CN1057126C

CN1057126C - 使用微生物制备有机硒提取剂的方法

Info

Publication number: CN1057126C
Application number: CN94115520A
Authority: CN
Inventors: 苏琪; 骆尚骅; 周宗俊; 刘强; 段文瑛
Original assignee: Zhuhai Zhongzhi Biotechnology Co; CHINESE ACADEMY OF AGRICULTURAL SCIENCES
Priority date: 1994-09-10
Filing date: 1994-09-10
Publication date: 2000-10-04
Anticipated expiration: 2014-09-10
Also published as: CN1121531A

Abstract

一种使用微生物食用菌菌株，接种后经过生物固体发酵转化，培育出高含量有机硒鲜品原料，经过粉碎打浆、浸提、离心分离、减压浓缩、沉淀离心、配料灭菌等工艺流程，制备出有机硒提取剂的水剂和粉剂。根据需要可以与各种食物、药物配合，制成口服液、胶囊、冲剂、糖丸、饮料、食品等各种形式的富硒补硒营养保健制品。本发明具有工艺简单、制作方便、总硒中有机硒比例在99%以上，高蛋白和氨基酸、低脂肪、低能量、富含蕈菌多糖、多种维生素(A、B、C、D、E)及矿质和微量元素。属纯天然制品，补硒效果及医疗保健作用比较明显，适合于规模生产等特点。

Description

使用微生物制备有机硒提取剂的方法

本发明使用微生物食用菌菌株，在培养基中，经过生物固体发酵培育出子实体，采摘其富硒鲜品原料，经过粉碎打浆、浸提、离心分离，减压浓缩、配料等工艺流程，提取有机硒水(粉)剂。国际分类属于C12R，涉及的是生物化学技术领域。

在公知技术中，经初步检索找出24件有关硒的中国专利，其中相近似的专利技术有：85107995“富硒麦芽的生产方法”，86100490“利用抗氨固氮菌生产富硒单细胞蛋白，维生素E和菌肥的方法”，88103347“硒化卡拉胶的制法”，91102488“黑豆硒力汁的制造方法”，91108877“富硒茶的人工栽培方法”，92107669“硒多糖及其制造方法”，92111121“硒力口服液生产工艺”等。

上述对比文件中的技术及其产品，一个共同点就是对硒这个微量元素的作用给予了充分肯定，补硒对人体提高免疫能力和医疗保健作用，都有明确的认识，技术方案及其制造方法都是可行的，并且取到了一定的积极效果。但是，它们仍然存在着许多不足之处：

它们大都未使用微生物食用菌菌株，培育鲜品原料，提取高含量的纯天然的有机硒制品，甚至有一部分是有机硒和无机硒的混合体。

通过叶面喷洒或根部吸收无机硒，而欲达到转化有机硒的目的，这种方法有机硒转化率低，所得到的叶子硒成份为有机硒和无机硒的结合体，且叶面含部分残留未吸收利用的无机硒，硒含量无法控制。

由于不是真正的纯天然有机硒制品，且不具增强免疫、防癌、治癌特性的蕈菌多糖，它的补硒作用及医疗保健效果相对较弱。

所以，对硒的研究还有深入一步。硒已被世界卫生组织确定为维持人和动物机体正常生命活动的必需微量雹素之一。硒缺乏还是心血管病、各种癌症、肝病等发生诱因或病因，由此，应该有更新的技术，更好的产品出现，来满足社会的需要。

本发明的目的，就是提供一种使用微生物食用菌菌株，经过生物固体发酵转化成鲜品原料，再经过特定的工艺流程，提取出高含硒和蕈菌多糖纯天然的，有机硒转化率高而且含硒量能人为有效控制和标码的，最终提取物几乎不含无机态硒因而无毒无付作用的，补硒作用及医疗保健效果比较显著的天然有机硒提取剂的制备方法。

