JP2016529224A - レット症候群およびその処置 - Google Patents

Abstract

本発明は、レット症候群および他のＭＥＣＰ２関連の障害の処置のための、例えば有用な治療モダリティの同定および／または特徴付けのための、および／または多かれ少なかれ特定の療法に応答する可能性がある患者を同定するためのレット症候群患者の層別化のための新しい戦略を提供する。一部の実施形態では、本発明は、代謝経路、詳細には脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路、最も詳細には脳の脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路のある特定の構成要素を、潜在的レット症候群処置剤の同定および／または特徴付けに有用な標的として規定する。

Description

レット症候群（ＲＴＴ）は、運動および神経学的機能不全の進行性の発達によって特徴付けられるＸ連鎖の障害である。ＲＴＴに侵される少女は、出生後正常なタイムラインで会話および動作技術を取得するが、６カ月齢から２歳の間に症状を起こす。疾患の神経学的徴候は、以下を含む：会話および運動技術の喪失、常同性の手の動作、歩行困難、散発的な速い呼吸および無呼吸、ならびに発作。ＲＴＴは有病率が高く（１０，０００例の出産中に１例）、女性において知的および発達障害（ＩＤＤ）の最も一般的な原因の１つである。寿命および疾患重症度は、大いに異なる。

ＲＴＴ患者の９５％超は、ＭＥＣＰ２遺伝子の突然変異を有する。機械学的に、ＭＥＣＰ２はメチル化ＤＮＡに結合して、抑制または活性化を通して遺伝子転写を調節する。ＭＥＣＰ２が遺伝子転写を抑制する場合、それはＩ型ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）を含有するクロマチンリモデリング複合体と結びつく（BienvenuおよびChelly Nat Rev Genet７巻：４１５〜４２６頁、２００６年）。したがって、ＭＥＣＰ２の排除は、通常は抑制されるであろう遺伝子の上方調節をもたらすことができる。注目すべきことに、少なくとも一部にはヘテロ接合女性でのＸ染色体の不活性化の好都合のパターンにより、ＭＥＣＰ２突然変異の程度は疾患重症度と必ずしも相関しない。

Ｍｅｃｐ２突然変異を有し、ＲＴＴの症状のほとんどを再現するマウスモデルが入手できる。Ｍｅｃｐ２／Ｙ雄突然変異体マウスは、出産および離乳時には正常であるが、４週齢という早い時期に機能低下、四肢硬直、振戦、運動障害および異常な呼吸を含む症状を起こす。そのような症状は次第に悪化し、６〜１６週齢で死につながる。成熟期への移行の遅延、シナプス前タンパク質の発現の変化および樹状突起棘密度の低減を含む顕著な神経細胞欠陥がＭｅｃｐ２／Ｙヌルマウスで観察される。
注目すべきことに、症状の発症後の突然変異体雌雄マウスでのＭｅｃｐ２の再発現は神経学的欠陥を救い、マウスは正常な動作を回復して長生きする（Guyら、Science３１５巻：１１４３〜１１４７頁、２００７年）。これらの知見は、ＲＴＴが胚形成の間のニューロンの恒久的な異常発達によって引き起こされず、代わりに、出生後のニューロンの維持のためにＭＥＣＰ２が必要とされることを示す。したがって、症状の発症後に遺伝的または薬理学的手段によってＲＴＴを改善することができるか、または覆すことさえでき、患者および家族に大きな希望を提供する。残念なことに、脳機能はＭＥＣＰ２のレベルにきわめて感受性であるので、ＭＥＣＰ２を使用する遺伝子療法は困難である。ＭＥＣＰ２の増加は、死にもつながる進行性の神経障害を引き起こす（BienvenuおよびChelly Nat Rev Genet７巻：４１５〜４２６頁、２００６年）。レット症候群のための新しい処置の同定および開発への切迫した必要性がまだある。

BienvenuおよびChelly Nat Rev Genet７巻：４１５〜４２６頁、２００６年 Guyら、Science３１５巻：１１４３〜１１４７頁、２００７年

本発明は、レット症候群の処置のための、例えば有用な治療モダリティの同定および／もしくは特徴付けのための、ならびに／または多かれ少なかれ特定の療法に応答する可能性がある患者を同定するためのレット症候群患者の層別化のための新しい戦略を提供する。

一部の実施形態では、本発明は、代謝経路、詳細には脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路、最も詳細には脳の脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路のある特定の構成要素を、潜在的レット症候群処置剤の同定および／または特徴付けに有用な標的として規定する。とりわけ、本発明は、１つまたは複数のそのような代謝経路構成要素を含む系と接触させ、１つまたは複数の指標（例えば、関連する経路（複数可）の構成要素、生成物および／またはマーカー）の存在、レベル、活性および／または形態に及ぼすそれらの影響を評価することによって、そのような薬剤を同定および／または特徴付けるための系を提供する。一部の実施形態では、提供される系は、完全および／または活性な代謝経路（例えば、脂質またはコレステロール生合成経路）を含む。一部の実施形態では、系は、スクアレンモノオキシゲナーゼを含むかまたは生成する。一部の実施形態では、系は、２４Ｓ−ヒドロキシコレステロール（２４Ｓ−ＯＨＣ）を含むかまたは生成する。一部の実施形態では、例えば代謝経路活性の指標として、２４Ｃ−ＯＨＣを利用することができる。一部の実施形態では、２４Ｃ−ＯＨＣは、対象からの試料（例えば、血液試料などの組織試料）で評価することができる（例えば、その存在、レベル、活性および／または形を判定することによって）。

一部の実施形態では、提供される同定および／または特徴付けの系は、１つまたは複数の細胞、組織および／または生物体を含む。一部の実施形態では、そのような系は、マウスの細胞、組織および／または生物体であるかまたはそれらを含む。一部の実施形態では、そのような系は、ＭＥＣＰ２の発現および／または活性の低減を示す（例えば、遺伝子突然変異および／または化学的改変の結果）、１つまたは複数のマウスの細胞、組織および／または生物体であるかまたはそれらを含む。

一部の実施形態では、本発明は、レット症候群の処置のための方法および／または組成物を提供する。一部の実施形態では、提供される方法および／または組成物は、ＭＥＣＰ２機能または活性をモジュレートする１つまたは複数の薬剤（すなわち、ＭＥＣＰ２モジュレーター）を含むかまたは利用する。一部の実施形態では、提供される方法および／または組成物は、脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路、詳細には脳の脂質および／またはコレステロール代謝経路をモジュレートする１つまたは複数の薬剤を含むかまたは利用する。

一部の実施形態では、本発明は、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に脳の脂質および／またはコレステロール代謝をモジュレートする少なくとも１つの薬剤またはモダリティを投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、少なくとも１つの薬剤またはモダリティは、以下から選択される：スタチン、ＬＸＲモジュレーター、グルコース代謝モジュレーター、ＳＲＥＢＰモジュレーター、ＰＰＡＲＧモジュレーターおよびその組合せ。

