CN109982686A

CN109982686A - 普利多匹定用于治疗rett综合征的用途

Info

Publication number: CN109982686A
Application number: CN201780071045.XA
Authority: CN
Inventors: 米甲·杰瓦; 拉尔夫·劳弗; 迈克尔·海登
Original assignee: Prinia Medical Development Co Ltd
Current assignee: Teva Pharmaceuticals International GmbH; Prinia Medical Development Co Ltd
Priority date: 2016-09-16
Filing date: 2017-09-15
Publication date: 2019-07-05
Also published as: ES2909557T3; JP6977029B2; AU2017326013A1; PL3512506T3; EP3512506A1; WO2018053280A1; MX2019003069A; CA3036984A1; EP4005570B1; BR112019005040A2; AU2017326013B2; CA3036984C; IL265342B2; IL265342A; HUE058314T2; JP2019532926A; EP3512506A4; EP4005570A1; DK3512506T3; EP3512506B1

Abstract

本发明提供了一种用于治疗罹患Rett综合征的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的普利多匹定，以便从而治疗受试者。

Description

普利多匹定用于治疗RETT综合征的用途

本申请要求于2016年9月16日提交的美国临时申请第62/395,854号的权益，该申请的内容特此通过引用以其整体并入。

本申请通过引用并入名称为“170915_88973-A-PCT_Sequence_Listing_JTC.txt”的文件中呈现的核苷酸和/或氨基酸序列，其大小为3千字节，并且于2017年9月15日以IBM-PC机器格式创建，与MS-Windows具有操作系统兼容性，该文件作为本申请的一部分被包含在2017年9月15日提交的文本文件中。

贯穿本申请，各种出版物通过第一作者和出版年份提及。这些出版物的完整引用信息在紧接权利要求书之前的参考文献部分中呈现。参考文献部分中提及的出版物的公开内容特此通过引用以其整体并入到本申请中，以便更充分地描述到本文描述的本发明为止的现有技术。

背景

Rett综合征

Rett综合征(RTT)是一种神经障碍，估计在所有种族和民族群中，每10,000至15,000个出生的存活女性中就有一个受到影响。(Amaral 2007)。

在95％-97％的病例中，RTT是由位于X染色体上的甲基-CpG结合蛋白2(MeCP2)基因中的突变引起的。(Isaias 2014)。突变通常是随机和自发的。在少于1％的有记录的病例中，突变是遗传的，或者从一代传给下一代。MeCP2基因参与甲基-胱氨酸结合蛋白2(MeCP2)蛋白的产生。MeCP2蛋白在靶基因的启动子区域的CpG位点处结合甲基胞嘧啶和5-羟基甲基胞嘧啶，通过募集共阻遏因子(co-repressor)和共活化因子(co-activitor)来控制它们的转录。(Pozzo-Miller 2015)。

在极少数情况下，RTT也可能是由其他基因诸如细胞周期蛋白依赖性激酶样5(CDKL5)基因、叉头盒蛋白(Forkhead box protein)G1(FOXG1)基因以及尚未被鉴定的可能的其他基因中的部分基因缺失或突变引起的。

RTT表现为不协调、智力下降、步态异常和癫痫。(Weng 2011)。目前，不存在针对RTT的治疗方案。

普利多匹定(pridopidine)

普利多匹定(4-[3-(甲基磺酰基)苯基]-1-丙基哌啶)(以前被称为ACR16)是正在开发的用于治疗亨廷顿氏病的药物。普利多匹定的化学名称为4-(3-(甲基磺酰基)苯基)-1-丙基哌啶，并且其化学登记号为CAS346688-38-8(CSID:7971505 2016)。普利多匹定盐酸盐的化学登记号为882737-42-0(CSID:25948790 2016)。

已经示出普利多匹定通过抑制活动过度或增强活动减退来调节运动活动度。普利多匹定的神经保护特性被认为归因于其对σ-1受体(S1R，IC50～100nM结合)的高亲和力，而普利多匹定的运动活动度可以主要通过其对多巴胺D2受体(D2R)(IC50～10μM结合)的低亲和力、拮抗活性来介导(Ponten 2010)。普利多匹定示出在微摩尔范围内与另外的受体的低亲和力结合。

S1R是一种内质网(ER)伴侣蛋白，其牵涉脑中的细胞分化、神经可塑性、神经保护和认知功能。最近，大鼠纹状体的转录组分析示出，普利多匹定治疗激活已知促进神经元可塑性和存活并且在HD中被削弱的BDNF、多巴胺受体1(D1R)、糖皮质激素受体(GR)和丝氨酸-苏氨酸激酶蛋白激酶B(Akt)/磷酸肌醇3-激酶(PI3K)途径的表达。此外，普利多匹定的基因表达谱在Q175敲入(Q175KI)HD小鼠模型中示出HD疾病基因表达谱的反向模式(Geva2016)。普利多匹定还以S1R依赖性方式增强成神经细胞瘤细胞系中神经保护性脑源性神经营养因子(BDNF)的分泌(Geva 2016)。

发明概述

本发明提供了用于治疗罹患Rett综合征(RTT)的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的普利多匹定，以便从而治疗受试者。

本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包含一定量的普利多匹定，用于在治疗罹患RTT的受试者中使用。

本发明还提供了呈单位剂型的药物组合物，用于治疗罹患RTT的受试者。

本发明还提供了一定量的普利多匹定在制备用于治疗罹患RTT的受试者的药物中的用途。

本发明还提供了一定量的普利多匹定用于治疗罹患RTT的受试者的用途。

本发明还提供了包装，包括：

a)药物组合物，包含一定量的普利多匹定和药学上可接受的载体；和

b)用于使用药物组合物治疗罹患RTT的受试者的说明书。

本发明还提供了治疗包装，用于向罹患RTT的受试者分配或用于在向罹患RTT的受试者的分配中使用，所述治疗包装包括：

a)一个或更多个单位剂量，每个这样的单位剂量包括有效治疗罹患RTT的受试者的量的普利多匹定，和

b)用于此的成品药物容器，所述容器包含一个或更多个所述单位剂量，所述容器还包含或包括指导使用所述包装治疗受试者的标签。

本发明还提供了用于增加罹患RTT的受试者中的脑源性神经营养因子(BDNF)血清水平的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的普利多匹定，以便从而增加受试者中的BDNF血清水平。

附图描述

图1：特征值和特征等级(被方形轮廓覆盖的曲线)的差异。计算两个不同集合中特征值之间的相对差异(％)，并且以与特征等级(其等级从0％至100％变化)对应的顺序对相对差异(％)绘图。

图2：等级去相关特征空间中的二元区分的可视化。出于可视化目的，选择两个最高等级的去相关特征形成2D坐标平面。每个圆圈或方形代表一只小鼠。来自对照组的小鼠示出为圆圈，并且来自疾病组的小鼠示出为方形。另一个方便的(从测量(scale)的角度来看)但等效的源自云重叠的度量是区分概率＝1-重叠，其测量了分类器能够被训练成高于偶然水平地在组A和组B之间进行区分的可靠性，零对应于100％重叠并且没有高于偶然水平地区分这两个组的能力，而100％意味着无错区分。

图3：8周时示出后肢抱握(hindlimb clasping)的小鼠的百分比(WT和普利多匹定30mg/kg未示出抱握)。^#与WT相比，p<0.05，^{^}与HET-媒介物组相比，p<0.06。

