CN105733795A - 一种蛇腹鳞下脂肪及其提取方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种蛇腹鳞下脂肪及其提取方法与用途。该蛇腹鳞下脂肪的提取方法，包括以下步骤：将带鳞蛇的腹皮绞碎，得带鳞蛇腹皮绞碎物；将所述带鳞蛇腹皮绞碎物加入至水中，用蛋白酶进行酶解，得带鳞蛇腹皮酶解产物；将带鳞蛇腹皮酶解产物离心，取上清液进行油水分离，得蛇腹鳞下脂肪粗品；将蛇腹鳞下脂肪粗品加入至醚类溶剂中，微波萃取，浓缩，即得。其提取得到的蛇腹鳞下脂肪的饱和脂肪酸含量较高，不饱和脂肪酸含量较低，碘值较低，酸价、皂化值较低，使人体手背皮肤的摩擦系数显著增大，显著提高人体手背皮肤的水分含量，具有保湿功能，将其用于制备具有护肤作用的产品，具有保护皮肤、增加皮肤弹性、滋养皮肤、提高皮肤润滑感的功效。

Description

一种蛇腹鳞下脂肪及其提取方法与用途

技术领域

本发明属于动物油提取领域，具体涉及一种蛇腹鳞下脂肪及其提取方法与用途。

背景技术

蛇油含有丰富的天然活性物质和抑菌成分，具有超强渗透力，可以直接渗透进入人体皮肤，促进皮肤细胞新陈代谢，从而增强皮肤的免疫调节功能。此外，蛇油还是一种富有营养、具有保健作用的物质，具有调节内分泌失调、润肠通便、养颜美容、防止皮肤衰老、防止血管硬化的作用。

然而，现有的蛇油主要为内脏脂肪混合物，其成分、结构并不明确，主要含有12种脂肪酸，如：亚油酸、亚麻酸等不饱和脂肪酸、及甘油棕榈酸等。其中，含量最多的不饱和脂肪酸-亚油酸，较长时间处于过高温度下，可能导致其氧化，进而导致蛇油功效的降低。

不同部位来源的蛇油，其性质具有较大的区别。研究发现，蛇腹鳞下表面覆盖的脂肪具有独特的物理化学性质，其分子结构排列较为紧密，分子之间相互构成致密的网络，因而蛇腹鳞下表面覆盖的脂肪不仅质地致密，结构稳定，而且抗摩擦、抗压力较强。正是由于蛇腹鳞下表面覆盖的脂肪的存在，使得蛇腹部光滑的鳞片不为粗糙的地面所损伤。

中国专利文献CN104531331A公开了一种酶解法提取乌风蛇油的方法，包括以下步骤：(1)将乌风蛇干燥，粉粹，得蛇粉；(2)将蛇粉按照料水重量比1:2-3的比例加入纯净水，并加入蛇粉重量1-3％的蛋白酶，在45-60℃温度下不断搅拌酶解2-4小时；(3)酶解完成后采用离心过滤机过滤，滤渣按照步骤(2)的方法再提取一次，合并滤液，得粗蛇油；(4)将粗蛇油加入中性活性炭，加热脱色20-30分钟，500目过滤，即得精制乌风蛇油。然而，采用上述方法提取蛇腹鳞下脂肪，不仅产率较低，而且提取产物纯度较低，从而限制了蛇腹鳞下脂肪的应用。

因此，研究新型的产率较高、提取产物纯度较高的蛇腹鳞下脂肪的提取方法具有重要意义。

发明内容

因此，本发明提供一种产率较高、提取产物纯度较高的蛇腹鳞下脂肪的提取方法，进而提供其提取得到的蛇腹鳞下脂肪与用途。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供一种蛇腹鳞下脂肪的提取方法，包括以下步骤：

(1)将带鳞蛇的腹皮绞碎，得带鳞蛇腹皮绞碎物；

(2)将所述带鳞蛇腹皮绞碎物加入至水中，用蛋白酶进行酶解，得带鳞蛇腹皮酶解产物；

(3)将所述带鳞蛇腹皮酶解产物离心，取上清液进行油水分离，得蛇腹鳞下脂肪粗品；

(4)将所述蛇腹鳞下脂肪粗品加入至醚类溶剂中，微波萃取，浓缩，即得。

优选地，本发明上述蛇腹鳞下脂肪的提取方法中，所述用蛋白酶进行酶解的步骤具体为：先用角蛋白酶进行酶解，再用碱性蛋白酶或复合蛋白酶进行酶解。

进一步优选地，本发明上述蛇腹鳞下脂肪的提取方法中，所述用蛋白酶进行酶解的步骤具体为：先在pH6.5-8.0、40-55℃的条件下用角蛋白酶进行酶解200-350min，再在pH6.5-8.5、45-60℃的条件下再用碱性蛋白酶或复合蛋白酶进行酶解30-150min。