一部の特定の実施形態では、本発明は、レット症候群を処置する方法であって、レット症候群を患っているかまたは感受性の対象にスタチンを投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、レット症候群を処置する方法であって、レット症候群を患っているかまたは感受性の対象にグルコース代謝モジュレーターを投与するステップを含む方法を提供する。

一部の実施形態では、本発明は、薬剤またはモダリティ（例えば、スタチンまたはグルコース代謝モジュレーター）を少なくとも１日１回投与することによって、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態（例えば、レット症候群）を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、薬剤またはモダリティ（例えば、スタチンまたはグルコース代謝モジュレーター）は、少なくとも週１回投与される。一部の実施形態では、薬剤またはモダリティ（例えば、スタチンまたはグルコース代謝モジュレーター）は、少なくとも週２回投与される。一部の実施形態では、薬剤またはモダリティ（例えば、スタチンまたはグルコース代謝モジュレーター）は、皮下、腹腔内、静脈内または経口投与される。

一部の実施形態では、本発明に従って使用するためのスタチンは、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチンおよびフルバスタチンの少なくとも１つであるかまたはそれを含む。

一部の実施形態では、本発明に従って使用するためのＬＸＲモジュレーターは、オキシステロール、ＬＸＲアゴニスト、ＲＸＲアゴニストおよびその組合せの少なくとも１つであるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、ＬＸＲモジュレーターは、ヒポコラミド、Ｔ０９０１３１７、ＧＷ３９６５、ＳＲ９２３８、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２７−ヒドロキシコレステロール、コレステン酸、ベキサロテンおよびその組合せの少なくとも１つであるかまたはそれを含む。

一部の実施形態では、本発明に従って使用するためのグルコース代謝モジュレーターは、ビグアナイド薬、２，４−ジニトロフェノール−メチルエーテル（ＤＮＰ−ＭＥ）、２，４−ジニトロフェノール−エチルエーテル（ＤＮＰ−ＥＥ）、２，４−ジニトロフェノール−ビニルエーテル（ＤＮＰ−ＶＥ）およびその組合せの少なくとも１つであるかまたはそれを含む。

一部の実施形態では、本発明に従って使用するためのビグアニド薬は、メトホルミン、プログアニル、クロルプログアニルおよびその組合せの少なくとも１つであるかまたはそれを含む。

一部の実施形態では、本発明に従って使用するためのＳＲＥＢＰモジュレーターは、ファトスタチン、Ｎ−（４−（２−（２−プロピルピリジン−４−イル）チアゾール−４−イル）フェニル）メタンスルホンアミド（ＦＧＨ１００１９）、ＳＲＥＢＰ１、ＳＲＥＢＰ２およびその組合せの少なくとも１つであるかまたはそれを含む。

一部の実施形態では、本発明に従って使用するためのＰＰＡＲＧモジュレーターは、チアゾリジンジオンであるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、チアゾリジンジオンは、ロジグリタゾン、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ネトグリタゾン、リボグリタゾン、シグリタゾンおよびその組合せの少なくとも１つであるかまたはそれを含む。

一部の態様では、本発明は、レット症候群の処置のための有用な治療剤を同定および／または特徴付ける方法を提供する。一部の実施形態では、そのような方法は、脳の脂質および／またはコレステロール代謝の１つまたは複数の態様に及ぼす候補治療剤の効果（複数可）を判定するステップを含むことができる。

一部の実施形態では、本発明の実施に関連する脂質および／またはコレステロール代謝の態様は、コレステロール生合成であってもよいかまたはそれを含むことができる。一部の実施形態では、脂質および／またはコレステロール代謝の１つまたは複数の態様は、３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＣＲ）の阻害である。一部の実施形態では、脂質および／またはコレステロール代謝の１つまたは複数の態様は、スクアレンエポキシダーゼ（ＳＱＬＥ）としても知られるスクアレンモノオキシゲナーゼの阻害である。一部の実施形態では、脂質および／またはコレステロール代謝の１つまたは複数の態様は、２４Ｓ−ＯＨＣの生成である。

一部の実施形態では、脂質および／またはコレステロール代謝の１つまたは複数の態様に及ぼす薬剤の効果（複数可）は、行動試験、認知試験、運動機能試験、１つまたは複数の生理的パラメーターの試験およびその組合せの１つまたは複数により評価される。

一部の実施形態では、本発明に従って有用な行動試験は、以下から選択される：聴覚驚愕応答試験、驚愕応答試験の前パルス阻害、オープンフィールド活動試験、３チャンバー社会的交流試験、ホームケージ活動試験および／またはその組合せ。

一部の実施形態では、本発明に従って有用な運動機能試験は、以下から選択される：呼吸チャレンジ、ロータロッド試験、オープンフィールド歩行活動試験、ＤｉｇｉＧａｉｔ系（Ｍｏｕｓｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｓ）およびその組合せ。

一部の実施形態では、本発明に従って有用な１つまたは複数の生理的パラメーターの試験は、以下から選択される：二重Ｘ線吸収測定（ＤＥＸＡ）試験、メタコリンチャレンジによる全身プレチスモグラフィー呼吸試験、グルコース耐性試験、インスリン耐性試験、血清コレステロール試験、熱量測定試験およびその組合せ。

本発明の他の特徴、目的および利点は、以下の詳細な説明で明らかである。しかし、詳細な説明は、本発明の実施形態を示しているが、限定ではなく実例としてだけ与えられることを理解すべきである。本発明の範囲内の様々な変更および修正は、詳細な説明から当業者に明らかになる。

定義
本開示がより容易に理解されるように、特定の用語を下で定義する。以下の用語および他の用語の追加の定義または明確化は、明細書全体に対して示すことができる。

この出願では、「または」の使用は特に明記しない限り「および／または」を意味する。この出願で使用されるように、用語「含む」ならびにその用語の変形体、例えば「含んでいる」および「含む」は、記載のアイテム、要素またはステップが含まれ、他のものが含まれてもよい状況で使用される。この出願で使用されるように、用語「約」および「およそ」は、同等物として用いられる。関連技術分野の当業者が理解するように、この出願で使用される任意の数字は、「約」または「およそ」に先行されようがされまいが、特に明記しない限り任意の正常な変動（例えば、標準誤差または偏差）を包含するものとする。ある特定の実施形態では、用語「およそ」または「約」は、特に明記されない限り、またはさもなければ文脈から明白でない限り（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除き）、明記された参照値のいずれかの方向（大きいか小さい）への２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満に入る値の範囲を指す。

投与：本明細書で使用されるように、用語「投与」は、対象への組成物／薬剤の投与を指す。投与は、任意の適当な経路によることができる。例えば、一部の実施形態では、投与は、経気管支（気管支点滴注入を含む）、口内、腸内、皮膚間（interdermal）、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、クモ膜下、静脈内、心室内、粘膜、経鼻、経口、直腸、皮下、舌下、局所、気管（気管内点滴注入を含む）、経皮、膣、硝子体（vitreal）であってもよい。

動物：本明細書で使用するように、用語「動物」は、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態では、「動物」は発達の任意の段階にあるヒトを指す。一部の実施形態では、「動物」は発達の任意の段階にあるヒト以外の動物を指す。一部の実施形態では、ヒト以外の動物は、哺乳動物（例えば、齧歯動物、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類および／またはブタ）である。一部の実施形態では、動物には、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類および／またはワームが含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物および／またはクローンであってもよい。

