CN105732557B - 分离提取2,2‑二甲基‑6‑乙酰基苯并二氢吡喃酮的方法 - Google Patents

分离提取2,2‑二甲基‑6‑乙酰基苯并二氢吡喃酮的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种分离提取2,2‑二甲基‑6‑乙酰基苯并二氢吡喃酮的方法。是以干燥的款冬花为原料，用石油醚超声提取、过滤、浓缩、高速逆流分离、硅胶柱分离，即可得到高纯度的2,2‑二甲基‑6‑乙酰基苯并二氢吡喃酮。本发明操作简单、成本较低、得率较高、对环境污染较小。该方法获得的2,2‑二甲基‑6‑乙酰基苯并二氢吡喃酮纯度大于98％，可作为化学对照品，用于款冬花药材、提取物及制剂的质量控制。

Description

分离提取2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的方法
技术领域
本发明涉及中药有效成分的提取方法，具体是一种分离提取2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的方法。
技术背景
款冬花是菊科植物款冬(Tussilagofarfara L.)的干燥花蕾。具有润肺下气、止咳化痰的功效。除具有止咳化痰作用外，现代研究发现款冬花提取物对交感神经、拟交感神经、血管平滑肌等有直接作用，另外还有抗氧化、抗菌、α-葡萄糖苷酶抑制等作用。2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮是从款冬花中提取纯化得到的，而且在款冬花中含量较高，因此可作为质量控制指标用于评价款冬花药材、提取物及制剂的质量(药物分析杂志，2012，32(9)：1517-1524)。
2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮，英文名称2,2-dimethyl-6-acetylchromanone，分子式：C13H14O3，，结构式如下：
目前尚无2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮对照品及其制备方法。已有文献(Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，2007,288-293)采用70％乙醇提取5次后合并，置水中成悬浮物，依次用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，再将环己烷部位用100:0-80:20比例的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂过硅胶柱得到I-IV部分，最后将第Ⅲ部分用100：0-90：10比例的石油醚和丙酮混合溶剂过硅胶柱可得2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮。该方法步骤繁琐，成本高，得率低(约为1mg/kg)。针对该问题，我们开发了一种操作简单、成本较低、得率较高、对环境污染较小，纯度在98％以上的2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离提取2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮方法，该方法操作步骤简单，得率较高，成本较低，2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮纯度在98％以上可作为化学对照品。
本发明的技术方案如下：
(1)取款冬花药材，加入液固比为2-3ml/g的石油醚常温浸泡1-5h，超声提取20-100min，取提取液过滤，减压浓缩得到浸膏；
(2)采用高速逆流色谱仪，溶剂系统由正己烷、甲醇、乙酸乙酯、水组成，体积比为10:5:11:3，置于分液漏斗中，上相为固定相，下相为流动相，用泵将固定相灌满分离柱，取步骤(1)所得浸膏用上相溶解，上样，泵入流动相，流速为1-2.5ml/min(优选为2.5ml/min)，主机转速为750-850rpm(优选为800rpm)，当流动相流出时根据检测器图谱收集目标成分，减压浓缩至干燥，即2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮粗品；
(3)将步骤(2)中所得2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮粗品过硅胶柱，以体积比为20-30:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂洗脱，用薄层色谱对各馏分进行检测，收集含2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的馏分，减压浓缩，即得到2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮。
所述步骤(3)中石油醚和乙酸乙酯混合溶剂体积比为25:1。
本发明的有益效果：
本发明从原料款冬花开始经过简单的提取、一次逆流色谱分离，过一次硅胶柱可以得到2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮纯品。本发明分离提取方法操作简单，环境污染小，成本较低，2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮纯度可达98％以上。其可作为化学对照品，用于款冬花药材、提取物及制剂的质量控制。
附图说明
图1为本发明实施例1中制备的2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的高速逆流采集图谱。
图2为本发明实施例1中制备的2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的HPLC图谱。
图3为本发明实施例1中制备的2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的1H-NMR图谱。
具体实施方式
实施例1
取干燥的款冬花蕾750g粉碎，加1.5L100％石油醚常温浸泡3h，超声提取80min，取提取液过滤，减压浓缩至干燥，得浸膏1.392g。
用高速逆流分离方法，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，静置分层，上相为固定相，下相为流动相，用泵将固定相灌满分离柱，取浸膏用上相溶解，上样，当主机转速达到800rpm，以2.5ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时根据检测器图谱(见图1)收集目标成分，减压浓缩至干燥，得粗提取物。
用硅胶色谱柱分离方法，以石油醚：乙酸乙酯＝25:1系统湿法装柱，并用该配比的混合溶剂对粗提取物进行洗脱，用石油醚和乙酸乙酯10:3作为展开剂对馏分进行检测，合并目标馏分，在旋转蒸发仪上挥干溶剂后得2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮纯品，得率为5.044mg/kg。
实施例2
取干燥的款冬花蕾750g粉碎，加2L100％石油醚常温浸泡1h，超声提取100min，提取液过滤，减压浓缩至干燥，得浸膏1.354g。
用高速逆流分离方法，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，静置分层，上相为固定相，下相为流动相，用泵将固定相灌满分离柱，取浸膏用上相溶解，上样，当主机转速达到750rpm，以1ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时根据检测器图谱(见图1)收集目标成分，减压浓缩至干燥，得粗提取物。
用硅胶色谱柱分离方法，以石油醚：乙酸乙酯＝20:1系统湿法装柱，并用该配比的混合溶剂对粗提取物进行洗脱，用石油醚和乙酸乙酯10:3作为展开剂对馏分进行检测，合并目标馏分，在旋转蒸发仪上挥干溶剂后得2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮，得率为4.913mg/kg。
实施例3
取干燥的款冬花蕾750g粉碎，加1.75L100％石油醚常温浸泡5h，超声提取20min，提取液过滤，减压浓缩至干燥，得浸膏1.301g。
用高速逆流分离方法，取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，静置分层，上相为固定相，下相为流动相，用泵将固定相灌满分离柱，取浸膏溶于上相中，上样，当主机转速达到850rpm，以2ml/min流速泵入流动相，当流动相流出时根据检测器图谱(见图1)收集目标成分，减压浓缩至干燥，得粗提取物。
用硅胶色谱柱分离方法，以石油醚：乙酸乙酯＝23:1系统湿法装柱，并用该配比的混合溶剂对粗提取物进行洗脱，用石油醚和乙酸乙酯10:3作为展开剂对馏分进行检测，合并目标馏分，在旋转蒸发仪上挥干溶剂后得2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮，得率为4.816mg/kg。
实施例4
2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮结构分析：
采用核磁共振对实施例1中得到的2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮进行结构分析，证明为2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮。并对数据进行1H-NMR归属(表1，图3)，与文献报道一致。
表1 2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的1H-NMR数据归属
实施例5
2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的HPLC--UV液相色谱纯度检测：
取上述条件得到的2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮单体适量，溶于色谱甲醇中，微孔滤膜过滤，置于液相小瓶中，采用如下条件检测，结果显示2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮纯度98％以上(表2，图2)
表2
名称 保留时间(分钟) 面积(微伏*秒) 高度(微伏)
1 峰1 16.825 5965813 323252
色谱条件：waters Alliance e2695HPLC色谱检测仪(含e2695分离单元，2489UV-Detector)；Empower3色谱工作站；ODS-3(5μm,4.5×250mm)色谱柱。流动相A乙腈，流动相C水，乙腈-水(65:35)；检测波长：254nm，204nm，203nm；流速1ml/min；柱温30℃，检测物质为2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮。
进样量：10ul。

