CN103621399A

CN103621399A - 一种牡丹组织培育方法

Info

Publication number: CN103621399A
Application number: CN201210297136.4A
Authority: CN
Inventors: 阎立燕
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-08-20
Filing date: 2012-08-20
Publication date: 2014-03-12

Abstract

本发明公开一种牡丹组织培育方法，涉及一种花卉组培方法，属于植物组织培养领域。其特征在于：将牡丹外植体消毒清洗，经过愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖，不定根诱导，炼苗。有益效果在于：可获得大批组培苗满足种植需要，成活率达95.5％，既可成批培育又可全面积种植组培苗，并且提早二年获得无公害药材，具有实用价值。

Description

一种牡丹组织培育方法

技术领域

本发明涉及一种花卉组培方法，属于植物组织培养领域，具体的说是一种牡丹组织培育方法。

背景技术

牡丹原产于中国西部秦岭和大巴山一带山区，为多年生落叶小灌木，生长缓慢，株型小。牡丹是我国特有的木本名贵花卉，素有“国色天香”、“花中之王”的美称，长期以来被人们当做富贵吉祥、繁荣兴旺的象征。牡丹以洛阳牡丹、菏泽牡丹最富盛名。牡丹根皮入药，名曰“丹皮”，可作为盆景植物观赏，花朵颜色众多，有粉色，红色，白色等等，粉色以粉中冠，白色以景玉较为出名。牡丹不仅有观赏价值，而且还具有很高的药用价值。将牡丹的根加工制成“丹皮”，是名贵的中草药。

目前公知的就牡丹栽培方法是采用扦插法、压条法、分株和播种法进行繁殖，在欧美及日本等地区对栀子属植物的分类、栽培及育种等方面有较为系统深入的研究，而我国对栀子属种质资源的利用和开发力度尚显不足。在国内各类文献资料中只有少量的关于芍药属种质资源及园林应用、观赏用栀子品种的组织培养等方面的报到，而关于牡丹的组织培养及种植的全套种植方法则未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种牡丹组织培育方法，针对现有技术没有牡丹全套种植方法，从而设计研究出操作简单，繁殖率高，可大量生产牡丹试管苗的培育方法。

为实现上述目的，本发明所述一种牡丹组织培育方法，其特征在于：将牡丹外植体消毒清洗，经过愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖，不定根诱导，炼苗；其具体技术方案如下：

a.外植体的选择和消毒：选用当年新发的茎尖，剪下茎尖经水洗，在超净工作台上用70％的乙醇处理10s，再用0.1％升汞消毒，浸泡并振荡6～8min，无菌水清洗4～6次，用滤水纸吸干水分备用；

b.培养：将消毒后的牡丹茎尖剪成小块，形成愈伤组织接种在MS培养基上培养30天，培养温度为20～25℃，光照强度2000Lux，每天光照14h，进行愈伤组织诱导与分化；分化形成丛芽，培养的不定芽单个切开转接在培养基上增殖培养，形成增殖体的幼苗转接到1/2MS+IAA 0.2mg/L的培养基中，25～30天即有愈伤组织分化形成的芽丛；

c.生根培养：将大而健壮的芽转接至生根培养基MS+IBA 0～0.05mg/L 15～21天生根；

d.炼苗：是将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5～7天，取出幼苗洗净培养基后移植在装有腐质土和泥炭1∶1并加少许腐质叶为基质的营养袋内，浇水，在1000～2000Lx中光照8～12h，湿度大于70％条件下练苗1个月，当叶达6～10片，高达6～8cm时移栽种植；

e.天然条件下进行种植，选择海拔800～2500m，满足日照年平均6h/日、年平均最高温度不高于18℃、月平均最高温度在11～23℃、最低可达0℃的条件；满足地下5cm土温年平均最高温度不高于16℃、月平均最高温度在9～20℃、最低可达9℃以下的条件。