抗体：本明細書で使用されるように、用語「抗体」は、特定の標的抗原への特異的結合を付与するのに十分である正規の免疫グロブリン配列エレメントを含むポリペプチドを指す。当技術分野で公知であるように、天然に生成されるインタクトな抗体は、互いに結びついて一般に「Ｙ形」構造と呼ばれるものになる、２つの同一の重鎖ポリペプチド（それぞれ約５０ｋＤ）および２つの同一の軽鎖ポリペプチド（それぞれ約２５ｋＤ）で構成されるおよそ１５０ｋＤの四量体作用因子である。各重鎖は、少なくとも４つのドメイン（各々約１１０アミノ酸長）で構成される−アミノ末端可変（ＶＨ）ドメイン（Ｙ構造の先端に位置する）、続いて３つの定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２およびカルボキシ末端ＣＨ３（Ｙのステムの基部に位置する）。「スイッチ」として知られる短い領域は、重鎖の可変および定常領域を接続する。「ヒンジ」は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを残りの抗体に接続する。このヒンジ領域中の２つのジスルフィド結合は、インタクトな抗体で２つの重鎖ポリペプチドをお互いに接続する。各軽鎖は２つのドメインで構成される−アミノ末端可変（ＶＬ）ドメイン、続いてカルボキシ末端定常ドメイン（ＣＬ）、これらは別の「スイッチ」によってお互いから分離される。インタクトな抗体四量体は、単一のジスルフィド結合によって重鎖および軽鎖がお互いに連結される２つの重鎖−軽鎖二量体で構成される；２つの他のジスルフィド結合は、二量体がお互いに接続されて四量体が形成されるように、重鎖ヒンジ領域をお互いに接続する。天然に生成される抗体は、一般的にＣＨ２ドメインでグリコシル化されもする。自然抗体中の各ドメインは、圧縮逆行性ベータバレルで互いに対して圧縮される２つのベータシート（例えば、３−、４−または５鎖のシート）から形成される「免疫グロブリンフォールド」によって特徴付けられる構造を有する。各可変ドメインは、「相補体決定領域」（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）として知られる３つの超可変ループおよび４つの若干不変の「フレームワーク」領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）を含有する。自然抗体が折り畳まれるとき、ＦＲ領域はそのドメインのために構造フレームワークを提供するベータシートを形成し、重鎖および軽鎖の両方からのＣＤＲループ領域は、それらがＹ構造の先端に位置する単一の超可変抗原結合部位を形成するように、三次元空間で一緒にされる。抗体ポリペプチド鎖の間のアミノ酸配列の比較で、２つの軽鎖（κおよびλ）クラス、いくつかの重鎖（例えば、μ、γ、α、ε、δ）クラスおよびある特定の重鎖サブクラス（α１、α２、γ１、γ２、γ３およびγ４）が規定された。抗体クラス（ＩｇＡ［ＩｇＡ１、ＩｇＡ２を含む］、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ［ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含む］、ＩｇＭ）は、利用される重鎖配列のクラスに基づいて規定される。本発明のために、ある特定の実施形態では、自然抗体で見出されるような十分な免疫グロブリンドメイン配列を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチドの複合体は、そのようなポリペプチドが天然に生成される（例えば、抗原に反応する生物体によって生成される）か、または組換え操作、化学的合成または他の人工の系もしくは方法論によって生成されるかどうかにかかわらず、「抗体」と呼ぶことおよび／または「抗体」として使用することができる。一部の実施形態では、抗体はモノクローナルである。一部の実施形態では、抗体はポリクローナルである。一部の実施形態では、抗体は、マウス、ウサギ、霊長類またはヒト抗体の特性を示す定常領域配列を有する。一部の実施形態では、当技術分野で公知のように、抗体配列エレメントは、ヒト化、霊長類化、キメラ化などされる。さらに、本明細書で使用されるように用語「抗体」は、代替提示で抗体の構造的および機能的特色を捕捉するための当技術分野で公知であるかまたは開発された構築物またはフォーマットのいずれかを包含し（特に明記されないかまたは文脈から明らかでない限り）、適当な実施形態ではそれを指すことができることが理解される。例えば、一部の実施形態では、この用語は二重または他の多重特異的（例えば、ザイボディなど）抗体、Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）、単鎖抗体、ラクダの抗体および／または抗体断片を指すことができる。一部の実施形態では、抗体は、天然に生成される場合は有するだろう共有結合性修飾（例えば、グリカンの付着）を欠いてもよい。一部の実施形態では、抗体は、共有結合性修飾（例えば、グリカン、ペイロード［例えば、検出可能な部分、治療薬部分、触媒部分など］または他のペンダント基［例えば、ポリエチレングリコールなど］の付着）を含有することができる。

抗体断片：本明細書で使用されるように、「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部、例えば抗体の抗原結合性または可変性の領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；トリアボディ；テトラボディ；線状抗体；単鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成される多重特異的抗体に含まれるＣＤＲ含有部分が含まれる。当業者は、用語「抗体断片」が任意の特定の生成様式を含意しないこと、およびそれに限定されないことを理解する。抗体断片は、インタクトな抗体の切断、化学的合成、組換え生成などを非限定的に含む、任意の適当な方法論の使用により生成することができる。

関連する：その用語が本明細書で使用されるように、２つの事象または実体は、一方の存在、レベルおよび／または形が他方のそれと相関しているならば、お互いと「関連する」。例えば、特定の実体（例えば、ポリペプチド）は、その存在、レベルおよび／または形が特定の疾患、障害または状態の発生率および／または感受性と相関する（例えば、関連する母集団全体で）ならば、その疾患、障害または状態に関連すると考えられる。一部の実施形態では、２つまたはそれを超える実体は、それらが直接的または間接的に相互作用する結果、お互いと物理的に近接し、そのままであるならば、お互いと物理的に「関連する」。一部の実施形態では、物理的にお互いに関連している２つまたはそれを超える実体は、お互いと共有結合している。一部の実施形態では、物理的にお互いに関連している２つまたはそれを超える実体はお互いと共有結合していないが、例えば水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁気およびその組合せによって非共有結合で関連している。

生体適合性：本明細書で使用されるように、用語「生体適合性」は、生組織と例えばｉｎ ｖｉｖｏで接触させたときに、そのような組織に有意な危害を引き起こさない材料を指す。ある特定の実施形態では、それらが細胞に毒性でないならば、材料は「生体適合性」である。ある特定の実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞へのそれらの添加が２０％未満または同等の細胞死をもたらすならば、および／またはそれらのｉｎ ｖｉｖｏ投与が有意な炎症もしくは他のそのような有害作用を誘導しないならば材料は「生体適合性」である。

