CN105707300B

CN105707300B - 一种抵御雾霾的石斛伴生红茶、饮料及其加工方法和应用

Info

Publication number: CN105707300B
Application number: CN201610093710.2A
Authority: CN
Inventors: 刘仲华; 林勇; 冯漾; 彭中胜; 刘建军; 李勤; 林海燕; 洪乐乐
Original assignee: Han Long Bio Tech Ltd Guizhou; Hunan Agricultural University
Current assignee: Han Long Bio Tech Ltd Guizhou; Hunan Agricultural University
Priority date: 2016-02-19
Filing date: 2016-02-19
Publication date: 2019-07-02
Anticipated expiration: 2036-02-19
Also published as: CN105707300A

Abstract

本发明涉及一种抵御雾霾的石斛伴生红茶、饮料及其加工方法和应用，所述石斛伴生红茶是以石斛伴生茶叶为原料，经摊放、揉捻或揉切、发酵、初烘、复烘后得到的，所述石斛伴生红茶具有口感干爽、汤色橙红明亮、香气愉悦的特点；所述石斛伴生茶饮料是以所述石斛伴生红茶为原料，经提取，调配得到的；本发明的石斛伴生红茶及石斛伴生茶饮料具有抵御雾霾的作用，能够抑制HMGB1，IL‑6，TNF‑α在肺部的表达，达到防治肺损伤的功能。

Description

一种抵御雾霾的石斛伴生红茶、饮料及其加工方法和应用

技术领域

本发明属于食品技术领域，尤其涉及一种抵御雾霾的石斛伴生红茶、饮料及其加工方法和应用。

背景技术

大气环境是人类生存最主要的条件之一。近年来，随着工农业生产，交通运输业的迅速发展及煤炭石油等能源利用的不断增大，大气环境受到了严重污染，雾霾的出现也日益频繁，在不少城市雾霾的出现已经成为一种常态，雾霾已经对人体健康构成了严重威胁。治理雾霾已成为当下最为迫切的任务之一，因此，探索具有抵御或者治疗雾霾作用的保健产品和药物已成为不少科研工作者们的目标。

石斛是我国传统名贵中药材，为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)植物新鲜或干燥茎的统称，我国76种石斛中约有40种为药用石斛，传统中医常将其用于滋阴清热、生津益胃、止咳润肺、清音明目，在临床中应用相当广泛。

中国是茶的故乡，茶叶利用历史悠久，中国明代李时珍所撰《本草纲目》对茶的药理作用记载详细，曰：“茶苦而寒，阴中之阴，沉也，降也，最能降火。火为百病，火降则上清矣。然火有五次，有虚实。苦少壮胃健之人，心肺脾胃之火多盛，故与茶相宜。”“茶主治喘急咳嗽，祛痰垢。”认为茶有清火去疾的功能。

早在《神农本草经》中，即有“茶味苦，饮之使人益思，少卧”的记载，还记载相传“神农尝百草，日遇七十二毒，得茶而解之”。《唐本草》说：“茶味甘苦，微寒无毒，去痰热，消宿食，利小便”。汉代名医张仲景说：“茶治便脓血甚效。”至今，我国民间仍有用茶叶治疗痢疾和肠炎的习惯。如将茶叶与药物或食物配成药茶，则疗效更好。如用姜茶治痢疾，薄荷茶、槐叶茶用于清热，茶与石斛、麦冬等制作成石斛伴生茶具有养阴清热，生津利咽等功效。

随着石斛的不断开发利用，各种形式的石斛产品和专利不断出现，如一种铁皮石斛保健茶的加工方法及其产品(CN 103315103 A)，该发明中石斛伴生茶及其制备方法是将洗净晾干后的石斛茎部经过切片、揉捻、烘焙制成条状或者片状或者卷曲的片状石斛伴生茶。以该发明专利制得的石斛伴生茶与传统意义上的茶叶在色香味形等方面都存在很大的差异。