为实现上述目的，本发明主要采取以下措施来达到：

使用聚硒能力强的侧耳科侧耳属食用菌菌株(pleurotus.sp)，在以植物壳体为主，经科学配制的培养基中接种，通过生物固体发酵转化，生成子实体，即高含量有机硒鲜品原料，再通过特定的工艺流程，接种→培育鲜品原料→粉碎打浆→浸提→离心分离→减压浓缩→沉淀离心→配料→灭菌→成品。离心分离流程中离心机内的固形沉淀物直接进入配料流程。提取出天然有机硒(水和粉)剂。

本发明还可以通过其他措施来达到：

1、菌株接种用的培养基的配方：

植物壳体 80-98％

麸皮 5％

石膏 1％

复合添加剂I 0.1-2％(维生素B、糖等)

复合添加剂II 0.01-1％(硒、钠、钾、镁、磷、硫)

玉米粉 2％

加水混合。

2、菌丝及实体培养条件：

菌丝培养温度；20-28℃ 子实体培养温度：10-25℃

菌丝培养湿度：60-75％子实体培养湿度：75-95％

菌丝培养时间：15-20天子实体培养时间：30-60天

光照要求：不需光。光照要求：散射光。

3、培育出的有机硒鲜品原料，包括平菇、香菇、金针菇灵芝、猴头等，按1份鲜品原料(含水量88-92％)3份水的比例混合，另加入含0.6％的柠檬酸水溶液，然后用打浆机粉碎得到的浆液，将该液在20-30℃的恒温条件下浸提0.5-1hr。

4、将恒温条件下浸提后的混合液，用300目筛网，在2000-4000rpm的离心机中离心分离，分别得到上清液和固形沉淀物，上清液进入减压浓缩流程，固形沉淀物在80℃烤箱中烤干，粉碎进入配料流程。该粉剂中有机硒含量达150-250ppm.蕈菌多糖为14-18g/100g干品。

5、上清液是在660mmHg汞柱的真空度50-70℃的条件下，于减压浓缩缸中，浓缩60％。

6、在所得到的浓缩液中，加入浓度为30-50ppm，并事先溶解在醋酸溶液中的甲壳素，然后加热至100℃，保温沉淀1’，静止0.5hr。再用200-300目的尼龙筛网，2000-4000rpm的离心机，进行离心沉淀。

7、经离心沉淀后的上清液，按其总重量加入0.01-0.05％的黄原酸，山犁酸钾等，搅拌均匀。所得的水剂中有机硒含量为50-100ppm，蕈菌多糖含量4-8g/100ml。

本发明具有如下的特点：

本发明使用的菌株(Pleurotus.sp)是经过认真筛选培育的，菌丝洁白，致密、好氧、无毒可食；

使用该食用菌菌株转化的鲜品原料，工艺简单、制造方便，而且是纯天然原料，食用菌鲜品因非菌表面直接喷施无机硒，故鲜品表面不含无机硒，总硒中有机硒比例在99％以上，明显优于其它技术高于其他富硒产品；

提取剂中还含有丰富的蕈菌多糖，维生素A、B、C、D、E，可协同有机硒起抗氧化能力，请除氧自由基，延缓衰老，防治各种癌症；

生产成本低，适合于规模生产；

由于本发明的提取物为浓缩剂型的水剂和粉剂，易于包装运输，便于配料制成饮料，口服液，食品糖丸、胶囊，冲剂等各种形式的富硒补硒制品。

本发明附图即工艺流程方框图的图面说明：

1、食用菌菌株，2、生物固体发酵，3、有机硒鲜品原料，4、粉碎打浆，5、浸提，6、离心分离，7、固形物处理，8、减压浓缩，9、沉淀离心，10、配料，11、灭菌，12、成品。

