CN105706929A - 一种玉竹组培叶片两步成苗方法 - Google Patents

Abstract

一种玉竹组培叶片两步成苗方法：取玉竹幼嫩叶片作为外植体进行灭菌处理，然后将其切分成0.5 cm×1 cm大小后接种到诱导及分化培养基上，1 ～1.5个月后选择幼嫩叶片上分化出的具有2片以上叶子、高2～3 cm的不定芽苗转接到壮苗生根培养基上，1～ 1.5个月无菌苗每株生根4条以上、根长达2.5～４ｃｍ，生根率98%。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量玉竹的优质种苗，并减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、生产成本降低，有效解决了玉竹规模化育苗及种质资源保存问题。

Description

一种玉竹组培叶片两步成苗方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及玉竹组培叶片两步成苗方法。

背景技术

玉竹为百合科黄精属多年生草本植物，根茎横走，肉质黄白色密生多数须根。叶面绿色，下面灰色。花腋生，通常1~3朵簇生。原产中国西南地区，但野生分布很广。耐寒，亦耐阴，喜潮湿环境，适宜生长于含腐殖质丰富的疏松土壤。《本草经集注》云"茎干强直，似竹箭杆，有节。"故有玉竹之名。

玉竹分布区在海拔约为500-3000m的林下或山野阴坡，玉竹根茎可供药用，中药名亦为玉竹，秋季采挖，洗净，晒至柔软后，反复揉搓，晾晒至无硬心，晒干，或蒸透后，揉至半透明，晒干，切厚片或段用。玉竹是黄精属大宗药材，具有降血糖、血脂、血压等功效，市场需求量巨大，开发前景广阔。本发明旨在通过组织培养技术叶片两步成苗法对玉竹种质资源进行有效的繁育和保护，是目前对玉竹育苗最便捷、稳定的手段，可以节约大量的人力、物力和场地，便于种质交换和转移，避免有害病虫的人为传播，为玉竹种质资源开发利用提供支持。

发明内容

本发明目的在于提供一种玉竹组培叶片两步成苗方法，能够短时间内提供大量优质适合栽培的玉竹种苗。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种玉竹组培叶片两步成苗法，其特征在于：

（1）叶片诱导分化不定芽培养：取玉竹幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~45s,无菌水2~3次，投入0.1%Hgcl₂5min,无菌水2~3次，0.1%Hgcl₂3min,无菌水2~3次冲洗干后切分为0.5cm×1cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为21~25°C,光照强度1800~2600lux,光照时间为8~10小时/天的条件下，10～15天叶片分化出不定芽；

（2）不定芽壮苗生根培养：选择玉竹叶片分化1~1.5个月、幼嫩叶片上分化出的具有2片以上叶子、高2~3cm不定芽接种到壮苗生根培养基，在温度为21~25°C，光照强度2000~2800lux，光照时间为8~10小时/天的条件下进行培养，1~2个月不定芽长至高4~6cm的无菌苗，根长平均根数4条以上、平均根长达2.5~4ｃｍ，生根率98%。

上述诱导及分化培养基为：以ＭＳ为基本培养基，每升添加６-苄氨基嘌呤（6-BA）1～2.0ｍｇ、α-萘乙酸（NAA）0.3～1.0ｍｇ、琼脂3.8～4.4ｇ和蔗糖20～25ｇ,ｐＨ值5.8,培养温度为23±2°C,光照强度1800~2600lux,光照时间为8~10小时/天；

上述壮苗生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，每升添加NAA0.5～1.5ｍｇ、6-BA0.2～0.5、吲哚丁酸（IBA）0.5～1.0ｍｇ,琼脂3.8～4.5ｇ和蔗糖25～30ｇ,ｐＨ值调节至5.8。

采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，能够短时间内提供大量优质适合栽培的玉竹种苗，并减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、生产成本降低，有效解决了玉竹规模化育苗及种质资源保存问题。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

玉竹组培叶片两步成苗方法，包括以下步骤：

（1）叶片诱导分化不定芽培养：取玉竹幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~45s，无菌水2~3次，投入0.1%Hgcl25min,无菌水2~3次，0.1%Hgcl23min,无菌水2~3次冲洗干后切分为0.5cm×1cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为21~25°C，光照强度1800~2600lux，光照时间为8~10小时/天的条件下，10～15天叶片分化出不定芽。

最佳的不定芽诱导及分化培养基为：MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.3mg/L+KT0.3mg/L。

（2）不定芽壮苗生根培养：选择玉竹叶片分化1～1.5个月高2~3cm不定芽接种到壮苗生根培养基，在温度为21~25°C,光照强度2000~2800lux,光照时间为8~10小时/天的条件下进行培养，1～2个月不定芽长至高4~6cm的无菌苗，根长平均根数4条以上、平均根长达2.5～４ｃｍ,生根率98%。

最佳的生根培养基为：MS+6-BA0.2mg/L+IBA1.5mg/L+AC0.5mg/L。

备注：6-BA（6-苄氨基嘌呤）,NAA（萘乙酸）,KT（激动素）,IBA(吲哚丁酸),AC(活性炭)。

Claims (1)

1.一种玉竹组培叶片两步成苗方法，其特征在于：

（1）叶片诱导分化不定芽培养：取玉竹幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~45s,无菌水2~3次，投入0.1%Hgcl₂5min,无菌水2~3次，0.1%Hgcl₂3min,无菌水2~3次冲洗干后切分为0.5cm×1cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为21~25°C,光照强度1800~2600lux,光照时间为8~10小时/天的条件下，10～15天叶片分化出不定芽；

（2）不定芽壮苗生根培养：选择玉竹叶片分化1~1.5个月、幼嫩叶片上分化出的具有2片以上叶子、高2~3cm不定芽接种到壮苗生根培养基，在温度为21~25°C，光照强度2000~2800lux，光照时间为8~10小时/天的条件下进行培养，1~2个月不定芽长至高4~6cm的无菌苗，根长平均根数4条以上、平均根长达2.5~4ｃｍ，生根率98%。