进一步优选地，本发明上述蛇腹鳞下脂肪的提取方法中，所述用蛋白酶进行酶解的步骤具体为：先在pH7.0-7.5、45-50℃的条件下用角蛋白酶进行酶解240-300min，再在pH7.0-8.0、50-55℃的条件下再用碱性蛋白酶或复合蛋白酶进行酶解60-120min。

进一步优选地，本发明上述蛇腹鳞下脂肪的提取方法中，以所述带鳞蛇腹皮绞碎物的重量为基准，所述角蛋白酶的加入量为0.01-1.2％，所述碱性蛋白酶或复合蛋白酶的加入量为0.01-1.2％。

进一步优选地，本发明上述蛇腹鳞下脂肪的提取方法中，以所述带鳞蛇腹皮绞碎物的重量为基准，所述角蛋白酶的加入量为0.2-1.0％，所述碱性蛋白酶或复合蛋白酶的加入量为0.2-1.0％。

进一步优选地，本发明上述蛇腹鳞下脂肪的提取方法中，所述步骤(2)中，以所述带鳞蛇腹皮绞碎物的重量为基准，水的加入量为5-50重量倍量；所述微波萃取具体为：功率100-1000w的条件下微波萃取1-10min；所述醚类溶剂为乙醚或石油醚，以所述蛇腹鳞下脂肪粗品的重量为基准，所述醚类溶剂的加入量为0.1-10.0重量倍量；所述浓缩的温度为30-60℃。

进一步优选地，本发明上述蛇腹鳞下脂肪的提取方法中，所述带鳞蛇选自乌梢蛇、蝮蛇或水蛇。

进一步优选地，本发明上述蛇腹鳞下脂肪的提取方法中，所述步骤(2)中，以所述带鳞蛇腹皮绞碎物的重量为基准，水的加入量为10-20重量倍量；所述微波萃取具体为：功率500-1000w的条件下微波萃取2-6min；所述醚类溶剂为乙醚或石油醚，以所述蛇腹鳞下脂肪粗品的重量为基准，所述醚类溶剂的加入量为0.5-2.0重量倍量；所述浓缩的温度为40-45℃。

本发明还提供上述提取方法提取得到的蛇腹鳞下脂肪。

本发明还提供含有上述蛇腹鳞下脂肪的制剂，所述蛇腹鳞下脂肪加入常规辅料，通过常规方法，制成膏霜剂、乳剂、水剂、露剂、喷雾剂、精华液或者面膜。

优选地，本发明还提供含有上述蛇腹鳞下脂肪的制剂中，以所述制剂的重量为基准，上述蛇腹鳞下脂肪的加入量为0.05-10％。

所述常规辅料为：油质原料、美白剂、保湿剂、表面活性剂、粘结剂、防腐剂、抗氧剂、香料等。如：橄榄油、椰子油、蓖麻油、棉籽油、大豆油、芝麻油、杏仁油、花生油、玉米油、米糠油、茶籽油、沙棘油、鳄梨油、石栗子油、欧洲坚果油、胡桃油、可可油、水貂油、蛋黄油、羊毛脂油、卵磷脂、棕榈蜡、小烛树蜡、霍霍巴蜡、木蜡、羊毛酯、蜂蜡、液体石蜡、固体石蜡、微晶石蜡、地蜡、凡士林、角鲨烷、羊毛脂衍生物、聚硅氧烷、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、异硬脂酸；抗坏血酸及其衍生物、氢醌、胎盘素、熊果苷、曲酸及其衍生物、果酸、绿茶提取物；甘油、丙二醇、山梨醇、神经酰胺、透明质酸、聚乙二醇、吡咯烷酮羧酸钠、乳酸钠、尿素、玻尿酸、水解胶原蛋白、β-葡聚糖、硫酸软骨素；十二烷基硫酸钠、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十八烷基三甲基氯化铵、椰油酰胺基丙基甜菜碱、月桂醇聚氧乙烯醚、椰油酸二乙醇酰胺、油酸单甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油；咪唑烷基脲、对羟基苯甲酸酯、异噻唑啉酮、季铵盐、苯甲酸钠；维生素E、茶多酚、辅酶Q10、泛醇-10、超氧化物岐化酶等。