以下结合工艺流程方框图及实施例对本发明作比较详细的说明：

本发明所使用的食用菌菌株为真菌门，担子菌、伞菌目、侧耳科、侧耳属、其拉丁名称为Plurotus.sp。该菌株是中国农业科学院食品工业研究所经多年研究，筛选和培育出的富硒食用菌，称之为“中植营养素8号”，它无毒可食，菌丝洁白、致密、好氧。培养条件为PH3-11，C/N比为20-25∶1。菌株一般在4℃情况下可保存0.5-1年。中国农业科学院食品工业研究所可以提供该菌株20年以上。

现于一九九四年九月六日委托“北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”保藏，保藏号为CGMCC 0217号。

本发明的实施例是这样的：

使用上述高富硒食用菌菌株(Pleurotus.sp)在以棉仔壳为主料的培养基中接种，培养基配料配方：

棉仔壳体 80-98％

麸皮 5％

石膏 1％

复合添加剂I 0.1-2％(维生素B和糖等)

复合添加剂II 0.01-1％(硒、钠、钾、镁、磷、硫)

玉米粉 2％

加水混合。

按照下列条件培养菌丝及子实体：

菌丝培养温度：20-28℃ 子实体培养温度：10-25℃

菌丝培养湿度：60-75％子实体培养湿度：75-95％

菌丝培养时间：15-20天子实体培养时间：30-60天

光照要求：不需光。光照要求：散射光。

本实施例接种培育的平菇，其它如香菇、金针菇、灵芝，猴头等都可作为富硒菌株和鲜品原料。有机硒鲜品原料，是一种富含有机硒的蕈菌产品，主要以硒蛋白、硒多糖，形式存在外，还含有大量的蕈菌蛋白、蕈菌多糖(包括平菇多糖、香菇多糖、金丝菇糖、灵芝多糖、猴头多糖)以及维生素A、B、C、D、E和丰富的矿质与微量元素等。其中具有抗癌和免疫活性的蕈菌多糖是由以分子量为10万-200万三链右旋螺旋状结构存在的β-(1→3)-D-葡聚糖、并具有-β-(1→6)-单葡糖基的支链组成。硒蛋白主要以硒——半胱氨酸、硒蛋氨酸的形式结合。硒蛋白在蕈菌体内的具体合成途径，大致用下式表达：

鲜品原料的打浆浸提流程：将有机硒鲜品原料按1份原料3份水的比例加入打浆机中，随即加入0.6％的柠檬酸水溶液，混合均匀，用打浆机粉碎，再将此浆液在20-30℃的恒温条件下浸提0.5-1hr。

浸提液的离心分离流程：

将打浆浸提后的混合液，用300目尼龙筛网，在2000-4000rpm的离心机内离心分离。分别得到上清液和固形沉淀物。其中上清液的主要成份包括有机硒蛋白、多糖和氨基酸、结合蛋白、树脂、纤维素、矿质元素、有机酸等。固形沉淀物包括纤维素，糖纤维素、木质素、游离蛋白结合态硒等。所得上清液转入减压浓缩流程，所得固形沉淀物在80℃的烤箱中烤干粉碎直接进入配料流程。

上清液的减压浓缩流程：

将上述离心分离所得到的上清液，在660mmHg汞柱的真空度，温度为50-70℃的条件下，于减压浓缩缸中，浓缩至所加入上清液重量的60％时，可停止浓缩。

沉淀离心流程：

在所得到的浓缩液中，加入浓度为30-50ppm的而且事先溶解在醋酸溶液中的甲壳素，然后加热至100℃，保温沉淀1’，静止0.5hr.用200-300目尼龙筛网，在2000-4000rpm的离心机内，进行离心分离。去掉部分水份后的浓缩液，主要成分包括有有机硒蛋白、多糖和氨基酸、结合蛋白、有机酸、矿质元素、维生素等，而一些纤维素、半纤维素、树脂素物质、部分蛋白，被甲壳素聚合沉淀于固形物中。

配料流程：

将上述沉淀分离所得上清液，按总重量加入0.01-0.05％的黄原胶，山犁酸钾等，于配料缸中搅拌混匀，制作成浓缩剂，主要成分包括有机硒蛋白、多糖、氨基酸、硒蛋氨酸、硒胱氨酸、有机酸、矿质元素、维生素及非含硒蛋白、多糖等物质。浓缩剂包括水剂和粉剂两种。