图4：从旋转杆跌落的等待时间。数据表示为平均值±SEM。^#与WT-媒介物组相比，p<0.05。

图5：跌落时旋转杆的速度。数据表示为平均值±SEM。^#与WT-媒介物组相比，p<0.05。

图6：平均惊吓响应。数据表示为平均值±SEM。^#与WT-媒介物组相比，p<0.05。^*与HET-媒介物组相比，p<0.05。

图7：整个治疗中所有小鼠的体重。数据呈现为平均值±SEM。将HET媒介物组与WT媒介物组比较，^###p<0.001、^##p<0.01、^#p<0.05；***将HET-媒介物组与HET-普利多匹定组比较，p<0.001。

图8A-图8B：(8A)普利多匹定(3mg/kg)对8周龄的MeCP2(BIRD)小鼠的步态特征的恢复的分析汇总。(8B)普利多匹定(30mg/kg)对8周龄的BIRD小鼠的步态特征的恢复的分析汇总。

云图用于在最佳区分特征空间中将WT(上部云)、HET小鼠(最右下部云)和HET+治疗(最左下部云)之间的关系可视化。柱状图示出了各种治疗的恢复百分比(最深的颜色)。图8A无恢复，图8B 55％恢复。

图9A-图9B：(9A)普利多匹定(3mg/kg)对12周龄的BIRD小鼠的步态特征的恢复的分析汇总。(9B)普利多匹定(30mg/kg)对12周龄的BIRD小鼠的步态特征的恢复的分析汇总。

云图用于在最佳区分特征空间中将WT(上部云)、HET小鼠(最左下部云)和HET+治疗(最右下部云)之间的关系可视化。柱状图示出了各种治疗的恢复百分比(最深的颜色)。图9A无恢复，图9B 55％恢复。

在图10A-图10C、图11A-图11B、图12A-图12B、图13A-图13B和图14A-图14B中：柱A代表媒介物治疗的MeCP2wt小鼠，柱B代表媒介物治疗的MeCP2HET小鼠，柱C代表普利多匹定治疗的MeCP2小鼠(3mg/kg)，并且柱D代表普利多匹定治疗的MeCP2小鼠(30mg/kg)。

图10A-图10C：全脑管家基因的相对mRNA表达：ATP5B(10A)、GAPDH(10B)和RPL13A(10C)；每一个对另外两种基因的几何平均值归一化。

图11A-图11B：全脑中BDNF I的相对mRNA表达：MeCP2(Rett)小鼠模型中的药物功效(11A)，与MeCP2_WT、媒介物治疗的组相比的BDNFI转录物拯救的程度(11B)。

图12A-12B：全脑中BDNF IV的相对mRNA表达：MeCP2(Rett)小鼠模型中的药物功效(12A)，与MeCP2_WT、媒介物治疗的组相比的BDNF IV转录物拯救的程度(12B)。

图13A-13B：全脑中BDNF VI的相对mRNA表达：MeCP2小鼠模型中的药物功效(13A)，与MeCP2_WT、媒介物治疗的组相比的BDNF VI转录物拯救的程度(13B)。

图14A-14B：全脑中BDNF IX(全长)的相对mRNA表达：MeCP2小鼠模型中的药物功效(14A)，与MeCP2_WT、媒介物治疗的组相比的BDNFIX转录物拯救的程度(14B)。

发明详述

在一个实施方案中，受试者是人类患者。在一个实施方案中，人类患者是女性。

在一个实施方案中，受试者在甲基CpG结合蛋白2(MECP2)基因中具有突变。在一个实施方案中，受试者在细胞周期蛋白依赖性激酶样5(CDKL5)基因中具有突变。在一个实施方案中，受试者在叉头盒蛋白G1(FOXG1)基因中具有突变。

在一个实施方案中，普利多匹定是普利多匹定盐酸盐。

在一个实施方案中，普利多匹定通过口服、经鼻、吸入、通过皮下注射、或通过静脉内、腹膜内、肌内、鼻内、含服、阴道、直肠、眼内、鞘内、局部或皮内途径施用。在一个实施方案中，普利多匹定被口服施用。

在一个实施方案中，普利多匹定以气雾剂、可吸入粉末、注射剂(injectable)、液体、凝胶、固体、胶囊或片剂的形式被施用。

在一个实施方案中，普利多匹定被周期性地施用。

在一个实施方案中，普利多匹定施用的频率少于每天一次。在一个实施方案中，普利多匹定每天地被施用。在一个实施方案中，普利多匹定每天一次被施用。在另一个实施方案中，普利多匹定施用的频率多于每天一次。在一个实施方案中，普利多匹定每天两次被施用。

在一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为10mg/天-315mg/天。在一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为90mg/天-315mg/天。在一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为90mg/天-225mg/天。在一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为180mg/天-225mg/天。在另一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为约20mg/天、22.5mg/天、约45mg/天、约67.5mg/天、约90mg/天、约100mg/天、约112.5mg/天、约125mg/天、约135mg/天、约150mg/天、约180mg/天、约200mg/天、约225mg/天、约250mg/天或约315mg/天。在一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为45mg/天。在一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为90mg/天。在一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为180mg/天。在一个实施方案中，所施用的普利多匹定的量为225mg/天。

在一个实施方案中，普利多匹定的量以一个剂量被每天施用。在一个实施方案中，普利多匹定的量以两个剂量被每天施用。

在一个实施方案中，以一个剂量施用的普利多匹定的量为约10mg、约22.5mg、约45mg、约67.5mg、约90mg、约100mg、约112.5mg、约125mg、约135mg、约150mg、约180mg、约200mg、约250mg或约315mg。在一个实施方案中，以一个剂量施用的普利多匹定的量为45mg。在一个实施方案中，以一个剂量施用的普利多匹定的量为10mg-45mg。

在一个实施方案中，普利多匹定的量以每天两个剂量，每个剂量45mg的量被施用。

在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后1天内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后1周内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后1个月内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后3个月内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后6个月内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后9个月内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后12个月内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后18个月内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后3年内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后5年内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后10年内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后15年内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后20年内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后25年内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后30年内被首次施用。在一个实施方案中，普利多匹定在受试者出生后30年或更长时间被首次施用。

在一个实施方案中，普利多匹定的周期性施用持续至少3天、至少30天、至少42天、至少8周、至少12周、至少24周、至少6个月、至少1年、至少2年、至少5年、至少10年、至少15年、至少20年、至少25年、或30年或更长。

在一个实施方案中，普利多匹定通过延迟受试者中症状的发作来治疗受试者。

在一个实施方案中，普利多匹定通过防止受试者中至少一种症状的恶化来治疗受试者。在一个实施方案中，普利多匹定通过延迟受试者中至少一种症状的恶化来治疗受试者。在一个实施方案中，普利多匹定通过改善受试者中至少一种症状来治疗受试者。

在一个实施方案中，症状是获得运动技能的延迟。在一个实施方案中，症状是延迟的就坐、爬行和/或行走。在一个实施方案中，症状是已获得的运动技能的部分丧失或完全丧失。在一个实施方案中，症状是就坐、爬行和/或行走的能力降低。在一个实施方案中，运动技能是运动协调技能。

在一个实施方案中，症状是异常步态。在一个实施方案中，症状是共济失调。在一个实施方案中，症状是失用症。在一个实施方案中，症状是肌无力(muscle weakness)。在一个实施方案中，症状是痉挛。在一个实施方案中，症状是僵硬。在一个实施方案中，症状是变差的步态起始。

在一个实施方案中，症状是异常肌肉张力。在一个实施方案中，症状是张力减退。在一个实施方案中，症状是外周血管舒缩障碍(peripheral vasomotor disturbance)。在一个实施方案中，症状是脊柱侧凸。在一个实施方案中，症状是变差的步态起始。