开发一种既具有石斛的保健功效，有兼具传统茶叶优良品质特征的产品，将具有及其广大的市场前景。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种抵御雾霾的石斛伴生红茶的加工方法，该种加工方法以石斛伴生茶叶为原料，优选地，本发明涉及到的石斛伴生茶叶是按照专利CN104904540A的方法栽培得到的。该栽培方法将青苔石斛驯化苗绑在茶树主枝干上部，营造一个青苔、石斛和茶树共生的生长环境，在共生条件下，茶叶因化感作用，在保持自身优良品质特征外，吸收石斛中的一些微量元素和芳香物质，采用此种茶树鲜叶作为本发明石斛伴生红茶的原料，加工得到的红茶在保持传统茶叶优良品质之外，还兼有部分石斛的保健功效。

所述石斛伴生红茶的加工方法，具体包括如下步骤：

(1)摊放：从石斛伴生茶树上采摘茶叶，并将所述茶叶摊放4-8h；

(2)揉捻或揉切：将摊放处理后的茶叶进行揉捻，揉捻至成条率达85％以上；或者，将摊放处理后的茶叶进行揉切，揉切至碎茶率达85％以上；

(3)发酵：将揉捻或揉切处理后的茶叶在28-35℃，湿度85％以上的条件下发酵；

(4)初烘：将发酵后的茶叶在80-100℃条件下干燥至水分含量为15-20％；

(5)复烘：将初烘后的茶叶摊放30-45min，然后在60-80℃条件下干燥至水分含量为4-6％，即得所述石斛伴生红茶。

优选地，为了得到口感及保健功能最佳的红茶，本发明采用的茶叶原料为单芽、一芽一叶初展、一芽二叶、一芽三叶或一芽四叶。进一步优选地，对单芽或一芽一叶初展的原料进行揉捻处理；对一芽二叶，一芽三叶或一芽四叶的原料进行揉切处理。

优选地，在步骤(2)揉捻或揉切处理之前，还包括将摊放后的茶叶按照茶叶大小进行分级的步骤，经过分级后的茶叶分别进行后续处理。

优选地，步骤(2)所述的揉捻为冷揉，并按照轻重轻的加压方式进行。进一步优选地，使用揉捻机进行揉捻，通过控制揉桶盖与茶叶表面的松紧度来控制揉捻的压力，如在揉捻开始，不加压，使叶片初步成条；然后向下调整揉桶盖的高度，初步加压收紧茶条；之后逐步减压或轻压，使茶条成圆，回收茶汁。

优选地，在步骤(2)揉捻之后，还包括将揉捻后的茶叶解块的步骤，解块的目的是避免茶团的出现，影响最终红茶的品质，将经解块处理后茶叶再进行后续的发酵处理。

优选地，在步骤(5)复烘之后，还包括将复烘后的茶叶按照茶叶大小进行分级的步骤，以及分级后，将大小一致的茶叶混合均匀进行包装的步骤。

优选地，步骤(3)发酵的时间为45-90min，进一步优选地，发酵至茶条为金黄色或橙黄色，香气带花香或果香。

本发明的第二个目的是提供一种抵御雾霾的石斛伴生红茶，所述石斛伴生红茶是通过上述任意一种方式加工得到的。

本发明的石斛伴生红茶具有口感干爽、汤色橙红明亮、香气愉悦的特点。

本发明的第三个目的是提供一种石斛伴生茶饮料的制备方法，所述方法包括如下步骤：

1)以上述任意一种石斛伴生红茶为原料，按照茶：水＝1:(10-20)的比例，在75-100℃条件下，提取45-60min，得提取液；

2)过滤所述提取液，得滤渣和过滤液，向所述过滤液中加入维生素C和/或植物糖，得调配液；

3)在130-135℃条件下对所述调配液灭菌处理3-8s，即得所述石斛半生茶饮料。

优选地，为了最大程度的回收提取液中的有效成分，向所述滤渣中加入水，按照步骤1)的提取方式重新提取一次，得二次提取液，过滤所述二次提取液，得二次过滤液，并将所述二次过滤液合并进入所述提取液中，进行后续加工；进一步优选地，向所述滤渣中加入的水的量为步骤1)中水量的一半。

