CN105713910B - 一个受温度调控水稻叶色基因及其检测方法和应用 - Google Patents

一个受温度调控水稻叶色基因及其检测方法和应用 Download PDF

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CN105713910B CN201610110381.8A CN201610110381A CN105713910B CN 105713910 B CN105713910 B CN 105713910B CN 201610110381 A CN201610110381 A CN 201610110381A CN 105713910 B CN105713910 B CN 105713910B
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
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Abstract

本发明涉及一个受温度调控水稻叶色的基因及其检测方法和应用。本发明公开了一个受温度调控水稻叶色的基因，具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，该基因编码的蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。利用设计一对SEQ ID No.3和SEQ ID No.4特异性PCR引物，对水稻中所提取的DNA进行PCR扩增后，经EcoRII酶切后再经过琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，即可快速有效的检测到含有该基因的水稻植株，具有检测精确度高，操作方便，成本低廉等特点。携带该基因的水稻植株在低温下表现黄化苗。本发明得到的受温度调控水稻叶色基因可应用到杂交水稻制种，可提高杂交水稻不育系本身及其它配制杂交水稻的纯度。

Description

一个受温度调控水稻叶色基因及其检测方法和应用
技术领域
本发明涉及农业和植物生物技术等领域，尤其是在分子水平进行水稻遗传育种以及生理、基因功能等基础研究。
技术背景
叶片是植物进行光合作用的主要器官，类型丰富且易于鉴别，所以叶色是辨别植物突变最直观的标准之一。在实际应用中，叶色不仅可用于观赏植物新特品种的选育，还可以作为很多农作物如水稻、小麦、玉米等的最理想的形态学标记，还可用于植物的遗传、生理及其相关基因的克隆和功能研究。目前，研究工作者们利用物理、化学、生物等技术已创制大量水稻叶色突变体，根据它们是否受温度调控，又分为高温表达型、低温表达型和温度钝感型等的叶色突变体。本研究利用60Coγ射线诱变处理创制的受低温度调控水稻叶色的突变株，并通过图位克隆技术定位到一个受温度调控水稻叶色新基因。
发明内容
本发明的目的在于提供一个受温度调控水稻叶色的基因、该基因编码的蛋白质及这种基因的检测方法和应用。
受温度调控叶色变化的水稻来源于经60Co γ射线处理的粳稻嘉花1号的诱变产生的群体后代，经多次自交繁殖和选择，该水稻性状和各种农艺性状均已稳定。以该水稻材料与籼稻9311杂交的F2代分离群体作为定位群体，利用DNA分子标记将受温度调控水稻叶色的基因定位在水稻第1号染色体上。
携带该受温度调控叶色的基因水稻植株在27.5℃以下生长的条件下表现出苗色黄化。该基因，具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。所述的基因编码的蛋白质，具有SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。
一对用于检测上述基因的特异性dCAPs引物，序列为：
上游：5’-CTTGGCTACTTGCTGATAGGTAACTTACCCCCTG-3’
下游：5’-CAGGCCTCCATAGAAGGAGGCCAAA-3’
即SEQ ID No.3 和SEQ ID No.4
检测该受温度调控水稻叶色基因的方法为，采用上述特异性（SEQ ID No.3 和SEQID No.4）对水稻提取DNA进行扩增，得到208bp核苷酸序列。SEQ ID No.5和SEQ ID No.6的序列分为野生型水稻（嘉花1号）和携带受温度调控叶色基因水稻的所示。由携带受温度调控叶色基因的水稻DNA扩增得到的208bp片段不含EcoRII酶的内切位点，不被EcoRII切断，而由野生型水稻扩增所得到的208bp片段能切成30bp和178bp的两个特异性片段。
在本发明中，发明人设计了在受温度调控叶色该基因片段与野生型嘉花1号相差一个碱基的特异性dCAPs引物，引入的错配碱基可以引入的限制性酶切位点，从而可以在此208bp核苷酸序列中EcoRII酶切野生型(嘉花1号)水稻，但不切断携带受温度调控叶色基因的水稻，根据酶切带型能快速检测到含有此基因的水稻品种，其检测精确度高，操作方便，成本低廉。
附图说明
图一为本发明野生型水稻（左）与具有受温度调控叶色的基因水稻（右）在27.5℃苗期表型；