在一个实施方案中，症状是获得有目的的手部技能的延迟。在一个实施方案中，症状是已获得的目的性手部技能的部分丧失或完全丧失。在一个实施方案中，症状是异常手部运动。在一个实施方案中，异常手部运动是绞扭(wringing)、紧握、击掌、洗手、敲击、摩擦和/或重复地将手放到口中。

在一个实施方案中，症状是获得沟通技能的延迟。在一个实施方案中，症状是已获得的沟通技能的部分丧失或完全丧失。在一个实施方案中，沟通技能是语言技能。在一个实施方案中，语言技能是口语技能。在一个实施方案中，沟通技能是眼神接触。

在一个实施方案中，症状是异常眼部运动。在一个实施方案中，异常眼部运动是长时间凝视、过度眨眼、对眼和/或一次闭合一只眼睛。

在一个实施方案中，症状是呼吸不规律。在一个实施方案中，呼吸不规律发生在受试者清醒时。在一个实施方案中，呼吸不规律是呼吸暂停。在一个实施方案中，呼吸不规律是换气过度。

在一个实施方案中，症状是受试者清醒时的磨牙症。

在一个实施方案中，症状是增加的易怒、降低的警觉性和/或降低的注意广度。在一个实施方案中，症状是不适当的大笑和/或尖叫。

在一个实施方案中，症状是癫痫。

在一个实施方案中，症状是心脏异常。在一个实施方案中，心脏异常是心动过缓。在一个实施方案中，心脏异常是心动过速。

在一个实施方案中，症状是对疼痛的响应降低。在一个实施方案中，症状是生长迟缓。在一个实施方案中，症状是小头畸型。在一个实施方案中，症状是受损的睡眠模式。在一个实施方案中，症状是营养不良性冷蓝脚(cold blue feet)。

在一个实施方案中，普利多匹定使症状改善至少20％。在一个实施方案中，普利多匹定使症状改善至少30％。在一个实施方案中，普利多匹定使症状改善至少50％。在一个实施方案中，普利多匹定使症状改善至少80％。在一个实施方案中，普利多匹定使症状改善100％。

在一个实施方案中，普利多匹定通过改善受试者进行日常生活活动、进行家务、管理财务和/或进行工作的能力来治疗受试者。在一个实施方案中，普利多匹定通过降低受试者所需的护理水平来治疗受试者。

在一个实施方案中，普利多匹定通过保持受试者进行日常生活活动、进行家务、管理财务和/或进行工作的能力来治疗受试者。

在一个实施方案中，普利多匹定有效增加受试者中的血清BDNF水平。在一个实施方案中，普利多匹定有效增加受试者脑中的BDNF水平。在一个实施方案中，普利多匹定有效保持受试者中的血清BDNF水平。

在一个实施方案中，普利多匹定的量为10mg-315mg。在一个实施方案中，普利多匹定的量为90mg-315mg。在一个实施方案中，普利多匹定的量为90mg-225mg。在另一个实施方案中，普利多匹定的量为约22.5mg、约45mg、约67.5mg、约90mg、约100mg、约112.5mg、约125mg、约135mg、约150mg、约180mg、约200mg、约225mg、约250mg或约315mg。在一个实施方案中，普利多匹定的量为45mg。在一个实施方案中，普利多匹定的量为90mg。在一个实施方案中，普利多匹定的量为180mg。在一个实施方案中，普利多匹定的量为225mg。

本发明还提供了包装，包括：

b)用于使用药物组合物治疗罹患RTT的受试者的说明书。

一种治疗包装，用于向罹患RTT的受试者分配或用于在向罹患RTT的受试者的分配中使用，所述治疗包装包括：

本发明还提供了增加罹患RTT的受试者中的血清BDNF水平的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的普利多匹定，以便从而增加受试者中的血清BDNF水平。本发明还提供了增加罹患RTT的受试者中的脑BDNF水平的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的普利多匹定，以便从而增加受试者中的脑BDNF水平。

对于前述实施方案，本文公开的每个实施方案都被设想为可适用于所公开的其他实施方案中的每一个。此外，方法实施方案中列举的要素可以用于本文描述的药物组合物、用途和包装实施方案，并且反之亦然。

术语

如本文使用的，并且除非另有说明，否则以下术语中的每一个都应具有下文阐述的定义。

如本文使用的，“普利多匹定”意指普利多匹定碱或其药学上可接受的盐，以及衍生物，例如富含氘的普利多匹定和盐。富含氘的普利多匹定和盐及其制备方法的实例可以在美国申请公布第2013-0197031号、第2016-0166559号和第2016-0095847号中找到，以上申请中的每一个的全部内容通过引用特此并入。

“富含氘”意指，在化合物的任何相关位置处的氘的丰度大于一定量的化合物中该位置处天然存在的氘的丰度。氘的天然存在的分布为约0.0156％。因此，在“富含氘”的化合物中，在其任何相关位置处的氘的丰度大于0.0156％，并且可以在从大于0.0156％至100％的范围内。富含氘的化合物可以通过用氘交换氢或用富含氘的起始材料合成该化合物来获得。

根据本发明的用于使用的活性化合物可以以任何适合于预期施用的形式提供。合适的形式包括药学上可接受的盐，以及本发明的化合物的前体或前药形式。

“其盐”是通过制备化合物的酸盐或碱盐而被改变的本发明化合物的盐。在该方面的术语“药学上可接受的盐”指的是适合于药学用途的本发明的化合物的相对无毒的无机的和有机的酸加成盐或碱加成盐。药学上可接受的盐可以通过本领域熟知和描述的程序形成。制备这样的盐的一种方法是通过用无机碱处理本发明的化合物。

本发明的化合物的酸加成盐的实例包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、高氯酸盐、磷酸盐、硫酸盐、甲酸盐、乙酸盐、阿康酸盐(aconate)、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、肉桂酸盐、柠檬酸盐、双羟萘酸盐、庚酸盐、富马酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、萘-2-磺酸盐、邻苯二甲酸盐、水杨酸盐、山梨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、对甲苯磺酸盐等。在某些实施方案中，普利多匹定是药学上可接受的盐，例如HCl盐或酒石酸盐。优选地，在如本文描述的本发明的任何实施方案中，普利多匹定呈其盐酸盐的形式。

如本文使用的，以毫克测量的普利多匹定的“量”或“剂量”指的是制品中存在的普利多匹定(4-[3-(甲基磺酰基)苯基]-1-丙基-哌啶)的毫克数，与制品的形式无关。例如，包含“90mg普利多匹定”的单位剂量意指制品中普利多匹定的量为90mg，与制品的形式无关。因此，当呈盐的形式例如普利多匹定盐酸盐时，由于盐的存在，提供90mg剂量的普利多匹定所需要的盐形式的重量将大于90mg。

如本文使用的，“单位剂量(unit dose)”、“单位剂量(unit doses)”和“单位剂型”意指单一药物施用实体(entity)/实体(entities)。可以制备用于口服剂型诸如片剂、胶囊、丸剂、粉剂和颗粒剂的“单位剂量(unit dose)”、“单位剂量(unit doses)”和“单位剂型”，口服剂型。

如本文使用的，在数值或范围的上下文中的“约”意指所陈述或要求保护的数值或范围的90％-110％。

“向受试者施用”或“向(人类)患者施用”意指向受试者/患者提供、分配或施加药物(medicines)、药物(drugs)或补救措施，以延迟、减轻、治愈或减少与状况例如病理学状况相关的症状。口服施用是向受试者施用本发明化合物的一种方式。