优选地，维生素C的添加质量为0.001％-0.008％，植物糖的添加质量为0.01％-0.06％。

所述添加量为重量体积百分比，即，每100g提取液中加入0.001-0.008g的维生素C，或每100g提取液中加入0.01-0.06g植物糖。

进一步优选地，所述植物糖为甜菊糖。

进一步优选地，在步骤3)后，还包括灌装的步骤，所述灌装为：将灭菌处理后的调配液进行热灌装，灌装结束后保持5-15min，再冷却至室温。

本发明的第四个目的是提供一种石斛半生茶饮料，所述石斛半生茶饮料是通过上述方法制备得到的。

本发明的第五个目的是提供上述任意一种石斛伴生红茶或石斛伴生茶饮料在制备具有防治肺损伤功能的食品、保健品或药品中的应用。

优选地，所述肺损伤是由PM2.5引起的。

进一步优选地，所述防治为抑制HMGB1，IL-6，TNF-α在肺部的表达。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

一种抵御雾霾的石斛伴生红茶的制备方法，包括如下步骤：

(1)采摘：采石斛伴生茶树嫩梢一芽一叶初展，避免露水、雨水、风伤、虫害、病害等芽叶100kg；

(2)摊放：将采摘后的茶叶摊放于阴凉通风5h；

(3)分级：经过摊放的鲜叶采用分级机按大小分离，分离后的茶叶分别进行下述操作；

(4)揉捻：将萎凋适度的鲜叶进行揉捻，为保证茶叶的优良的色香味品质特征，采用冷揉方式进行，按照轻重轻的加压方式，揉捻至成条率达98％；

(5)解块分筛：将揉捻叶进行解块，避免茶团的出现；

(6)发酵：将解块后的发酵叶放入发酵箱或者发酵室中进行发酵，温度28-30℃，湿度90％，发酵45min至85％以上的茶条为橙黄或金黄色，香气带花香或者果香；

(7)初烘：经过发酵后的茶制品采用茶烘焙机进行干燥，在80℃条件下干燥至水分含量20％；

(8)摊凉：初烘的茶制品在水筛或地板上摊放30min，促进水分的重新分布；

(9)复烘：将摊凉叶再次进行干燥，在70℃条件下干燥至水分含量5％；

(10)分选：将经过复烘的在制品用抖筛或圆筛进行分级；

(11)匀堆：将经过分选的大小一致的在制品混合均匀；

(12)包装：根据需要选择不同包装将匀堆后的在制品进行包装。

实施例2

一种抵御雾霾的石斛伴生碎红茶的制备方法，包括如下步骤：

(1)采摘：采石斛伴生茶树一芽三叶，一牙四叶，避免露水、雨水、风伤、虫害、病害等芽叶100kg；

(2)摊放：将采摘后的茶叶摊放于阴凉通风处8h；

(4)揉切：将摊放处理后的茶叶进行揉切，揉切至碎茶率达90％；

(5)发酵：将解块后的发酵叶放入发酵箱或者发酵室中进行发酵，温度28-32℃，湿度92％，发酵至85％以上的茶条为橙黄或金黄色，香气带花香或者果香；

(6)初烘：经过发酵后的茶制品采用茶烘焙机进行干燥，在95℃条件下干燥至水分含量16％；

(7)摊凉：初烘的茶制品在水筛或地板上摊放45min，促进水分的重新分布；

(8)复烘：将摊凉叶再次进行干燥，在80℃条件下干燥至水分含量4％；

(10)分选：将经过复烘的在制品用抖筛或圆筛进行分级；

(11)匀堆：将经过分选的大小一致的在制品混合均匀；

实施例3

一种石斛伴生茶饮料的制备方法，具体步骤为：

1)以10g实施例1制备得到的石斛伴生红茶为原料；

2)向所述茶叶中加入100mL水，在75℃条件下，提取60min，得一次提取液；

3)过滤所述一次提取液，得一次过滤液和滤渣；

