CN105682688A - Rett综合征及其治疗 - Google Patents

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Baylor College of Medicine
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Abstract

本发明提供了用于治疗Rett综合征以及其它MECP2相关性紊乱的新策略，其包括用于识别和/或表征有用的治疗方式和/或将Rett综合征患者分层以确定那些更有可能或更不可能响应特定治疗的患者。在一些实施方式中，本发明将代谢通路，且特别是脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路，尤其是脑内脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路的某些组件定义为可用于识别和/或表征潜在Rett综合征治疗剂的靶标。除了其它方面，本发明还提供了用于识别和/或表征此类试剂的系统，其通过使试剂接触包含一种或多种此类代谢通路组件的系统，并评估其对于一种或多种指示物(如，相关通路的组件、产物和/或标记物)的存在、水平、活性和/或形式的影响。

Description

RETT综合征及其治疗
背景技术
Rett综合征(RTT)是一种特征为运动和神经机能障碍进行性发展的X染色体连锁疾病。患有RTT的女孩在出生后的正常时间表获得语言和运动机能，但在6个月和2周岁之间出现症状。疾病的神经系统表现包括：丧失语言和运动技能、刻板的手部运动、行走困难、间歇性喘促和窒息、以及痉挛。RTT的患病率高(1/10,000出生人数)，且其为女性智力和发育障碍(IDD)的最常见病因之一。寿命和疾病严重程度变化很大。
超过95％的RTT患者携带MECP2基因突变。就机理而言，MECP2结合甲基化DNA从而通过抑制或活化调节基因转录。当MECP2抑制基因转录时，其与包含I型组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的染色质重塑复合物结合(Bienvenu和ChellyNatRevGenet7:415-4262006)。因此，MECP2的消除可能导致正常情况下将被抑制的基因的上调。值得注意的是，MECP2突变的严重度并非总是与疾病严重度相关联，这至少部分是由于杂合女性中倾向于失活带有MECP2突变的X染色体。
可以获得携带Mecp2突变并具有大部分RTT症状的小鼠模型。Mecp2/Y雄性突变小鼠在出生和断奶时是正常的，但早在4周龄时就出现包括活动减退、肢紧握、颤动、运动障碍和呼吸异常的症状。此类症状逐步恶化，导致其在6-16周时死亡。在Mecp2/Y缺失小鼠中观测到明显的神经元缺损，包括转变进入成熟期的推迟、突触前蛋白表达改变以及树突棘密度减小。
[1]值得注意的是，在突变雄性和雌性小鼠中在症状出现后重表达Mecp2援救了神经缺损，并且小鼠恢复了正常运动从而长期存活(Guy等人Science315:1143-1147，2007)。这些发现表明RTT不是由胚胎形成期间的神经元的永久异常发育引起的；相反，MECP2是出生后神经元的维持所需的。因此，在症状出现后通过基因或药理学手段可改善或甚至逆转RTT，这为患者及家庭提供了巨大希望。不幸的是，使用MECP2的基因治疗是有挑战性的，因为脑功能对于MECP2水平十分敏感：增加的MECP2也引起导致死亡的进行性神经障碍(Bienvenu和ChellyNatRevGenet7:415-4262006)。仍然亟需找到和开发针对Rett综合征的新治疗方法。
概述
本发明提供了用于治疗Rett综合征的新策略，其包括用于识别和/或表征对于Rett综合征患者有用的治疗方式和/或将Rett综合征患者分层以确定那些更有可能或更不可能响应特定治疗的患者。
在一些实施方式中，本发明确定了代谢通路，且特别是脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路，尤其是脑内脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路的某些组件可用于识别和/或表征潜在Rett综合征治疗剂的靶标。除了其它方面，本发明还提供了用于识别和/或表征此类试剂的系统，其通过使试剂接触包含一种或多种此类代谢通路组件的系统，并评估其对于一种或多种指示物(如，相关通路的组件、产物和/或标记物)的存在、水平、活性和/或形式的影响。在一些实施方式中，所提供系统包含完整和/或激活的代谢通路(如，脂质或胆固醇生物合成通路)。在一些实施方式中，系统包含或产生鲨烯单加氧酶。在一些实施方式中，系统包含或产生24S-羟基胆固醇(24S-OHC)。在一些实施方式中，24C-OHC可用作例如代谢通路活性的指示剂。在一些实施方式中，可在来自个体的样本(如，组织样本例如血样)中评估24C-OHC(如，通过测定其存在、水平、活性和/或形式)。
在一些实施方式中，所提供的识别和/或表征系统包含一种或多种细胞、组织和/或机体。在一些实施方式中，此系统为或包含小鼠细胞、组织和/或机体。在一些实施方式中，此系统为或包含显示出减小的MECP2表达和/或活性(如，由于基因突变和/或化学改变)的一种或多种小鼠细胞、组织和/或机体。
在一些实施方式中，本发明提供了用于治疗Rett综合征的方法和/或组合物。在一些实施方式中，所提供的方法和/或组合物包含或利用一种或多种调节MECP2功能或活性的试剂(即，MECP2调节剂)。在一些实施方式中，所提供的方法和/或组合物包含或利用一种或多种调节脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路，且特别是脑内脂质和/或胆固醇代谢通路的试剂。
在一些实施方式中，本发明提供了治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况的方法，其包括给予有需求的个体调节脑内脂质和/或胆固醇代谢的至少一种试剂或治疗方式的步骤。在一些实施方式中，所述至少一种试剂或治疗方式选自：他汀类药物、LXR调节剂、葡萄糖代谢调节剂、SREBP调节剂、PPARG调节剂、及其组合。
在一些特定的实施方式中，本发明提供了治疗Rett综合征的方法，该方法包括向患有或易感Rett综合征的个体给予他汀类药物的步骤。在一些实施方式中，本发明提供了治疗Rett综合征的方法，该方法包括向患有或易感Rett综合征的个体施用葡萄糖代谢调节剂的步骤。
在一些实施方式中，本发明提供了通过以每天给药至少一次施予试剂或治疗方式(如，他汀类药物或葡萄糖代谢调节剂)治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况(如，Rett综合征)的方法。在一些实施方式中，试剂或治疗方式(如，他汀类药物或葡萄糖代谢调节剂)为每周给药至少一次。在一些实施方式中，试剂或治疗方式(如，他汀类药物或葡萄糖代谢调节剂)为每周给药至少二次。在一些实施方式中，试剂或治疗方式(如，他汀类药物或葡萄糖代谢调节剂)为皮下、腹腔内、静脉内或口服给药。
在一些实施方式中，根据本发明使用的他汀类药物为或包含以下至少一种：洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、普伐他汀、匹伐他汀和氟伐他汀。
在一些实施方式中，根据本发明使用的LXR调节剂为或包含以下至少一种：氧固醇、LXR激动剂、RXR激动剂及其组合。在一些实施方式中，LXR调节剂包含或为以下至少一种：次胆酰胺(hypocholamide)、T0901317、GW3965、SR9238、22(R)-羟基胆固醇、24(S)-羟基胆固醇、27-羟基胆固醇、胆固醇酸、蓓萨罗丁及其组合。
在一些实施方式中，根据本发明使用的葡萄糖代谢调节剂为或包含以下至少一种：双胍类药物、2,4-二硝基酚-甲醚(DNP-ME)、2,4-二硝基酚-乙醚(DNP-EE)、2,4-二硝基酚-乙烯醚(DNP-VE)及其组合。
在一些实施方式中，根据本发明使用的双胍类药物为或包含以下至少一种：二甲双胍、氯胍、氯丙胍及其组合。
在一些实施方式中，根据本发明使用的SREBP调节剂为或包含以下至少一种：fatostatin、N-(4-(2-(2-丙基吡啶-4-基)噻唑-4-基)苯基)甲磺酰胺(FGH10019)、SREBP1、SREBP2及其组合。
在一些实施方式中，根据本发明使用的PPARG调节剂为或包含噻唑烷二酮。在一些实施方式中，噻唑烷二酮为或包含以下至少一种：罗格列酮、吡格列酮、曲格列酮、萘格列酮、利格列酮、环格列酮及其组合。
在一些方面中，本发明提供了识别和/或表征用于治疗Rett综合征的有用治疗剂的方法。在一些实施方式中，此方法可包括测定候选治疗剂对于脑内脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面的效应的步骤。
在一些实施方式中，与本发明的实施相关的脂质和/或胆固醇代谢的方面可以是或包含胆固醇生物合成。在一些实施方式中，脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面为抑制3-羟基-3-甲基-戊二酰-CoA还原酶(HMGCR)。在一些实施方式中，脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面为抑制也称为鲨烯环氧酶(SQLE)的鲨烯单加氧酶。在一些实施方式中，脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面为产生24S-OHC。
在一些实施方式中，试剂对于脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面的效应是通过以下一项或多项评估：行为实验、认知实验、运动机能实验、一种或多种生理参数测验及其组合。
在一些实施方式中，可用于本发明的行为实验选自：听觉惊吓反应实验、惊吓反应前脉冲抑制实验、旷场活动实验，三箱社交行为实验、笼内活动实验和/或其组合。
在一些实施方式中，可用于本发明的运动机能实验选自：呼吸挑战、转杆实验、旷场自发活动实验、DigiGait系统(MouseSpecifics)及其组合。
在一些实施方式中，可用于本发明的一种或多种生理参数测验选自：双能X射线吸收(DEXA)实验、乙酰甲胆碱激发的全身体积描记法呼吸实验、葡萄糖耐量实验、胰岛素耐量实验、血清胆固醇实验、量热法实验及其组合。
本发明的其它特征、目标和优点在以下详细说明中显而易见。然而应当理解的是，虽然详细说明表明了本发明的实施方式，但其仅是以例证方式而非限制方式给出的。通过详细说明本发明范围内的各种改变和修饰对于本领域技术人员将是显而易见的。
定义
为使本发明更易于被理解，以下定义了某些术语。贯穿本说明书可阐明以下术语及其它术语的附加定义或解释。
在本申请中，除非另外说明，否则“或”的使用是指“和/或”。本申请中所使用的术语“包含”及该术语的变体，例如“包括”和“含有”是指包含所列的项目、要素或步骤，并且还可包含其它的项目、要素或步骤。本申请中所使用的术语“约”和“近似”为等价使用。除非另外说明，否则在本申请中使用的任何数词，无论其是否前加“约”或“近似”，均意图涵盖相关领域普通技术人员理解的任何正常波动(如，标准误差或偏差)。在某些实施方式中，除非另外说明或另外由上下文显见的，否则术语“近似”或“约”是指落入所述参照值两个方向内(大于或小于)的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小范围内的数值范围(除非此数将超过可能值的100％)。
施用：本发明所使用的术语“施用”是指将组合物/试剂施予个体。施用可通过任何适当途径。例如，在一些实施方式中，给药可为支气管(包括支气管灌注)、口腔、肠内、皮间、动脉内、皮内、胃内、髓内、肌内、鼻内、腹膜内、鞘内、静脉内、心室内、粘膜、经鼻、口服、直肠、皮下、舌下、局部、气管内(包括气管注入)、经皮、阴道和玻璃体给药。
动物：本发明所使用的术语“动物”是指动物王国任何成员。在一些实施方式中，“动物”是指处于任何发育阶段的人类。在一些实施方式中，“动物”是指处于任何发育阶段的非人动物。在一些实施方式中，所述非人动物是哺乳动物(如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、羊、牛、灵长类和/或猪)。在一些实施方式中，动物包括但不限于，哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼和/或蠕虫。在一些实施方式中，动物可为转基因动物、基因工程动物和/或克隆体。
抗体：本发明所使用的术语“抗体”是指包含足以赋予对特定靶抗原的特异性结合的标准免疫球蛋白序列元件的多肽。如本领域所知的，如天然产生的完整抗体为约150kD的四聚体，由彼此相连形成通常所谓的“Y-型”结构的两条相同的重链多肽(各约50kD)以及两条相同的轻链多肽(各约25kD)组成。各重链由至少4个结构域(各约110个氨基酸长)组成–氨基末端可变(VH)域(位于Y结构的尖端)，然后是三个恒定域：CH1、CH2和羧基末端CH3(位于Y主干的底部)。被称为“转换区”的短区连接重链可变和恒定区。“铰链”连接CH2和CH3域至抗体其余部分。在完整抗体中，此铰链区中的两个二硫键将两条重链多肽彼此连接。各轻链由两个结构域组成–氨基末端可变(VL)域，然后是羧基末端恒定(CL)域，通过另一“转换区”彼此分离。完整抗体四聚体的组成为两个重链-轻链二聚体，其中所述重链和轻链通过单个二硫键彼此相连；另外两个二硫键将重链铰链区彼此连接，以将二聚体彼此连接并形成四聚体。天然产生的抗体也是糖基化的，通常是在CH2域上。天然抗体中的各结构域具有表征为由在扁平反平行β桶中彼此堆叠的两个β片层(如，3-、4-或5-链折叠)形成的“免疫球蛋白折叠”的结构。各可变域含有三个称作“互补决定区”的高度可变环(CDR1、CDR2和CDR3)以及四个基本不变的“框架区”区(FR1、FR2、FR3和FR4)。当天然抗体折叠时，FR区形成提供域结构骨架的β片层，且在三维空间中来自两条重链和轻链的CDR环状区集合在一起从而形成位于Y结构尖端的单一高度可变抗原结合位点。抗体多肽链间的氨基酸序列比对已定义出两个轻链(κ和λ)类别，若干重链(如，μ、γ、α、ε、δ)类别，以及某些重链亚类(α1、α2、γ1、γ2、γ3和γ4)。抗体类别(IgA[包括IgA1、IgA2]、IgD、IgE、IgG[包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4]、IgM)的定义是基于所使用的重链序列类别。为了本发明的目的，在某些实施方式中，包含如在天然抗体中发现的足够的免疫球蛋白结构域序列的任何多肽或多肽复合物可被称作和/或用作“抗体”，无论此多肽是天然产生的(如，通过生物体针对抗原反应生成)，或通过重组工程、化学合成或其它人工系统或方法所产生的。在一些实施方式中，抗体是单克隆的；在一些实施方式中，抗体是多克隆的。在一些实施方式中，抗体具有表征鼠、兔、灵长类或人源抗体的恒定区序列。在一些实施方式中，抗体序列元件是人源化的、灵长类化的、嵌合的等，如本领域所知的。此外，在适当实施方式中，如本发明所使用的术语“抗体”将被理解为包含(除非另外提出或从上下文显见)可表示任何现有技术已知或开发的以替代表现方式捕获抗体结构和功能特性的结构或格式。例如，在一些实施方式中，所述术语可指双-或其它多-特异性(如，zybodies等)抗体、小型模块化免疫药物(SmallModularImmunoPharmaceuticals(“SMIPsTM”))、单链抗体、驼类抗体和/或抗体片段。在一些实施方式中，抗体可缺乏若天然产生则将具有的共价修饰(如，多糖的连接)。在一些实施方式中，抗体可包含共价修饰(如，多糖、载荷[如，可检测部分、治疗部分、催化部分等]，或其它侧基[如，聚乙二醇等]的连接)。