根据本发明的化合物可以以碱形式或药学上可接受的盐的形式被施用，优选地以与一种或更多种辅助剂、赋形剂、载体、缓冲剂、稀释剂和/或其他常规药物助剂一起的药物组合物的形式。

“药学上可接受的载体”指的是适合用于与人类和/或动物、而没有过度不良副作用(诸如毒性、刺激和过敏响应)、与合理的益处/风险比相称的载体或赋形剂。它可以是药学上可接受的溶剂、悬浮剂或媒介物，用于将本发明化合物递送至受试者。

施用可以是周期性施用。如本文使用的，“周期性施用”意指间隔一定时间段的重复/反复施用。施用之间的时间段优选地是时时(from time to time)一致的。周期性施用可以包括例如每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每周一次、每周两次、每周三次、每周四次等等施用。

如本文使用的“治疗(treat)”或“治疗(treating)”涵盖缓解、减轻、降低罹患RTT的受试者的身体、精神或情感缺陷的严重程度，消除或基本上消除或改善其身体、精神或情感缺陷。治疗也指的是延迟或防止症状或减少与疾病相关的缺陷。

如本文使用的，作为达到终点有效的量的“有效的”意指，组分当以本公开内容的方式被使用时与合理的益处/风险比相称的足以产生指示的治疗响应而无过度不良副作用(诸如毒性、刺激或过敏响应)的量。例如，有效治疗RTT症状的量。具体的有效量随诸如所治疗的特定状况、患者的身体状况、所治疗的哺乳动物的类型、治疗的持续时间、联合疗法(如果有的话)的性质、和所使用的具体制剂以及化合物或其衍生物的结构等因素而变化。

应理解，在提供参数范围的情况下，本发明也提供了该范围内的所有整数及其小数点后一位的数(tenth)。例如，“22mg-300.0mg”包括22.0mg、22.1mg、22.2mg、22.3mg、22.4mg等等直到包括300.0mg。

通过参考下面的实验细节将更好地理解本发明，但是本领域技术人员将容易理解，详细的具体实验仅仅是对本发明的例示，如在其后的权利要求中本发明被更全面地描述。

实验细节

实施例1：在Rett综合征的MeCP2小鼠模型中评价普利多匹定的功效

本研究的目的是在RTT的雌性MeCP2(BIRD)小鼠模型(Guy 2001)中评估普利多匹定的效果。

材料：

将普利多匹定(3mg/kg和30mg/kg)以10mg/kg的剂量体积每天两次(给药间隔6小时)口服施用。在测试日，在测试前30分钟施用普利多匹定。

给药在小鼠～5.5周龄时开始，并且持续到行为测试结束。行为测试在8周龄和12周龄进行。

来自Jackson Laboratories的～4.5周龄的雌性MeCP2(MeCP1_HET，HET)小鼠和野生型(MeCP2_WT，WT)同窝小鼠被以两个群组接收。为它们分配唯一的识别号，并且分组圈养在opti-MICE笼(Animal Care Systems,CO)中。在开始之前以及整个研究中，对所有动物进行检查和称重以确保足够的健康和适宜性，并且将与操作相关的非特异性应激最小化。在研究过程期间，保持12/12亮/暗周期。将室温保持在20℃和23℃之间，相对湿度保持在约50％。对于研究的持续期间，随时供应食物和水。测试在动物的光周期阶段期间进行。

方法：

治疗组：

·WT小鼠—媒介物(皮下，每周一次，盐水)，n＝24(群组1，n＝20；群组2，n＝4)

·HET MeCP2小鼠—媒介物(皮下，每周一次，盐水)，n＝24(群组1，n＝20；群组2，n＝4)

·HET MeCP2小鼠—普利多匹定(3mg/kg；口服每天两次)，n＝20(群组2)

·HET MeCP2小鼠—普利多匹定(30mg/kg；口服每天两次)，n＝20(群组1)

体重：

·每周两次评估体重。

行为测试：

(1)步态分析使用系统

系统是利用计算机视觉检测神经障碍、疼痛&神经病的啮齿动物模型中的步态几何学和步态动力学的变化的平台。该平台由于以下原因对于步态测试是独特的：

·它是完全自动化的，并且因此消除了任何偏见或主观性

·该系统捕捉步态几何学和步态动力学(站姿、摇摆、推进(propulsion)等)两者。

将小鼠放入NeuroCube中以便于5min的测试。对所收集的定义疾病表型的特征中最主要的特征(症状描述符)鉴定并评级。使用复杂的生物信息学算法计算WT小鼠和BIRD小鼠之间的区分概率，并且检测测试化合物逆转疾病表型的能力。计算突变体和野生型之间的区分，以及用测试化合物治疗的HET小鼠的疾病特征的恢复。

(2)抱握

抱握用于评估四肢肌肉的肌肉强度。通过尾巴握持小鼠，并且轻轻地抬起直到前爪从计数器(counter)表面上刚刚抬起。实验者观察腿，并确定四肢的抱握或展开。在测试后，将动物放回到测试笼或圈养笼中。确定并报告后肢抱握的百分比。

(3)旋转杆

将小鼠带到实验室，并放在旋转杆设备上。杆以恒定或变化且加速度为4rpm的速度旋转。一旦小鼠失去其平衡并跌落到下方的平台上，计时器自动停止。纸巾或尿布垫用来缓冲跌落。设备自动记录动物跌落所用的等待时间(以秒计)或每只小鼠的忍耐时间。每次测试时，将小鼠暴露于恒定速度的设备训练5min，并且在每次跌落后放回杆上。在至少1小时的休息时间段后，将动物放回旋转杆设备上以便测试。在测试阶段将所有动物放到杆上之后，将旋转杆设备置于增加的速度(0rpm-40rpm)超过5min，并且记录直到第一次跌落的时间。记录跌落速度和跌落等待时间。

(4)惊吓响应/前脉冲抑制(PPI)

声惊吓测量对外部听觉刺激的无条件反射响应。前脉冲抑制(PPI)由在展示弱听觉刺激或前脉冲后对听觉刺激的抑制的惊吓响应(幅度降低)组成，已经被用作用于评估感觉运动门控缺陷的工具，诸如精神分裂症中观察到的缺陷。这是一项任选的测试，其仅对没有表现出听源性惊厥的那些动物进行。

将小鼠置于PPI室(Med Associates)中，进行5min时间的白噪声(70dB)习惯化。在适应期后，测试阶段自动开始。该阶段以6次展示单独的惊吓刺激的习惯化区块(habituation block)开始，接着是6种不同类型的试验的10个PPI块。

试验类型为：零(无刺激)、惊吓(120dB)、惊吓加前脉冲(高于背景噪音4dB、8dB和12dB，即74dB、78dB或82dB)和单独的前脉冲(82dB)。在每个区块内随机展示试验类型。每项试验以50ms时间段的零开始，记录在此期间的基线移动。存在随后的20ms时间段，在该时间段内，前脉冲刺激被展示并且测量对前脉冲的响应。在另外的100ms后，持续40ms展示惊吓刺激，并且从惊吓开始后内记录响应，持续100ms。每毫秒对响应进行采样。试验间间隔是可变的，平均为15s(范围从10s至20s)。

在单独的惊吓试验中，测量了基本听觉惊吓，并且在前脉冲加惊吓试验中，确定了正常惊吓的抑制量并将其表示为基本惊吓响应(来自单独的惊吓试验)的百分比，排除第一习惯化区块的惊吓响应。

