的更迅速，升温快，缩短碱溶解与升温的时间。
本发明的皂化反应采用的是一锅法，将皂化，调节pH连续进行后，最后才进行分液萃取，pH值调节至3~4，是因为α-亚麻酸和γ-亚麻酸是两种同分异构体，在碱性条件下，α-亚麻酸很容易发生异构化变化，变成γ-亚麻酸，然而在酸性适当的情况下，γ-亚麻酸又可异构化为α-亚麻酸，但是酸性太强，又影响不饱和双键的稳定性，将实验研究得出，pH值调节至3~4最为合适。使用饱和食盐水萃取效果好，相比蒸馏水，不会发生乳化现象，有机相与无机相分层速度快，缩短实验后处理时间。
5、在步骤（6）包合除杂中使用硫脲作为包合剂的情况下确定步骤（6）包合除杂中95%乙醇的加入量。
步骤（6）包合除杂中选用95%乙醇溶液和硫脲，在加入步骤（5）冷冻结晶得到含有α-亚麻酸的液体的量、硫脲、温度、时间等条件相同的情况下，改变95%乙醇溶液的加入量，经过实施例2所述的步骤（6） ~步骤（9），得到α-亚麻酸。之所以用95%乙醇的原因是，硫脲在无水乙醇中的溶解度并不好，影响包合除杂效果。
参照第三次浓缩后的产率、第三次浓缩后液相纯度和步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率这些数据，确定95%乙醇溶液的加入量。
步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸占步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的百分比，即第三次浓缩后的产率=(第三次浓缩得到的α-亚麻酸的量/冷冻结晶得到含有α-亚麻酸的液体的量)*100%；采用液相色谱仪测量步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的纯度，即第三次浓缩后液相纯度=（第三次浓缩得到的α-亚麻酸中α-亚麻酸的量/第三次浓缩得到的α-亚麻酸的量)*100%；因为胡麻油中最多含有80%的不饱和脂肪酸，所以计算步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率=（第三次浓缩后的产率/80%）*第三次浓缩后液相纯度。
相关的部分试验结果如下表所示：
表5 硫脲作为包合剂时包合除杂中95%乙醇溶液的加入量对第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率的影响
| 序号 | 冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体(g) | 95%乙醇(mL) | 硫脲(g) | 温度(℃) | 反应时间(min) | 第三次浓缩后的产率(%) | 第三次浓缩后液相纯度(%) | 第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率(%) |
| 941 | 6 | 60 | 6 | 85 | 90 | 80.97 | 81.62 | 82.60 |
| 951 | 6 | 75 | 6 | 85 | 90 | 75.23 | 77.10 | 72.50 |
| 961 | 6 | 80 | 6 | 85 | 90 | 64.88 | 71.44 | 72.50 |
| 971 | 6 | 85 | 6 | 85 | 90 | 73.15 | 83.90 | 76.72 |
从表5可以看出，序号941第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率比别的序号的高，在步骤（6）包合除杂中使用硫脲作为包合剂的情况下确定步骤（6）包合除杂中95%乙醇的加入量。
6、在步骤（6）包合除杂中使用硫脲作为包合剂的情况下确定步骤（6）包合除杂中含有α-亚麻酸的液体的加入量。
步骤（6）包合除杂中选用95%乙醇溶液和硫脲，在加入步骤（5）冷冻结晶得到含有95%乙醇溶液的量、硫脲、温度、时间等条件相同的情况下，改变含有α-亚麻酸的液体的加入量，经过实施例2所述的步骤（6） ~步骤（9），得到α-亚麻酸。
参照第三次浓缩后的产率、第三次浓缩后液相纯度和步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率这些数据，确定含有α-亚麻酸的液体的加入量。
步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸占步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的百分比，即第三次浓缩后的产率=(第三次浓缩得到的α-亚麻酸的量/冷冻结晶得到含有α-亚麻酸的液体的量)*100%；采用液相色谱仪测量步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的纯度，即第三次浓缩后液相纯度=（第三次浓缩得到的α-亚麻酸中α-亚麻酸的量/第三次浓缩得到的α-亚麻酸的量)*100%；因为胡麻油中最多含有80%的不饱和脂肪酸，所以计算步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率=（第三次浓缩后的产率/80%）*第三次浓缩后液相纯度。