抗体片段：本发明所使用的“抗体片段”包含完整抗体的一部分，例如，抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；三聚体；四聚体；线性抗体；单链抗体分子；以及包含在由抗体片段形成的多特异性抗体中的含CDR的部分。本领域技术人员将会理解，术语“抗体片段”不隐含且不受限于任何特定产生模式。抗体片段的产生可通过使用任何适当方法，包括但不限于切割完整抗体、化学合成、重组生产等。
与…相关：若一个事件或实体的存在、水平和/或形式与另一个事件或实体存在关联，则如本发明所使用的术语两个事件或实体是彼此“相关的”。例如，若特定实体(如，多肽)的存在、水平和/或形式与特定疾病、紊乱或病况的发病率和/或易感性相关(如，在某个有关群体中)，则认为该实体与该疾病、紊乱或病况相关。在一些实施方式中，若两个或多个实体直接或间接相互作用从而使其为并保持彼此物理接近，则它们彼此为物理“相关的”。在一些实施方式中，彼此物理相关的两个或多个实体为彼此共价相连；在一些实施方式中，彼此物理相关的两个或多个实体并非彼此共价相连而是非共价相连，例如通过氢键、范德华相互作用、疏水相互作用、磁力及其组合。
生物相容的：本发明所使用的术语“生物相容的”是指当与活组织接触(如体内)时不会对此组织产生显著损害的材料。在某些实施方式中，若材料对细胞无毒则为“生物相容的”。在某些实施方式中，若将材料在体外加至细胞导致少于或等于20％的细胞死亡和/或将其体内给药未诱导显著的炎症或其它此类不良反应，则其为“生物相容的”。
生物可降解的：本发明所使用的术语“生物可降解的”是指当引入细胞时分解(如，通过细胞机制，例如通过酶降解、通过水解和/或通过其组合)为细胞可再利用或处理的而对所述细胞无显著毒性作用的组分的材料。在某些实施方式中，通过分解生物可降解材料生成的组分是生物相容的且因此不会在体内诱发显著的炎症和/或其它不良反应。在一些实施方式中，生物可降解的聚合物材料分解为其组分单体。在一些实施方式中，生物可降解材料(包括，例如生物可降解的聚合物材料)的分解涉及酯键的水解。替代或另外地，在一些实施方式中，生物可降解材料(包括，例如生物可降解聚合物材料)的分解涉及氨酯键的裂解。示例性生物可降解聚合物包括，例如，羟基酸例如乳酸和乙醇酸的聚合物，包括但不限于聚(羟基酸)，聚(乳酸)(PLA)、聚(乙醇酸)(PGA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、以及与PEG、聚酸酐、聚原酸酯、聚酯、聚氨酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(己内酯)、聚(羟基烷酸酯)、聚(乳酸-共-己内酯)、其混合物及共聚物的共聚物。许多天然生成的聚合物也是生物可降解的，包括例如，蛋白质例如白蛋白、胶原、明胶和醇溶蛋白，例如玉米蛋白，以及多糖例如藻酸盐、纤维素衍生物以及聚羟基烷酸酯，例如，聚羟基丁酸酯混合物及其共聚物。本领域技术人员将会理解或能确定何时此类聚合物是其生物相容的和/或生物可降解的衍生物(如，如同现有技术已知的，与母体聚合物具有大体上相同的结构，区别仅在于特定化学基团的取代或加入)。
生物活性：本发明所使用的短语“生物活性”是指在生物系统中(如，在细胞中(如，经分离的、在培养中的、在组织中的、在生物体中的)、在细胞培养中、在组织中、在生物体中等)具有活性的物质。例如，在施予生物体时对该生物体具有生物效应的物质被认为是生物活性的。本领域技术人员将会理解，通常仅需要(如，必需且足够)生物活性物质的一部分或片段就能呈现其活性；在此情况下，该部分或片段被认为是“生物活性”部分或片段。
组合治疗：本发明所使用的术语“组合治疗”是指将个体同时暴露至两种或多种治疗剂的那些情形。在一些实施方式中，此类试剂为同时给药；在一些实施方式中，此类试剂为依序给药；在一些实施方式中，此类试剂为在重叠方案中给药。
相似的：本发明所使用的术语“相似的”是指彼此可不相同但充分相似的两种或多种试剂、实体、状况、条件设置等以至于可在其彼此间进行比较从而基于所观测的差异或相似性可合理推出结论。本领域普通技术人员将会理解，在上下文中，在任何给定情况下针对两种或多种此类试剂、实体、状况、条件设置等，需要什么程度的同一性以认为其为相似的。
对应于：本发明所使用的术语“对应于”通常用于定义聚合物中的残基位置/身份，例如多肽中的氨基酸残基或核酸中的核苷酸残基。普通技术人员将会理解，为了简洁，通常使用基于聚合物的相关参照的标准编号系统定义此聚合物中的残基，从而第一聚合物中的“对应于”参照聚合物190位残基的残基，例如，无需实际上为第一聚合物中第190位的残基，而是对应于在参照聚合物中第190位处发现的残基；本领域普通技术人员容易理解如何确定“对应的”氨基酸，包括通过使用一种或多种市售的专门设计用于聚合物序列比对的算法。
衍生物：本发明所使用的术语“衍生物”是指参照物的结构类似物。即，“衍生物”是与参照物显示出显著结构相似性的物质，例如共享核心或统一结构，但还在某些不同方面存在区别。在一些实施方式中，衍生物是可通过化学处理参照物而产生的物质。在一些实施方式中，衍生物是可通过进行与产生参照物的合成方法实质相似(如，与其共享多个步骤)的方法而产生的物质。
剂型：本发明所使用的术语“剂型”是指用于施予个体的治疗剂的物理分离的单元。各单元含有预定量的活性剂。在一些实施方式中，此量为根据已经确定当施予相关群体(即，采用治疗给药方案的)时与期望或有益结果相关的给药方案适于给药的单元剂量(或其整数分数)。
给药方案：本发明所使用的术语“给药方案”是指分别施予个体(通常以时间段分隔)的一组单元剂量(通常超过一种)。在一些实施方式中，给定治疗剂具有推荐给药方案，其可包含一剂或多剂。在一些实施方式中，给药方案包含多剂，其各自彼此间通过相同长度的时间段相分隔；在一些实施方式中，给药方案包含多剂以及分隔各剂的至少两个不同时间段。在一些实施方式中，当在相关群体中给药时，给药方案与期望或有益结果相关(即，为治疗给药方案)。
包封的：本发明所用术语“包封的”是指完全被另一材料包围的物质。
[2]工程化的：通常，术语“工程化的”是指已通过人工操控的方面。例如，当天然未彼此直接相连的两个或多个序列通过人工操控在工程化的多核苷酸中以该次序连接在一起时，认为该多核苷酸是“工程化的”。例如，在本发明的一些实施方式中，工程化的多核苷酸包含天然发现与第一编码序列操作性相连而不与第二编码序列操作性相连的调控序列，通过人工连接以使其与第二编码序列操作性相连。类似地，若细胞或生物体经操控以致其遗传信息被改变，则认为其为“工程化的”(如，引入之前不存在的新的基因材料，例如通过转化、配种、体细胞杂交、转染、转导或其它机制，或者改变或除去之前存在的基因材料，例如通过取代或缺失突变、或通过配种方法)。如同本领域技术人员常规实践并能够理解的，工程化的多核苷酸或细胞的后代通常仍称作“工程化的”，即便实际操作是在之前的实体上进行的。
表达：本发明所使用的核酸序列的“表达”是指一种或多种以下事件：(1)从DNA序列产生RNA模板(如，通过转录)；(2)加工RNA转录本(如，通过剪切、编辑、5’帽形成和/或3’末端形成)；(3)将RNA翻译为多肽或蛋白；和/或(4)多肽或蛋白的翻译后修饰。
片段：本发明所述的材料或实体的“片段”具有包含整体的单独部分的结构，但缺乏整体中存在的一个或多个部分。在一些实施方式中，片段由此单独部分构成。在一些实施方式中，片段由整体中存在的特征结构元件或部分组成或包含整体中存在的特征结构元件或部分。在一些实施方式中，聚合物片段包含或由整体聚合物中存在的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500或更多单体单元(如，残基)组成。在一些实施方式中，聚合物片段包含或由整体聚合物中存在的至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、25％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多单体单元(如，残基)组成。在一些实施方式中，整体的材料或实体可被称作整体的“母体”。
功能性的：本发明所使用的术语“功能性的”用于表示呈现特定性质和/或活性的实体形式或片段。
同源性:本发明所使用的术语“同源性”是指聚合物分子间，如核酸分子(如，DNA分子和/或RNA分子)间和/或多肽分子间的整体关联性。在一些实施方式中，若聚合物分子序列至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％相同，则认为其为彼此“同源的”。在一些实施方式中，若聚合物分子序列至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％相似(如，在相应位置包含具有相关化学性质的残基)，则认为其为彼此“同源的”。例如，如本领域普通技术人员所熟知的，通常将某些氨基酸分为彼此相似的“疏水性”或“亲水性”氨基酸，和/或分为具有“极性”或“非极性”侧链。将一个氨基酸取代为相同类型的另一氨基酸通常可认为是“同源”取代。以下汇总了典型的氨基酸分类：
不明确氨基酸 3字母 1字母
天冬酰胺或天冬氨酸 Asx B
谷氨酰胺或谷氨酸 Glx Z
亮氨酸或异亮氨酸 Xle J
未指明或未知氨基酸 Xaa X
如本领域普通技术人员将会理解的，现有允许进行序列比较以测定其同源程度的各种算法，其包括当考虑不同序列中哪些残基彼此“对应”时允许一个序列中存在相对于另一序列的指定长度的空位。进行两个核酸序列间同源百分比的计算例如可通过为最优比较目的对齐两个序列(如，为最优比对可在第一和第二核酸序列的一个或两个中引入空位且为比较目的可忽略非对应序列)。在某些实施方式中，为比较目的而对齐的序列长度为参照序列长度的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或基本上100％。然后比对相应核苷酸位点的核苷酸。当第一序列中的一个位置被与第二序列中相应位置的核苷酸相同的核苷酸占据时，则各分子该位置处是相同的；当第一序列中的一个位置被与第二序列中相应位置的核苷酸相似的核苷酸占据时，则各分子该位置处是相似的。两个序列间的同源百分比是所述序列所共享的相同和相似位点数目的函数，并考虑了两序列最优对齐时需引入的空位数目以及各空位的长度。可用于测定两个核苷酸序列间的同源百分比的代表性算法和计算机程序包括例如，已被引入ALIGN程序(2.0版)的Meyers和Miller算法(CABIOS，1989，4:11-17)，其使用PAM120残基权重表、空位长度罚分为12且空位罚分为4。或者，两个核苷酸序列间的同源百分比的测定可使用例如使用NWSgapdna.CMP矩阵的GCG软件包中的GAP程序。
经分离的：如本发明所使用的，术语“经分离的”是指(1)分离自当最初产生(无论是天然的和/或是在实验设置中)时与其相联的至少一些成分和/或(2)人工设计、产生、制备和/或制造的物质和/或实体。经分离的物质和/或实体可分离自约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或超过约99％的与其最初相联的其它成分。在一些实施方式中，经分离试剂为约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或超过约99％纯的。如本发明所使用的，若物质基本上不含其它成分，则其为“纯的”。在一些实施方式中，本领域普通技术人员将会理解的，在与某些其它成分例如一种或多种载体或赋形剂(如，缓冲剂、溶剂、水等)联合后，物质可仍被认为是“经分离的”或甚至“纯的”；在此类实施方式中，物质分离百分比或纯度的计算不包含此类载体或赋形剂。在一些实施方式中，分离涉及或需要破坏共价键(如，从较长多肽中分离多肽域和/或从较长寡核苷酸或核酸中分离核苷酸序列元件)。
MECP2调节剂：如本发明所使用的术语“MECP2调节剂”是指其存在、水平、状态和/或形式与MECP2水平和/或活性的改变相关联的试剂。即，在试剂存在情况下(或当所述试剂处于特定水平、或处于特定状态或形式时)相比于其不存在和/或相比于可比参照，观测到可检测差异的MECP2水平和/或活性。
调节剂：通常，术语“调节剂”是指以下实体：其在观测到感兴趣活性的系统中的存在、水平、状态和/或形式与相比于在不含该调节剂(或其相关水平、状态和/或形式)的另外可比条件下所观测的该活性的水平和/或性质的改变相关。在一些实施方式中，调节剂是活化剂，活性在其存在情况下相比不含该调节剂的另外可比条件下的其不存在情况下增加。在一些实施方式中，调节剂是抑制剂，活性在其存在情况下相比另外可比条件下的其不存在情况下降低。在一些实施方式中，调节剂与感兴趣活性的目标实体直接相互作用。在一些实施方式中，调节剂与感兴趣活性的目标实体间接相互作用(即，与和目标实体相互作用的中间试剂直接相互作用)。在一些实施方式中，调节剂影响感兴趣目标实体的水平；替代或另外地，在一些实施方式中，调节剂影响感兴趣目标实体的活性而不影响该目标实体的水平。在一些实施方式中，调节剂同时影响感兴趣目标实体的水平和活性，从而所观测的活性差异不完全由所观测的水平差异所解释或与所观测的水平差异不完全相称。在一些实施方式中，与参照相比较评估调节剂的活性；在一些实施方式中，此参照可为历史性参照和/或可以植入有形或电子介质中。