脑收集：

在所有行为测试完成后，在用普利多匹定给药后60分钟收集脑样品。小鼠经由颈椎脱位被安乐死并去头。从10只小鼠/治疗组中，收集全脑，称重，并且然后在干冰上冷冻。在分析脑源性神经营养因子(BDNF)之前，将样品储存在-80℃。

从剩余的10个脑中收集全脑，并且然后矢状切开。从左半球，解剖纹状体、PFC和海马并放入RNAlater中。从右半球，收集纹状体、PFC和海马，在干冰上快速冷冻，并且在运送到赞助商的指定实验室用于蛋白质分析之前储存在-80℃。

BDNF分析：

总RNA提取：

将组织(全脑)在750μL的QIAzol裂解试剂(目录#79306,Qiagen,Valencia,CA)中用TissueLyser(Qiagen,Valencia,CA)和5mm不锈钢珠(目录#69989,Qiagen,Valencia,CA)在25Hz均质2×1min。一旦组织破坏，允许样品在室温孵育5分钟。

对于RNA提取，遵循制造商关于用于RNA分离的RNeasy 96通用组织试剂盒(目录#74881,Qiagen,Valencia,CA)的方案。简言之，加入150μL的氯仿(目录#C2432,Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)，并且将样品剧烈震荡15秒，接着在室温孵育3分钟。通过在6,000xg(Beckman Coulter Avanti J-30I)、4℃离心持续15分钟，将水相与有机相分离。然后将水相转移至新的96孔区块(block)中，并且用等体积的70％乙醇沉淀总RNA。将内容物转移至RNeasy 96孔板，然后在室温以6,000-xg(Beckman Coulter Avanti J-30I)离心4分钟。结合至柱膜的总RNA用不含RNA酶的DNA酶集(目录#79254,Qiagen,Valencia,CA)处理30分钟，接着是用RW1和RPE缓冲液(RNeasy 96通用组织试剂盒提供的)的3个洗涤步骤。RNA用不含RNA酶的水洗脱。

总RNA定量和逆转录：

使用NanoDrop 8000(Thermo Scientific)对样品进行定量。用3.2μg随机六聚体(目录#11034731001,Roche Applied Science,Indianapolis,IN)、1mM的每一种dNTP(目录#11814362001,Roche Applied Science,Indianapolis,IN)、20U保护RNA酶抑制剂(目录#03335402001,Roche Applied Science,Indianapolis,IN)、1X Transcriptor逆转录反应缓冲液和10U Transcriptor逆转录酶(目录#03531287001,Roche Applied Science,Indianapolis,IN)在20μL总体积中将一微克的总RNA逆转录成cDNA。

对每个RNA样品进行多达三次独立的RT反应。允许反应在室温进行10分钟，55℃持续30分钟，并且然后在GeneAmp PCR系统9700热循环仪(Applied Biosystems,FosterCity,CA)中在85℃灭活5分钟。cDNA样品用不含RNA酶的水稀释10倍用于qPCR分析。

定量PCR(qPCR)：

对于利用通用探针文库探针的所有反应，将5μl被稀释的cDNA用12.5μL 2x快速启动通用探针主Rox(FastStart Universal Probe Master Rox)(目录#04914058001,RocheApplied Science,Indianapolis,IN)、0.5μL通用探针文库探针(Roche Applied Science,Indianapolis,IN)、200nM的基因特异性引物-HPLC纯化的(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)在25μL反应体积中扩增。反应在ABI 7900HT序列检测系统(Applied Biosystems,FosterCity,CA)上运行。qCPR条件是95℃持续10分钟以用于激活快速启动Taq DNA聚合酶，接着是95℃持续15秒和60℃持续1分钟的40次循环。对于用于qPCR的引物和通用探针文库，请参考下表1。

表1：qPCR和引物/探针信息

qPCR数据分析：

将从WT媒介物治疗的动物的合并样品制备的全脑cDNA用作校准物(校准物与样品cDNA相同地稀释)，以将板与板之间的差异归一化。本研究中使用的qPCR测定的PCR效率参见上表1。

每个cDNA样品(1:10稀释)以一式三份测定，并且对Ct值取平均值。将大于平均值0.5标准偏差的值丢弃。

PCR产物(相对于校准物)的相对量如下计算：

靶基因的相对量

＝(PCR效率靶)^{(Ct校准物-Ct样品)}

管家基因1的相对量

＝(PCR效率管家1)^{(Ct校准物-Ct样品)}

管家基因2的相对量

＝(PCR效率管家2)^{(Ct校准物-Ct样品)}

管家基因3的相对量

＝(PCR效率管家3)^{(Ct校准物-Ct样品)}

三种管家基因的几何平均值如下计算：

几何平均值

＝(管家基因1的相对量*管家基因2的相对量*管家基因3的相对量)^(1/3)

靶基因的相对水平如下计算：

靶基因的相对量÷管家基因的几何平均值

然后将靶基因的相对水平对WT媒介物组归一化。

统计分析：

来自标准测试的数据按照基因型(t-检验)并按照治疗(ANOVA)进行分析，接着在适当的情况下进行事后比较。对于一些量度(即体重和PPI)，进行重复测量ANOVA。对于抱握数据，进行N-1两比例检验(two-proportional test)。如果p<0.05，则认为效果是显著的。所有数据表示为平均值和平均值的标准误差(s.e.m)。认为与平均值偏离±2个标准偏差的值是异常值。

来自NeuroCube的数据分析：

NeuroCube的输出是许多行为特征的集合，提交这些行为特征以便用生物信息学中使用的机器学习技术进行分析。这些特征中的许多是相关联的(例如饲养计数和印证的饲养计数)。因此，PGI形成了原始特征的统计学上独立的组合(进一步被称为去相关特征)，这些组合在两组之间更有效地区分。

每个去相关特征从原始特征的整个聚类中提取信息，因此新的特征空间具有较低的维度。接下来，PGI应用一种专有的特征评级算法来对每个特征的区分力(区分两组例如对照和疾病的能力)评分。

评级是分析的重要部分，因为它根据每个特征的相关性来衡量每个特征的变化：如果针对特定表型测量的一些不相关特征中存在显著变化，则该特征的低评级将自动减少分析中这样的变化的影响，所以不需要依赖传统的“特征选择”方法和丢弃埋藏在较少提供信息的特征中的信息。评级算法可以应用于原始特征或新特征，以获得关于关键的对照-疾病差异的见解(参见图1)。

特征分析：疾病表型的定量评估

在新的特征空间中，“云”之间的重叠(高斯分布近似于小鼠在被评级的去相关特征空间中的组)用作两组之间的可区分性(“可区别性”)的定量量度(参见图2)。出于可视化目的，对每个云绘图，其半轴等于沿相应维度的一个标准偏差。

结果：

在图3-图6中，左边的黑色柱代表媒介物治疗的wt动物，浅灰色柱代表媒介物治疗的HET动物，较深灰色柱代表普利多匹定治疗的HET动物(3mg/kg)，并且右边的最深灰色的柱代表普利多匹定治疗的HET动物(30mg/kg)。

行为测试：

(1)抱握

普利多匹定对8周和12周时的抱握的影响在图3中示出。与WT小鼠相比，媒介物治疗的HET小鼠示出了显著更多的抱握。普利多匹定(每天两次(BID)3mg/kg)对该量度没有显著影响。然而，8周时普利多匹定(每天两次30mg/kg)倾向于使该行为正常化(p<0.06)，但12周时却没有观察到这种效果。(8周时，代表媒介物治疗的wt动物和普利多匹定(30mg/kg)治疗的动物的柱消失。12周时，代表媒介物治疗的wt动物的柱消失)。