相关的部分试验结果如下表所示：
表6 硫脲作为包合剂时包合除杂中含有α-亚麻酸的液体的加入量对第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率的影响
| 序号 | 冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体(g) | 95%乙醇(mL) | 硫脲(g) | 温度(℃) | 反应时间(min) | 第三次浓缩后的产率(%) | 第三次浓缩后液相纯度(%) | 第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率(%) |
| 941 | 6 | 60 | 6 | 85 | 90 | 80.97 | 81.62 | 82.60 |
| 866 | 12 | 60 | 6 | 85 | 90 | 79.75 | 75.24 | 75.00 |
| 1014 | 9 | 60 | 6 | 85 | 90 | 80.66 | 81.02 | 81.69 |
| 1013 | 15 | 60 | 6 | 85 | 90 | 69.59 | 80.00 | 69.59 |
| 1015 | 4 | 60 | 6 | 85 | 90 | 69.59 | 75.95 | 66.04 |
从表6可以看出，序号1014第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率比别的序号的高，在步骤（6）包合除杂中使用硫脲作为包合剂的情况下确定步骤（6）包合除杂中含有α-亚麻酸的液体的加入量。
7、在步骤（6）包合除杂中使用尿素作为包合剂的情况下确定步骤（6）包合除杂中尿素的加入量。
步骤（6）包合除杂中选用95%乙醇溶液和尿素，在加入步骤（5）冷冻结晶得到含有95%乙醇溶液的量、含有α-亚麻酸的液体的量、温度、时间等条件相同的情况下，改变尿素的加入量，经过实施例2所述的步骤（6） ~步骤（9），得到α-亚麻酸。
参照第三次浓缩后的产率、第三次浓缩后液相纯度和步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率这些数据，确定尿素的加入量。
步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸占步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的百分比，即第三次浓缩后的产率=(第三次浓缩得到的α-亚麻酸的量/冷冻结晶得到含有α-亚麻酸的液体的量)*100%；采用液相色谱仪测量步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的纯度，即第三次浓缩后液相纯度=（第三次浓缩得到的α-亚麻酸中α-亚麻酸的量/第三次浓缩得到的α-亚麻酸的量)*100%；因为胡麻油中最多含有80%的不饱和脂肪酸，所以计算步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率=（第三次浓缩后的产率/80%）*第三次浓缩后液相纯度。
相关的部分试验结果如下表所示：
表7 包合除杂中尿素的加入量对第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率的影响
| 序号 | 冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体(g) | 95%乙醇(mL) | 尿素(g) | 温度(℃) | 反应时间(min) | 第三次浓缩后的产率(%) | 第三次浓缩后液相纯度(%) | 第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率(%) |
| 105 | 6 | 72 | 6 | 75 | 90 | 54.11 | 90.01 | 60.88 |
| 107 | 6 | 72 | 12 | 75 | 90 | 75.71 | 84.70 | 80.16 |
| 108 | 6 | 72 | 18 | 75 | 90 | 10.74 | 87.61 | 11.76 |
| 120 | 6 | 72 | 15 | 75 | 90 | 30.92 | 89.60 | 34.63 |