核酸:如本发明所使用的，最广义的术语“核酸”是指寡核苷酸链或可并入寡核苷酸链的任何化合物和/或物质。在一些实施方式中，核酸是寡核苷酸链或可通过磷酸二酯键并入寡核苷酸链的化合物和/或物质。如将由上下文所显见的，在一些实施方式中，“核酸”是指个体核酸残基(如，核苷酸和/或核苷)；在一些实施方式中，“核酸”是指包含个体核酸残基的寡核苷酸链。在一些实施方式中，“核酸”包含或为RNA；在一些实施方式中，“核酸”包含或为DNA。在一些实施方式中，核酸包含、为或由一种或多种天然核酸残基组成。在一些实施方式中，核酸包含、为或由一种或多种核酸类似物组成。在一些实施方式中，核酸类似物与核酸的区别在于其不使用磷酸二酯骨架。例如，在一些实施方式中，核酸包含、为或组成为一种或多种“肽核酸”，其是现有技术中已知的并在骨架中具有肽键而非磷酸二酯键，将其考虑在本发明的范围内。替代或另外地，在一些实施方式中，核酸具有一个或多个硫代磷酸酯和/或5’-N-亚磷酰胺键而非磷酸二酯键。在一些实施方式中，核酸包含、为或由一种或多种天然核苷(如，腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)组成。在一些实施方式中，核酸包含、为或由一种或多种核苷类似物(如，2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-丙炔基-尿苷、C5-丙炔基-胞苷、C5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、O(6)-甲基鸟嘌呤、2-硫代胞苷、甲基化碱基、插入碱基，及其组合)组成。在一些实施方式中，核酸相比于那些天然核酸包含一种或多种改性糖(如，2’-氟核糖、核糖、2’-脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)。在一些实施方式中，核酸具有编码功能性基因产物例如RNA或蛋白的核苷酸序列。在一些实施方式中，核酸包含一个或多个内含子。在一些实施方式中，核酸的制备通过以下一种或多种：从天然来源分离、通过基于互补模板的聚合的酶法合成(体内或体外)、在重组细胞或系统中复制、以及化学合成。在一些实施方式中，核酸长度至少为3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000或更多残基。
患者：本发明所使用的术语“患者”或“个体”是指给予治疗的人或任何非人动物(如，小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、猪、羊、马或灵长类)。在许多实施方式中，患者是人类。在一些实施方式中，患者是呈现给医疗提供者用于诊断或治疗疾病、紊乱或病况的人。在一些实施方式中，患者显示出疾病、紊乱或病况的一种或多种症状或特征。在一些实施方式中，患者不显示疾病、紊乱或病况的任何症状或特征。在一些实施方式中，患者是具有易感疾病、紊乱或病况或存在此风险的一种或多种特征的个体。
药学上可接受的：本发明所使用的术语“药学上可接受的”是指以下试剂：其在合理医学判断的范围内、适用于与人类和/或动物组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，并与合理收益/风险比相称。
多肽：如本发明所使用的术语“多肽”，通常具有其现有技术认可的含义：通过肽键彼此连接的至少三个氨基酸的聚合物。在一些实施方式中，所述术语用于表示特定功能的多肽类别，例如自身抗原多肽、烟碱乙酰胆碱受体多肽、同种抗原多肽等。对于每种此类别，本说明书提供了所述类别内的已知示例性多肽的氨基酸序列的若干实例；在一些实施方式中，此类已知多肽是针对所述类别的参照多肽。在此类实施方式中，术语“多肽”是指该类别中与相关参照多肽显示出显著序列同源性或同一性的任意成员。在许多实施方式中，此成员也与所述参照多肽共享显著活性。例如，在一些实施方式中，一种成员多肽显示出与参照多肽至少约30-40％，且通常大于约50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同源性或同一性总体程度和/或包含至少一个显示非常高序列同一性(通常大于90％或甚至95％、96％、97％、98％或99％)的区域(即，保守区，其通常包含特征性的序列元件)。此保守区通常包含至少3-4个且经常直至20个或更多个氨基酸；在一些实施方式中，保守区包含至少一个至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多个连续氨基酸的延伸。在一些实施方式中，如本发明所述的有用多肽可包含或由母体多肽的片段组成。在一些实施方式中，如本发明所述的有用多肽可包含或由多个片段组成，与在感兴趣的多肽中所发现的相比较，发现其各自在相同母体多肽中以不同的彼此间相对空间排列(如，在母体中直接相连的片段在感兴趣的多肽中可为空间分离的或反之亦然，和/或片段在感兴趣的多肽中相比在母体中可以以不同顺序存在)，从而感兴趣的多肽是其母体多肽的衍生物。
参照:术语“参照”在本发明中经常用于描述感兴趣的试剂或值与之相比较的标准或对照试剂或值。在一些实施方式中，参照试剂的检测和/或参照值的测定与感兴趣的试剂或值的检测或测定基本上同时进行。在一些实施方式中，参照试剂或值是历史性参照，可选地植入有形介质中。通常，如本领域普通技术人员将会理解的，在与测定或表征感兴趣的试剂或值所使用的那些条件可比的条件下测定或表征参照试剂或值。
样本：术语“样本”是指获得、提供和/或经受分析的体积或质量。在一些实施方式中，样本是或包含组织样本、细胞样本、流体样本等。在一些实施方式中，样本取自个体(如，人或动物个体)。在一些实施方式中，组织样本是或包含脑、毛发(包括发根)、口腔拭样、血液、唾液、精液、肌肉，或来自任意内脏，或与任一这些相关的癌、癌前或肿瘤细胞。流体可为但不限于，尿、血、腹水、胸水、脊髓液等。体组织可包括但不限于，脑、皮肤、肌肉、内膜、子宫和子宫颈组织或与任一这些相关的癌、癌前或肿瘤细胞。在一个实施方式中，体组织为脑组织或脑肿瘤或脑癌。本领域普通技术人员将会理解，在一些实施方式中，“样本”是获自来源(如，个体)的“原始样本”；在一些实施方式中，“样本”是对原始样本进行加工的结果，例如除去某些潜在污染成分和/或分离或纯化某些感兴趣的成分。
小分子：如本发明所使用的，术语“小分子”是指可用作酶底物或生物过程调节剂的低分子量有机化合物。通常，“小分子”是分子大小小于约5千道尔顿(kD)的分子。在一些实施方式中，所提供的纳米颗粒另外包含一种或多种小分子。在一些实施方式中，所述小分子小于约4kD、3kD、约2kD或约1kD。在一些实施方式中，所述小分子小于约800道尔顿(D)、约600D、约500D、约400D、约300D、约200D或约100D。在一些实施方式中，小分子小于约2000g/mol、小于约1500g/mol、小于约1000g/mol、小于约800g/mol或小于约500g/mol。在一些实施方式中，一种或多种小分子被包封在纳米颗粒内。在一些实施方式中，小分子为非聚合的。在一些实施方式中，根据本发明，小分子不是蛋白、多肽、寡肽、肽、多核苷酸、寡核苷酸、多糖、糖蛋白、蛋白聚糖等。在一些实施方式中，小分子是治疗剂。在一些实施方式中，小分子是佐剂。在一些实施方式中，小分子是药物。
基本上：本发明所使用的术语“基本上”是指呈现出总体或接近总体的范围或程度的感兴趣的特征或性质的定性状况。生物领域普通技术人员将会理解生物和化学现象很少(若有的话)走向完成和/或进行完整或者实现或避免绝对结果。因此，本发明使用术语“基本上”来包括在许多生物或化学现象中固有的潜在缺乏的完整性。
患有…：“患有”疾病、紊乱或病况的个体已被诊断和/或呈现或已呈现出所述疾病、紊乱或病况的一种或多种症状或特征。
易感：“易感”疾病、紊乱或病况的个体是存在发展疾病、紊乱或病况的风险的患者。在一些实施方式中，易感疾病、紊乱或病况的个体未显示出所述疾病、紊乱或病况的任何症状。在一些实施方式中，易感疾病、紊乱或病况的个体尚未被诊断患有所述疾病、紊乱和/或病况。在一些实施方式中，易感疾病、紊乱或病况的个体是已暴露至与发展所述疾病、紊乱或病况相关的条件的个体。在一些实施方式中，发展疾病、紊乱和/或病况的风险是基于群体(如，患有过敏的个体的家族成员等)的风险。
症状减轻：根据本发明，当特定疾病、紊乱或病况的一种或多种症状的量级(如，强度、严重度等)和/或频率减轻时则“症状减轻”。为了清楚的目的，特定症状发作的延迟被认为是该症状频率减轻的一种形式。
治疗剂：本发明所使用的短语“治疗剂”是指当施予个体时具有治疗效应和/或引出期望的生物和/或药理效应的任何试剂。在一些实施方式中，若对相关群体的给药与所述群体中期望的或有益的治疗结果在统计学上相关，则无论给药所述试剂的特定个体是否经历了所述期望的或有益的治疗结果，均认为该试剂为治疗剂。
治疗有效量：如本发明所使用的，术语“治疗有效量”是指当根据治疗给药方案对患有或易感疾病、紊乱和/或病况的人群给药时，足以治疗所述疾病、紊乱和/或病况的量。在一些实施方式中，治疗有效量是一种减少所述疾病、紊乱和/或病况的一种或多种症状的发病率和/或严重度、和/或延迟其出现的量。本领域普通技术人员将会理解术语“治疗有效量”事实上无需在特定个体中实现成功治疗。相反，治疗有效量可为当对有此治疗需求的患者给药时在显著量的个体中提供特别期望的药理响应的量。特别理解的是，事实上，特定个体对于“治疗有效量”可为“难治性的”。举一个例子，难治性个体可具有低生物利用度以致不可获得临床疗效。在一些实施方式中，治疗有效量的参照可以是在一种或多种特定组织(如，受疾病、紊乱或病况影响的组织)或流体(如，血液、唾液、血清、汗液、泪液、尿液等)中测定的量的参照。本领域普通技术人员将会理解，在一些实施方式中，治疗有效量可以单剂的形式配制和/或给药。在一些实施方式中，治疗有效量可以多剂的形式配制和/或给药，例如，作为给药方案的部分。
治疗方案：如本发明所使用的术语“治疗方案”是指对相关群体的给药与期望或有益的治疗结果相关的给药方案。
治疗：如本发明所使用的，术语“治疗”是指部分或完全减轻、改善、解除、抑制特定疾病、紊乱和/或病况的一种或多种症状、特征和/或原因，延迟其发作、减少其严重度和/或减少其频率、发生率或严重度的物质的任意施用。治疗可用于未呈现出相关疾病、紊乱和/或病况的迹象的个体(如，可为预防性的)和/或用于仅呈现出疾病、紊乱和/或病况的早期迹象的个体。替代或另外地，治疗可用于呈现出相关疾病、紊乱和/或病况的一种或多种经确立迹象的个体(如，可为治疗性的)。在一些实施方式中，治疗可用于已诊断为患有相关疾病、紊乱和/或病况的个体。在一些实施方式中，治疗可用于已知具有与发展相关疾病、紊乱和/或病况增加的风险统计学相关的一种或多种易感因素的个体。
附图简述
由至少以下示图组成的附图仅用于例证目的而非限制。
图1显示了能够带来运动和寿命援救的Sqle终止密码子突变。a)SqleSum3Jus/+突变的存在显著增加Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠的存活；p＝.002。回交129S6/SvEvTac至N7代的Mecp2tm1.1Bird/YSqleSum3/+动物显示出b)P56时显著改善的转杆表现(p＝.0001)，c)P70时改善的旷场活动。此外，SqleSum3Jus突变在129.Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠中(该小鼠在P70时经受前脉冲抑制分析)既未d)增加惊吓幅度也未e)减少惊吓时间。nostim＝不存在刺激；as50＝存在50dB刺激；pp8＝存在8dB前脉冲；pp850＝8dB前脉冲后50dB刺激。所有误差线表示平均数标准误差(s.e.m)。
图2显示在Mecp2缺失雄性小鼠中胆固醇代谢紊乱。a)显示了经由链甾醇的胆固醇生物合成中的酶和产物的简化示图。b)Mecp2tm1.1Bird/Y和Mecp2tm1.1Jae/Y中Hmgcr、Sqle和Cyp46a1的脑内表达相似。c)显示了P56(每组N＝8)和P70(每组N＝4)时每克脑组织的羊毛甾醇(Lan)、链甾醇(Des)和总胆固醇(TC)浓度。d)P56时Mecp2tm1.1Jae/Y脑中的胆固醇合成减少(野生型N＝4；缺失N＝5)。e)Mecp2tm1.1Bird/Y和Mecp2tm1.1Jae/Y中的肝内Hmgcr和Sqle表达不同。f)显示了P56时每克肝组织的三酰甘油(TAG)和TC浓度(每组N＝6)。g)P56时Mecp2tm1.1Jae/Y肝中每克组织的胆固醇合成略微增加(野生型N＝4；缺失N＝5)。P56时Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠中的血清h)总胆固醇、i)LDL-胆固醇和j)甘油三酯水平显著增高(每组N＝8–11)，但其在Mecp2tm1.1Jae/Y小鼠中无变化(每组N＝6)。对于基因表达数据(b,e)Bird：P28时每个基因型N＝6，且P56时每个基因型N＝12；Jae：P28时每个基因型N＝4，且P56时每个基因型N＝6。组织数据(b-g)表示自野生型水平的百分比改变。*p≤0.05；所有误差线表示平均数标准误差。
图3显示Mecp2突变小鼠出现了代谢综合征。如图所示，雄性和雌性Mecp2/YandMecp2/+小鼠均在腹腔内葡萄糖耐量试验(IPGTT)中显示出不能适当清除葡萄糖，并在胰岛素推注(ITT)后显示出胰岛素抵抗。此代谢失调随着症状发展恶化。此外，雄性在活动期间燃烧脂肪而非葡萄糖。这些都是代谢综合征的迹象。因此，该图3中呈现的数据确立Mecp2缺失小鼠发展了代谢综合征。
图4显示他汀类药物治疗在129.Mecp2tm1.1Bird/Y雄性中改善健康。用于以下实验的所有评估动物为37只Mecp2tm1.1Bird/Y氟伐他汀治疗小鼠、12只Mecp2tm1.1Bird/Y洛伐他汀治疗小鼠、31只Mecp2tm1.1Bird/Y载剂治疗小鼠、29只野生型+/Y氟伐他汀治疗小鼠、8只+/Y洛伐他汀治疗小鼠和29只野生型+/Y载剂治疗小鼠。a)氟伐他汀治疗129.Mecp2tm1.1Bird/Y赋予增加的寿命：中位数122天相比于87天，超过120天后具有57％的存活率(p<.0001)。三只动物由于皮炎(疹)被处死，但其活跃且其它方面健康。b)在P56时经治疗的缺失雄性中转杆表现得到改善(氟伐他汀：p＝.015；洛伐他汀：p＝.009)，c)如通过梁断所评估的，在P70时经治疗的缺失雄性中的旷场活动增加(氟伐他汀：p＝.026，洛伐他汀：p＝.011)。此外，氟伐他汀治疗在129.Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠(P70时经受前脉冲抑制分析)中既未d)增加增加惊吓幅度也未e)减少惊吓时间。f)他汀类药物治疗在P70时降低血浆胆固醇(氟伐他汀：p＝.001，洛伐他汀：p＝.001)。g)他汀类药物治疗在P70时改善129.Mecp2tm1.1Bird/Y肝中提高的脂质浓度(氟伐他汀：p＝.02；洛伐他汀：p＝.386)。P70时经氟伐他汀治疗的129.Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠脑中的h)羊毛甾醇浓度略微增加且i)链甾醇浓度显著增加(每组N＝4；p＝.04)。j)显示了他汀类药物治疗前后的脂肪肝组织学。