图二为本发明对PCR的dCAPs引物扩增产物进行EcoRII酶切检查结果。
具体实施方式
实施例1 水稻DNA提取
1.取新鲜的苗期水稻叶片，将叶片剪成0.5cm长的小段，放入预冷的研钵中，加入液氮将其研磨至粉末状，转入2ml离心管中加入1ml60℃预热的2×CTAB（破坏细胞膜），轻轻震荡后60℃水浴45min,期间多次震荡。
2.取出离心管，冷却至室温，12000r/min 20℃条件下离心5min，吸取600μl上清液,并加入等体积的氯仿-异戊醇（24:1）混合液，充分混匀。
3. 将含有溶液的离心管进行平衡，12000r/min 20℃离心5min，吸取600μl上清液，加入其2/3体积（400μl）异丙醇，轻轻混匀使核酸析出。
4. 12000r/min 20℃离心3min,使核酸沉淀，弃上清。
5. 加入70%乙醇洗涤，12000r/min20℃离心5min，弃上清。
6.重复步骤5。
7.室温干燥后溶于10μl的无菌水中。
8.取2μl用于后续的PCR扩增反应。
实施例2
（一） 获得受温度调控水稻叶色的基因及其氨基酸序列
1.25μl PCR反应体系如下：100MmTris-HCl pH9.0;100mM KCl;20mM MgSO4;80mM(NH4)SO4;2.5Mm Dntp;10μM引物，5U/μl Taq酶，1μl模板DNA。
引物序列为：
上游：5’-CACCGCCTGCCCACCGACGACGATG-3’
下游：5’-GAAGATGCCATTTCAGTCAC-3'
PCR扩增反应
反应条件：
PCR扩增产物长度为3446bp,用Bioxm软件与http://rice.plantbiology.msu.edu/网页下载得到的基因序列与测序结果比对，舍去其它片段结果如SEQ ID No.1。
参照KOME网站上获得的ORF序列，设计特异性RT-PCR引物，上游端和下游端分别为:
5’-ATGGAGCTTCGACATAAAACGGGGA-3’
5’- AGTTCAATTCTCCAACATCACTTCC-3’
对所提取的正常植株总cDNA进行扩增，其目的片段长度为1146bp，并进行测序。将测序得到的DNA序列即ORF, 利用Bioxm软件翻译成381个氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
（二）检测受温度调控水稻叶色的基因
1. 25μl PCR反应体系如下：100MmTris-HCl pH9.0;100mM KCl;20mM MgSO4;80mM(NH4)SO4;2.5Mm Dntp;10μM引物，5U/μl Taq酶，1μl模板DNA。
特异性PCR引物序列如下：
上游：5’-CTTGGCTACTTGCTGATAGGTAACTTACCCCCTG-3’
下游：5’-CAGGCCTCCATAGAAGGAGGCCAAA-3’
2.PCR扩增反应。反应条件：
得到的扩增产物，经溴酚蓝染色，上样于经溴化乙锭染色的2%的琼脂糖凝胶上并电泳，在UVP凝胶成像仪上成像，结果如图2所示，出现208bp条带，序列如SEQ ID No.3所示，是SEQ ID No.1中的一段。
3.酶切反应体系
34μl无菌水,5μl 10×EcoRIIBuffer,1μl 10U/μl EcoRII和10μl PCR扩增产物。
4.酶切处理
将酶切反应体系混匀后，放入37℃恒温水浴中，温水浴2小时，每管加入1μl 10×Loading buffer终止酶切反应，将扩增产物，经溴酚蓝染色，上样于经溴化乙锭染色的5%琼脂糖凝胶上并电泳，在UVP凝胶成像仪上成像。结果如图2所示。其酶切带型为出现两个特异性片段，长度为30bp和178bp，由于30bp带较小，已经跑出凝胶。
实施例4功能基因验证
受温度调控叶色的水稻来源于经60Coγ射线处理的粳稻嘉花1号的诱变产生的群体后代，经多次自交繁殖和选择，该突变性状和各种农艺性状均已稳定。该突变株低于27.5℃突变体叶片呈黄色，当温度高于27.5℃时，突变体表现为正常绿色，具有明显的温度调控。
经过60Coγ射线处理后，测序结果表明该基因发生了碱基的替换如SEQ ID No.1的碱基序列所示（第2157个碱基）。
将含有水稻自身启动子SEQ ID No. 7的核苷酸序列农杆菌表达载体PCambia1301S上，并经过酶切、测序验证为该目的基因序列。
利用农杆菌介导技术，将上述重组载体转化受体，受体是含有温度调控叶色基因水稻的愈伤组织，通过鉴定获得阳性第一代转基因株，其叶色在27.5℃以下呈绿色。
将第一代转基因植株的种子在低温下播种，其苗期叶色出现分离，具有绿色和黄化的表现，并符合孟德尔遗传分离定律即3:1。
携带温度调控叶色基因水稻在高于27.5℃叶色表现为绿色，而低于27.5℃时，植株苗期叶色呈黄化表型，因此可通过此表型变化来鉴别水稻品种真伪，提高杂交水稻种子纯度。
序列表
SEQUENCE LISTING
<110> 上海师范大学
<120> 一种受温度调控水稻叶色基因及其检测方法和应用
<160> 5
<210> 1