从表7可以看出，序号107第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率比别的序号的高，在步骤（6）包合除杂中使用尿素作为包合剂的情况下确定步骤（6）包合除杂中尿素的加入量。
8、在步骤（6）包合除杂中使用尿素作为包合剂的情况下确定步骤（6）包合除杂中含有α-亚麻酸的液体的加入量。
步骤（6）包合除杂中选用95%乙醇溶液和硫脲，在加入步骤（5）冷冻结晶得到含有95%乙醇溶液的量、尿素、温度、时间等条件相同的情况下，改变含有α-亚麻酸的液体的加入量，经过实施例2所述的步骤（6） ~步骤（9），得到α-亚麻酸。
参照第三次浓缩后的产率、第三次浓缩后液相纯度和步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率这些数据，确定含有α-亚麻酸的液体的加入量。
步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸占步骤（5）冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体的百分比，即第三次浓缩后的产率=(第三次浓缩得到的α-亚麻酸的量/冷冻结晶得到含有α-亚麻酸的液体的量)*100%；采用液相色谱仪测量步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的纯度，即第三次浓缩后液相纯度=（第三次浓缩得到的α-亚麻酸中α-亚麻酸的量/第三次浓缩得到的α-亚麻酸的量)*100%；因为胡麻油中最多含有80%的不饱和脂肪酸，所以计算步骤（9）第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率=（第三次浓缩后的产率/80%）*第三次浓缩后液相纯度。
相关的部分试验结果如下表所示：
表8 尿素作为包合剂时包合除杂中含有α-亚麻酸的液体的加入量对第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率的影响
| 序号 | 冷冻结晶得到的含有α-亚麻酸的液体(g) | 95%乙醇(mL) | 尿素(g) | 温度(℃) | 反应时间(min) | 第三次浓缩后的产率(%) | 第三次浓缩后液相纯度(%) | 第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率(%) |
| 107 | 6 | 72 | 12 | 75 | 90 | 75.71 | 84.70 | 80.16 |
| 111 | 9 | 72 | 12 | 75 | 90 | 55.64 | 84.19 | 58.55 |
| 112 | 12 | 72 | 12 | 75 | 90 | 65.67 | 83.12 | 68.23 |
从表8可以看出，序号107第三次浓缩得到的α-亚麻酸的最终产率比别的序号的高，在步骤（6）包合除杂中使用尿素作为包合剂的情况下确定步骤（6）包合除杂中含有α-亚麻酸的液体的加入量。
确定了所有材料的最有加入比例之后，确定了本发明的实验方案，进行放大实验得到了α-亚麻酸，检验最终产物α-亚麻酸的纯度还有分子结构，进行了以下实验。
将提取过程中步骤（1）皂化得到的皂化混合物样品的液相谱图、步骤（5）冷冻结晶得到粗结晶产物样品的液相谱图、步骤（6）包合除杂得到除杂后的产物样品的液相谱图与α-亚麻酸标准样品的液相谱图进行对比，能看出来本发明一步步将α-亚麻酸纯化的过程，最终得到了纯度为90%以上的α-亚麻酸。请同时参看液相谱图1至4 ，由图1~图4可以看出来，以α-亚麻酸标准样品的α-亚麻酸纯度为100%，皂化得到的皂化混合物样品的α-亚麻酸纯度为52.35%，冷冻结晶得到粗结晶产物样品的α-亚麻酸纯度为76.24%，包合除杂得到除杂后的产物样品的α-亚麻酸纯度为95.92%；本发明最终得到的α-亚麻酸纯度很高，同时杂质残存很少，工艺简单，适用于大规模工业化生产，是上好的保健食品原料。
为了知晓本发明获得的α-亚麻酸的分子结构，将α-亚麻酸标准样品和本发明所述方法最终获得的α-亚麻酸样品做核磁图谱，请同时参看图5至图8 ，可以看出，本发明所述方法最终获得的α-亚麻酸样品的核磁氢谱和α-亚麻酸标准样品的核磁氢谱一致，本发明所述方法最终获得的α-亚麻酸样品的核磁碳谱和α-亚麻酸标准样品的核磁碳氢谱一致，也就是分子结构层面本发明所述方法最终获得的α-亚麻酸和α-亚麻酸标准样品的分子结构是一致的。
本发明使用简单快捷的方法，利用了多种方法的联合，解决了各种问题，得到了纯度高于90%的α-亚麻酸，该方法适用于大规模生产，产率高效果好。
Claims (10)
1.胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）皂化；将蒸馏水加入到碱中，加热升温至50℃~80℃后，加入95%的乙醇或者95%的甲醇，待温度稳定后，少量多次加入胡麻油，边加边搅拌至均匀混匀，继续恒温反应，得到皂化混合物；