本发明还提供蛇腹鳞下脂肪或上述制剂在制备具有护肤作用的产品中的应用。

与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下优点：

(1)本发明所述蛇腹鳞下脂肪的提取方法，以带鳞蛇的腹皮为原料，在较低的温度30-60℃下，依次经过酶解、油水分离、微波萃取和浓缩的步骤，通过进一步优化所加入的酶的具体种类、酶的具体加入量、酶解步骤的具体反应条件和微波萃取的反应条件，即可以较高产率89-92％、较高纯度93-98％提取得到蛇腹鳞下脂肪，不仅解决了现有的提取方法提取蛇腹鳞下脂肪产率较低、纯度较低的问题，而且解决了过高温度导致的不饱和脂肪酸的氧化、进而导致蛇油功效降低的问题，从而更有利于蛇腹鳞下脂肪的广泛应用；

(2)本发明提取得到的蛇腹鳞下脂肪的饱和脂肪酸含量较高，不饱和脂肪酸含量较低，碘值较低，酸价、皂化值较低，使人体手背皮肤的摩擦系数显著增大，显著提高人体手背皮肤的水分含量，具有保湿功能，将其用于制备具有护肤作用的产品，具有保护皮肤、增加皮肤弹性、滋养皮肤、提高皮肤润滑感的功效。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明以下实施例和实验例中所有原料均为市售品。

实施例1

本实施例蛇腹鳞下脂肪的提取方法，包括以下步骤：

(1)将乌梢蛇带鳞蛇的腹皮绞碎至0.8mm，得带鳞蛇腹皮绞碎物；

(2)将500g所述带鳞蛇腹皮绞碎物加入至5000g水中，先在pH7.5、50℃的条件下用5g角蛋白酶进行酶解240min，再在pH8.0、50℃的条件下再用1g碱性蛋白酶进行酶解120min，得带鳞蛇腹皮酶解产物；

(3)将所述带鳞蛇腹皮酶解产物离心，取上清液进行油水分离，得蛇腹鳞下脂肪粗品；

(4)将所述蛇腹鳞下脂肪粗品加入至1重量倍量的乙醚中，500w的条件下微波萃取5min，40℃浓缩，用蒸馏法除去乙醚，浓缩物即为蛇腹鳞下脂肪(淡黄色、清亮液体，无腥味，产率为89％，纯度为98％)。

本实施例提取得到的蛇腹鳞下脂肪，加入常规辅料，通过常规方法，制成乳剂。

实施例2

本实施例蛇腹鳞下脂肪的提取方法，包括以下步骤：

(1)将蝮蛇带鳞蛇的腹皮绞碎至0.5mm，得带鳞蛇腹皮绞碎物；

(2)将1000g所述带鳞蛇腹皮绞碎物加入至15000g水中，先在pH7.2、45℃的条件下用5g角蛋白酶进行酶解300min，再在pH7.0、55℃的条件下再用8g碱性蛋白酶进行酶解60min，得带鳞蛇腹皮酶解产物；

(3)将所述带鳞蛇腹皮酶解产物离心，取上清液进行油水分离，得蛇腹鳞下脂肪粗品；

(4)将所述蛇腹鳞下脂肪粗品加入至0.5重量倍量的乙醚中，700w的条件下微波萃取6min，45℃浓缩，用蒸馏法除去乙醚，浓缩物即为蛇腹鳞下脂肪(淡黄色、清亮液体，无腥味，产率为92％，纯度为97％)。

本实施例提取得到的蛇腹鳞下脂肪，加入常规辅料，通过常规方法，制成膏霜剂。

实施例3

本实施例蛇腹鳞下脂肪的提取方法，包括以下步骤：

(1)将水蛇带鳞蛇的腹皮绞碎至1mm，得带鳞蛇腹皮绞碎物；

(2)将500g所述带鳞蛇腹皮绞碎物加入至10000g水中，先在pH7.0、48℃的条件下用1g角蛋白酶进行酶解280min，再在pH7.2、52℃的条件下再用5g碱性蛋白酶或复合蛋白酶进行酶解90min，得带鳞蛇腹皮酶解产物；

(3)将所述带鳞蛇腹皮酶解产物离心，取上清液进行油水分离，得蛇腹鳞下脂肪粗品；

(4)将所述蛇腹鳞下脂肪粗品加入至2重量倍量的石油醚中，1000w的条件下微波萃取2min，42℃浓缩，用蒸馏法除去石油醚，浓缩物即为蛇腹鳞下脂肪(淡黄色、清亮液体，无腥味，产率为91％，纯度为93％)。