生分解性：本明細書で使用されるように、用語「生分解性」は、細胞に導入したときに、細胞への有意な毒性作用なしで細胞が再利用または処分することができる構成要素に分解される（例えば、細胞機構により、例えば酵素分解、加水分解および／またはその組合せによって）材料を指す。ある特定の実施形態では、生分解性材料の分解によって生成される構成要素は生体適合性であり、したがってｉｎ ｖｉｖｏで有意な炎症および／または他の有害作用を誘導しない。一部の実施形態では、生分解性重合体材料は、それらの構成要素単量体に分解する。一部の実施形態では、生分解性材料（例えば、生分解性重合体材料を含む）の分解は、エステル結合の加水分解を含む。あるいは、またはさらに、一部の実施形態では、生分解性材料（例えば、生分解性重合体材料を含む）の分解は、ウレタン結合の切断を含む。例示的な生分解性高分子には、例えば、乳酸およびグリコール酸などのヒドロキシ酸の重合体、例えば、限定されずにポリ（ヒドロキシル酸）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、およびＰＥＧ、ポリアンヒドリド、ポリ（オルト）エステル、ポリエステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシアルカノエート、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）との共重合体、そのブレンドおよび共重合体が含まれる。多くの天然に存在する重合体、例えばタンパク質、例えばアルブミン、コラーゲン、ゼラチンおよびプロラミン、例えばゼイン、ならびに多糖、例えばアルギン酸塩、セルロース誘導体およびポリヒドロキシアルカノエート、例えばポリヒドロキシブチレート、そのブレンドおよび共重合体も生分解性である。当業技術者は、そのような重合体が生体適合性であるときおよび／またはその生分解性誘導体（例えば、当技術分野で公知である特定の化学基の置換または付加だけで異なる実質的に同一の構造によって親重合体と関係がある）であるときを理解するかまたは判定することができる。

生物学的に活性：本明細書で使用されるように、「生物学的に活性」という語句は、生物系（例えば、細胞（例えば、単離されたもの、培養物中、組織中、生物体中）、細胞培養物、組織、生物体など）で活性を有する物質を指す。例えば、生物体に投与されるとき、その生物体に生物学的作用を有する物質は、生物学的に活性であると考えられる。当業者は、その活性が存在するために生物学的に活性な物質の一部または断片だけがしばしば必要とされる（例えば、必要十分である）ことを理解する。そのような状況では、その一部または断片は、「生物学的に活性」な一部または断片であると考えられる。

併用療法：本明細書で使用されるように、用語「併用療法」は、対象が２つまたはそれを超える治療剤に同時に曝露される状況を指す。一部の実施形態では、そのような薬剤は、同時に投与される。一部の実施形態では、そのような薬剤は、逐次的に投与される。一部の実施形態では、そのような薬剤は、重複するレジメンで投与される。

同等：本明細書で使用されるように、用語「同等」は、お互いと同一でないかもしれないが、観察される差または類似性に基づいて結論を合理的に導くことができるようにそれらの間での比較を許すのに十分に類似している、２つまたはそれを超える薬剤、実体、状況、条件のセットなどを指す。当業者は、置かれた状況で、２つまたはそれを超えるそのような薬剤、実体、状況、条件のセットなどが同等であると考えるために任意の所与の状況でどの程度の同一性が必要とされるかについて理解する。

に対応する：本明細書で使用されるように、用語「に対応する」は、重合体中の残基、例えばポリペプチド中のアミノ酸残基または核酸中のヌクレオチド残基の位置／同一性を指定するためにしばしば使用される。当業者は、そのような重合体中の残基は、単純さのために参照の関連重合体に基づく正規の番号付け系を使用してしばしば指定され、その結果、例えば参照重合体中の１９０位の残基に「対応する」第１の重合体中の残基は、実際に第１の重合体中の第１９０番目の残基である必要がなく、参照重合体中の第１９０番目の位置で見出される残基にむしろ対応することを理解する。当業者は、重合体配列の比較のために特別に設計されている１つまたは複数の市販のアルゴリズムの使用を通すことを含め、「対応する」アミノ酸を同定する方法を容易に理解する。

誘導体：本明細書で使用されるように、用語「誘導体」は、参照物質の構造類似体を指す。すなわち、「誘導体」は、参照物質との有意な構造類似性、例えばコアまたはコンセンサス構造を共有する類似性を示すが、ある特定の別個の点で異なりもする物質である。一部の実施形態では、誘導体は、化学的操作によって参照物質から生成することができる物質である。一部の実施形態では、誘導体は、参照物質を生成するプロセスに実質的に類似の（例えば、複数の工程を共有する）合成プロセスの実行を通して生成することができる物質である。

剤形：本明細書で使用されるように、用語「剤形」は、対象への投与のための治療剤の物理的に個別の単位を指す。各単位は、活性薬剤の所定量を含有する。一部の実施形態では、そのような量は、関連する母集団に投与したときの所望のまたは有益な結果と相関すると判定された投薬レジメン（すなわち、治療的投薬レジメン）に従う投与に適当な単位投薬量（またはその全部）である。

投薬レジメン：本明細書で使用されるように、用語「投薬レジメン」は、期間によって一般的に区切られた、対象に個々に投与される単位用量（一般的に複数）のセットを指す。一部の実施形態では、所与の治療剤は推奨される投薬レジメンを有し、それは１つまたは複数の用量を含むことができる。一部の実施形態では、投薬レジメンは、各々同じ長さの時間でお互いと区切られる複数の用量を含む。一部の実施形態では、投薬レジメンは、複数の用量および個々の用量を区切る少なくとも２つの異なる時間を含む。一部の実施形態では、関連する母集団全体に投与したとき、投薬レジメンは所望のまたは有益な結果と相関する（すなわち、治療的投薬レジメンである）。

封入された：本明細書において用語「封入された」は、別の材料によって完全に囲まれる物質を指すために使用される。

操作された：一般に、用語「操作された」は、人の手によって操作された態様を指す。例えば、天然においてその順序で連結していない２つまたはそれを超える配列が、操作されたポリヌクレオチド内で直接的に連結するように人の手によって操作されるとき、そのポリヌクレオチドは「操作された」と考えられる。例えば、本発明の一部の実施形態では、操作されたポリヌクレオチドは、第１のコード配列と作動可能に関連しているが第２のコード配列と作動可能に関連していない状態で天然に見出され、第２のコード配列と作動可能に関連するように人の手によって連結される調節配列を含む。同様に、その遺伝情報が改変されるように操作された（例えば、以前に存在していない新しい遺伝物質が、例えば形質転換、交配、体細胞ハイブリダイゼーション、トランスフェクション、形質導入もしくは他の機構によって導入された、または以前に存在する遺伝物質が、例えば置換もしくは欠失突然変異もしくは交配プロトコールによって改変もしくは除去される）ならば、細胞または生物体は「操作された」と考えられる。慣例であるように、および当業者によって理解されるように、実際の操作が先の実体で実施されたとしても、操作されたポリヌクレオチドまたは細胞の子孫はなお「操作された」と一般的に呼ばれる。

発現：本明細書で使用されるように、核酸配列の「発現」は、以下の事象の１つまたは複数を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成および／または３’末端形成による）；（３）ポリペプチドまたはタンパク質へのＲＮＡの翻訳；および／または（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。