（2）加酸调pH；将皂化混合物的pH用盐酸调节到3~4，恒温反应，得到酸性混合物；
（3）萃取；向酸性混合物中同时加入水相和有机相进行萃取，所述水相为饱和食盐水，所述有机相是乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸甲酯或石油醚中的至少一种，得到萃取后的有机相；
（4）第一次浓缩； 将萃取后的有机相浓缩，得到浓缩的有机相；
（5）冷冻结晶；将浓缩的有机相加入到冷冻溶剂中，冷冻溶剂是乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、丙酮、环己酮或苯乙酮中的至少一种溶液中，在低温条件下进行结晶，低温冷冻结晶后的固液混合物在固液分离装置中将固体杂质去除，得到含有α-亚麻酸的液体；
（6）包合除杂；将包合剂完全溶解于95%乙醇或95%甲醇溶液后，加入含有α-亚麻酸的液体，所述包合剂为尿素或硫脲，均匀搅拌60~100分钟后转移到低温环境中进行梯度降温重结晶，重结晶后用抽滤装置将晶体与母液分离，得到母液；
（7）第二次浓缩；将母液浓缩，得到浓缩的母液；
（8）再次萃取；向浓缩的母液中同时加入水相和有机相进行萃取，所述水相为饱和食盐水，所述有机相是乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸甲酯或石油醚中的至少一种，得到再次萃取后的有机相；
（9）第三次浓缩；将再次萃取后的有机相浓缩，得到α-亚麻酸。
2.根据权利要求1所述的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（1）皂化的全部过程保持在超声波条件下，待温度稳定在75℃后加入胡麻油，全部胡麻油加入后 在75℃的温度下恒温搅拌反应20~100分钟，所述碱是NaOH或KOH中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（1）皂化中95%的乙醇或者95%的甲醇、蒸馏水、胡麻油和碱的比例为6ml：1ml：10ml：1.2g~10ml：2ml：10ml：1.8g。
4.根据权利要求3所述的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（2）加酸调pH是用6mol/L盐酸调节pH，恒温反应30~50min。
5.根据权利要求4所述的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（3）萃取和步骤（8）再次萃取中所述水相饱和食盐水的加入量为参与反应的胡麻油体积的2~3倍，所述的有机相的加入量为参与反应的胡麻油体积的2~3倍，所述的有机相是石油醚，所述步骤（3）萃取和步骤（8）再次萃取均重复3次。
6.根据权利要求5所述的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（4）浓缩、步骤（7）第二次浓缩和步骤（9）第三次浓缩都是在减压蒸馏装置中进行浓缩。
7.根据权利要求6所述的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（5）冷冻结晶中冷冻溶剂是乙醚，是在-10℃~-35℃的温度下缓慢结晶。
8.根据权利要求7所述的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（6）包合除杂中包合剂为硫脲，所述硫脲、含有α-亚麻酸的液体和95%乙醇或95%甲醇的比例为1g：1 ml：8ml~1g：3 ml：12ml。
9.根据权利要求7所述的胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（6）包合除杂中包合剂为尿素，所述尿素、含有α-亚麻酸的液体和95%乙醇或95%甲醇的比例为2g：1 ml：8ml~2g：3 ml：12ml。
10.根据权利要求8或者9所述的任意一种胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法，其特征在于：所述步骤（6）包合除杂中转移到低温环境中进行梯度降温重结晶过称为：由5℃降温至0℃后保持20~40分钟，由0℃降温至-5℃后保持20~40分钟，由-5℃降温至-10℃后保持20~40分钟，由-10℃降温至-15℃后保持20~40 分钟，温度恒定在-15℃后保持6小时。
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| CN201610144247.XA CN105753689B (zh) | 2016-03-15 | 2016-03-15 | 胡麻油中提取纯化α-亚麻酸的方法 |
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