图5：显示氟伐他汀治疗在129.Mecp2tm1.1Bird/+雌性中改善健康a)无氟伐他汀治疗129.Mecp2tm1.1Bird/+雌性在8个月前死亡，但有三只载剂治疗雌性死亡。b)在5月龄的氟伐他汀治疗的129.Mecp2tm1.1Bird/+雌性中转杆表现改善(p＝.001)。c)在4个月时的旷场活动评估显示在氟伐他汀或载剂治疗组中无显著差异。d)氟伐他汀治疗在8个月时未显著改变血清胆固醇水平。e)在8个月时评估，氟伐他汀治疗改善了129.Mecp2tm1.1Bird/+肝中提高的脂质浓度(p＝.045)，f)显示出他汀类药物治疗前后肝的组织学油红O染色。
图6：显示了针对Justice实验室中开发的Mecp2雄性小鼠的标准药物治疗方案的示例性时间线。如图所示，雌性将接受1X周剂量，且实验将基于年龄开始。而实验种类相同。针对雌性的时间线将从6周时开始，并在8个月时结束，其中转杆在8周时进行，且旷场活动(OFA)、听觉惊吓反应前脉冲抑制(PPI)、体积描记法(Pleth)、针对身体组成的DEXA在5个月时进行，然后在6个月时尸检所有临床脂质项，并在尸检时评估组织脂质。
图7：显示了使用具有不同亲脂性的四种不同他汀类药物治疗小鼠的示例图。转杆和旷场活动(OFA)为运动表现的量度(分别为图B和C)。双能X射线吸收(DEXA)为体脂和骨组成的测试(图E)。给予小鼠以下剂量：3mg/kg氟伐他汀、2mg/kg体重阿托伐他汀、1.5mg/kg洛伐他汀或6mg/kg辛伐他汀，每周2X，并使其经历图6中所示的行为测试实验方案。相关条栏下显示了各组测试的小鼠数目。由于无他汀类药物治疗改变了任何任务中的野生型表现，黑色虚线显示了野生型均值。使用ANOVA然后是DunnettPostHoc通过比较治疗组与相关对照组对数据进行分析。*p<0.05，#p<0.10
图8：显示了指示Mecp2缺失小鼠不能在外周器官中使用葡萄糖的示例图。在8周龄Mecp2缺失和野生型同窝上进行高胰岛素血症-正常血糖性钳夹。Mecp2缺失雄性需要显著减慢葡萄糖输液率以维持正常血糖(图A中示出)，提示其不能代谢葡萄糖。在白色脂肪组织(WAT)和比目鱼肌中测量14C葡萄糖证实了在主要消耗葡萄糖的外周器官中减少的葡萄糖摄取(分别在图B和C中示出)。
图9：显示了采用LXR激动剂和二甲双胍治疗Mecp2/Y小鼠后的示例图。相关条栏下显示了各组测试的小鼠数目。由于无他汀类药物治疗改变了任何任务中的野生型表现，黑色虚线显示了野生型均值。用30mg/kg剂量二甲双胍和3mg/kg剂量LXR激动剂T0901917，每周2X治疗小鼠，并按照图6中实验方案进行分析。使用ANOVA然后是DunnettPostHoc通过比较治疗组与相关对照组对数据进行分析。*p<0.05，#p<0.10
图10：显示了采用葡萄糖代谢调节剂2,4-二硝基酚-甲醚(DNPME)治疗Mecp2/Y小鼠后的示例图。用5mg/kg剂量每周2X治疗小鼠并按照图6中实验方案进行分析。野生型N＝4，Mecp2/YN＝6，且1个载剂对照缺失小鼠在P70前死亡。使用ANOVA然后是DunnettPostHoc通过比较治疗组与相关对照组对数据进行分析。*p<0.05，#p<0.10
具体实施方式详述
MECP2相关性疾病、紊乱和病况(如，Rett综合征)
本发明涉及与MECP2活性失调相关的疾病、紊乱和病况的治疗。已知MECP2突变与各种疾病、紊乱和病况相关。在各种实施方式中，本领域技术人员将会理解本发明的教导可适用于其症状与一种或多种MECP2改变(如，MECP2蛋白水平、活性或形式改变和/或MECP2基因具有一种或多种特定突变)相关和/或相联的任何疾病、紊乱或病况。
注意到95％的Rett综合征病例与一种或多种MECP2突变相关，本领域技术人员将会理解本发明的教导特别可应用于Rett综合征(RTT)。Rett综合征是一种影响约万分之一女孩的X染色体连锁疾病。患者经历四个阶段：阶段I)出生后一段时期看似正常的发育后，在6月龄和8月龄之间，儿童开始显示出类似于在其它自闭症中所见的那些社交和沟通缺陷。儿童的发育标志显示延迟，尤其是运动能力，例如坐和爬。阶段II)在1岁和4岁之间开始，儿童经历一段时间的丧失语言和运动能力的退化，出现典型的中线手部运动和步态障碍。在此阶段期间还出现呼吸不规则，包括窒息和换气过度。在此阶段还普遍存在自闭症症状。阶段III)在2岁和10岁之间，退化期结束且症状稳定。在此稳定期期间社交和沟通技能可显示出小幅改善，其可持续患者的大部分生命。阶段IV)运动能力和肌肉退化持续。许多女孩发展严重的脊柱侧弯并丧失行走能力。经典Rett综合征是由MECP2单基因突变引起。
具有截断或丧失功能的MECP2突变的半合子人类男性相比患有RTT的女性具有更加严重的表型，且通常在2岁时死亡。涉及MECP2的亚效等位基因突变或复制还与各种智力障碍ID、自闭症和其它精神病学特征相关。
此外，考虑到MECP2涉及胆固醇代谢，在一些实施方式中，本发明教导了与脂质和/或胆固醇生物合成相关的一种或多种代谢通路的其它组件可被认为是采用如本发明所述的代谢调节剂可治疗的MECP2相关性疾病、紊乱或病况。胆固醇代谢已涉及神经病学疾病例如阿尔茨海默病、帕金森氏病和亨廷顿氏病，以及肌萎缩性脊髓侧索硬化症和脆性X染色体综合征。而且，在一些实施方式中，某些特定形式的自闭症，特别包括与一种或两种Rett综合征相关的症状相关性自闭症，可被认为是本发明所述的MECP2相关性疾病、紊乱或病况。最广义的自闭症是具有复杂病因的基因多样化的紊乱群组，不太可能响应单一治疗。
在某些实施方式中，本发明描述了任意或全部这些的治疗和/或识别、表征和/或针对它们的疗法和/或生物标记的使用。
在某些实施方式中，本发明提供了治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况的方法，该方法包括给予有需求的个体调节脑内脂质和/或胆固醇代谢的至少一种试剂或治疗方式的步骤。在一些实施方式中，所述至少一种试剂或治疗方式选自：他汀类药物、LXR调节剂、葡萄糖代谢调节剂、SREBP调节剂、PPARG调节剂，及其组合。
代谢通路
如本发明所述的，本发明包含以下认识：某些代谢通路(如，脂质和/或胆固醇生物合成通路)调节剂可用于治疗Rett综合征和/或包含此类通路一种或多种组件的系统可用于识别和/或表征此类调节剂。本发明还提供了以下见解：在一些情况下，基于如本发明所述的代谢通路的一种或多种特征的活性或特性，可用于从彼此区分个体Rett综合征患者。本发明的教导与涉及脑和/或肝内胆固醇和/或脂质生物合成的代谢通路和/或其它系统代谢组件特别相关。
胆固醇是脑的主要成分，其在脑中通过半独立性途径合成，该途径与通过鲨烯环氧酶(SQLE)和羊毛甾醇合酶(LSS)将鲨烯转化为羊毛甾醇相同，因为其无法通过膳食吸收或肝合成提供(Dietchy、Turley和SpadyJLipidRes34:1637-1659，1993)(图2a)。通常关注血中的高循环胆固醇，因为其与增加的心血管疾病发病率相关。然而，胆固醇在神经组织中具有许多功能，包括膜转运、信号转导、髓鞘形成、树突重构，神经肽形成和突触发生(Pfrieger和Ungerer，ProgLipidRes50:357-371，2011)。脑胆固醇代谢的调节异常可导致胆固醇蛋白中间体的蓄积，当胆固醇蛋白中间体过量存在时破坏正常发育，并影响包括亨廷顿氏病和阿尔茨海默病的老化疾病(Waterham，FEBSLett580:5442-5449，2006)。
因为胆固醇在心血管疾病中的作用，HMGCoA还原酶抑制剂(他汀类药物)作为医学处方被用于导致不良反应的高于正常的胆固醇水平或升高的胆固醇水平。胆固醇的正常水平是通常不需要应用HMGCoA还原酶抑制剂治疗的水平。如本领域中所理解的，精确的“正常”水平在一定程度上取决于个体及针对年龄、性别、饮食和群体类型观测到的胆固醇水平的变化。通常，当个体未患有急性病、未在压力下时(且对于女性，当未怀孕时)测量胆固醇水平。
在许多实施方式中，如本发明所使用的胆固醇水平是总血清胆固醇水平，其包括血清中发现的以下形式的联合胆固醇：高密度脂蛋白(HDL)、中等密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)。胆固醇水平的测量通常与脂质、甘油三酯或三酰甘油的贮存形式相关联。胆固醇水平可基于联合脂蛋白部分中的总胆固醇量。将血清中发现的胆固醇和甘油三酯分为各种组分：HDL、IDL、LDL和VLDL。LDL部分来源于VLDL，且提高的总血清胆固醇水平和LDL(c-LDL)部分胆固醇水平与增加的动脉粥样硬化风险相关。
取决于各种因素，例如个体的年龄、饮食和性别，成人的示例性正常血清胆固醇水平为低于200mg/dL至约140mg/dL范围，认为所述个体是健康的。对于儿童或青少年，认为健康的水平为约120mg/dL至约170mg/dL之间。使用本发明方法可治疗的个体群体包括儿童或青少年。人的正常c-LDL水平为小于约150mg/dL、小于约130mg/dL或小于约110mg/dL，下限为被认为是健康水平的c-LDL水平。对于儿童或青少年，认为健康的水平为低于110mg/dL。
不同于外周代谢，关于脑胆固醇代谢知之甚少。本发明首次指出脑胆固醇稳态在Rett综合征中的重要性。因为胆固醇对于脑功能而言是重要的，但其不能穿过血脑屏障(BBB)，所以脑自行生产胆固醇。然而，脑必须将旧的胆固醇循环或周转入循环并产生新的胆固醇，否则所述胆固醇可被氧化并导致炎症。已知在神经元突触处需要胆固醇周转；成人脑内不存在于髓鞘中的大部分循环胆固醇是由星形胶质细胞产生，包装入HDL样颗粒内以通过胞内间隙递送至神经元上的LDL样受体(Pfrieger和Ungerer，ProgLipidRes50:357-371，2011)。当神经元蓄积过多胆固醇或其中间体时，细胞色素P450氧化酶Cyp46a1羟化胆固醇以产生24SOHC，使其能够通过单向扩散穿过BBB周转入循环(Lund、Guileyardo和Russell，ProcNatlAcadSciUSA96:7238-7243；Lund等人JBiolChem278:22980-22988，2003)。
代谢通路调节剂
如本发明所述的，本发明包含以下认识：某些代谢通路调节剂可用于治疗Rett综合征和/或其它MECP2相关性疾病、紊乱或病况。特别地，本发明确定脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路的某些调节剂，且特别是脑内脂质和/或胆固醇通路的某些调节剂可用于治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况。在一些实施方式中，本发明教导在Rett综合征的治疗中使用MECP2调节剂。
通常，本发明所述有用的代谢通路调节剂可以是或包括任何化学试剂类别，包括例如，核酸、多肽、脂质、糖类和/或小分子试剂、或其组合。本领域技术人员将会理解，例如，多种蛋白靶点可被抗体试剂和/或靶向核酸试剂(如，反义和/或siRNA试剂)所抑制。在一些实施方式中，代谢通路抑制剂可穿过血脑屏障(BBB)。
他汀类药物
如本发明所述的，他汀类药物可用于治疗MECP2相关性疾病、紊乱和病况。
例如，本发明实施例证明他汀类药物复制了Mecp2缺失小鼠中Sqle抑制基因的突变所展示的症状的改善。在所测试的特定条件下，他汀类药物未改善所有症状，包括听觉惊吓反应或听觉惊吓反应前脉冲抑制。
申请人关注到由Silva公开的(美国专利申请公开号2007/0299096，公开于2007年12月27日，其来自2005年5月23日提交的美国专利申请序列号11/569426并要求分别于2004年5月24日和2005年3月15日提交的美国临时专利申请序列号60/574442和60/661764的优先权)题为“TreatingLearningDeficitswithInhibitorsofHMG-CoAReductase”(“Silva公开”)包含提示催化HMGCoA转化为用于胆固醇生物合成的类异戊二烯中间体甲羟戊酸的HMG-CoA还原酶的抑制剂可能一般可用于治疗认知障碍的表述。据信至少部分他汀类药物是HMG-CoA还原酶抑制剂，且Silva公开特别推荐使用他汀类药物用于此治疗。然而，Silva公开自身与现有技术中的理解相一致，也指出认知是复杂的神经过程，且认知功能中涉及各种分子机制。
Silva公开界定了可能涉及与不同疾病、紊乱或病况相关的学习缺陷的多种不同生物学通路。特别地，Silva公开强调神经纤维瘤蛋白信号通路涉及1型神经纤维瘤。对于1型神经纤维瘤(“NF-1”)，Silva公开提供的数据显示在小鼠模型中洛伐他汀对p21Ras/MAPK活性、长期增强作用、空间学习缺陷以及注意和感觉门控缺陷的适度有益影响。
Silva公开总体未特别推荐HMG-CoA还原酶抑制剂更不用说尤其是他汀类药物在治疗Rett综合征中的使用。事实上，Rett综合征本身未在Silva公开列为采用HMG-CoA还原酶抑制剂可适当治疗的认知障碍中。然而，Silva公开的确在其背景和介绍部分指出，一些Rett综合征患者显示出自闭症症状和/或与自闭症个体共有一种或多种遗传特征。Silva公开的确将自闭症列为可治疗的紊乱，虽然其指出的与自闭症发展相关的生物学通路不同于与NF-1相关的那些。
不幸的是，由Silva参考文献激励并设计用于改善学习障碍和注意缺陷的在NF-1患者上进行的临床试验被证明是不成功的；未观测到辛伐他汀显示出显著功效(参见例如，Krab等人JAMA300:287，2008)。类似地，针对阿尔茨海默病使用辛伐他汀的临床试验也失败了(Sano等人Neurology77:556，2011)。这些试验的失败证明NF-1小鼠和/或在小鼠上进行的相关认知实验不是适当的人类认知功能模型。此失败还提示在Silva参考文献中提出的机制–经由调节Ras活性可能未如提示般起效。本领域技术人员将会熟悉这些失败并将很好地理解其对Silva参考文献所提供的教导的影响。
相比之下，本公开证明了他汀类药物可实现在神经功能缺损之下的运动缺陷的改善，并另外确立了他汀类药物在调节脂质沉积能力方面的作用。在我们所知范围内，本公开首次教导脂质或胆固醇生物合成通路调节剂且特别是MECP2调节剂(如，他汀类药物)可用于治疗Rett综合征。无疑地，本发明首次提示在未携带自闭症相关性基因突变(即，在不同于MECP2的基因座中)的那些Rett综合征患者中的此应用。
因此，在一些实施方式中，本发明提供了治疗MECP-2相关性疾病、紊乱或病况(如，Rett综合征)的方法，该方法包括给予患有或易感MECP-2相关性疾病、紊乱或病况的相关个体他汀类药物的步骤。根据各种实施方式，可使用包括例如阿托伐他汀、西伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀、辛伐他汀的任何他汀类药物。在一些实施方式中，所述他汀类药物选自：洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀及其组合。
肝脏受体X(LXR)调节剂