<211> 3447
<212> DNA
<213> 水稻
<400> 1
1 caccgcctgc ccaccgacga cgatgagcca ccggcgagtg gatgcggcgg cgtgcgactc
61 atggaggccc ccacccacgc cgccgcctcc ccacgcccgc cgcgcgctcg ccctccgcgt
121 gggtgggggt gggggtggcc cggcgttcgc gtcgctcacc gtgcgggagg ggggaggggg
181 aggggaggag ggggaggtgg gggaggggaa ggggaagcag cagcagctgc cggcggcggg
241 ggtgctggtg aggcacccgc tggcgatgct ggcgctggtg cccaacgccg tcgcgctctt
301 cgcggcgggg gcggccgcgg gggccgtcgc caagacgatc accgcgccgc tcgaccgcgt
361 caagctcctc atgcaggtag ggcacaccat gaccccgccc ctcccgtccc gggggtttct
421 gatttctctc cctctccttg ctgtggggtg gcctgtgggt gcgtggtctg taacccactg
481 catttcctgc tcttcttctt tgtagacgca cagcgtgcgg gtggtggggg agagcaccaa
541 gaaagggatc ggattcctcg aggtaactct gatgatgtcc tccacctctt ctcttcagtt
601 tgctataaat ttctaagttg gtaagagtgt gtaattctgt tgttgctata gaatggcttt
661 tctgtagcca tggagctgat gcaacactgt ctattttagt aatgttaata ctatcgtctg
721 cgattttcat gacaacaatg tcaatctgtt gttgctataa aatgccttcc atctagccat
781 ggagttgatc ccaaccctgt ctattttagt acctgtcatt tgcaattgca tgataaattc
841 cctgaattca taagtgcagc ttccgaatac atcagggata agttagaacg aaccgagttc
901 tgtctgtgtg tgtggtgttg aacataacaa tggggtactc ttctctccac tacaaatatg
961 cagtattctg gtcttgcggt tgtatgtgaa ctgatatgga acaatgaaac tcgtggttta
1021 ctaaaaatta acacacaatc tcaaaattac gttttagaaa tttgaaaact attctgggaa
1081 acatatcatg aaaaaggctt tcgtgaggca tggagcattt ttctttaaaa aagaacctgt
1141 gagtcatgaa actgatgtgt ttcaccacta ccaattcgtg gttgctatct gagggaaagc
1201 cataatttgt tccaatatac ttataataca ctgtaacata ctcactgtgt cctgaattca
1261 tgatgcttct tgtatggttc agaaatgagg gtaacaatgg ttttcagaaa taggcagtgg
1321 catgccatta agttttactt atggcttcat gatgtttgtt cgtttagatg tttttaatat
1381 gatatcagat gctgccatgc tggtgcttca tgtgttgatg agttagacac aaagtactgc
1441 cagttcgcat atgctttaac atgttgtttc tatgtgcggt ctgacttctt aacataattg
1501 tttctaattt ctcttggata tatgaacttg cactttccac tttcaaacaa ggaggagaag
1561 catagctatc tttttcatag attttactta gagttgtata tctggtacta cataactaat
1621 ctgatacatc tacaattatg caggctattg cagagatagg gaaggaagag ggcttgaagg
1681 gttactggaa aggcaatctt ccacaggtgc ttgatattcc ccatcatgca gattgtggct
1741 catgcatggt ttattttatt ctgttggtcc tgttctcact tagtttcttt ataaactact