4)向所述滤渣渣中添加50mL水，按2)的操作方式再提取一次，得二次提取液；

5)过滤4)所述的二次提取液，得二次过滤液；

6)将一次过滤液和二次过滤液混合，并按照0.001％的添加量添加食用级维生素C，并混合均匀，得混合液；

7)灭菌：将所述混合液在130-135℃高温下瞬时灭菌5S；

8)灌装：将灭菌处理后的混合液采用热灌装程序，满灌后保持10min，冷却即得。

实施例4

一种石斛伴生红茶饮料的制备方法，具体步骤为：

1)以10g实施例2制备得到的石斛伴生红碎茶为原料；

2)向所述红茶中加入200mL水，在100℃条件下，提取45min，得一次提取液；

3)过滤所述一次提取液，得一次过滤液和滤渣；

4)向所述滤渣中添加50mL的水，按2)的操作方式再提取一次，得二次提取液；

5)过滤4)所述二次提取液，得二次过滤液；

6)将一次过滤液和二次过滤液混合并进行调配，按照0.06％的添加量添加0.06％的甜菊糖，并搅拌均匀，的混合液；

7)灭菌：将所述混合液在130-135℃高温下瞬时灭菌5S；

8)灌装：将灭菌后的混合液采用热灌装程序，且满灌后保持10min，冷却即得。

审评：

将实施例1加工好的石斛伴生红茶3g放入150mL的专业名优茶审评杯中，加入100℃的纯净水150mL，冲泡5min，过滤茶汤于审评碗中。对香气、茶汤颜色、滋味进行分别审评，审评结果为：实施例1中的石斛伴生红茶，外形紧细匀直，毫尖金黄，色泽乌润，香气浓郁，带兰花香，滋味甜醇，汤色红艳明亮。

将实施例2加工好的石斛伴生红碎茶3g放入150mL的专业名优茶审评杯中，加入100℃的纯净水150mL，冲泡5min，过滤茶汤于审评碗中。对香气、茶汤颜色、滋味进行分别审评，审评结果为：实施例2中的石斛伴生红碎茶，外形匀整，颗粒较大，汤色红浓，香气浓郁，具兰花香，滋味浓厚。

不同红茶感官审评分析

1 材料与方法

1.1 材料

样品1，湖南省高桥茶叶市场购买的一芽一叶功夫红茶；

样品2，实施例1制备得到的一芽一叶石斛伴生红茶；

样品3，湖南省高桥茶叶市场购买的红碎茶；

样品4，实施例2制备得到的一芽三叶石斛伴生红碎茶。

1.2 方法

按照茶叶感官审评方法GB/T 23776-2009，并参照国家标准审评术语进行品质评价，评分项目有:外形、香气、汤色、滋味和叶底，从评茶盘中扦取充分混匀的有代表性的红茶茶样各3.0g,置于相应的评茶杯中，注满150ml沸水,加盖、计时，5min后按冲泡顺序依次等速将茶汤滤入评茶碗中，留叶底于杯中，按香气(热嗅)、汤色、香气(温嗅)、滋味、香气(冷嗅)、叶底的顺序逐项

审评，审评评分采用集体评分的方法，由5名评茶员一起完成，评语使用GB/T14487中的术语。评分采用百分制，品质因子评分系数为外形25％，汤色10％，香气25％，滋味30％，叶底10％。将单因子的评分系数相乘，并将各个乘积值相加即为该茶样审评的总得分。

2 结果与分析

感官审评结果，由表1可知：两种功夫红茶(样品1、样品2)相比，样品2外形紧细并带金毫，香气甜香带兰花香，滋味醇厚带花香，叶底红亮，品质为高档功夫特征，品质优于市售同嫩度的样品1；两种红碎茶(样品3、样品4)相比，样品4颗粒紧结重实、乌润，汤色红艳，香气高鲜带花香，滋味浓爽，叶底红亮，为高档红碎茶品质特征，品质优于样品3。由表2可知：四种红茶得分排名最高两位分别为样品2、样品4，两个样品均带有明显的兰花香，说明石斛伴生茶树在生长过程中吸收了石斛的香气物质，从而影响到伴生红茶的品质特征。