虽然他汀类药物通过减缓其机体产生胆固醇而治疗高胆固醇，但还可通过诱导肝脏再摄取血胆固醇而降低胆固醇水平，在肝中胆固醇可转化为用于分泌的胆汁酸。此再摄取由LXR介导。LXR还具有脑特异性作用，虽然确切机理是未知的。直接调节LXR活性的药物包括次胆酰胺(hypocholamide)、T0901317、GW3965、SR9238和蓓萨罗丁。这些LXR激动剂已有效治疗动脉粥样硬化和糖尿病小鼠模型，且一些化合物，特别是蓓萨罗丁，已经显示可穿过血脑屏障。间接影响LXR水平的多种其它药物(例如Psck9抑制剂)当前处于开发中。任意这些是用于在Rett综合征和/或如本发明所述的其它MECP2相关性疾病、紊乱和病况模型中调节胆固醇的他汀类药物的替代或补充途径的良好候选。
在一些实施方式中，LXR调节剂可以是或包含任何氧固醇或RXR激动剂。超出上述那些的非限制性实例包括但不限于，次胆酰胺、22(R)-羟基胆固醇、27-羟基胆固醇、24(S)-羟基胆固醇(脑特异性)、24(S),25-环氧胆固醇(肝特异性)、胆固醇酸及其组合。LXR激动剂5,6-24(S),25-二环氧胆固醇和6α-羟基胆汁酸对LXRα具有选择性。
葡萄糖代谢调节剂
葡萄糖代谢通过称作5’AMP-活化蛋白激酶(AMPK)的蛋白的作用与胆固醇和脂质代谢密切相关，AMPK蛋白充当脂质、胆固醇、葡萄糖和蛋白代谢的主调节因子，其将小分子前体和能量从一种活动分流至另一活动。经FDA批准的药物二甲双胍活化AMPK并用于治疗2型糖尿病；其在此情况下的主要作用是抑制肝葡萄糖产生，但也已显示其在糖尿病患者中预防常见的胆固醇相关性心脏并发症。如本发明所证实的(参见图2和3)，Mecp2突变小鼠同时显示胆固醇调节异常以及类似于2型糖尿病的葡萄糖和胰岛素代谢调节异常。因此，根据本发明的一些实施方式，二甲双胍以及其它相关双胍类药物可为Rett综合征和/或其它MECP2相关性疾病、紊乱和病况治疗中的有用试剂。在一些实施方式中，葡萄糖代谢调节剂例如2,4-二硝基酚-甲醚(DNPME或DNP-ME)也可能可用于治疗Mecp2相关性机能失调的一种或多种症状。
因此，在一些实施方式中，本发明提供了治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况(如，Rett综合征)的方法，该方法包括对患有或易感所述MECP2相关性疾病、紊乱或病况的个体施用葡萄糖代谢调节剂的步骤。在一些实施方式中，所述葡萄糖代谢调节剂选自：双胍类药物、2,4-二硝基酚-甲醚(DNP-ME)、2,4-二硝基酚-乙醚(DNP-EE)、2,4-二硝基酚-乙烯醚(DNP-VE)、此类化合物的衍生物、和/或其组合。在一些实施方式中，双胍类药物选自：二甲双胍、氯胍、氯丙胍。
SREBP调节剂
SREBP调节HMG-CoA还原酶的胆固醇和脂质代谢上游，以及AMPK下游。已显示至少一种间接SREBP抑制剂(fatostatin)在小鼠和大鼠中有效预防及治疗肥胖、高胆固醇血症和高血糖症。在一些实施方式中，fatostatin或另一间接SREBP抑制剂可用作如本发明所述的代谢调节剂。在一些实施方式中，具有抑制SREBP的更直接作用机理的一种或多种试剂可用作如本发明所述的代谢调节剂。例如，在一些实施方式中，使用fatostatin、SREBP1、SREBP2和/或一种或多种非特异性SREBP抑制剂来改善患有或易感MECP2相关性疾病、紊乱或病况(例如Rett综合征)的个体中的行为和/或代谢症状。
PPARG调节剂
根据本发明的一些实施方式，可考虑将靶向过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARG)的试剂用作如本发明所述的代谢调节剂。例如，已被食品和药物管理局(FDA)批准用于治疗2型糖尿病的试剂(其中一些是PPARG活化剂)可用于治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况。特别地，噻唑烷二酮类可用于治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况。噻唑烷二酮被用于治疗2型糖尿病是因为其有效降低血糖水平而不增加胰腺胰岛素的分泌，且其还已显示减少脂肪酸、LDL-胆固醇和甘油三酯的产生。
组合
在本发明的一些实施方式中，如本发明所述的代谢通路调节剂彼此组合使用和/或与治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况的一种或多种症状、和/或减小治疗的一种或多种不良副作用的发生率、频率和/或强度的一种或多种其它试剂或治疗方式组合使用。
如本发明所使用的短语“组合”是指试剂或治疗方式，其在一种或多种其它期望疗法之前、同时或之后给予，以致个体同时暴露于两种(或全部)试剂或治疗方式。两种或多种试剂或治疗方式中的每种均可根据不同的时间表给予；不需要不同试剂的个体剂量同时或在相同组合物中给予。相反，只要两种(或多种)试剂在个体身体中同时存在一段时间，则认为其为“组合”给予。
和他汀类及依折麦布的情况相同，具有不同作用机理的降低胆固醇药物的组合使用是常见的。此外，因为他汀类所抑制的HMGCo-A还原酶的产物是多种生物学通路而非仅为胆固醇产生所需的，所以他汀类药物通常与补充剂例如甲羟戊酸一起给予，以预防由下调非期望靶向的通路所引起的不良效应。
在本发明的许多实施方式中，MECP2相关性疾病、紊乱或病况的治疗可包含或需要如本发明所述的两种或多种代谢通路调节剂或其它试剂或治疗方式的组合。一个实例将是二甲双胍与PPARG激动剂或与他汀类的组合。替代或另外地，在许多实施方式中，采用针对常见并发症例如癫痫和多动的试剂或其它治疗方式治疗患有或易感一种或多种MECP2相关性疾病、紊乱或病况(如，Rett综合征)的患者。实际上，因为针对Rett综合征中胆固醇和脂质调节异常的主要益处为代谢性质和运动症状的改善，所以在许多实施方式中预期如本发明所述的代谢通路调节剂治疗法将不会取代当前的症状特异性治疗，而是将与其联合作用。
药物组合物
如本发明所述的调节脂质和/或胆固醇代谢的所提供试剂或治疗方式可在药物组合物背景中使用。通常，所用药物组合物包含至少一种活性剂和至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。此药物组合物可任选包含一种或多种附加治疗活性物质和/或与其组合给药。在一些实施方式中，所提供药物组合物用于药中。在一些实施方式中，所提供药物组合物可用作预防剂。在一些实施方式中，所提供药物组合物可用于治疗应用中。在一些实施方式中，药物组合物经配制可用于给药至人类。
例如，在一些实施方式中，本发明提供的药物组合物可以无菌可注射形式(如，适于皮下注射或静脉输注的形式)和/或适用于注射的其它液体剂型提供。在一些实施方式中，药物组合物以粉末(如，冻干和/或无菌粉末)形式提供，任选是在真空下，其在注射前用水性稀释剂(如，水、缓冲液、盐溶液等)重构。在一些实施方式中，在水、氯化钠溶液、醋酸钠溶液、苄醇溶液、磷酸盐缓冲盐水等中稀释和/或重构药物组合物。在一些实施方式中，粉末应与水性稀释剂温和混合(如，不振摇)。
在一些实施方式中，所提供药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂(如，防腐剂、惰性稀释剂、分散剂、表面活性剂和/或乳化剂、缓冲剂等)。在一些实施方式中，用于所提供药物组合物中的适宜赋形剂例如可包括适合所需特定剂型的一种或多种药学上可接受的溶剂、分散介质、制粒介质、稀释剂、或其它液体载剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂和/或乳化剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂、崩解剂、粘合剂、防腐剂、缓冲剂等。替代或另外地，可使用药学上可接受的赋形剂例如可可油和/或栓剂蜡、着色剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和/或香化剂。
在一些实施方式中，适宜的赋形剂为至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％纯度。在一些实施方式中，赋形剂经美国食品药物管理局的批准。在一些实施方式中，赋形剂是药用级的。在一些实施方式中，赋形剂符合美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、英国药典和/或其它国际药典的标准。
在一些实施方式中，药物组合物包含一种或多种防腐剂。在一些实施方式中，药物组合物不含防腐剂。
在一些实施方式中，以可冷藏和/或冷冻的形式提供药物组合物。在一些实施方式中，以不可冷藏和/或冷冻的形式提供药物组合物。在一些实施方式中，重构溶液和/或液体剂型在重构后可贮存特定时期(如，2小时、12小时、24小时、2天、5天、7天、10天、2周、1个月、2个月或更长)。在一些实施方式中，组合物贮存超过指定时间导致活性剂的降解。
在一些实施方式中，液体剂型(如，用于口服和/或肠胃外给药)包括但不限于，乳剂、微乳、溶液、混悬剂、糖浆和/或酏剂。除了所提供的可溶性脂化配体剂以外，液体剂型可包含本领域中常用的惰性稀释剂例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯，丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和失水山梨醇脂肪酸酯，及其混合物。除了惰性稀释剂外，口服组合物可包含佐剂例如润湿剂、乳化和悬浮剂、增甜剂、调味剂和/或香化剂。在用于肠胃外给药的某些实施方式中，组合物与增溶剂如醇类、油类、改性油类、二醇类、聚山梨醇酯类、环糊精类、聚合物和/或及其组合混合。液体剂型和/或重构溶液在给药前可包含微粒物质和/或脱色。在一些实施方式中，若存在脱色或浑浊和/或过滤后残余微粒物质，则该溶液不应被使用。
在一些实施方式中，可根据已知方法使用适当的分散剂、润湿剂和/或悬浮剂配制可注射制剂，例如，无菌水性或油质悬浮液。无菌液体制剂可为例如无毒的肠胃外可接受的稀释剂和/或溶剂中的溶液、悬浮液和/或乳液，例如为1,3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受载剂和溶剂，例如为水、美国药典林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。无菌固定油类常规用作溶剂或悬浮介质。为此目的可使用包含合成单甘酯和双甘酯的任何温和(bland)固定油。脂肪酸例如油酸可用于制备液体制剂。
可通过例如经细菌截留滤器过滤和/或通过在使用前可溶于或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式中掺入灭菌剂而对液体制剂进行灭菌。
在一些实施方式中，可使用一种或多种策略延长和/或延迟所提供的可溶性脂化配体试剂在递送后的作用。
在一些实施方式中，固体剂型(如，用于口服给药的)包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和/或颗粒剂。在此类固体剂型中，可将所提供的可溶性脂化配体剂与至少一种惰性的、药学上可接受的赋形剂例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或填充剂或增充剂(如，淀粉例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉；糖类例如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇和硅酸)、粘合剂(如，羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶)、湿润剂(如，甘油)、崩解剂(如，琼脂、Explotab、羧甲淀粉钠、Amberlite、羧甲基纤维素钠、超支链淀粉、橙皮、天然海绵、膨润土、碳酸钙、马铃薯淀粉、木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐、一种或多种不溶性阳离子交换树脂以及碳酸钠)、溶液迟滞剂(如，石蜡)、吸收加速剂(如，季铵化合物)、润湿剂(如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯)、吸附剂(如，高岭土和膨润土)和润滑剂(如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠)，及其混合物混合。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述剂型可包含缓冲剂。
在一些实施方式中，相似类型的固体组分可被用作采用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和/或硬明胶胶囊中的填充剂。片剂、糖衣丸、胶囊和颗粒剂的固体剂型可用包衣或外壳物例如肠溶衣及其它制药领域众所周知的包衣来制备。
示例性肠溶包衣包括但不限于以下一种或多种：醋酸纤维素酞酸酯；丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物；醋酸纤维素琥珀酸酯；羟丙基甲基纤维素酞酸酯；醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯)；HP55；聚醋酸乙烯酞酸酯(PVAP)；EudragitL30D；EudragitL；EudragitS；Aquateric；甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物；甲基丙烯酸共聚物、醋酸纤维素(及其琥珀酸酯和酞酸酯形式)；苯乙烯马来酸共聚物；聚甲基丙烯酸/丙烯酸共聚物；羟乙基乙基纤维素酞酸酯；醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯；醋酸纤维素四氢酞酸酯；丙烯酸树脂；虫胶，及其组合。在一些实施方式中，肠溶包衣至少对于pH5.0是基本上不透水的。
在一些实施方式中，固体剂型可任选包含遮光剂并可为仅在或优先在肠道的某些部位(如，十二指肠、空肠或回肠)释放(可选地以延迟方式)所提供的可溶性脂化配体剂的组合物。可使用的包封组分的实例包含聚合物和蜡类。相似类型的固体组分可被用作采用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬明胶胶囊中的填充剂。
在一些实施方式中，本发明提供了用于局部和/或透皮递送的组合物，如作为乳膏、搽剂、软膏、油、泡沫、喷雾、洗液、液体、粉末、增稠洗液或凝胶的形式。可将特别示例性的此类制剂制备为例如产品例如皮肤软化剂、营养洗液型乳液、卸妆水、洁面乳、皮肤乳液、润肤露、按摩霜、滋润霜、隔离霜、唇膏、面膜或面部凝胶，清洁制剂例如香波、洗液、洁肤露、生发液或肥皂，或皮肤病学组合物例如洗液、软膏、凝胶、乳膏、搽剂、贴剂、除臭剂或喷雾。