(2)旋转杆

测试化合物对从旋转杆跌落的等待时间和跌落时速度的影响分别在图4和图5中示出。与WT小鼠相比，MeCP2_HET小鼠更快地跌落，并且在更慢旋转速度跌落。治疗对这些量度中的任一种不存在影响。

(3)惊吓响应/PPI

普利多匹定对惊吓响应的影响在图6中示出。与媒介物治疗的WT小鼠相比，媒介物治疗的HET小鼠惊吓更少。普利多匹定(每天两次30mg/kg)对该量度没有显著影响。然而，在两个周龄，用普利多匹定(每天两次3mg/kg)治疗的HET小鼠示出了与媒介物治疗的HET小鼠相比增加的惊吓响应。在前脉冲抑制响应中没有观察到基因型或治疗效果，但是该响应在历史上是可变的，并且不被用作该测试的主要量度，但在测试过程中被收集。

(4)体重

治疗期间所有小鼠体重的变化百分比在图7中示出。重复测量的ANOVA发现了显著的基因型效应和基因型x时间相互作用。从研究的第二周直到研究完成，HET小鼠的BW增加百分比与WT小鼠相比更高。

在HET小鼠中，重复测量的ANOVA发现了显著的治疗效果。与媒介物相比，用普利多匹定(每天两次3mg/kg和每天两次30mg/kg)治疗的两组从仍持续的治疗后1.5周开始示出极小的体重增加。在图中，浅灰色圆圈代表媒介物治疗的野生型小鼠；浅灰色方形代表媒介物治疗的MeCP2HET小鼠，深灰色菱形代表普利多匹定治疗的MeCP2HET小鼠(3mg/kg)，并且深灰色圆圈代表普利多匹定治疗的MeCP2HET小鼠(30mg/kg)。

(5)

在8周龄和12周龄，WT小鼠和HET小鼠之间的区分概率分别为90％和94％。在8周龄，在WT和HET之间区分的一些主要步态特征包括WT小鼠与HET小鼠相比更长的步幅和步长、更窄的基宽和更小的爪强度。在12周龄，WT小鼠还示出了与HET小鼠相比更长的步幅长度、更长的步幅持续时间和更长的摇摆持续时间、更大的爪面积和更小的爪强度。8周时普利多匹定对步态表现的影响在图8中示出。12周时普利多匹定对步态表现的影响在图9中示出。8周和12周时普利多匹定(30mg/kg)示出了显著的总体步态特征恢复(分别为45％和55％)。

进一步的分析示出了几个步态领域的显著差异，如下表2所示。MeCP2_HET小鼠在所有步态特征方面(除了8周时的节律性)与全体WT对照小鼠显著不同。第8周的数据表明，用普利多匹定(每天两次3mg/kg和每天两次30mg/kg)治疗的MeCP2_HET小鼠在两个周龄都示出了对身体运动的功效。在12周时间点，在普利多匹定(每天两次30mg/kg)的情况下也观察到对单独的步态的显著影响。

表2：普利多匹定对8周和12周时的步态的影响。

8周

12周

BDNF分析

普利多匹定对WT小鼠和HET小鼠的脑样品中的相对BDNF表达的影响在图10-图14中示出。

全脑管家基因mRNA表达水平在被检查的不同动物组治疗之间没有变化(参见图10)。

与MeCP2_WT(媒介物)相比，MeCP2_HET(媒介物)治疗组中的BDNF I mRNA表达显著降低。与MeCP2_HET媒介物治疗组相比，在MeCP2_HET治疗组中没有观察到显著变化(参见图11)。

与MeCP2_WT(媒介物)相比，MeCP2_HET(媒介物)治疗组中的BDNF IV mRNA表达显著降低。普利多匹定治疗(3mg/kg或30mg/kg)将MeCP2_HET小鼠中下调的BDNF IV mRNA拯救至接近MeCP2_WT水平(参见图12)。

与MeCP2_WT(媒介物)相比，MeCP2_HET(媒介物)治疗组中的BDNF VI mRNA表达显著降低。在MeCP2_HET治疗组中没有观察到与MeCP2_HET媒介物治疗组相比的显著变化(参见图13)。

与MeCP2_WT(媒介物)相比，MeCP2_HET(媒介物)治疗组中的BDNF IX mRNA表达显著降低。普利多匹定治疗(3mg/kg或30mg/kg)将MeCP2_HET小鼠中下调的BDNF IX mRNA拯救至接近MeCP2_WT水平(参见图14)。

结论

本研究评价了长期皮下施用普利多匹定对MeCP2_HET小鼠的步态、抱握、旋转杆和惊吓/PPI的影响。

普利多匹定(每天两次3mg/kg)在步态量度方面与媒介物治疗的突变体显著不同。此外，在两个测试时间点，用普利多匹定(每天两次3mg/kg)治疗的HET小鼠示出了与媒介物治疗的HET小鼠相比增加的惊吓响应。用普利多匹定(每天两次30mg/kg)治疗的MeCP2_HET小鼠在8周龄时示出了显著的步态特征恢复，并且倾向于正常化抱握。

我们先前的数据示出，编码BDNF I、IV、VI、IX同种型的转录物在4月龄的杂合MeCP2敲除小鼠的脑中被下调，这些转录物由选择性剪接产生但产生相同的蛋白质。

通过比较媒介物治疗的MeCP2_HET小鼠和WT小鼠的脑中这些转录物的相对mRNA表达水平，再现了先前的观察结果。

没有一种治疗对MeCP2小鼠中的BDNF I和BDNF VI mRNA表达水平具有显著影响。用两种剂量的普利多匹定(每天两次3mg/kg和每天两次30mg/kg)治疗完全拯救了BDNF IV和BDNF IX的下调的mRNA水平。普利多匹定对BDNF mRNA表达的积极影响与行为范式中观察到的改善是一致的。

实施例2：普利多匹定治疗的MeCP2小鼠的RNA分析

～4.5周龄的雌性MeCP2(HET，杂合)小鼠和野生型同窝小鼠用普利多匹定或媒介物治疗。将普利多匹定(3mg/kg和30mg/kg)以10mg/kg的剂量体积每天两次(给药间隔6小时)口服施用。存在四个治疗组：1.WT小鼠-媒介物，2.HET MeCP2小鼠-媒介物，3.HET MeCP2小鼠——普利多匹定(3mg/kg；PO每天两次)，4.HET MeCP2小鼠——普利多匹定(30mg/kg；PO每天两次)。

从普利多匹定治疗的小鼠和媒介物治疗的小鼠的纹状体、海马和皮层组织分离RNA。接下来，使用Illumina TruSeq Stranded mRNA试剂盒与HiSeq 2x50nt配对末端测序进行RNAaseq。下载fastq文件，并且使用带有GRCm38主组件注释和标准选项的Star比对器来比对fastq文件。基因通过GeneCode vM7上的特征计数(FeatureCounts)来计数。对于feature_type和group_by，使用“基因”并且使用“逆向”以用于链型(strandedness)。进行读段计数到单个矩阵的合并和所有其他下游计算处理并且将用R统计编程语言完成。示出样品的第一和第二主成分的图用来选择异常值。将平均每个基因具有少于10个读段的转录物过滤掉。来自edgeR R包的CalcNormFactors用于经由TMM方法来使计数归一化。limma R-包用来转换基因水平的定量数据并建模。limma::voom用来将计数数据转换为log2-每百万计数，并且计算平均值-方差关系。