1801 taaggttatc cgcatagttc cttacagtgc ggtgcaactg ttttcttatg aagtttacaa
1861 ggtgataacg ccaactcttt atcatcagtc aattacctat tttggattcc tgtcatttca
1921 atttccatgt acctgctttg cattcagaaa tttttccgga gaaaggacgg agagcttact
1981 gtgtttggga gacttgctgc tggtgcttgt gcgggcatga catctacact tgtaatttat
2041 ttatttactc ctgagcaatt gtccttatat ctagtttgat ttgtttgttt gtgttctgat
2101 cattatgaaa cttctatata tacttggcta cttgctgata ggtaacttac ccactgaatg
2161 ttcttcggct gaggctagca gttcaatctg gacatagtac tatgtctcag gtaactagtt
2221 tataagcttg agtttcgttt ctggaaatta atgtaacctg atgacttaac ttttaggttg
2281 ctatgaacat gctgagagac gaaggtttgg cctccttcta tggaggcctg ggtccgtctc
2341 ttataggaat cgccccttac attgctgtga acttctgtgt ttttgacttg tgagattctt
2401 tctacctcat catataaaaa agttggtctc aaaagtagat attcacctca ccctctattc
2461 ttttctgtat gtaagaatga agaaatctgt accagagaag tataagagta gaccagagac
2521 atctctggca actgctcttc tttcagcaac atttgcaact ttgatgtgtt atcctctgga
2581 cactgttaga aggcagatgc aaatgaaagg atcaccctac aacacggttt tggatgctat
2641 tccaggtagc tgatttatat atagtccttc tggtgttgga taaacatcat cttttactta
2701 ctgcataacg ttcacttcag ctctcagatg ccagttctac atgctcactt gtagcttggt
2761 cttgtccttt atgggctaaa ctgaagcatt tcttaaattt gtctctgctg aatgcaggca
2821 ttgtggaacg tgatggtcta attggactat acagaggttt tgttccaaat gcattaaaaa
2881 atctaccaaa tagcaggtgc cttttctttt cacagtggtg gtcaactata tatttaaatt
2941 tatggcaaca ctgataggta atagtatgtt tactggcacg taacttctca ttgctcacag
3001 tattcctcaa tccatgcagt attaaactga ctgcgttcga tactgtgaag acactgatat
3061 ctactgggca gaaggaactg gagaaactaa tgcaagaaaa tcaagagaaa atgagctaag
3121 gaaaagttga cctctttgca tgctgcattt tgtttggttt tcccatttct tggggccaat
3181 tctagggttt gaatagtagc acatctattc tgttgctttg ccggatattg aggcggcgtt
3241 agaagcaaac aagacagtaa attcatttct ttagtggcaa tatggcttta gatagcgtca
3301 gcaggagcat taaccctaca agatcttatt tattggattg caagtatttg gtgatatcat
3361 aagttcttca aaaagatcag gattatacca tacagacaga tatatgaggt gctgtggagc
3421 accctggtga ctgaaatggc atcttc
<210> 2
<211> 381
<212> PRT
<213> 水稻
<400> 2
1 MetSerHisArgArgValAspAlaAlaAlaCysAspSerTrpArgPro
17 ProProThrProProProProHisAlaArgArgAlaLeuAlaLeuArg
33 ValGlyGlyGlyGlyGlyGlyProAlaPheAlaSerLeuThrValArg
49 GluGlyGlyGlyGlyGlyGluGluGlyGluValGlyGluGlyLysGly