表1 不同红茶样品感官审评结果

表2 不同红茶样品感官审评结果

为了进一步说明本发明石斛伴生茶的功效，下面通过石斛伴生茶抵御雾霾的研究进行说明。

1.实验材料

1.1 主要仪器设备

TH-1000智能大容量PM2.5采样器(天虹智能仪表厂，武汉)

分析天平：上海第二天平仪器厂，中国

电子天平(1509001)：GAMR公司，德国

恒温超声振荡器(THZ一98A)：上海一恒科技仪器公司，中国

低温超速离心机(541SR)：GAMR公司，德国

真空冷冻干燥机(ALPhaZ一4)：Christ公司，德国

高压灭菌器(YX280B)：上海三申医疗器械厂，中国

微量加样器(Q/CYFC01一2001)：上海雷勃分析仪器公司，中国

恒温水浴锅(上海金宏实验设各有限公司,DKB-501)

1.2 试剂和材料

生理盐水，水合氯醛(分析纯，99.5％，C2H3Cl3O2，分子量：165.40，天津市福晨化学试剂厂，符合HG3-1004-76，XK13-201-00116，批号：20101015)，酸性磷酸酶(ACP)，碱性磷酸酶(AKP)，乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH)试剂盒购自南京建成生物制剂有限公司。磷酸盐缓冲液。静脉输液管，注射器，一次性采血针，普通采血管，离心管，甲醛，冰醋酸(分析纯)。HMGB1兔单克隆抗体(美国epitomics公司)，辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗(美国santaeruz)，β肌动蛋白(β-actin)大鼠单克隆抗体、总蛋白提取试剂盒、钠盐(BCA)蛋白定量试剂盒、DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(北京博奥森)，TNF-α、Il-6、ELISA试剂盒(达科为生物科技有限公司)。

2.实验方法

2.1 PM2.5样品采集及处理

2.1.1 滤膜前期处理

一般采用玻璃纤维滤膜，采样前，滤膜采样前恒温干燥24小时称重，检查其是否完整。天平室要求室温在20-25℃，温度变化小于3℃，相对湿度小于50％，相对湿度变化小于5％。称量注意事项：称量前要用2-5g标准祛码检测分析天平的准确度，砝码的标准值与称量值的差不应大于0.5mg。称量滤膜时要准确到0.lmg，称量要快，每张滤膜应在30秒内称完。

2.1.2 大气采样

采样器周围100m内无主要污染源及建筑遮挡物。以玻璃纤维滤膜24小时连续采集PM2.5，采样流量为10L/min，采样每隔24小时更换一次滤膜，连续采样30天，雨雪天气停止采样。采样后滤膜对折后(尘面朝里)立即装入编好号的密封袋，在同样条件(相同恒温恒湿的环境中)下平衡24小时，用分析天平仔细称量滤膜，前后质量之差(即为所采颗粒物重量)。记录重量变化。-30℃避光保存，备用。

2.1.3 PM2.5悬液制备

将载有PM2.5的滤膜剪成1x1cm大小，浸入蒸馏水中，在超声震荡器上反复震荡，收集洗脱液。再加入蒸馏水进行第二次超声振荡，两次洗脱液液体合并于锥形瓶中。六层无菌纱布过滤，滤液即为PM2.5悬浮液，真空冷冻干燥，称重后超低温冰箱保存。用前以生理盐水制备成不同浓度的细颗粒物悬液(浓度分别为1mg/ml，5mg/ml，25mg/ml)，并经高压灭菌15min，染毒前超声震荡15min使悬液混匀，4℃备用。

2.2 动物实验方法

2.2.1 实验动物

用健康雄性SD大鼠，体重220～260g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK(湘)2011-003。在动物饲养室内适应性喂养一周，自由进食、饮水，饲养温度为18～22℃，湿度为45％～55％，昼夜节律为12h昼夜交替。