对于仍需要完成的差异表达分析，limma::lmFit用于基于实验设计矩阵拟合每个基因的线性模型，并且具有添加的条件(term)来校正批次信息。为了对比显著性，limma::eBayes用于计算经验性Bayes调节的t统计。使用limma::toptable计算多个假设调整的p值，limma::toptable实现了Benjamini-Hochberg程序来控制FDR。未治疗的MeCP2HET和未治疗的WT样品、被治疗的MeCP2HET和未治疗的MeCP2HET样品之间的差异表达对比针对所有三种组织独立地计算。为了测试治疗基因表达特征是否针对相关生物特征进行富集，使用基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis，GSEA)。对于给定对比，基因通过limma生成的t统计进行评级。Enrichr用于途径分析。

预期结果和潜在用途

设计该实验以评估普利多匹定是否逆转了在MeCP2HET小鼠中观察到的异常转录。这将通过获取在疾病背景下受干扰的基因列表，并测试普利多匹定是否将这些基因的表达恢复到其野生型水平来完成。此外，寻找在Rett疾病小鼠模型的背景下普利多匹定对基因表达有什么影响的问题的答案。途径分析可能产生的相关的途径、转录因子或激酶富集物指出普利多匹定在RTT中的潜在作用机制。BDNF途径和其他相关途径将被特别地查询。在Rett综合征的背景下普利多匹定基因表达的特征被用来帮助开发药效学生物标志物(PD生物标志物)。在临床试验期间，在更容易接近的组织中可以观察到在纹状体、海马或皮层中观察到的治疗相关的普利多匹定诱导的基因表达变化。

进行这些实验以印证普利多匹定在治疗罹患RTT的受试者中的用途。

实施例3：普利多匹定治疗罹患RTT的患者的功效的评估

将普利多匹定周期性地(例如，每天一次或每天两次)静脉内或口服施用至罹患RTT的患者对治疗该患者是有效的。

施用普利多匹定有效地延迟了RTT患者的症状的发作。

施用普利多匹定有效地防止或延迟了RTT患者的至少一种症状的恶化，或改善了RTT患者的至少一种症状。

施用普利多匹定有效地防止或延迟了RTT患者的运动技能的恶化，或改善了RTT患者的运动技能。施用普利多匹定有效地防止了RTT患者的已获得的运动技能的部分丧失或完全丧失。

施用普利多匹定有效地防止或延迟了RTT患者的步态的恶化，或改善了RTT患者的步态。

施用普利多匹定有效地防止、延迟或改善了RTT患者的共济失调、失用症、肌无力、痉挛和/或僵硬。施用普利多匹定有效地防止、延迟或改善RTT患者的受损的步态起始。

施用普利多匹定有效地防止、延迟或改善RTT患者的异常肌肉张力、外周血管舒缩障碍和/或脊柱侧凸。

施用普利多匹定有效地防止或延迟了RTT患者的有目的的手部技能的恶化，或改善了RTT患者的有目的的手部技能。施用普利多匹定有效地防止、延迟或改善了异常手部运动，包括但不限于绞扭、紧握、击掌、洗手、敲击、摩擦和重复地将手放到口中。施用普利多匹定有效地防止RTT患者的已获得的有目的的手部技能的部分丧失或完全丧失。

施用普利多匹定有效地防止或延迟了RTT患者的沟通技能的恶化，或改善了RTT患者的沟通技能，包括但不限于言语和正常的眼神接触。施用普利多匹定有效地防止了RTT患者的已获得的沟通技能的部分丧失或完全丧失。

施用普利多匹定有效地防止、延迟或改善了生长迟缓、癫痫、心脏异常、呼吸不规律、受损的睡眠模式、清醒时的磨牙症、降低的对疼痛的响应、营养不良性冷蓝脚、增加的易怒、降低的警觉性、降低的注意广度、不适当的大笑和/或不适当的尖叫。

参考文献：

Amaral.M.D.，et al(2007)“TRPC channels as novel effectors of BDNFsignaling：Potential implications for Rett syndrome”.Pharmacol Ther，113(2)：394-409.

CSID：25948790，www.chemspider.com/Chemical-Structure.25948790.html(accessed 23：27.Jul 15，2016).

CSID：7971505.www.chemspider.com/Chemical-Structure.7971505html(accessed 23：33.Jul 15，2016).

Geva.M.et al.Pridopidine activates neuroprotective pathways impairedin Huntington Disease.Human Molecular Genetics.2016，25(18)：3975-3987

Guy J，Hendrich B，Holmes M，Martin JE，Bird A.(2001)A mouse MeCP2-nullmutation causes neurological symptoms that mimic Rett syndrome.Nat Genet.27(3)：322-326.

lsaias，I.U.，et al.(2014).“Gait Initiation in Children with RettSyndrome.”PLoS One，9(4)：e92736.

Ponten H，J，Lagerkvist S，Martin P，Pettersson F，Sonesson C，Waters S，Waters N.In vivo pharmacology of the dopaminergic stabilizerpridopidine.(2010)Eur J Pharmacol.644(1-3)：88-95.

Pozzo-Miller，L.，Pati S.，&Percy，A.K.(2015).“Rett Syndrome：Reaching forClinical Trials.”Neurotherapeutics，12(3)：631-40.

U.S.Publication No.2013/0267552 A1(Teva Pharmaceuticals InternationalGMBH)，published October 10，2013.

U.S.Publication No.2014/0378508(Teva Pharmaceuticals InternationalGMBH)，published December 25，2014.

U.S.Publication No.2015/0202302(Teva Pharmaceuticals InternationalGMBH)，published July 23，2015.

U.S.Patent No.7,923,459(Teva Pharmaceuticals International GMBH)，issued April 12，2011.

U.S.Patent No.6,903,120(Teva Pharmaceuticals International GMBH)，issued June 7，2015.

Weng，S.M.et al.(2011).“Rett Syndrome：From Bed to Bench.”Pediatricsand Neonatology，52：309-316.

序列表

<110> 梯瓦制药国际有限责任公司

<120> 普利多匹定用于治疗RETT综合征的用途

<130> 88973-A-PCT/JPW/GJG/JTC

<150> 62/395,854

<151> 2016-09-16

<160> 14

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 5'引物序列

<400> 1

ggcacaatgc aggaaagg 18

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 3'引物序列

<400> 2

tcagcaggca catagatagc c 21

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 5'引物序列

<400> 3

ttgtggccaa gcaggtact 19

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 3'引物序列

<400> 4

gttgatgcct tcacagcgta 20

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 5'引物序列

<400> 5

caatgtgtcc gtcgtggatc t 21

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 3'引物序列

<400> 6

gtcctcagtg tagcccaaga tg 22

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 5'引物序列

<400> 7

agtctccagg acagcaaagc 20

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 3'引物序列

<400> 8

tgcaaccgaa gtatgaaata acc 23

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 5'引物序列

<400> 9

gctgccttga tgtttacttt ga 22

<210> 10

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 3'引物序列

<400> 10

aaggatggtc atcactcttc tca 23

<210> 11

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 5'引物序列

<400> 11

ccgagagctt tgtgtggac 19

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 3'引物序列

<400> 12

tcatgcaacc gaagtatgaa a 21

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 5'引物序列

<400> 13

gcctttggag cctcctctac 20

<210> 14

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 3'引物序列

<400> 14

gcggcatcca ggtaatttt 19

Claims

1.一种用于治疗罹患Rett综合征(RTT)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的普利多匹定，以便从而治疗所述受试者。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述普利多匹定是普利多匹定盐酸盐。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述普利多匹定通过口服、经鼻、吸入、通过皮下注射、或通过静脉内、腹膜内、肌内、鼻内、含服、阴道、直肠、眼内、鞘内、局部或皮内途径施用。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述普利多匹定被口服施用。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定以气雾剂、可吸入粉末、注射剂、液体、凝胶、固体、胶囊或片剂的形式被施用。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定被周期性地施用。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述普利多匹定施用的频率少于每天一次。