本发明所述药物组合物的制备可通过药学领域任何已知方法或今后发展的方法。在一些实施方式中，此类制备方法包括以下步骤：联合活性成分与一种或多种赋形剂和/或一种或多种其它助剂，然后，若需要和/或期望，则将产物塑形和/或包装入期望的单一或多剂量单元。
根据本发明的药物组合物可作为单一单元剂量和/或多个单一单元剂量整批制备、包装和/或售卖。本发明所使用的“单元剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的独立量。活性成分量通常等于将给予个体的剂量和/或此剂量的便利分数，例如，此剂量的一半或三分之一。
取决于受治疗个体的身份、体型和/或状况和/或取决于组合物的给药途径，根据本发明的药物组合物中的活性成分、药学上可接受的赋形剂和/或任意附加成分的相对量可发生变化。举例而言，组合物可包含0.1％至100％(w/w)之间的活性成分。
本发明药物组合物可另外包含适合所需特定剂型的一种或多种溶剂、分散介质、稀释剂、或其它液体载剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。Remington的TheScienceandPracticeofPharmacy，第21版，A.R.Gennaro，(Lippincott，Williams&Wilkins，Baltimore，MD，2006)公开了用于配制药物组合物的各种赋形剂以及用于制备其的已知工艺。除了任意常规赋形剂介质与物质或其衍生物不相容的情况，例如通过产生任何不期望的生物效应或另外与药物组合物的任意其它组分以有害方式相互作用，否则将其应用考虑在本发明的范围内。
给药途径
在一些实施方式中，所提供的试剂可经配制用于任何适当递送途径。在一些实施方式中，所提供的试剂可经配制用于包括但不限于以下的递送途径：肌内(IM)、静脉内(IV)、腹腔内(IP)、皮下(SQ)、支气管滴注和/或吸入；口腔、肠内、皮间、动脉内(IA)、胃内(IG)、髓内、鼻内、鞘内、(通过)气管内滴注、心室内、关节内、粘膜、鼻用喷雾和/或气雾剂、口服(PO)、作为口腔喷雾、直肠(PR)、舌下；局部和/或透皮(如通过洗液、乳膏、搽剂、软膏、粉末、凝胶、滴剂等)、透皮，阴道，玻璃体和/或通过门静脉导管；和/或其组合。在一些实施方式中，本发明提供了经由直接注射(如，进入特定组织例如脑)给药所提供的试剂的方法。在一些实施方式中，本发明提供了经由静脉内给药的所提供的试剂的施用方法。在一些实施方式中，本发明提供了经由口服给药的所提供的试剂的施用方法。在一些实施方式中，本发明提供了经由皮下给药的所提供的试剂的施用方法。
在一些实施方式中，以组织特异性方式施用试剂。在一些实施方式中，将试剂直接施用至脑。
剂量
将任意各种剂量设想为与各种实施方式相匹配。可预期根据合理医学判断确定特定应用中的适合剂量。通过在各种试剂和考量因素例如效能、相对生物利用度、患者体重、不良副作用严重度和优选给药模式间进行选择，可设计不会引起实质上不想要的毒性但有效治疗特定个体的有效的预防性或治疗性治疗方案。用于任何特定应用的有效量可取决于诸如正在施用的本发明的特定试剂、个体体型和/或疾病或病况严重度的因素而改变。
在一些实施方式中，优选使用最大剂量，即，根据合理医学判断的最高安全剂量。在一些实施方式中预期每天多剂有利于实现所提供试剂的适当系统水平。适当系统水平的测定可通过例如测量个体的试剂最高或持续血浆水平。
在一些实施方式中，人类个体的试剂每日剂量将为约0.01mg/kg/天至1,000mg/kg/天(如，约1.5-30mg/kg/天)。取决于给药模式，可适当调节特定剂量以实现期望的局部或系统药物水平。在一些实施方式中，考虑每天多剂以实现试剂的适当系统水平。可将所提供试剂配制为控制和/或持续释放形式。
在一些实施方式中，试剂是或包含FDA所批准的药物。在一些实施方式中，根据FDA批准的药物给药方案施用此类试剂。在一些实施方式中，根据与FDA批准的给药方案不同的给药方案施用此类试剂。在一些实施方式中，相比于FDA批准的给药方案，以较低剂量、较低频度的给药安排和/或较少总剂量中的一种或多种施用此类试剂。在一些实施方式中，以介于10X少于FDA批准的剂量和10X多于FDA批准的剂量之间的剂量施用此类试剂。
代谢通路调节剂的识别和/或表征
在一些实施方式中，本发明提供了用于识别和/或表征用于治疗疾病、紊乱或病况(例如与异常MECP2相关的)的有用代谢通路调节剂的系统。特别地，本发明提供了用于识别和/或表征脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路，且特别是脑内脂质和/或胆固醇通路的调节剂的系统。
在一些实施方式中，本发明基于试剂对于代谢通路，且特别是脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路，尤其是脑内脂质和/或胆固醇代谢(如，生物合成)通路的一种或多种特定组件的效应而对其进行识别和/或表征。在一些特别实施方式中，本发明基于试剂对于鲨烯环氧酶(Sqle)(还称作角鲨烯单加氧酶)或Sqle参与通路的其它组件的效应而对其进行识别和/或表征。在一些特别实施方式中，本发明基于试剂对于24S-OHC存在、水平、活性和/或形式的效应而对其进行识别和/或表征。
在一些实施方式中，本发明进一步提供了通过评估暴露至一种或多种试剂或治疗方式的个体中的24SOHC水平来评估一种或多种此类试剂或治疗方式对脂质和/或胆固醇代谢的效应的方法。在一些实施方式中，使用来自个体的血样进行24SOHC评估。在一些实施方式中，使用血样以外的生物样本(如，脑脊液)进行24SOHC评估。24S-OHC的检测/评估可通过任何适当的方法，其包括但不限于：基于抗体的检测(如，ELISA)、放射性标记、配体结合分析、质谱、高压液相色谱和/或酶活性分析。
在一些实施方式中，本发明提供了用于识别和/或表征此类试剂的系统，其通过使试剂接触包含一种或多种此类代谢通路组件的系统，并评估其对于一种或多种指示物(如，相关通路的组件、产物和/或标记物)的存在、水平、活性和/或形式的影响。在一些实施方式中，所提供的系统包含完整和/或活性代谢通路(如，脂质或胆固醇生物合成通路)。
在一些实施方式中，所提供的识别和/或表征系统包含一种或多种细胞、组织和/或生物体。在一些实施方式中，此系统是或包含鼠细胞、组织和/或生物体。在一些实施方式中，此系统是或包含显示出减小的MECP2表达和/或活性(如，由于基因突变和/或化学改变)的一种或多种鼠细胞、组织和/或生物体。
根据本发明的特定实施方式，已建立了某些表型(症状)的评估以确定潜在调节剂改变认知能力、运动功能和/或生理参数的程度。在一些实施方式中，使用模型生物体(如，工程化的小鼠)。在一些实施方式中，使用MECP2缺失小鼠。在一些实施方式中，将结果与MECP2缺失被补偿(如，通过Sqle突变)的参照小鼠进行比较。
在一些实施方式中，在雌性细胞中或细胞上(如，在雌性小鼠中的)评估潜在调节剂的效应。近期公开显示杂合Mecp2tm1.1Bird/+雌性在某些分析中表现优异，其将允许我们同样评估在雌性中的援救程度(Samaco等人HumMolGenet22:96-109，2013)。
在一些实施方式中，使用用于听觉惊吓反应(ASR)、惊吓反应前脉冲抑制(PPI)、旷场活动、三箱社交行为和/或其组合的行为分析(如，在小鼠中)评估潜在调节剂的效应。在一些实施方式中，评估(如，周期性地，例如每天、每周、每两周或每月)潜在调节剂对体重增加和整体健康的效应。
在一些实施方式中，针对呼吸异常评估潜在调节剂的效应。例如，在七周雄性和雌性小鼠上进行的在Buxco全身体积描记箱内的乙酰甲胆碱激发分析精确评估了呼吸异常，且此缺陷也通过他汀类药物的使用而得到改善。
下表展示了可根据本发明使用以识别和/或表征感兴趣试剂的代表性时间进程和示例性顺序。
在一些实施方式中，评估血清化学和/或脑和肝脂质。特别地，若脂质调节证据是显见的，可针对代谢状态进行附加分析，包括腹腔内葡萄糖耐量试验(IPGTT)、胰岛素耐量(ITT)和量热法。
在一些实施方式中，通过以下一项或多项评估潜在调节剂的效应：行为实验、认知实验、运动机能实验、一种或多种生理参数测验及其组合。
在一些实施方式中，相关行为实验选自：听觉惊吓反应实验、惊吓反应前脉冲抑制实验、旷场活动实验，三箱社交行为实验、笼内活动实验和/或其组合。
在一些实施方式中，相关运动机能实验选自：呼吸挑战、转杆实验、旷场自发活动实验、监控步态的DigiGait系统(来自MouseSpecifics)及其组合。
在一些实施方式中，一种或多种生理参数测验选自：双能X射线吸收(DEXA)实验、乙酰甲胆碱激发的全身体积描记法呼吸实验、葡萄糖耐量实验、胰岛素耐量实验、血清胆固醇实验、量热法实验及其组合。
与特别且单独指出以参照方式并入的每个公开、专利或专利申请一样，除非另外说明，否则本发明提及的所有公开、专利和专利申请均以参照方式整体并入。在有冲突的情况下，将以本申请(包括本发明的任何定义)为准。
示例
材料和方法：除非另外说明，否则在以下实施例中使用以下材料和方法。
动物实验
在动物上实施的所有实验均依照由国立卫生研究院制定的指导方针得到贝勒医学院动物饲养和使用委员会的批准。药物治疗实验中实验者对基因型和治疗组是不知情的。除非另外描述，否则根据Buchovecky等人，AgeneticsuppressorscreeninMecp2miceimplicatescholesterolmetabolisminRettSyndrome，2013，Nat.Genet.，45(9):1013-1020中详述的条件和方案进行所有动物实验，并在此概述。简而言之，采用他汀类治疗的所有动物为129.Mecp2tm1.1Bird/Y或129.Mecp2tm1.1Bird/+以及它们的性别匹配的野生型同窝。除非另外指明，否则将小鼠饲养在交替13小时和11小时光、暗期的房间内具有玉米芯铺垫的塑料LabProducts笼中，向其提供酸化水，并自由采食HarlanTeklad2920X饮食(19.1％蛋白，6.5％脂肪；0％胆固醇)。在使用氟伐他汀进行初步研究之后(其中每个治疗组中包含6只Mecp2-缺失小鼠)，由对治疗组不知情的实验者进行所有行为评估。对于其它他汀类药物治疗，由对治疗组不知情的实验者进行所有行为评估。在对基因型和治疗组不知情的情况下进行所有化学分析。除非另外指明，否则组织和血液采集是在禁食4-6小时后的午后2小时窗口内。在皮质下区域进行脑分析，该区域包含胼胝体、纹状体、丘脑、下丘脑和海马体。
Q-PCR分析
根据制造商的说明，使用RNAeasyLipidTissueMiniKit(Qiagen)分离脑RNA并使用Trizol(Invitrogen)分离肝脏RNA。按照制造商说明用1IUDNA酶(AmbionInc.)在37℃下处理肝脏RNA1小时。按照制造商说明使用SuperScriptIIIFirstStrandSynthesisSystem(Invitrogen)自5000ng总RNA合成第一链互补DNA(cDNA)。每个样本设三个平行样在ABI7900(AppliedBiosystemsCA，USA)上进行RT-PCR。使用Primer3软件对照已公开的mRNA序列设计用于QRT-PCR的基因引物并由IntegratedDNATechnologies公司(Iowa，USA)进行合成。引物序列将根据要求提供。在ABI7900(AppliedBiosystemsCA，USA)上进行三个平行样的QRT-PCR。反应包含来自10ng总RNA的cDNA、0.1μL正向和反向引物、5μLPowerGreenMasterMix，并加水至最终体积10μL。PCR条件：95℃下10分钟，40个循环的95℃下15秒，60℃下60秒。通过分解曲线和琼脂糖凝胶电泳确认了单一产物扩增。将基因表达归一化至RpL19(L19)内载对照，并使用表达为原始2-(ΔΔCT)或表达为相对于WT的Mecp2/Y表达量的2-(ΔΔCT)法进行分析。
小鼠脑和肝脏样本的串联质谱分析
在经如上相同处理的小鼠处获取组织，并从中提取胆固醇中间体后，按照之前公开的方法(McDonald等人JLipidRes53:1399-1409，2012)通过串联质谱对胆固醇中间体进行测量。
体内胆固醇合成分析
对于体内胆固醇合成研究，从12小时开/关光暗循环的晚黑暗期进食状态下的小鼠中获得样本。使这些小鼠适应独居并在分析前的P38时起适应HarlanTeklad7001鼠粮(低胆固醇0.02％w/w，低脂4％w/w)。采样鼠龄为P54-56。如Xie等人JLipidRes44:1780–1789，2003中所公开的，腹腔内注射后由引入100mCi3H2O后的皂化组织评估胆固醇合成。
药物给药
将氟伐他汀(Selleckchem)溶于无菌超纯水以使得可以100ul施予针对20g小鼠的期望剂量并经皮下给药。在5、6和7周时给予雄性小鼠单一的3mg/kg的周剂量，然后从8周龄开始给予每周三次(周一，周三，周五)3mg/kg剂量。从6周龄开始，雌性小鼠也接受3mg/kg剂量，但每周仅治疗一次。按照产品信息指南，洛伐他汀(TocrisBioscience)制剂需要在乙醇中活化后调节至pH7.2。用乙醇稀释活化储备溶液至20x注射剂量并保持在-20℃下达一个月。注射当天通过在无菌盐水中稀释储备溶液制备1x工作溶液，以使得可以100ul给予针对20g小鼠的期望剂量。从5周龄开始每周两次以1.5mg/kg剂量对雄性小鼠进行皮下注射。
加速转杆任务
使用旋转杆(转杆)(Stoelting)测量运动表现的一个方面。在8周(雄性)或12周(雌性)时，将小鼠放在以4转/分钟速度旋转的槽型杆上。经过五分钟试验过程后，旋转率稳步增加至最大40转/分钟。针对8次试验记录每只小鼠能够在杆上停留的时间，每天4次连续两天，试验间隔最少30分钟。当小鼠落杆、与杆同转连续两转或成功完成五分钟时实验结束。
旷场自发活动
使用Versamax动物活动监控器评估旷场自发活动。在具有微光(20-25lux)和人造白噪音(55-60dB)的隐蔽室内进行记录。将各小鼠置于旷场室的中心并记录活动30分钟。这些测量是在10周(雄性)或5个月(雌性)、末次注射24小时后进行。
前脉冲抑制实验
使用SR-Lab惊吓室(SanDiegoInstruments)测量前脉冲抑制。经15分钟试验过程，将小鼠暴露于随机听觉脉冲序列或脉冲对，其旨在引出听觉惊吓反应(50分贝)，以及当通过柔和脉冲(4、8或12分贝)进行分贝(dB)脉冲时缓和该反应。在整个试验过程中将各小鼠暴露于每种可能的设置6次。
脂质测量
在气-液色谱前，使用CHCl3：CH3OH提取方法从组织中分离脂质，然后在N2压力下干燥有机相。然后将脂质再溶于500μlPBS-5％TritonX100中。在CobasMira临床化学分析仪上测量血清胆固醇。