65 LysGlnGlnGlnLeuProAlaAlaGlyValLeuValArgHisProLeu
81 AlaMetLeuAlaLeuValProAsnAlaValAlaLeuPheAlaAlaGly
97 AlaAlaAlaGlyAlaValAlaLysThrIleThrAlaProLeuAspArg
113 ValLysLeuLeuMetGlnThrHisSerValArgValValGlyGluSer
129 ThrLysLysGlyIleGlyPheLeuGluAlaIleAlaGluIleGlyLys
145 GluGluGlyLeuLysGlyTyrTrpLysGlyAsnLeuProGlnValIle
161 ArgIleValProTyrSerAlaValGlnLeuPheSerTyrGluValTyr
177 LysLysPhePheArgArgLysAspGlyGluLeuThrValPheGlyArg
193 LeuAlaAlaGlyAlaCysAlaGlyMetThrSerThrLeuValThrTyr
209 ProLeuAsnValLeuArgLeuArgLeuAlaValGlnSerGlyHisSer
225 ThrMetSerGlnValAlaMetAsnMetLeuArgAspGluGlyLeuAla
241 SerPheTyrGlyGlyLeuGlyProSerLeuIleGlyIleAlaProTyr
257 IleAlaValAsnPheCysValPheAspLeuMetLysLysSerValPro
273 GluLysTyrLysSerArgProGluThrSerLeuAlaThrAlaLeuLeu
289 SerAlaThrPheAlaThrLeuMetCysTyrProLeuAspThrValArg
305 ArgGlnMetGlnMetLysGlySerProTyrAsnThrValLeuAspAla
321 IleProGlyIleValGluArgAspGlyLeuIleGlyLeuTyrArgGly
337 PheValProAsnAlaLeuLysAsnLeuProAsnSerSerIleLysLeu
353 ThrAlaPheAspThrValLysThrLeuIleSerThrGlyGlnLysGlu
369 LeuGluLysLeuMetGlnGluAsnGlnGluLysMetSer
<210> 3
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<400>3
1 cttggctact tgctgatagg taacttaccc cctg
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
1 caggcctcca tagaaggagg ccaaa
<210> 5
<211> 208
<212> DNA
<213>野生型水稻
<400>5
1 cttggctact tgctgatagg taacttaccc cctggatgtt cttcggctga ggctagcagt
61 tcaatctgga catagtacta tgtctcaggt aactagttta taagcttgag tttcgtttct
121 ggaaattaat gtaacctgat gacttaactt ttaggttgct atgaacatgc tgagagacga
181 aggtttggcc tccttctatg gaggcctg
<210> 6
<211> 208
<212> DNA
<213>携带受温度调控叶色基因水稻
<400> 6
1 cttggctact tgctgatagg taacttaccc cctgaatgtt cttcggctga ggctagcagt
61 tcaatctgga catagtacta tgtctcaggt aactagttta taagcttgag tttcgtttct
121 ggaaattaat gtaacctgat gacttaactt ttaggttgct atgaacatgc tgagagacga
181 aggtttggcc tccttctatg gaggcctg
<210> 7
<211> 3437
<212> DNA
<213>水稻
<400> 7
1 caccgcctgc ccaccgacga cgatgagcca ccggcgagtg gatgcggcgg cgtgcgactc
61 atggaggccc ccacccacgc cgccgcctcc ccacgcccgc cgcgcgctcg ccctccgcgt
121 gggtgggggt gggggtggcc cggcgttcgc gtcgctcacc gtgcgggagg ggggaggggg
181 aggggaggag ggggaggtgg gggaggggaa ggggaagcag cagcagctgc cggcggcggg