本实施例提取得到的蛇腹鳞下脂肪，加入常规辅料，通过常规方法，制成精华液。

对比例1

本对比例蛇腹鳞下脂肪的提取方法，以乌梢蛇带鳞蛇的腹皮为原料，实验方法和操作参照中国专利文献CN104531331A的实施例1，产率为56％，纯度为76％。

对比例2

本对比例蛇腹鳞下脂肪的提取方法，以乌梢蛇带鳞蛇的腹皮为原料，实验方法和操作参照中国专利文献CN104531331A的实施例2，产率为45％，纯度为75％。

实验例

实验例1本发明提取得到的蛇腹鳞下脂肪的理化性质的研究

1、实验目的

检测本发明提取得到的蛇腹鳞下脂肪的脂肪酸含量、不饱和脂肪酸含量、酸价、皂化值、碘值。

2、实验材料

以实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪为供试品。

3、实验方法

3.1实验分组

实验组：以实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪为供试品；对照组：以普通蛇油为供试品。

3.2实验检测标准

饱和脂肪酸/不饱和脂肪酸的含量检测参照GB/T22223-2008标准，酸价的检测按照GB/T5530-2005标准，皂化值的检测按照GB/T5534-2008，碘值的检测按照GB/T5532-2008标准。

4、实验结果

具体实验结果如表1所示。

表1理化性质实验的具体实验结果

组号	饱和脂肪酸含量	不饱和脂肪酸含量	酸价	皂化值	碘值
						对照组	23.7％	73.8％	0.9	196.8	114.9
实验组	67.8％	28.5％	0.4	185.1	86.8

由表1可知，与普通蛇油相比，实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪的饱和脂肪酸含量较高，不饱和脂肪酸含量较低，碘值较低，酸价、皂化值较低。

实验例2本发明提取得到的蛇腹鳞下脂肪对人体手背皮肤的摩擦系数的研究

1、实验目的

检测本发明提取得到的蛇腹鳞下脂肪对人体手背皮肤的摩擦系数。

2、实验材料

以实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪为供试品。

3、实验方法

3.1实验分组

以男性志愿者、女性志愿者各100名为受试对象，每名受试对象的手背皮肤均按照如下实验方法进行实验。实验组：涂抹实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪；对照组：涂抹蛇内脏油脂；空白对照组：未涂抹任何物质。

3.2实验仪器与实验条件

以UMT-多功能摩擦磨损试验机为实验仪器检测对人体手背皮肤的摩擦系数。

具体实验条件为：法向载荷为50g，滑动速度为0.5mm/s，滑动距离为10mm。

3.3检测条件

检测部位：手背皮肤；检测时间：涂抹后0.5h。

4、实验结果

具体实验结果如表2所示。

表2对人体手背皮肤的摩擦系数实验的具体实验结果

由表2可知，无论男性受试对象还是女性受试对象，与未涂抹任何物质或涂抹蛇内脏油脂相比，涂抹实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪，可以使人体手背皮肤的摩擦系数显著增大。

实验例3本发明提取得到的蛇腹鳞下脂肪对人体皮肤的保湿性能的研究

1、实验目的

研究本发明提取得到的蛇腹鳞下脂肪对人体皮肤的保湿性能。

2、实验材料

以实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪为供试品。

3、实验方法

3.1实验分组

以男性志愿者、女性志愿者各100名为受试对象，每名受试对象的手背皮肤均按照如下实验方法进行实验。实验组：涂抹实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪；对照组：涂抹蛇内脏油脂；空白对照组：未涂抹任何物质。

3.2实验仪器

以CK多功能皮肤测试仪MC750为实验仪器，通过测定介电常数的大小来检测人体手背皮肤的水分含量。

检测方法：

3.3检测条件与检测方法方法

检测条件为：恒温(20℃)、恒湿(40-60％)。

按照如下步骤进行检测：

(1)检测前，用低刺激性肥皂清洗每名受试对象的手背皮肤，清洗完30min后进行检测；(2)在每名受试对象的手背皮肤上每隔2cm取一个直径为3.7cm的圆，共取3个，分别为空白对照组、实验组、对照组，分别检测使用前每名受试对象的手背皮肤的空白对照组、实验组、对照组的水分含量；(3)每名受试对象的手背皮肤上，实验组涂抹实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪，对照组涂抹蛇内脏油脂，空白对照组未涂抹任何物质，使用0.5h后，分别检测每名受试对象的手背皮肤的空白对照组、实验组、对照组的水分含量。