统计分析
使用SPSS通过Kaplan-Meier分析后通过对数秩比对(logrankcomparison)对存活曲线进行比较。在GraphPadPrism5中使用非配对、双尾学生t-检验进行两组间的统计学比较(野生型相比于Mecp2突变体)；因为Mecp2突变体组相比于野生型通常显示出增加的变异性，所以未假定等方差。在SPSS中分析需要多重比较的统计检验。除了转杆数据以外，通过单项ANOVA分析多组间的比较，未进行球形假设；当比较超过两种基因型时应用Bonferroni调整，使用Dunnett事后检验比较他汀类药物治疗组与载剂对照。使用重复测量ANOVA分析转杆数据。
代谢分析
在雄性4和8周龄时以及在雌性12和24周龄时进行腹腔内葡萄糖耐受实验(IPGTT)。4小时禁食期后，用异氟烷轻度麻醉动物。进行小尾切除术并在0时间点采血。在治疗前以及接着在葡萄糖注射后15、30、60和120分钟时(t＝15、t＝30、t＝60和t＝120)按照制造商说明使用AlphaTRAK血糖监控系统(AbbottLaboratories，IL，USA)取样血糖。每个小鼠腹腔注射葡萄糖(2g/kg体重)。
由BCM的糖尿病和内分泌研究中心(P30DK079638)进行腹腔内胰岛素耐受实验(IPGTT)。简而言之，4小时禁食后，给予小鼠胰岛素(0.75毫单位/g体重)并在0、15、30、60和120分钟时获得葡萄糖水平。
使用OxymaxDeluxeSystem间接量热计等流八室系统(ColumbusInstruments，Columbus，Ohio)评估呼吸代谢功能并使用OxymaxWindowsV3.32软件对其进行分析。小鼠独居在量热笼内24小时：开始是3小时的光相适应性(12:00-15:00)，然后连续是4小时光相(15:00-19:00)、12小时暗相(19:00-07:00)和最小5小时光相(07:00-12:00)。测量累积食物摄入、温度、氧气消耗体积以及二氧化碳产生体积。由这些数据推导呼吸交换率和能量消耗。
实施例1:RTT基因靶标的识别和表征
本实施例描述了在Mecp2缺失小鼠(“Mecp2小鼠”)(一种广泛接受的Rett综合征小鼠模型)中进行的抑制基因筛选，以及某些RTT治疗新靶标的识别。
识别“抑制”基因(即，当突变时改善与特定“疾病”基因缺陷相关的疾病、紊乱或病况的症状或预防其恶化的基因)有助于集中精力理解疾病基因如何作用以及当丧失此功能时相关疾病、紊乱或病况如何随之发生。此外，此抑制基因揭示了可被靶向以逆转或预防症状进展的新通路。
本实施例证明了(参见图1)鲨烯环氧酶(Sqle)(也称作角鲨烯单加氧酶)中无义(STOP)抑制基因突变的识别，其抑制Mecp2小鼠中(特别地，获得自Jackson实验室的Mecp2tm1.1Bird小鼠)的RTT症状。Sqle编码胆固醇合成中的限速酶；因此，本实施例确定胆固醇生物合成通路为用于RTT治疗的适当靶标。
特别地，本实施例描述了“修饰基因”的遗传筛选，其中用同时改变基因组中许多基因的强大诱变剂诱变Mecp2缺失小鼠，预期仅少数突变将改变与现存MECP2失调相关的表型。特别地，采用高效化学诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲(ENU)诱变野生型C57BL/6J雄性小鼠，已知该诱变剂能提供适当水平的诱变力(JusticeNatRevGenet1:109-115，2000)。ENU通常引起点突变。ENU诱变的可能遗传结果包括功能丧失、功能获得、超活和部分活性编码区突变，以及非编码RNA和调节突变。通过测序鉴定突变。
使用随机化学诱变筛选进行小鼠遗传筛选，其中可通过任何未知基因中的突变赋予症状援救。随后的基因识别包含遗传和测序研究。将ENU处理的C57BL/6J雄性与雌性129.Mecp2tm1.1Brd/+小鼠(维持所述系为在129S6/SvEvTac上功能缺失的同类系)配种。将第一代(G1)中断奶时无症状的雄性后代基因根据突变Mecp2的存在情况分型，并检查显性突变对疾病表型的抑制，该显性突变将援救神经病学症状并可能导致长寿。对携带缺失Mecp2突变等位基因的679只雄性进行神经功能缺损援救和增加存活的筛选。在5种抑制基因中，所述筛选识别出Sqle突变，其通过改变MECP2突变小鼠中的胆固醇代谢而抑制症状。将附加筛选3700配子；在每个突变系中通过育种和评估多达300后代证实所述系中的症状改善。
在初筛中，识别了小鼠中MECP2症状的五个抑制基因。所述数据涉及RTT中的某些代谢通路，并暗示开发用于治疗代谢紊乱的药物有可能改善RTT和/或与MECP2相关的其它紊乱的症状。
确定一个特别感兴趣的抑制基因突变Sum3为鲨烯环氧酶(Sqle)中的终止密码子突变(Buchovecky等人NatureGenetics，2013年在刊)。Sqle催化胆固醇生成中的第一氧化反应。胆固醇水平通过独立机制反馈影响SQLE和HMGCo-A还原酶(HMGCR)二者的活性，以上二者对于胆固醇稳态而言是关键的(Yamamoto和BlochJBiolChem245:1670-1674，2008；Gill等人CellMetab13:260-273，2011)。Sqle广泛表达且其初级产物2,3-环氧鲨烯是一种被羊毛甾醇合酶(Lss)立即环化成羊毛甾醇的瞬时中间体(Cory等人JAmChemSoc88:4750-4751(1966)。SQLE在进化期间是高度保守的；小鼠和人源蛋白具有84％的同一性。
Mecp2缺失突变体脑中提高的胆固醇生物合成可促成神经功能障碍：终止密码子突变可能下调通路以赋予援救。本发明提供的数据首次显示Rett综合征小鼠模型的脑和肝中的胆固醇代谢紊乱。通过Q-RT-PCR、气液色谱法、质谱法和定量法测量两种Mecp2缺失等位基因型：Mecp2tm1.1Bird和Mecp2tm1.1Jae在脑和肝中的胆固醇合成来评估胆固醇代谢(Xie等人2003)。当Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠显示最小症状时，在缺失突变体脑中Cyp46a1表达已增加(超过野生型38倍；p>0.05)，表明疾病早期中对于胆固醇周转的需求提高。
显著地，中度症状小鼠的脑内胆固醇合成每克组织减少23％，当考虑在许多活性状态中存在各种细胞类型时其是不寻常的。有趣的是，在从头合成减少的情况下每克脑胆固醇浓度却略有增加。Cyp46a1-/-是呈现出脑胆固醇合成减少的唯一其它的小鼠突变体，但其每克组织胆固醇浓度无改变且脑质量无改变(Lund等人JBiolChem278:22980-22988，2003)。Cyp46a1-/-分析证明了脑胆固醇周转对于神经功能的重要性。胆固醇周转可能是产生香叶基香叶醇所必需的，香叶基香叶醇是学习和突触可塑性所必需的SQLE上游的HMGCR产物，并可能对神经元和星形胶质细胞在突触处的相互作用来说是重要的。因此，本发明确立了神经元中胆固醇代谢调节异常是Mecp2缺失雄性中症状发展的潜在主要因素。胆固醇周转失败可解释神经胶质特异性Mecp2表达以非细胞自主性方式对RTT症状减轻的贡献(Ballas等人NatNeurosci12:311-317(2009)。
在雄性和雌性Mecp2缺失小鼠中血脂异常伴随着代谢综合征。进行代谢和内分泌挑战实验以确定Mecp2缺失血脂异常表型是否导致代谢疾病。禁食4小时、6小时和16小时的Mecp2小鼠的基础葡萄糖水平未与野生型对照显著不同，提示Mecp2小鼠不是高血糖的，且因此没有糖尿病。然而，Mecp2小鼠在腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)期间对于葡萄糖推注给药具有降低的敏感性，指示胰腺本身无法产生胰岛素或者组织对于胰岛素作用的敏感性降低。如葡萄糖挑战后曲线下面积(AUC)的显著增加所显见的，早在4周龄时，MECP2缺失雄性小鼠就显示出糖耐量受损，该增加在8周龄时更加明显(P＝0.003；图3)。MECP2小鼠响应胰岛素外源性输注而从其血液清除葡萄糖的能力相对较低，表明他们是胰岛素抵抗的。因此，在MECP2小鼠中观测的葡萄糖耐受很可能源于对胰岛素作用降低的敏感性而非胰腺缺陷。作为正常胰腺功能的支持，MECP2小鼠在禁食0小时、6小时和24小时后具有可比的血中酮体水平。基于进食和活动行为以每日方式调节脂质稳态。在白天期间，当夜行性小鼠不活动并较少进食时，涉及脂质合成和封存的基因被抑制。这可使得肝内的代谢前体池朝糖异生方向分流以维持血糖量正常。在夜间，当小鼠活动并进食时，涉及脂肪生成通路的基因进行表达，促进外来代谢物贮存为甘油三酯，而不直接影响糖异生转录本的表达。通过间接测热法检查能量消耗。MECP2缺失雄性小鼠在活动期间优先于葡萄糖使用脂肪作为能量来源，提示其使用葡萄糖的能力受损，且为代谢综合征的迹象。
实施例2:在小鼠中用胆固醇生物合成调节剂治疗RTT样症状
本实施例证明用他汀类药物治疗MECP2突变小鼠(如本发明所述其代表经确立RTT模型)改善运动症状并增加寿命。本实施例另外证明通过改变MECP2雄性和雌性小鼠的脑和肝中脂质的异常合成和沉积发生了性状改善，并因此证实此类异常合成和沉积引起与RTT相关的一些或全部代谢缺陷。因此，本实施例证实他汀类药物可用于缓解异常脂质沉积并在雄性和雌性小鼠中改善运动症状。本领域普通技术人员在阅读包括本实施例在内的本说明书将会理解其确定了以下原则：有效治疗某些代谢紊乱的化合物可作为如本发明所述使用的代谢调节剂。可受助于胆固醇降低药物的潜在患者群体是具有MECP2突变或具有改变MECP2募集的或锚向基因组的那些复合物的剂量、功能或定位的突变的个体。
本实施例特别证明包括他汀类药物的胆固醇降低药物缓解雄性和雌性小鼠中MECP2突变的症状。测试化合物包括：1)氟伐他汀；2)辛伐他汀，3)洛伐他汀和4)阿托伐他汀。给予雄性和雌性小鼠以下不同剂量的药物以测试其对症状援救的影响：等于及十倍高于其在啮齿动物中的已公开的有效剂量。皮下给药以绕过肝脏代谢。在我们所知范围内，先前未将此类药物用于治疗Rett综合征、或与Mecp2突变相关的任何其它疾病、紊乱或病况。
性状改善结果的评估是通过体重和体脂的测量，以及神经和呼吸活动以及一般健康状况的测量(图6)。如同可见的，包括氟伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀的他汀类药物提供不同程度的运动性状和寿命援救，其中氟伐他汀和洛伐他汀在雄性小鼠中提供最佳援救(图4)。施用他汀类药物导致对于脑胆固醇合成的有益效果，并缓解肝内脂质蓄积。
值得注意的是各种其它药物，包括靶向鲨烯合成酶((E)-2-[2-氟-2-(亚奎宁环-3-基)乙氧基]-9H-咔唑单盐酸盐)或鲨烯环氧酶(1-(乙基磺仙姬)-2-哌啶乙烷)的两种药物，未显著改善症状。然而，这些药物的有效剂量和给药途径的确立不及他汀类药物完善，使得在适当剂量下更新的化合物将也有可能有效降低胆固醇。由于MECP2小鼠缺陷同时影响胆固醇和脂质沉积，对通路中更上游的HMGCR的调节可能更加有效。这暗示了改造因子指出了一条药物可靶向通路而无需提供最佳性状改善的Sqle随机突变。
他汀类药物通过预防肝内脂质蓄积以及通过维持脑胆固醇合成而改善运动症状。FDA批准的他汀类药物提供了通过抑制HMGCR来下调胆固醇生物合成通路的药理学手段。在初步试验中，用氟伐他汀皮下注射治疗年龄匹配的129Mecp2tm1.1Bird/Y和+/Y同窝出生者。当与接受假剂量的对照小鼠相比时，治疗减少了血清胆固醇、改善了转杆行为和旷场活动并增加了寿命。他汀类药物未能援救通常与小鼠RTT模型相关的全部健康参数，包括声惊吓反应。然而，如通过质谱评估的，其朝野生型水平方向改善了脑内胆固醇生物合成产物的水平。这些数据支持以下观点：调节胆固醇生物合成通路改善了小鼠中Mecp2突变的运动症状。未包含针对认知功能的学习和记忆实验，因为其依赖于小鼠运动行为并可被曲解。
Mecp2tm1.1Bird缺失雄性发展导致肝性脂肪变性的严重代谢疾病，其很可能在它们的早死中发挥作用。他汀类药物的给药引起的症状改善同时影响Mecp2缺失小鼠中的脑和全身的胆固醇稳态。氟伐他汀未被认为能够有效穿过BBB(Guillot等人，JCardiovascPharmacol21:339–346，1993)；然而，他汀类药物可通过针对肝胆固醇代谢的全身效应来降低脑胆固醇合成(CibickovaL，JClinLipidol5:373-379，2011)。洛伐他汀更为亲脂，且更有效地穿过BBB。
为针对患有Rett综合征的雌性提供更多相关性，我们给予雌性小鼠氟伐他汀以测定援救程度：从六周龄至8月龄1X/周治疗雌性。类似于雄性小鼠，氟伐他汀援救运动行为、寿命并改善脂肪肝疾病(图5)。特别地，Mecp2/+雌性小鼠发展相似的代谢疾病，虽然相比雄性Mecp2/Y小鼠是在生命更后期，其发作时间与增加的症状严重性相关。
鉴于他汀类药物的积极数据，在我们的药物测试方案(图6)中使用皮下或口服给药途径评价包括LXR抑制剂和代谢调节剂的其它脂质调节药物以评估其缓解Rett综合征症状的能力。此类药物包括：调节SREBP2(一种胆固醇通路调节物)的fatostatin、活化AMPK的常用代谢调节剂二甲双胍、以及SR9238和蓓萨罗丁、LXR调节剂。
实施例3:对使用代谢调节剂的治疗敏感的RTT患者
本实施例定义了可能受益于如本发明所述的代谢调节剂治疗的个体(如，Rett综合征患者)的特征。
特别地，本实施例证明在Mecp2缺失雄性小鼠中Sqle提高，且胆固醇生物合成通路同时在Mecp2缺失雄性小鼠的脑和肝中被扰乱(图2)。值得注意地，提高的胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白是小鼠中疾病的外围特征，并可用作可响应胆固醇降低药物的患者的生物标记物。先前未报道在携带MECP2突变的Rett患者中或在Mecp2缺失小鼠中胆固醇代谢通路的扰乱。本实施例证明扰乱的脂质代谢导致小鼠中脂肪肝疾病的发展以及代谢综合征(图2和3)。
当存在Mecp2突变时，他汀类药物在一个小鼠近交系(129S6/SvEv)中降低了提高的外周血胆固醇和甘油三酯，但在另一品系C57BL/6J中，提高的胆固醇和甘油三酯不与Mecp2突变同时存在。此发现提示提高的血清脂质将仅可作为患者子集的生物标记物。
新出现的证据表明脂肪酸代谢异常可促成神经发育紊乱例如自闭症和Rett综合征(Wiest等人FattyAcids80:221-227，2009；Sticozzi等人FEBSLettersdoi.org/10.1016，2013)。后一篇文章首次显示包括LDL-和HDL-胆固醇的总胆固醇在Rett患者中统计学上提高，提示本发明所提供的使用小鼠模型的数据预期将转化至人类种群。并且，与具有最严重MECP2突变的那些相关联的54％的RTT患者在其诊断早期也具有可在血中检测的高脂质参数。本实施例教导了具有异常脂质参数证据的患者可受助于给药调节脂质代谢的药物，且提高的血清胆固醇或LDL-胆固醇可用作可响应脂质调节药物治疗的那些患者的生物标记物。