8.如权利要求6所述的方法，其中所述普利多匹定每天一次或每天两次被施用。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所施用的普利多匹定的量为10mg/天-315mg/天。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所施用的普利多匹定的量为45mg/天-90mg/天。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所施用的普利多匹定的量为45mg/天-180mg/天。

12.如权利要求9所述的方法，其中所施用的普利多匹定的量为20mg/天、22.5mg/天、45mg/天、67.5mg/天、90mg/天、100mg/天、112.5mg/天、125mg/天、135mg/天、150mg/天、180mg/天、200mg/天、225mg/天、250mg/天或315mg/天。

13.如权利要求12所述的方法，其中所施用的普利多匹定的量为45mg/天或90mg/天或180mg/天。

14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中普利多匹定的所述量以每天一个剂量或每天两个剂量被施用。

15.如权利要求14所述的方法，其中以一个剂量施用的普利多匹定的量为10mg、22.5mg、45mg、67.5mg、90mg、100mg、112.5mg、125mg、135mg、150mg、180mg、200mg、250mg或315mg。

16.如权利要求15所述的方法，其中以一个剂量施用的普利多匹定的量为10mg-45mg。

17.如权利要求16所述的方法，其中普利多匹定的所述量以每天两个剂量，每个剂量10mg-45mg的量被施用。

18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定在所述受试者出生后1天、1周、1个月、3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、3年、5年、10年、15年、20年、25年或30年内被首次施用。

19.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定在所述受试者出生后30年或更长时间内被首次施用。

20.如权利要求6-19中任一项所述的方法，其中普利多匹定的周期性施用持续至少3天、至少30天、至少42天、至少8周、至少12周、至少24周、至少6个月、至少1年、至少2年、至少5年、至少10年、至少15年、至少20年、至少25年、或30年或更长。

21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定通过延迟所述受试者中至少一种症状的发作来治疗所述受试者。

22.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定通过防止所述受试者中的至少一种症状的恶化来治疗所述受试者。

23.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定通过延迟所述受试者中的至少一种症状的恶化来治疗所述受试者。

24.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定通过改善所述受试者中的至少一种症状来治疗所述受试者。

25.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是获得运动技能的延迟。

26.如权利要求25所述的方法，其中所述症状是延迟的就坐、爬行和/或行走。

27.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是已获得的运动技能的部分丧失或完全丧失。

28.如权利要求27所述的方法，其中所述症状是就坐、爬行和/或行走的能力降低。

29.如权利要求25或27所述的方法，其中所述运动技能是运动协调技能。

30.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是异常步态、共济失调、运动不能症、肌无力、痉挛、僵硬、异常肌肉张力、外周血管舒缩障碍、脊柱侧凸或变差的步态起始。

31.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是获得有目的的手部技能的延迟或已获得的目的性手部技能的部分丧失或完全丧失。

32.如权利要求21-24中任一项所述的方法，所述症状是异常手部运动。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述异常手部运动是绞扭、紧握、击掌、洗手、敲击、摩擦和/或重复地将手放到口中。

34.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是获得沟通技能的延迟或已获得的沟通技能的部分丧失或完全丧失。

35.如权利要求34所述的方法，其中所述沟通技能是语言技能或眼神接触。

36.如权利要求35所述的方法，其中所述语言技能是口语技能。

37.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是异常眼部运动。

38.如权利要求37所述的方法，其中所述异常眼部运动是长时间凝视、过度眨眼、对眼和/或一次闭合一只眼睛。

39.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是呼吸不规律。

40.如权利要求39所述的方法，其中所述呼吸不规律在所述受试者清醒时发生。

41.如权利要求39或40所述的方法，其中所述呼吸不规律是呼吸暂停或换气过度。

42.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是当所述受试者清醒时的磨牙症。

43.如权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述症状是增加的易怒、降低的警觉性、降低的注意广度、不适当的大笑和/或尖叫、癫痫、心脏异常、对疼痛的响应降低、生长迟缓、受损的睡眠模式和/或营养不良性冷蓝脚。

44.如权利要求43所述的方法，其中所述心脏异常是心动过缓或心动过速。

45.如权利要求43所述的方法，其中所述生长迟缓是小头畸型。

46.如权利要求24-45中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定使所述症状改善至少20％、至少30％、至少50％、至少80％或100％。

47.如权利要求1-46中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定通过改善或保持所述受试者进行日常生活活动、进行家务、管理财务和/或进行工作的能力来治疗所述受试者。

48.如权利要求1-47中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定通过降低所述受试者所需的护理水平来治疗所述受试者。

49.如权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述普利多匹定有效地增加或保持所述受试者中的血清BDNF水平和或增加所述受试者中的脑BDNF水平。

50.如权利要求1-49中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类患者。

51.如权利要求50所述的方法，其中所述人类患者是女性。

52.如权利要求1-51中任一项所述的方法，其中所述受试者在甲基CpG结合蛋白2(MeCP2)基因、细胞周期蛋白依赖性激酶样5(CDKL5)基因或叉头盒蛋白G1(FOXG1)基因中的至少一种中具有突变。

53.一种药物组合物，所述药物组合物包含一定量的普利多匹定，用于在治疗罹患RTT的受试者中使用。

54.一种药物组合物，所述药物组合物呈单位剂型，用于治疗罹患RTT的受试者。

55.如权利要求53或54所述的药物组合物，其中普利多匹定的所述量为10mg/天-315mg/天。

56.如权利要求55所述的药物组合物，其中普利多匹定的所述量为20mg/天、22.5mg/天、45mg/天、67.5mg/天、90mg/天、100mg/天、112.5mg/天、125mg/天、135mg/天、150mg/天、180mg/天、200mg/天、225mg/天、250mg/天或315mg/天。

57.如权利要求56所述的药物组合物，其中普利多匹定的所述量为45mg/天-90mg/天或45mg/天-180mg/天、或90mg或180mg。

58.一定量的普利多匹定在制备用于治疗罹患RTT的受试者的药物中的用途。

59.一定量的普利多匹定用于治疗罹患RTT的受试者的用途。

60.一种包装，所述包装包括：

a)药物组合物，所述药物组合物包含一定量的普利多匹定和药学上可接受的载体；和

b)用于使用所述药物组合物治疗罹患RTT的受试者的说明书。

61.一种治疗包装，用于向罹患RTT的受试者分配或用于在向罹患RTT的受试者的分配中使用，所述治疗包装包括：

a)一个或更多个单位剂量，每个这样的单位剂量包括有效治疗罹患RTT的所述受试者的量的普利多匹定，和

b)用于此的成品药物容器，所述容器包含一个或更多个所述单位剂量，所述容器还包含或包括指导使用所述包装治疗所述受试者的标签。

62.一种增加罹患RTT的受试者中的血清BDNF水平或脑BDNF水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的普利多匹定，以便从而增加所述受试者中的血清BDNF水平脑BDNF水平。