2.2.2 实验动物分组

48只健康雄性SD大鼠，随机分成6组，每组8只，分为空白对照组，PM2.5组，石斛伴生红茶1组(实施例1产品)、石斛伴生红茶2组(实施例2产品)、一共4组。

2.2.3 染毒方法及大鼠灌胃

染毒：称重后的大鼠腹腔注射麻醉后，充分暴露口腔咽部，PM2.5染尘组采用气管注入染尘方法，经气管缓慢滴注制备好的PM2.5悬浮液，滴注体积1.5mL/kg，1次/w，共4次；干预组染尘同上，适应性饲养后给予石斛伴生茶水提物干预。对照组在同等条件下气管灌注生理盐水1.5mL/kg，1次/w，共4次。实验期间，动物自由进食和饮水，每天观察大鼠的饮食情况，活跃情况，精神状态。实验进行4周，最后一次染尘后两天内处死。处死方式采用腹腔注射麻醉腹主动脉放血处死，采集腹主动脉血5ml，然后用PBS缓冲液灌洗肺收集肺泡灌洗液10ml，之后摘取肝，脾脏器称重。

灌胃：实验中大鼠石斛伴生茶的给予采用专门注射器灌胃的方式进行，灌胃体积为3mL/只,将石斛伴生茶制作成水提物，-20℃冰箱保存，灌胃前配成所需浓度，灌胃剂量为人体推荐摄入量的5倍。大鼠气管滴注具体方案：

1、滴注前期准备

将滴注中所需设备与仪器提前准备好，包括：铁架台、移液枪、枪头、小儿喉镜、细铁丝或者细绳、麻醉罐、无水乙醚、棉花或者纱布、计时器

2、麻醉罐的制作：为能够直观地观察到大鼠麻醉的效果，选用一透明玻璃或者塑料罐，根据大鼠体型选择麻醉罐大小。将棉花或纱布放入罐中，最少将麻醉罐底部覆盖，然后，将无水乙醚注入罐中，为避免大鼠身体沾染太多的乙醚，注入量以棉花或纱布不滴出乙醚为适。一般大鼠在5-10s内能够达到完全麻醉的效果，操作多次后，可视情况添加无水乙醚，以保证麻醉效率。

3、简易手术台的制作：取铁架台一个，将铁夹或铁圈上系一根能够承受大鼠重量的细绳，升高铁夹或铁圈的高度，至能使上门牙挂在绳上的大鼠能伸展开。

4、大鼠麻醉：抓取欲滴注的大鼠，快速密封至麻醉罐中，盖紧麻醉罐，大鼠在5-10s内被麻醉，麻醉标准为倒下不动，呼吸较慢，似熟睡状，快速从罐中取除大鼠，将大鼠上门牙悬挂只铁架台上的细绳上，使其自然垂落。

5、定位气管：按照步骤4操作后，一人右手用包一层薄纱的镊子将大鼠舌头夹住拉出之口腔外，用左手用拇指、食指轻轻顺向拉出舌头，右手放下镊子，拿小儿喉镜从口腔顺着舌根照射，能清楚的看到大鼠的声门随着呼吸如鱼嘴般开启与闭合。

6、药物滴注：按步骤5操作后，另一人左手捏住大鼠鼻子，大鼠用嘴呼吸，可见声门一张一闭，右手持已吸好滴注药物的移液枪快速插入声门，将药物滴注至气管。退出移液枪，左手继续捏鼻3-8s，使其通过呼吸主动将滴注药物吸入肺部，若听到湿啰音，则说明滴注成功。

7、药物均匀分布：大鼠滴注结束后，继续悬挂在细绳上5-10s,缓慢转动大鼠，使药物均匀分布到大鼠肺部。

2.3 茶样的制备

茶样采用实施例1-2方法制得的干茶样品，干品磨碎后，过80目筛，按1:15茶水比，使用去离子水沸水浴分两次浸提(时间分别是30min和20min)，浸提结束后，经过粗滤、精滤，所得的滤液再利用真空旋转蒸发仪45℃浓缩，最后冷冻干燥制得冻干粉，-20℃保存备用。2.4标本采集与检测