因此，本实施例教导了显示脂肪肝疾病的一种或多种症状，和/或在脑和/或肝组织中显示提高的胆固醇甘油三酯(如，提高的血清胆固醇)和低密度脂蛋白的患者是使用本发明所述代谢调节剂(如，他汀类药物)的治疗的候选。本领域技术人员将会理解可使用各种方法中的任一检测此类脂肪肝疾病症状，和/或此类脑和/或肝组织中提高的胆固醇甘油三酯和低密度脂蛋白，和/或检测其代替物(即，相关特征或项目)。
实施例4:用具有不同亲脂性程度的他汀类药物治疗小鼠中的RTT样症状
如以上实施例2中所示，他汀类药物代表了对Mecp2相关性疾病、紊乱或病况例如Rett综合征的治疗的在先不明类别的潜在治疗方法(参见图4)。根据本发明的各种实施方式，本实施例扩展了那些发现并提供了亲脂性他汀类药物的使用可产生优越结果的深入理解。特别地，氟伐他汀可特别用于治疗Mecp2相关性疾病、紊乱或病况。
在本实施例中，使用氟伐他汀、洛伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀。氟伐他汀是可溶的且在治疗前无需活化，但大部分他汀类药物需要活化。按照制造商指南，将其它他汀类药物，洛伐他汀(TocrisBioscience)、辛伐他汀(TocrisBioscience)、阿托伐他汀(CrescentChemical)在乙醇中活化后调节pH至适于体内使用的水平(pH7-8)。用乙醇稀释活化储备溶液至20x注射剂量并在-20℃下贮存达一个月。在注射当日，在18份灭菌盐水和1份DMSO中稀释1份所述储备溶液制备1x工作溶液，以使得可以100ul给予针对20g小鼠的期望剂量。从5周龄开始每周两次皮下注射小鼠，剂量在表1中示出。按照图6中示意图评估小鼠。
表1–实施例4中使用的他汀类药物的示例性特性
如表1中所示，本实施例中使用的各种他汀类药物具有不同清除率、由不同细胞色素p450酶代谢并具有通过大鼠测定的导致50％动物死亡的不同致死剂量(LD50)。此外，各他汀类药物具有不同得半衰期，洛伐他汀具有约9小时的半衰期、阿托伐他汀具有约14小时的半衰期、辛伐他汀具有约2-3小时的半衰期且氟伐他汀具有约96小时的半衰期。
图7显示了他汀类药物治疗Mecp2小鼠5周的结果。如图7中所示，相比于载剂对照动物，洛伐他汀显示出转杆表现、旷场活动、血清胆固醇水平和肝脏脂质项的显著改善。此外，洛伐他汀小鼠在5周后具有比任意其它组显著更低的体重。考虑到洛伐他汀的短半衰期(～9小时)与本实施例中使用的给药日程(2X/周)相比，此数据是特别有趣的。因此，不希望受限于特定理论，若以更高频率间隔给药，洛伐他汀(以及可能还有其它他汀类药物)可能显示出显著增加的有效性。从治疗前的5周龄时开始每周获得体重，并在研究最后的第10周结束。图7中显示的是治疗3周后(8周龄时，图A)以及治疗5周后(10周龄，图C)的重量。
实施例5:RTT患者中的异常葡萄糖摄取
本实施例确认并扩展实施例3中的发现(参见图3)，显示如通过使用高胰岛素-正常血糖钳夹所示的，患有Mecp2功能紊乱的个体呈现出异常葡萄糖摄取和胰岛素抵抗。特别地，如图8中所示，Mecp2小鼠是胰岛素抵抗的并患有代谢综合征。
在本实施例中，如下发生高胰岛素-正常血糖钳夹的植入。麻醉8周大Mecp2tm1.1Bird/Y雄性小鼠并进行中线颈部切口以暴露颈静脉。将微型插管插入颈静脉，穿入右心房，并在静脉切开术位点处固定。允许小鼠恢复4天，随意采食水和食物。过夜禁食后，使用注射输液泵使有意识小鼠接受初步输液(10uCi)，然后以恒定速率静脉输液(0.1uCi/min)色谱纯化的[3-3H]-葡萄糖。为测定基础葡萄糖生成，示踪葡萄糖输液50、55和60分钟后从尾静脉采集血样。60分钟后(时间上允许葡萄糖进入血流并被葡萄糖敏感性组织摄取)，小鼠接受胰岛素的引发输注(40mU/kg体重)，然后是2小时的胰岛素输液(4mU/kg/min)。同时，使用另一输液泵以调节至维持血糖水平为100-140mg/dL(血糖正常)的速率输注10％葡萄糖。通过血糖仪每10分钟测量血糖浓度。在100、110和120分钟时，采血以测量钳夹状况下的肝脏葡萄糖生成。为预估个体组织中的胰岛素刺激性葡萄糖运输活性，在结束钳夹前的45分钟时以推注形式(10uCi)给予2-[14C]脱氧葡萄糖。120分钟后，将小鼠安乐死并提取组织。通过气相色谱质谱法(GCMS)通过2-[14C]脱氧葡萄糖的组织富集由血浆计算不同组织中的葡萄糖摄取。
由于各动物接受相同量的胰岛素，达到100-140mg/dL葡萄糖的稳态所需的葡萄糖输液量提供了全身胰岛素作用的指示。如图8中所示，相比于野生型小鼠，Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠需要较少的葡萄糖输液以达到100-140mg/dL葡萄糖的稳态，指示胰岛素抵抗。图A显示了在野生型和Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠中达到期望的稳态水平所需的总葡萄糖输液率，而图B和C显示了野生型和Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠的白色脂肪组织(WAT)和比目鱼肌中摄取的葡萄糖量。这些数据证实Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠是胰岛素抵抗的并具有代谢综合征。不希望受限于特定理论，Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠中外围脂质的过量产生可能至少部分是所观测的葡萄糖代谢缺陷的原因。
实施例6:RTT患者的糖尿病治疗和/或脂质治疗的作用
考虑到以上实施例5中所述的显示Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠中代谢功能紊乱的数据，评估了治疗剂用于治疗代谢紊乱的作用。特别地，在Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠中评估糖尿病治疗剂二甲双胍、LXR激动剂T0901317和线粒体解偶联剂DNPME的作用。在本实施例中，使Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠经受上文实施例4中(包括图6中)所述的实验方案并经受载剂、二甲双胍、LXR激动剂T0901317或线粒体解偶联剂DNPME中的一种。
本实施例中所用试剂的制备如下：将二甲双胍盐酸盐溶于盐水(Sigma)中。在注射当日，将二甲双胍稀释至18份储备溶液、1份DMSO和1份乙醇，以使得可以100ul给予针对20g小鼠的期望剂量。剂量＝30mg/kg，腹腔内注射(IP)。对于LXR激动剂T0901317(CaymenChemicals)和DNPME，将药物溶于100％DMSO中并接着在18份灭菌盐水、1份储备液、1份乙醇中稀释。T090317的最终剂量为25mg/kg，通过皮下注射递送，DNPME则为IP递送的5mg/kg。从5周龄时开始治疗动物直至10周龄，或治疗周期为5周。从治疗前的5周龄时开始每周获得体重数据，并在研究最后的第10周结束。图9中显示的是治疗3周后(8周龄时，图A)以及治疗5周后(10周龄，图D)的重量。
图9显示了相比于载剂给药，给药Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠二甲双胍或T090317的结果。虽然二甲双胍在此实施例中似乎收效甚微，但如通过转杆和旷场活动实验所示的，T090317改善了运动表现。然而，T090317似乎未改善外围脂肪测量值。因此，不希望受限于特定理论，T090317中观测的改善可能是由于脑脂(如，胆固醇)而非系统脂质的改变。此外，若根据FDA推荐的二甲双胍每日给药日程进行给药，二甲双胍可能会具有显著作用。
DNPME是一种线粒体解偶联剂，其解偶联来自葡萄糖的ATP能量产生，并允许替代地利用脂质。不希望受限于特定理论，将DNPME施予Mecp2功能紊乱患者可能引起机体内脂质的分解，因此增加脑内某些脂质(如，胆固醇)的可用性或通过使小鼠使用脂质作为能量来源而非葡萄糖。虽然先前显示了DNPME的线粒体解偶联活性(参见PerryRJ等人，Reversalofhypertriglyceridemia，fattyliverdisease，andinsulinresistancebyaliver-targetedmitochondrialuncoupler，2013，CellMetabolism，18:740-748)，但本工作首次提出DNPME显示出对于脑内脂质和/或胆固醇生物合成的状态具有影响。如图10中所示，DNPME的施用导致Mecp2tm1.1Bird/Y小鼠在转杆和旷场活动实验中的表现显著改善。每日给药很有可能将导致甚至更好的结果且联合治疗例如与他汀类药物或其它治疗化合物联合可能导致更进一步的益处。
本实施例显示出经显示有效治疗II型糖尿病和/或脂质沉积的治疗化合物可为用于治疗Mecp2相关性疾病、紊乱或病况例如Rett综合征的有吸引力疗法。
总体而言，以上实施例清晰证明和确认了调节脑内脂质和/或胆固醇代谢的试剂或治疗方式代表了先前未知类别的用于治疗Mecp2相关性疾病、紊乱或病况例如Rett综合征的疗法。根据各种实施方式，此类试剂能够在患有Mecp2功能紊乱的个体中改善运动表现、降低脂质水平以及延长寿命。
其它实施方式及等同
本领域技术人员将会意识到，或能够仅仅使用常规实验确定本发明所述发明特定实施方式的许多等同。本发明的范围无意受限于以上说明书，而是在以下权利要求书中阐明。

Claims (34)

1.一种治疗MECP2相关性疾病、紊乱或病况的方法，其包括给予有需求的个体调节脑内脂质和/或胆固醇代谢的至少一种试剂或治疗方式。
2.权利要求1所述方法，其中所述至少一种试剂或治疗方式选自：他汀类药物、LXR调节剂、葡萄糖代谢调节剂、SREBP调节剂、PPARG调节剂及其组合。
3.权利要求2所述方法，其中所述他汀类药物为以下一种或多种：洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、瑞舒伐他汀和氟伐他汀。
4.权利要求2所述方法，其中所述LXR调节剂为以下至少一种：氧固醇、LXR激动剂和/或RXR激动剂。
5.权利要求4所述方法，其中所述LXR调节剂为以下至少一种：次胆酰胺(hypocholamide)、T0901317、GW3965、SR9238、22(R)-羟基胆固醇、24(S)-羟基固醇，27-羟基胆固醇、胆固醇酸和蓓萨罗丁。
6.权利要求2所述方法，其中所述葡萄糖代谢调节剂为以下至少一种：双胍类药物和2,4-二硝基酚-甲醚(DNP-ME)或其衍生物。
7.权利要求6所述方法，其中所述至少一种双胍类药物选自：二甲双胍、氯胍、氯丙胍.
8.权利要求2所述方法，其中所述SREBP调节剂为以下至少一种：fatostatin、N-(4-(2-(2-丙基吡啶-4-基)噻唑-4-基)苯基)甲磺酰胺(FGH10019)、SREBP1和SREBP2。
9.权利要求2所述方法，其中所述PPARG调节剂为噻唑烷二酮。
10.权利要求9所述方法，其中所述噻唑烷二酮为以下至少一种：罗格列酮、吡格列酮、曲格列酮、萘格列酮、利格列酮和环格列酮。
11.以上权利要求任一项所述方法，其中所述至少一种试剂或治疗方式为每天给药至少一次。
12.以上权利要求任一项所述方法，其中所述至少一种试剂或治疗方式为每周给药至少一次。
13.以上权利要求任一项所述方法，其中所述至少一种试剂或治疗方式为每周给药至少两次。
14.以上权利要求任一项所述方法，其中所述至少一种试剂或治疗方式为皮下、腹腔内、静脉内或口服给药。
15.一种识别和/或表征用于治疗Rett综合征的有用治疗剂的方法，其包括：
测定候选治疗剂对于脑内脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面的效应。
16.权利要求15所述方法，其中所述脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面是胆固醇生物合成。
17.权利要求15所述方法，其中所述脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面是抑制3-羟基-3-甲基-戊二酰-CoA还原酶(HMGCR)。
18.权利要求15所述方法，其中所述脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面是抑制角鲨烯单加氧酶。
19.权利要求15-18任一项所述方法，其中所述治疗剂对于脂质和/或胆固醇代谢的一个或多个方面的效应是通过以下一项或多项评估：行为实验、认知实验、运动机能实验、一种或多种生理参数测验及其组合。
20.权利要求19所述方法，其中所述行为实验选自：听觉惊吓反应实验、惊吓反应前脉冲抑制实验、旷场活动实验，三箱社交行为实验、笼内活动实验和/或其组合。
21.权利要求19所述方法，其中所述运动机能实验选自：转杆实验、旷场自发活动实验、DigiGait监测系统及其组合。
22.权利要求19所述方法，其中所述一种或多种生理参数测验选自：双能X射线吸收(DEXA)实验、乙酰甲胆碱激发的全身体积描记法呼吸实验、葡萄糖耐量实验、胰岛素耐量实验、血清胆固醇实验、量热法实验及其组合。
23.一种治疗Rett综合征的方法，其包括给予患有或易感Rett综合征的个体他汀类药物。
24.权利要求23所述方法，其中所述他汀类药物选自：洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀及其组合。
25.权利要求23或24所述方法，其中所述他汀类药物为每天给药至少一次。
26.权利要求23或24所述方法，其中所述他汀类药物为每周给药至少一次。
27.权利要求23或24所述方法，其中所述他汀类药物为每周给药至少两次。
28.权利要求23-27任一项所述方法，其中所述他汀类药物为皮下或口服给药。
29.一种治疗Rett综合征的方法，其包括给予患有或易感Rett综合征的个体葡萄糖代谢调节剂。
30.权利要求29所述方法，其中所述葡萄糖代谢调节剂选自：双胍类药物；2,4-二硝基酚-甲醚(DNP-ME)、2,4-二硝基酚-乙醚(DNP-EE)、2,4-二硝基酚-乙烯醚(DNP-VE)或其衍生物；及其组合。
31.权利要求30所述方法，其中所述双胍类药物选自：二甲双胍、氯胍、氯丙胍。
32.权利要求29-31任一项所述方法，其中所述葡萄糖代谢调节剂为每周给药至少一次。
33.权利要求29-31任一项所述方法，其中所述葡萄糖代谢调节剂为每周给药至少两次。
34.权利要求29-33任一项所述方法，其中所述葡萄糖代谢调节剂为皮下、腹腔内、静脉内或口服给药。
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