Claims (3)

1.一种分离提取2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取款冬花药材，加入液固比为2-3ml/g的石油醚常温浸泡1-5h，超声提取20-100min，取提取液过滤，减压浓缩得到浸膏；
(2)采用高速逆流色谱仪，溶剂系统由正己烷、甲醇、乙酸乙酯、水组成，体积比为10:5:11:3，置于分液漏斗中，上相为固定相，下相为流动相，用泵将固定相灌满分离柱，取步骤(1)所得浸膏用上相溶解，上样，泵入流动相，流速为1-2.5ml/min，主机转速为750-850rpm，当流动相流出时根据检测器图谱收集目标成分，减压浓缩至干燥，即2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮粗品；
(3)将步骤(2)中所得2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮粗品过硅胶柱，以体积比为20-30:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂洗脱，用薄层色谱对各馏分进行检测，收集含2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的馏分，减压浓缩，即得到2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮。
2.如权利要求1所述的一种分离提取2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的方法，其特征在于，所述步骤(2)中高速逆流色谱仪的流动相的流速为2.5ml/min，主机转速为800rpm。
3.如权利要求1所述的一种分离提取2,2-二甲基-6-乙酰基苯并二氢吡喃酮的方法，其特征在于，所述步骤(3)中石油醚和乙酸乙酯混合溶剂体积比为25:1。
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