最后一次染尘结束后两天内，大鼠用水合氯醛(浓度10％)，麻醉剂量30mg/100g，ip)腹腔注射麻醉后，并放血处死大鼠，仰卧位固定在操作台，打开胸腔、分离颈部气管并剥离暴露肺脏，结扎右肺门后，在环状软骨下剪“V”字型切口，将带有灌洗针头的聚乙烯管气管插管前端嵌入左主支气管下端分叉处，结扎固定，经管推注预热至37℃PBS(PBS，pH＝7.4)2.5ml每次，每次通过导管以较小的压力将PBS缓冲液缓慢注入肺内，可见大鼠左肺逐渐变得膨隆、苍白，同时轻轻按摩胸部，并缓慢抽出缓冲液再注入气管内，再将所得液体缓缓注回肺内，如此反复抽注3次，最后一次边回抽边将插管缓缓外拔约3.5cm至气管隆突处，然后将回抽液盛入15ml的塑料离心管，周围被冰水包围，随即处理。按以上灌洗操作步骤重复灌洗3次。灌洗液1500r/min离心10min后收集上清液保存，采用Western-blot方法检测HMGB1，计算表达量，以HMGB1/β-actin比值作为相对表达水平，ELISA试剂盒测定IL-6、TNF-α。

2.5 统计方法

实验结果以X±s表示，采用MicrosoftExcel2003和SPSS19.0统计软件包进行统计学分析，采用单因素方差分析(ANOVA)进行统计学检验，当方差分析有意义时，Dunnett-t对实验组和对照组进行比较，检验水准为α＝0.05；两组比较用t检验，检验水准α＝0.05。

3.结果分析

3.1 石斛伴生红茶对大鼠肺损伤组织中HMGB1表达的影响

表1 石斛伴生红茶对PM_2.5致SD大鼠肺损伤中HMGB1表达的影响(x±s)

组别	n/只	HMGB1/β-actin
			空白对照组	8	0.581±0.129
PM<sub>2.5</sub>雾霾组	8	2.210±0.298
			石斛伴生红茶1组	8	0.622±0.217<sup>＊Δ</sup>
石斛伴生红茶2组	8	0.641±0.243<sup>＊Δ</sup>

注：^＊与PM_2.5组比较，P＜0.05；^Δ与空白对照组比较，P＞0.05

表1可以看出，与空白对照组相比，经染毒的PM2.5雾霾组，肺组织中HMGB1/β-actin比值显著增加，表明造模成功，染毒后的大鼠肺部组织受到损伤。石斛伴生茶灌胃的四组大鼠HMGB1/β-actin比值，与PM2.5雾霾组相比明显降低，差异达显著水平，具有统计学意义(P＜0.05)；与空白对照组相比，差异不显著，不具有统计学意义(P＞0.05)，结果表明灌胃石斛伴生红茶能够有效的预防雾霾对大鼠肺部的损伤。

3.2 石斛伴生茶对大鼠肺损伤组织中IL-6含量的影响

表2 石斛伴生红茶对PM_2.5致SD大鼠肺损伤组织中IL-6表达的影响(x±s)

注：^＊与PM_2.5组比较，P＜0.05；^Δ与空白对照组比较，，P＞0.05

表2可以看出，与空白对照组相比，经染毒的PM2.5雾霾组，肺组织中IL-6含量显著增加，IL-6是急性炎症反应的主要标志之一，肺泡灌洗液中IL-6含量增加，表明肺部受到损伤，造模成功。石斛伴生茶灌胃的四组大鼠IL-6含量，与PM2.5雾霾组相比明显降低，差异达显著水平，具有统计学意义(P＜0.05)；与空白对照组相比，差异不显著，不具有统计学意义(P＞0.05)，结果表明灌胃石斛伴生茶能够有效的抵御雾霾对大鼠肺部造成的损伤。