断片：本明細書に記載される材料または実体の「断片」は、完全体の個別の一部を含むが完全体で見出される１つまたは複数の部分を欠く構造を有する。一部の実施形態では、断片はそのような個別の一部からなる。一部の実施形態では、断片は、完全体で見出される特徴的な構造要素または部分からなるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、完全体重合体で見出されるように、重合体断片は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００またはそれを超える数の単量体単位（例えば、残基）を含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、重合体断片は、完全体重合体で見出される単量体単位（例えば、残基）の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、２５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える％を含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、完全体の材料または実体は、完全体の「親」と呼ぶことができる。

機能的：本明細書で使用されるように、用語「機能的」は、特定の特性および／または活性を示す実体の形または断片を指すために使用される。

相同性：本明細書で使用されるように、用語「相同性」は、重合体分子の間、例えば核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）の間および／またはポリペプチド分子の間の全体的関係を指す。一部の実施形態では、重合体分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％同一であるならば、お互いに「相同性」であると考えられる。一部の実施形態では、重合体分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％類似している（例えば、対応する位置に関連する化学特性を有する残基を含有する）ならば、お互いに「相同性」であると考えられる。例えば、当業者に周知であるように、ある特定のアミノ酸は、「疎水性」もしくは「親水性の」アミノ酸として、および／または「極性」もしくは「無極性」の側鎖を有するとしてお互いに類似していると一般的に分類される。１つのアミノ酸の同じ種類の別のものへの置換は、しばしば「相同性」置換と考えることができる。一般的なアミノ酸分類を、下に要約する：

当業者が理解する通り、例えば異なる配列でどの残基がお互いに「対応するか」考えるときに別のものと比較して１つの配列に指定された長さのギャップを許すことによって、相同性の程度を判定するために配列比較を可能にする様々なアルゴリズムが入手できる。例えば２つの核酸配列間の相同性パーセントの計算は、最適な比較目的のために２つの配列を整列させることによって実行することができる（例えば、最適なアラインメントのために第１および第２の核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、非対応配列は比較目的のために無視することができる）。ある特定の実施形態では、比較目的のために整列させた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または実質的に１００％である。対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドが、次に比較される。第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じヌクレオチドによって占められる場合は、分子はその位置で同一であり、第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と類似のヌクレオチドによって占められる場合は、分子はその位置で類似している。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮する、配列によって共有される同一および類似の位置の数の関数である。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントの判定において有用である代表的なアルゴリズムおよびコンピュータプログラムには、例えば、ＰＡＭ１２０ウェイトレジデュ表、１２のギャップ長ペナルティおよび４のギャップペナルティを使用するＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている、MeyersおよびMiller（CABIOS、１９８９年、４巻：１１〜１７頁）のアルゴリズムが含まれる。あるいは、２つのヌクレオチド配列間の相同性パーセントは、例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムを使用して判定することができる。

単離された：本明細書で使用されるように、用語「単離された」は、（１）最初に生成された（天然および／または実験的な設定であるかどうかにかかわらず）ときに関連していた構成要素の少なくともいくつかから分離されている、および／または（２）人の手によって設計、生成、調製および／または製造された物質および／または実体を指す。単離された物質および／または実体は、それらが最初に関連していた他の構成要素の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％から、または約９９％を超えて分離されてもよい。一部の実施形態では、単離された作用因子は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％を超えて純粋である。本明細書で使用されるように、それが他の構成要素を実質的に含まない場合、物質は「純粋」である。一部の実施形態では、当業者が理解するように、例えば１つまたは複数の担体または添加剤（例えば、バッファー、溶媒、水など）などのある特定の他の構成要素と合わされた後にも、物質はなお「単離された」または「純粋」とさえ考えることができる。そのような実施形態では、物質の単離または純度パーセントは、そのような担体または添加剤を含むことなく計算される。一部の実施形態では、単離は、共有結合の破壊を伴うかまたは必要とする（例えば、より長いポリペプチドからポリペプチドドメインを単離することおよび／またはより長いオリゴヌクレオチドもしくは核酸からヌクレオチド配列エレメントを単離すること）。

ＭＥＣＰ２モジュレーター：本明細書で使用されるように、用語「ＭＥＣＰ２モジュレーター」は、その存在、レベル、状態および／または形がＭＥＣＰ２のレベルおよび／または活性の改変と相関する薬剤を指す。すなわち、観察されるＭＥＣＰ２のレベルおよび／または活性は、その不在と比較しておよび／または同等の参照と比較して、その薬剤の存在下で（またはその薬剤が特定のレベルにあるかまたは特定の状態もしくは形態であるとき）検出可能的に異なる。

モジュレーター：一般に、用語「モジュレーター」は、目的の活性が観察される系でのその存在、レベル、状態および／または形が、モジュレーター（またはその関連するレベル、状態および／または形）が不在時のさもなければ同等の条件下で観察されるものと比較して、その活性のレベルおよび／または性質の変化と相関する実体を指すために使用される。一部の実施形態では、モジュレーターが不在時のさもなければ同等の条件下のその不在と比較して、活性がその存在下で増加するという点で、モジュレーターはアクチベータである。一部の実施形態では、さもなければ同等の条件下のその不在と比較して、活性がその存在下で低減するという点で、モジュレーターは阻害剤である。一部の実施形態では、モジュレーターは、その活性が目的である標的実体と直接的に相互作用する。一部の実施形態では、モジュレーターは、その活性が目的である標的実体と間接的に（すなわち、標的実体と相互作用する中間作用因子と直接的に）相互作用する。一部の実施形態では、モジュレーターは目的の標的実体のレベルに影響する。あるいは、またはさらに、一部の実施形態では、モジュレーターは、標的実体のレベルに影響することなく目的の標的実体の活性に影響する。一部の実施形態では、モジュレーターは目的の標的実体のレベルおよび活性の両方に影響し、観察される活性の差は観察されるレベルの差によって完全に説明されないかまたはそれと釣り合っていない。一部の実施形態では、モジュレーターの活性は、参照と比較して評価される。一部の実施形態では、そのような参照は歴史上の参照であってもよく、および／または有形もしくは電子的媒体に組み入れることができる。

核酸：本明細書で使用されるように、用語「核酸」は、その最も広い意味において、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるかまたは組み込むことができる任意の化合物および／または物質を指す。一部の実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合を通してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるかまたは組み込むことができる化合物および／または物質である。文脈から明らかになるように、一部の実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）を指す。一部の実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。一部の実施形態では、「核酸」はＲＮＡであるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、「核酸」はＤＮＡであるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、核酸は、１つまたは複数の天然の核酸残基であるか、それを含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、核酸は、１つまたは複数の核酸類似体であるか、それを含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、核酸類似体は、ホスホジエステル骨格を利用しないという点で核酸と異なる。例えば、一部の実施形態では、核酸は、当技術分野で公知であり、骨格にホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有し、本発明の範囲内にあると考えられている、１つまたは複数の「ペプチド核酸」であるか、それを含むかまたはそれからなる。あるいは、またはさらに、一部の実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく１つまたは複数のホスホロチオエートおよび／または５’−Ｎ−ホスホラミダイト結合を有する。一部の実施形態では、核酸は、１つまたは複数の天然のヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジン）であるか、それを含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、核酸は、１つまたは複数のヌクレオシド類似体（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、２−チオシチジン、メチル化塩基、挿入された塩基およびその組合せ）であるか、それを含むかまたはそれからなる。一部の実施形態では、核酸は天然の核酸中のそれらと比較して１つまたは複数の改変された糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノースおよびヘキソース）を含む。一部の実施形態では、核酸は、ＲＮＡまたはタンパク質などの機能的遺伝子生成物をコードするヌクレオチド配列を有する。一部の実施形態では、核酸は、１つまたは複数のイントロンを含む。一部の実施形態では、核酸は、天然の供給源からの単離、相補鋳型に基づく重合による酵素的合成（ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ）、組換え細胞または系での複製、および化学合成の１つまたは複数によって調製される。一部の実施形態では、核酸は、長さが少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００またはそれを超える残基数である。