4、实验结果

具体实验结果如表3所示。

表3对人体手背皮肤的保湿性能实验的具体实验结果

由表3可知，无论男性受试对象还是女性受试对象，与未涂抹任何物质或涂抹蛇内脏油脂相比，涂抹实施例1提取得到的蛇腹鳞下脂肪，显著提高了人体手背皮肤的水分含量，其具有保湿功能。

综上，本发明所述蛇腹鳞下脂肪的提取方法，以带鳞蛇的腹皮为原料，在较低的温度30-60℃下，依次经过酶解、油水分离、微波萃取和浓缩的步骤，通过进一步优化酶解步骤的具体反应条件、所加入的酶的具体种类、酶的具体加入量和微波萃取的反应条件，即可以较高产率89-92％、较高纯度93-98％提取得到蛇腹鳞下脂肪，不仅解决了现有的提取方法提取蛇腹鳞下脂肪产率较低、纯度较低的问题，而且解决了过高温度导致的不饱和脂肪酸的氧化、进而导致蛇油功效降低的问题，从而更有利于蛇腹鳞下脂肪的广泛应用；其提取得到的蛇腹鳞下脂肪的饱和脂肪酸含量较高，不饱和脂肪酸含量较低，碘值较低，酸价、皂化值较低，可以使人体手背皮肤的摩擦系数显著增大，显著提高了人体手背皮肤的水分含量，具有保湿功能将其用于制备具有护肤作用的产品，具有保护皮肤、增加皮肤弹性、滋养皮肤、提高皮肤润滑感的功效。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种蛇腹鳞下脂肪的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将带鳞蛇的腹皮绞碎，得带鳞蛇腹皮绞碎物；

(2)将所述带鳞蛇腹皮绞碎物加入至水中，用蛋白酶进行酶解，得带鳞蛇腹皮酶解产物；

(3)将所述带鳞蛇腹皮酶解产物离心，取上清液进行油水分离，得蛇腹鳞下脂肪粗品；

(4)将所述蛇腹鳞下脂肪粗品加入至醚类溶剂中，微波萃取，浓缩，即得。

2.根据权利要求1所述的蛇腹鳞下脂肪的提取方法，其特征在于，所述用蛋白酶进行酶解的步骤具体为：先用角蛋白酶进行酶解，再用碱性蛋白酶或复合蛋白酶进行酶解。

3.根据权利要求2所述的蛇腹鳞下脂肪的提取方法，其特征在于，所述用蛋白酶进行酶解的步骤具体为：先在pH6.5-8.0、40-55℃的条件下用角蛋白酶进行酶解200-350min，再在pH6.5-8.5、45-60℃的条件下再用碱性蛋白酶或复合蛋白酶进行酶解30-150min。

4.根据权利要求3所述的蛇腹鳞下脂肪的提取方法，其特征在于，所述用蛋白酶进行酶解的步骤具体为：先在pH7.0-7.5、45-50℃的条件下用角蛋白酶进行酶解240-300min，再在pH7.0-8.0、50-55℃的条件下再用碱性蛋白酶或复合蛋白酶进行酶解60-120min。

5.根据权利要求2-4任一项所述的蛇腹鳞下脂肪的提取方法，其特征在于，以所述带鳞蛇腹皮绞碎物的重量为基准，所述角蛋白酶的加入量为0.01-1.2％，所述碱性蛋白酶或复合蛋白酶的加入量为0.01-1.2％。

6.根据权利要求5所述的蛇腹鳞下脂肪的提取方法，其特征在于，以所述带鳞蛇腹皮绞碎物的重量为基准，所述角蛋白酶的加入量为0.2-1.0％，所述碱性蛋白酶或复合蛋白酶的加入量为0.2-1.0％。

7.根据权利要求1-6任一项所述的蛇腹鳞下脂肪的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，以所述带鳞蛇腹皮绞碎物的重量为基准，水的加入量为5-50重量倍量；所述微波萃取具体为：功率100-1000w的条件下微波萃取1-10min；所述醚类溶剂为乙醚或石油醚；所述浓缩的温度为30-60℃。

8.权利要求1-7任一项所述的提取方法提取得到的蛇腹鳞下脂肪。

9.含有权利要求8所述的蛇腹鳞下脂肪的制剂，其特征在于，所述蛇腹鳞下脂肪加入常规辅料，通过常规方法，制成膏霜剂、乳剂、水剂、露剂、喷雾剂、精华液或者面膜。

10.权利要求8所述的蛇腹鳞下脂肪或权利要求9所述的制剂在制备具有护肤作用的产品中的应用。