3.3 石斛伴生红茶对大鼠肺损伤组织中TNF-α表达量的影响

表3 石斛伴生红茶对PM_2.5致SD大鼠肺损伤组织中TNF-α表达的影响(x±s)

组别	n/只	TNF-α
			空白对照组	8	227.97±21.78
PM<sub>2.5</sub>雾霾组	8	326.08±41.23
			石斛伴生红茶1组	8	232.13±32.36<sup>＊Δ</sup>
石斛伴生红茶2组	8	233.54±29.57<sup>＊Δ</sup>

表3可以看出，与空白对照组相比，经染毒的PM2.5雾霾组，肺组织中TNF-α表达量显著增加，TNF-α是炎症反应中重要的启动因子，可调节IL-6的释放，导致肺组织损伤，肺泡灌洗液中TNF-α含量增加，表明肺部受到损伤，造模成功。石斛伴生茶灌胃的四组大鼠含量，与PM2.5雾霾组相比明显降低，差异达显著水平，具有统计学意义(P＜0.05)；与空白对照组相比，差异不显著，不具有统计学意义(P＞0.05)。

雾霾主要成分为PM2.5，物质成分复杂，形状不规则，富集效应强，比表面积大，极易通过呼吸途径到达终末细支气管和肺泡，大气颗粒物PM2.5可引起大鼠呼吸系统显著的免疫损伤。高迁移率蛋白 (HMGB1)是哺乳动物细胞核内的非组蛋白，与晚期糖基化终末产物受体(receptor ofadvanced glycationend-product,RAGE)结合后，可激活固有免疫及获得性免疫系统,IL-6是急性炎症反应的主要标志之一，具有调节免疫应答，参与机体炎症反应和抗感染防御作用,TNF-α是炎症反应中重要的启动因子，可调节IL-6释放，导致肺组织损伤。

雾霾进入人体，能激活非特异性免疫及特异性免疫系统，免疫系统的激活与肺的卫外功能失调密切相关，HMGB1、IL-6、TNF-α等炎症因子可作用于肺泡毛细血管，使其通透性发生障碍，终致肺部受损，石斛、麦冬均具有养阴清热、润肺化痰的功效，茶叶同样具有清热解毒的功能。实验结果表明，两组石斛伴生茶灌胃的大鼠肺组织中的HMGB1、IL-6、TNF-α表达量与PM2.5组相比，明显下降，差异达显著水平，具有统计学意义，表明石斛伴生茶能够抑制HMGB1、IL-6、TNF-α在大鼠肺部的表达，具有抵御雾霾损伤的作用。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种抵御雾霾的石斛伴生红茶在制备具有抑制HMGB1，IL-6，TNF-α在肺部的表达功能的食品、保健品或药品中的应用，其特征在于，所述抵御雾霾的石斛伴生红茶的加工方法，包括如下步骤：

（1）摊放：从石斛伴生茶树上采摘茶叶，并将所述茶叶摊放4-8h；

（2）揉捻或揉切：将摊放处理后的茶叶进行揉捻，揉捻至成条率达85%以上；或者，将摊放处理后的茶叶进行揉切，揉切至碎茶率达85%以上；

（3）发酵：将揉捻或揉切处理后的茶叶在28-35℃，湿度85%以上的条件下发酵，发酵时间为45-90min；

（4）初烘：将发酵后的茶叶在80-100℃条件下干燥至水分含量为15-20%；

（5）复烘：将初烘后的茶叶摊放30-45min，然后在60-80℃条件下干燥至水分含量为4-6%，即得所述石斛伴生红茶。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述茶叶为单芽、一芽一叶初展、一芽二叶、一芽三叶或一芽四叶中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：步骤（2）中，对单芽或一芽一叶初展茶叶进行揉捻处理，对一芽二叶、一芽三叶或一芽四叶茶叶进行揉切处理。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤（2）所述的揉捻为冷揉，并按照轻重轻的加压方式进行。