患者：本明細書で使用されるように、用語「患者」または「対象」は、療法が投与されるヒトまたは任意のヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマまたは霊長類）を指す。多くの実施形態では、患者はヒトである。一部の実施形態では、患者は、疾患、障害または状態の診断または処置のために医療提供者へ受診に訪れるヒトである。一部の実施形態では、患者は、疾患、障害または状態の１つまたは複数の症状または特徴を示す。一部の実施形態では、患者は、疾患、障害または状態のいかなる症状または特徴も示さない。一部の実施形態では、患者は、疾患、障害または状態への感受性またはその危険に特徴的な１つまたは複数の特色をもつ者である。

薬学的に許容される：本明細書で使用されるように用語「薬学的に許容される」は、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答または他の問題もしくは合併症なしでヒトおよび／または動物の組織と接触させて使用するのに適し、理にかなった利点／危険比と釣り合う薬剤を指す。

ポリペプチド：本明細書で使用されるように、用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合によってお互いに連結する少なくとも３つのアミノ酸の重合体の当技術分野で認知された意味を一般に有する。一部の実施形態では、この用語は、ポリペプチドの特定の機能的クラス、例えば自己抗原ポリペプチド、ニコチンアセチルコリン受容体ポリペプチド、アロ抗原ポリペプチドなどを指すために使用される。そのようなクラスの各々について、本明細書は、クラス内の公知の例示的ポリペプチドのアミノ酸配列のいくつかの例を提供する。一部の実施形態では、そのような公知のポリペプチドは、そのクラスの参照ポリペプチドである。そのような実施形態では、用語「ポリペプチド」は、関連する参照ポリペプチドとかなりの配列相同性または同一性を示すクラスの任意のメンバーを指す。多くの実施形態では、そのようなメンバーは、参照ポリペプチドとかなりの活性も共有する。例えば、一部の実施形態では、メンバーのポリペプチドは、参照ポリペプチドと、少なくとも約３０〜４０％であり、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ超をしばしば超える、全体的な配列相同度または同一度を示し、および／またはしばしば９０％、または９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％さえも超える非常に高い配列同一性を示す少なくとも１つの領域（すなわち、特徴的な配列エレメントをしばしば含む保存された領域）を含む。そのような保存された領域は、通常少なくとも３〜４個、およびしばしば最高２０個またはそれを超えるアミノ酸を包含する。一部の実施形態では、保存された領域は、ひと続き少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５またはそれを超える数の連続したアミノ酸を少なくとも１つ包含する。一部の実施形態では、本明細書に記載される有用なポリペプチドは、親ポリペプチドの断片を含むかまたはそれからなることができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される有用なポリペプチドは、複数の断片を含むかまたはそれからなることができ、その各々は、目的のポリペプチドで見出されるより、お互いと比較して異なる空間配置の同じ親ポリペプチドで見出され（例えば、親の中で直接的に連結されている断片は目的のポリペプチドの中で空間的に分離されてもよく、その逆もまた同じであり、および／または、目的のポリペプチドの中で断片は親の中と異なる順序で存在することができる）、その結果目的のポリペプチドはその親ポリペプチドの誘導体である。

参照：用語「参照」は、目的の薬剤または値を比較する標準または対照の薬剤または値を記載するために本明細書でしばしば使用される。一部の実施形態では、目的の薬剤または値の試験または判定と実質的に同時に参照薬剤は試験され、および／または参照値は判定される。一部の実施形態では、参照薬剤または値は歴史上の参照であり、任意選択で有形媒体に組み入れられる。一般的に、当業者は理解するように、参照薬剤または値は、目的の薬剤または値を判定または特徴付けるために利用される条件と同等の条件下で判定または特徴付けられる。

試料：用語「試料」は、得られる、提供される、および／または分析にかけられる容量または質量を指す。一部の実施形態では、試料は、組織試料、細胞試料、流体試料などであるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、試料は対象（例えば、ヒトまたは動物対象）からとられる。一部の実施形態では、組織試料は、脳、毛髪（根部を含む）、口内スワブ、血液、唾液、精液、筋肉であるかまたはそれを含み、または任意の内臓に、またはこれらのいずれか１つと関連するがん、前がんもしくは腫瘍細胞に由来する。流体は、限定されずに、尿、血液、腹水、胸膜液、脊髄液などであってもよい。体組織には、限定されずに、脳、皮膚、筋肉、子宮内膜、子宮および頸部の組織またはこれらのいずれか１つと関連するがん、前がんもしくは腫瘍細胞が含まれてもよい。一実施形態では、体組織は、脳組織または脳の腫瘍もしくはがんである。当業者は、一部の実施形態では、供給源（例えば、対象）から得られるという点で「試料」が「一次試料」であることを理解する。一部の実施形態では、「試料」は、例えばある特定の潜在的に混入している構成要素を除去するために、および／またはある特定の目的の構成要素を単離もしくは精製するために一次試料を処理した結果である。

小分子：本明細書で使用されるように、用語「小分子」は、生物学的過程の酵素基質または調節因子の役割をすることができる低分子量有機化合物を意味する。一般に、「小分子」は、約５キロダルトン（ｋＤ）未満のサイズの分子である。一部の実施形態では、提供されるナノ粒子は、１つまたは複数の小分子をさらに含む。一部の実施形態では、小分子は、約４ｋＤ、３ｋＤ、約２ｋＤまたは約１ｋＤ未満である。一部の実施形態では、小分子は、約８００ダルトン（Ｄ）、約６００Ｄ、約５００Ｄ、約４００Ｄ、約３００Ｄ、約２００Ｄまたは約１００Ｄ未満である。一部の実施形態では、小分子は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、約１０００ｇ／ｍｏｌ未満、約８００ｇ／ｍｏｌ未満または約５００ｇ／ｍｏｌ未満である。一部の実施形態では、１つまたは複数の小分子がナノ粒子中に封入される。一部の実施形態では、小分子は非重合体である。一部の実施形態では、本発明に従って、小分子は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖、糖タンパク質、プロテオグリカンなどではない。一部の実施形態では、小分子は治療薬である。一部の実施形態では、小分子はアジュバントである。一部の実施形態では、小分子は薬物である。