将所提取的浓缩剂，可以与各种可食物配制成口服液，冲剂、胶囊、糖丸、饮料、食品等各种形式的富硒补硒制品。

灭菌及成品流程：

所得到的水剂灌装入瓶，在高压灭菌锅内，于121-125℃，1.0-1.2蒸气压下消毒灭菌10-15分钟，取出后又在20-25℃条件下保温培养72hr，检查各项微生物指标及其它各项指标，合格则包装为成品。所得粉剂根据需要进行配料，产品真空充氮包装保存。

本发明使用微生物食用菌菌株制备的有机硒(水、粉)提取剂，经北京市卫生局药检所进行的小白鼠毒性试验。分别为：

1、有机硒浓缩液水剂急性毒性试验：

取健康的昆明种小白鼠17-19g的20只，雌雄和半，每次口服灌胃0.8ml，(原提取剂稀释10倍)一日二次，总计1.6ml/日/只，相当于人用剂量的133倍，观察7天，结果表明：7天内小白鼠全部健康存活，体重增加且正常生长，未见异常反应。

2、有机硒粉剂的急性毒性试验：

采用昆明小白鼠18g的20只，雌雄各半，每次口服灌胃0.0625g/只，相当于人用剂量的104倍，观察7天，小白鼠全部存活，体重增加且正常生长，未见异常反应。

Claims

1、一种使用微生物制备有机硒提取剂的方法，该方法是利用生物化学方法，从培育的含硒原料中，提取有机硒制剂，其特征在于：使用聚硒能力强的侧耳科侧耳属食用菌菌株Pleurotus.SP CGMCC0217，在以植物壳体为主的培养基中接种，分别进行菌丝培养和子实体培养，获得有机硒鲜品原料，进行粉碎打浆、浸提、离心分离、减压浓缩、沉淀离心、配料、灭菌。

2、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：菌株接种用培养基配料比(重量比)为：

植物壳体 80-98％

麸皮 5％

石膏 1％

复合添加剂I(维生素B、糖) 0.1-2％

复合添加剂II(硒、钠、钾、镁、磷、硫) 0.01-1％

玉米粉 2％

加水混合，各组分之和＝100％

3、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：菌丝及子实体培养条件分别为：

菌丝培养温度：20-28℃，子实体培养温度：10-25℃

菌丝培养湿度：60-75％，子实体培养湿度：75-95％

菌丝培养时间：15-20天，子实体培养时间：30-60天

光照要求：不需光，光照要求：散射光

4、按照权利要求1所述的方法，其特征在于其中所说的粉碎打浆是将有机硒鲜品原料粉碎后，按1份鲜品原料3份水的比例混合，另加入含0.6％的柠檬酸水溶液，然后用打浆机粉碎得到浆液，其中所说的浸提是将打浆液在20-30℃的恒温条件下浸提0.5-1hr。

5、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：其中所说的离心分离是将浓缩液用300目筛网，在2000-4000rpm的离心机内离心分离，分别得到上清液和固形沉淀物。

6、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：其中所说的减压浓缩是将离心上清液在660mmHg汞柱的真空度，50-70℃的条件下，于减压浓缩缸中浓缩60％。

7、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：其中所说的沉淀离心是在浓缩液中加入浓度为30-50ppm，并事先溶解在醋酸溶液中的甲壳素，然后加热至100℃，保温沉淀1分钟，静止0.5hr，再用200-300目的尼龙筛网，于2000-4000rpm的离心机中进行离心沉淀。

8、按照权利要求1所述的方法，其特征在于：其中所说的配料是将离心沉淀后的上清液，按其总重量加入0.01-0.05％的黄原胶，山梨酸钾搅拌均匀，与各种食物配制口服液、胶囊、冲剂、糖丸、饮料、食品。