241 ggtgctggtg aggcacccgc tggcgatgct ggcgctggtg cccaacgccg tcgcgctctt
301 cgcggcgggg gcggccgcgg gggccgtcgc caagacgatc accgcgccgc tcgaccgcgt
361 caagctcctc atgcaggtag ggcacaccat gaccccgccc ctcccgtccc gggggtttct
421 gatttctctc cctctccttg ctgtggggtg gcctgtgggt gcgtggtctg taacccactg
481 catttcctgc tcttcttctt tgtagacgca cagcgtgcgg gtggtggggg agagcaccaa
541 gaaagggatc ggattcctcg aggtaactct gatgatgtcc tccacctctt ctcttcagtt
601 tgctataaat ttctaagttg gtaagagtgt gtaattctgt tgttgctata gaatggcttt
661 tctgtagcca tggagctgat gcaacactgt ctattttagt aatgttaata ctatcgtctg
721 cgattttcat gacaacaatg tcaatctgtt gttgctataa aatgccttcc atctagccat
781 ggagttgatc ccaaccctgt ctattttagt acctgtcatt tgcaattgca tgataaattc
841 cctgaattca taagtgcagc ttccgaatac atcagggata agttagaacg aaccgagttc
901 tgtctgtgtg tgtggtgttg aacataacaa tggggtactc ttctctccac tacaaatatg
961 cagtattctg gtcttgcggt tgtatgtgaa ctgatatgga acaatgaaac tcgtggttta
1021 ctaaaaatta acacacaatc tcaaaattac gttttagaaa tttgaaaact attctgggaa
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1141 gagtcatgaa actgatgtgt ttcaccacta ccaattcgtg gttgctatct gagggaaagc
1201 cataatttgt tccaatatac ttataataca ctgtaacata ctcactgtgt cctgaattca
1261 tgatgcttct tgtatggttc agaaatgagg gtaacaatgg ttttcagaaa taggcagtgg
1321 catgccatta agttttactt atggcttcat gatgtttgtt cgtttagatg tttttaatat
1381 gatatcagat gctgccatgc tggtgcttca tgtgttgatg agttagacac aaagtactgc
1441 cagttcgcat atgctttaac atgttgtttc tatgtgcggt ctgacttctt aacataattg
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1801 taaggttatc cgcatagttc cttacagtgc ggtgcaactg ttttcttatg aagtttacaa
1861 ggtgataacg ccaactcttt atcatcagtc aattacctat tttggattcc tgtcatttca
1921 atttccatgt acctgctttg cattcagaaa tttttccgga gaaaggacgg agagcttact
1981 gtgtttggga gacttgctgc tggtgcttgt gcgggcatga catctacact tgtaatttat
2041 ttatttactc ctgagcaatt gtccttatat ctagtttgat ttgtttgttt gtgttctgat
2101 cattatgaaa cttctatata tacttggcta cttgctgata ggtaacttac ccactggatg
2161 ttcttcggct gaggctagca gttcaatctg gacatagtac tatgtctcag gtaactagtt
2221 tataagcttg agtttcgttt ctggaaatta atgtaacctg atgacttaac ttttaggttg
2281 ctatgaacat gctgagagac gaaggtttgg cctccttcta tggaggcctg ggtccgtctc