実質的に：本明細書で使用されるように、用語「実質的に」は、目的の特徴または特性の全体またはほぼ全体の範囲または程度を示す定性的状態を指す。生物分野の当業技術者は、生物的および化学的現象が完結すること、および／または完全に進行すること、または絶対的な結果を達成もしくは回避することは、あるとしても稀であることを理解する。したがって、用語「実質的に」は、本明細書で、多くの生物的および化学的現象に内在する完全性の潜在的欠如を捉えるために使用される。

患う：疾患、障害および／または状態を「患う」個体は、その疾患、障害または状態を診断されており、および／またはその１つまたは複数の症状もしくは特徴を示すかもしくは示している。

感受性：疾患、障害または状態に「感受性」である個体は、その疾患、障害または状態を発症する危険がある。一部の実施形態では、疾患、障害または状態に感受性である個体は、その疾患、障害または状態のいかなる症状も示さない。一部の実施形態では、疾患、障害または状態に感受性である個体は、その疾患、障害および／または状態を診断されていない。一部の実施形態では、疾患、障害または状態に感受性である個体は、その疾患、障害または状態の発症と関連する状態へ曝露させられた個体である。一部の実施形態では、疾患、障害および／または状態を発症する危険は、母集団をベースとした危険である（例えば、アレルギーを患っている個体のファミリーメンバーなど）。

症状が低減される：本発明により、特定の疾患、障害または状態の１つまたは複数の症状の重大性（例えば、強さ、重症度など）および／または頻度が低減されるとき、「症状は低減される」。明瞭さのために、特定の症状の発生の遅れは、その症状の頻度低減の１つの形態であると考えられる。

治療剤：本明細書で使用されるように、「治療剤」という語句は、対象に投与したときに治療効果を有する、ならびに／または所望の生物学的および／もしくは薬理学的効果を導き出す任意の薬剤を指す。一部の実施形態では、薬剤が投与される特定の対象が所望のまたは有益な治療結果を経験するか否かを問わず、関連する母集団へのその投与がその母集団での所望のまたは有益な治療結果と統計学的に相関するならば、その薬剤は治療剤であると考えられる。

治療有効量：本明細書で使用されるように、用語「治療有効量」は、治療的投薬レジメンに従って疾患、障害および／または状態を患うかまたはそれに感受性である母集団に投与したときに、その疾患、障害および／または状態を処置するのに十分である量を意味する。一部の実施形態では、治療有効量は、疾患、障害および／または状態の１つまたは複数の症状の発生率および／もしくは重症度を低減する、ならびに／またはその発症を遅らせる量である。当業者は、用語「治療有効量」は、特定の個体で処置の成功が達成されることを実際は必要としないことを理解する。むしろ、治療有効量は、そのような処置を必要とする患者に投与したときに、有意な数の対象で特定の所望の薬理学的応答を提供する量であってもよい。特定の対象が、実際に「治療有効量」に「抗療性」であってもよいことが特に理解される。１例だけを与えると、抗療性の対象は、臨床効能が得られないほど低い生物学的利用能を有してもよい。一部の実施形態では、治療有効量への言及は、１つまたは複数の特定の組織（例えば、疾患、障害または状態によって侵された組織）または流体（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿など）で測定される量への言及であってもよい。当業者は、一部の実施形態では、治療有効量が単一の用量で製剤化および／または投与されてもよいことを理解する。一部の実施形態では、治療有効量は、複数の用量で、例えば投薬レジメンの一部として製剤化および／または投与されてもよい。

治療レジメン：本明細書で使用される用語「治療レジメン」は、関連する母集団全体へのその投与が所望のまたは有益な治療結果と相関する投薬レジメンを指す。

処置：本明細書で使用されるように、用語「処置」（「処置する」または「処置すること」も）は、特定の疾患、障害および／または状態を部分的または完全に軽減、改善、緩和、阻害する、その発症を遅らせる、その重症度を低減する、ならびに／またはその１つまたは複数の症状、特徴および／もしくは原因の頻度、発生率もしくは重症度を低減する物質の任意の投与を指す。そのような処置は、関連する疾患、障害および／もしくは状態の徴候を示さない対象（例えば、予防的であってもよい）ならびに／または疾患、障害および／もしくは状態の初期の徴候だけを示す対象のものであってもよい。あるいは、またはさらに、そのような処置は、関連する疾患、障害および／または状態の１つまたは複数の確立された徴候を示す対象のものであってもよい（例えば、治療的であってもよい）。一部の実施形態では、処置は、関連する疾患、障害および／または状態を患っていると診断された対象のものであってもよい。一部の実施形態では、処置は、関連する疾患、障害および／または状態の発達の危険の増加と統計学的に相関する１つまたは複数の感受性因子を有することが知られている対象のものであってもよい。

以下の図を少なくとも含む図面は、限定のためではなく、例示目的だけのためである。

図１は、Ｓｑｌｅでの終止コドン突然変異が運動系および寿命の救済を付与することを示す。ａ）Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙマウスの生存は、Ｓｑｌｅ^{Ｓｕｍ３Ｊｕｓ}／＋突然変異の存在によって有意に増加する；ｐ＝．００２。１２９Ｓ６／ＳｖＥｖＴａｃへの戻し交雑世代Ｎ_７のＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙ Ｓｑｌｅ^Ｓｕｍ３／＋動物は、ｂ）Ｐ５６で有意に向上したロータロッド成績（ｐ＝．０００１）、ｃ）Ｐ７０で向上したオープンフィールド活動を示す。さらに、Ｓｑｌｅ^{Ｓｕｍ３Ｊｕｓ}突然変異は、Ｐ７０で前パルス阻害アッセイを受ける１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙマウスでｄ）驚愕振幅を増加させず、ｅ）驚愕までの時間を減少させない。ｎｏｓｔｉｍ＝刺激を与えない；ａｓ５０＝５０ｄＢの刺激を与える；ｐｐ８＝８ｄＢの前パルスを与える；ｐｐ８５０＝８ｄＢの前パルスと続く５０ｄＢの刺激。全てのエラーバーは、ｓ．ｅ．ｍ．を表す。