所述愈伤组织诱导接种在MS培养基加含NAA0.2～0.3mg/L培养基上，光照10～16h，湿度大于70％条件下直接诱导产生丛芽，25～30天开始萌动；再经8～14天有丛芽出现；7～15天丛芽长叶。

所述不定芽增殖接种在1/2MS+IBA 0.2mg/L的培养基中，25～30天便可形成幼苗；增殖培养产生的新丛芽，叶变绿，2～3cm时，进一步转接进行增殖培养或继代培养。

所述生根培养是接至生根培养基MS+NAA 0～0.05mg/L 15～21天生根，练苗后移栽。

本发明所述的一种牡丹组织培育方法，有益效果在于：可获得大批组培苗满足种植需要，成活率达95.5％，既可成批培育又可全面积种植组培苗，并且提早二年获得无公害药材，具有实用价值。

具体实施方式

通过本发明的实施例，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明

实施例1：

1.外植体材料的采取和处理：

选择牡丹6月生长茂盛无病的母株新发幼嫩茎尖叶为外殖体材料，采集野生或家种牡丹全株移种在花盒中，用清水洗叶，待新叶长出，从母株上剪下活茎尖用自来水冲洗15min，除去叶表面的尘土和绒毛，将茎尖放入70％的乙醇中翻转20s，除去叶表面的蜡质物后用清水冲洗叶面除去乙醇，放入0.1％升汞液中浸泡15min消毒，无菌水洗净后剪成1cm²小方块，叶背面平放于培养基中，每瓶放4块外植体，盖紧瓶盖，用保鲜袋封好瓶口，在无菌操作台上完成接种；

2.愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖和不定根诱导：

①愈伤组织诱导与分化：在无菌条件下，从消毒后茎尖上剪下1cm2小叶块，接种在MS培养基加含6-BA 0.25mg/L+NAA 0.2mg/L培养基上，在25℃，光照1000Lx，光照12h，湿度大于70％条件下：直接诱导产生丛芽，30天开始萌动；再经14天有丛芽出现，15天丛芽长叶；

②不定芽增殖：取出已长叶丛芽单个切开，在MS培养基加含6-BA0.5mg/L+NAA 0.3mg/L培养基上，进行增殖培养；40～60天便可形成幼苗，取其高4～5cm的幼苗进行生根培养，增殖培养产生的新丛芽，叶变绿，2～3cm，可一进转接进行增殖培养或继代培养；

③不定根诱导：取出增殖培养长出高4cm的幼苗，单个切开，转接到1/2MS+IBA 0.2mg/L培养中，转接后151天，开始生根，40天根达3条以上，叶6片，高6cm的试菅苗可取出练苗；

3.炼苗：

将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5天，取出幼苗用清水洗净培养基移植在营养袋中，营养袋内装有腐质土和红土1∶1混均，加少许腐质叶为基质，绕清水，保湿控制光照2000Lx，光照12h，湿度大于70％条件下，练苗1月成活达92.5％，叶10片，高6cm移栽在大田中；

4.天然条件下种植：

选择海拔800m，气温18℃，湿度在75％，满足日照要求：0.8h/日，株行间距20cm。

Claims

1.一种牡丹组织培育方法，包括外植体消毒清洗，经过愈伤组织诱导与分化，不定芽增殖，不定根诱导，炼苗，其特征在于：外植体为当年新发的茎尖，使其成为愈伤组织后，在进行培养形成芽丛，在转接至生根培养基后炼苗。

2.如权利要求1所述一种牡丹组织培育方法，其特征在于：所述炼苗是将试菅苗从组培室取出后置于温棚中，放置5～7天，取出幼苗洗净培养基后移植在装有腐质土和泥炭1∶1并加少许腐质叶为基质的营养袋内，浇水，在1000～2000Lx中光照8～12h，湿度大于70％条件下练苗1个月，当叶达6～10片，高达6～8cm时移栽种植。