2341 ttataggaat cgccccttac attgctgtga acttctgtgt ttttgacttg tgagattctt
2401 tctacctcat catataaaaa agttggtctc aaaagtagat attcacctca ccctctattc
2461 ttttctgtat gtaagaatga agaaatctgt accagagaag tataagagta gaccagagac
2521 atctctggca actgctcttc tttcagcaac atttgcaact ttgatgtgtt atcctctgga
2581 cactgttaga aggcagatgc aaatgaaagg atcaccctac aacacggttt tggatgctat
2641 tccaggtagc tgatttatat atagtccttc tggtgttgga taaacatcat cttttactta
2701 ctgcataacg ttcacttcag ctctcagatg ccagttctac atgctcactt gtagcttggt
2761 cttgtccttt atgggctaaa ctgaagcatt tcttaaattt gtctctgctg aatgcaggca
2821 ttgtggaacg tgatggtcta attggactat acagaggttt tgttccaaat gcattaaaaa
2881 atctaccaaa tagcaggtgc cttttctttt cacagtggtg gtcaactata tatttaaatt
2941 tatggcaaca ctgataggta atagtatgtt tactggcacg taacttctca ttgctcacag
3001 tattcctcaa tccatgcagt attaaactga ctgcgttcga tactgtgaag acactgatat
3061 ctactgggca gaaggaactg gagaaactaa tgcaagaaaa tcaagagaaa atgagctaag
3121 gaaaagttga cctctttgca tgctgcattt tgtttggttt tcccatttct tggggccaat
3181 tctagggttt gaatagtagc acatctattc tgttgctttg ccggatattg aggcggcgtt
3241 agaagcaaac aagacagtaa attcatttct ttagtggcaa tatggcttta gatagcgtca
3301 gcaggagcat taaccctaca agatcttatt tattggattg caagtatttg gtgatatcat
3361 aagttcttca aaaagatcag gattatacca tacagacaga tatatgaggt gctgtggagc
3421 accctggtga ctgaaatggc atcttc

Claims (6)

1.一个受温度调控水稻叶色基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.根据权利要求1所述的一个受温度调控水稻叶色基因，其特征在于所述的基因序列所编码的蛋白质为SEQ ID No.2所示的381个氨基酸序列。
3.一种用于检测权利要求1所述的受温度调控水稻叶色基因的特异性dCAPs PCR引物，其特征在于，其核苷酸序列为：
上游：5’-CTTGGCTACTTGCTGATAGGTAACTTACCCCCTG-3’（SEQ ID No.3）
下游：5’-CAGGCCTCCATAGAAGGAGGCCAAA-3’（SEQ ID No.4）。
4.一种用于检测权利要求1所述的受温度调控水稻叶色基因的方法，其特征在于，用权利要求3所述的特异性dCAPs PCR引物对野生型水稻和携带受温度调控叶色基因水稻苗期所提取的DNA进行PCR扩增反应，得到208bp核苷酸序列，由携带受温度调控叶色基因的水稻DNA扩增得到的208bp片段不含EcoRII酶的内切位点，不被EcoRII切断，而由野生型水稻扩增所得到的208bp片段能切成30bp和178bp的两个特异性片段。
5.根据权利要求4所述的受温度调控水稻叶色基因的检测方法，其特征在于所述的野生型水稻208bp核苷序列如SEQ ID No.5所示，所述的携带受温度调控叶色基因水稻208bp核苷序列如SEQ ID No.6所示。
6.根据权利要求4或5所述的受温度调控水稻叶色基因的检测方法，鉴别是否含有温度调控基因的步骤为，将野生型水稻如嘉花1号的DNA扩增所得到的208bp片段用EcoRII酶切出现30bp和178bp的特异性片段，而由携带受温度调控叶色基因水稻植株DNA扩增得到的208bp片段用EcoRII酶切后仍是208bp，说明含有温度调控水稻叶色基因。
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