図２は、コレステロール代謝がＭｅｃｐ２ヌル雄マウスで破壊されることを示す。ａ）デスモステロールを経るコレステロール生合成での酵素および生成物の簡略化された概略図を示す。ｂ）Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／ＹおよびＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｊａｅ}／ＹでのＨｍｇｃｒ、ＳｑｌｅおよびＣｙｐ４６ａ１の発現は、脳において類似している。ｃ）ラノステロール（Ｌａｎ）、デスモステロール（Ｄｅｓ）および総コレステロール（ＴＣ）の濃度は、Ｐ５６（群につきＮ＝８）およびＰ７０（群につきＮ＝４）での脳組織１グラムにつき表示される。ｄ）コレステロール合成は、Ｐ５６（野生型Ｎ＝４；ヌルＮ＝５）でＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｊａｅ}／Ｙの脳で減少する。ｅ）Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／ＹおよびＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｊａｅ}／ＹでのＨｍｇｃｒおよびＳｑｌｅの発現は、肝臓において異なる。ｆ）トリアシルグリセリド（ＴＡＧ）およびＴＣの濃度は、Ｐ５６（群につきＮ＝６）での肝臓組織１グラムにつき表示される。ｇ）コレステロール合成は、Ｐ５６（野生型Ｎ＝４；ヌルＮ＝５）でＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｊａｅ}／Ｙの肝臓で組織１グラムにつきわずかに増加する。血清ｈ）総コレステロール、ｉ）ＬＤＬコレステロールおよびｊ）トリグリセリドのレベルは、Ｐ５６（群につきＮ＝８〜１１）までにＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙマウスで有意により高いが、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｊａｅ}／Ｙマウス（群につきＮ＝６）では不変である。遺伝子発現データ（ｂ、ｅ）については、Ｂｉｒｄ：Ｐ２８での遺伝子型につきＮ＝６およびＰ５６での遺伝子型につきＮ＝１２；Ｊａｅ：Ｐ２８での遺伝子型につきＮ＝４およびＰ５６での遺伝子型につきＮ＝６。組織データ（ｂ〜ｇ）は、野生型レベルからの変化百分率を表す。^＊ｐ≦０．０５；全てのエラーバーは、ｓ．ｅ．ｍ．を表す。

図３は、Ｍｅｃｐ２突然変異体マウスがメタボリックシンドロームを起こすことを示す。示すように、雌雄のＭｅｃｐ２／ＹおよびＭｅｃｐ２／＋マウスは、腹腔内グルコース耐性試験（ＩＰＧＴＴ）でグルコースを適切に処分する能力がないことを示し、またインスリンのボーラス注射（ＩＴＴ）の後にインスリン抵抗性を示す。この代謝調節不全は、症状の進行に伴って悪化する。さらに、雄は活動期間中にグルコースよりも脂肪を燃やす。これらは全て、メタボリックシンドロームの徴候である。したがって、この図３で提示されるデータは、Ｍｅｃｐ２ヌルマウスがメタボリックシンドロームを起こすことを立証する。

図４は、スタチン処置が１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙ雄の健康を向上させることを示す。以下の試験のために評価した全動物は、フルバスタチン処置した３７匹のＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙ、ロバスタチン処置した１２匹のＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙ、ビヒクル処置した３１匹のＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙ、フルバスタチン処置した２９匹の野生型＋／Ｙ、ロバスタチン処置した８匹の＋／Ｙ、およびビヒクル処置した２９匹の野生型＋／Ｙマウスであった。ａ）１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙのフルバスタチン処置は寿命の増加を付与する：８７日に比較して中央値１２２日であり、１２０日を超えて生存したのは５７％である（ｐ＜．０００１）。さもなければ健康な活発な間に、３匹の動物を皮膚炎（ボックス）のために屠殺した。ｂ）Ｐ５６処置したヌル雄で、ロータロッド成績が向上する（フルバスタチンｐ＝．０１５；ロバスタチンｐ＝．００９）、ｃ）光線遮断によって評価するときに、Ｐ７０処置ヌル雄でオープンフィールド活動が増加する（フルバスタチン：ｐ＝．０２６、ロバスタチン：ｐ＝．０１１）。さらに、フルバスタチン処置は、ｄ）驚愕振幅を増加させず、ｅ）Ｐ７０で前パルス阻害アッセイを受ける１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙマウスで驚愕までの時間を減少させない。ｆ）スタチン処置は、Ｐ７０までに血漿コレステロールを低下させる（フルバスタチン：ｐ＝．００１、ロバスタチン：ｐ＝．００１）。ｇ）スタチン処置は、Ｐ７０で１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙの肝臓で上昇した脂質濃度を改善する（フルバスタチンｐ＝．０２；ロバスタチン：ｐ＝．３８６）。Ｐ７０でフルバスタチン処置１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙマウスの脳において、ｈ）ラノステロールの濃度は、わずかに増加し、ｉ）デスモステロールの濃度は有意に増加する（群につきＮ＝４；ｐ＝．０４）。ｊ）スタチン処置の前後の脂肪肝の組織像を示す。

図５は、フルバスタチン処置が１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／＋雌の健康を向上させることを示す。ａ）８カ月の前に死んだフルバスタチン処置１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／＋雌はいなかったが３匹のビヒクル処置雌が死んだ。ｂ）５カ月齢のフルバスタチン処置１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／＋雌でロータロッド成績が向上する（ｐ＝．００１）。ｃ）４カ月時に評価したオープンフィールド活動は、フルバスタチン処置群またはビヒクル処置群で有意な差を示さない。ｄ）フルバスタチン処置は、８カ月時の血清コレステロールレベルを有意に変化させない。ｅ）フルバスタチン処置は、８カ月時に評価した１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／＋の肝臓で上昇した脂質濃度を改善し（ｐ＝．０４５）、ｆ）スタチン処置の前後の肝臓の組織像オイルレッドオーを示す。

図６は、Ｊｕｓｔｉｃｅ研究室で開発されたＭｅｃｐ２雄マウスのための標準の薬物処置プロトコールの例示的なタイムラインを示す。示すように、雌は１Ｘの週用量を受け、試験は年齢に基づいてオフセットされる。しかし、試験は同じになろう。雌のためのタイムラインは６週目から始まって８カ月目に終了し、ロータロッドは８週目に実行され、オープンフィールド活動（ＯＦＡ）、聴覚驚愕応答の前パルス阻害（ＰＰＩ）、プレチスモグラフィー（Ｐｌｅｔｈ）、体組成のためのＤＥＸＡは５カ月目に実行され、その後全ての臨床脂質パネルによる検死が続き、６カ月目の検死で組織脂質が評価される。

図７は、異なる親油性の４つの異なるスタチン薬を使用したマウスの処置の例示的なグラフを示す。ロータロッドおよびオープンフィールド活動（ＯＦＡ）は、運動能力の尺度である（それぞれ、パネルＢおよびＣ）。二重Ｘ線吸収測定（ＤＥＸＡ）は、体脂肪および骨組成のための試験である（パネルＥ）。マウスに週２回、３ｍｇ／ｋｇフルバスタチン、２ｍｇ／ｋｇ体重のアトルバスタチン、１．５ｍｇ／ｋｇロバスタチンまたは６ｍｇ／ｋｇシンバスタチンの用量を投与し、図６に示す行動試験プロトコールを受けさせた。各群のために試験するマウスの数は、関連するバーの下に示す。スタチン処置のいずれもいかなる作業に関しても野生型の成績を変化させなかったので、黒色破線は野生型の平均を示す。ＡＮＯＶＡと、続いてＤｕｎｎｅｔｔ ＰｏｓｔＨｏｃを使用し、処置を関連する対照群と比較することによってデータを分析した。^＊ｐ≦０．０５、＃ｐ≦０．１０

図８は、Ｍｅｃｐ２ヌルマウスが末梢器官でグルコースを利用することができないことを示す例示的なグラフを示す。Ｍｅｃｐ２ヌルおよび野生型同腹仔で８週齢時に高インスリン性正常血糖性クランプを実施した。正常血糖を維持するためにＭｅｃｐ２ヌル雄はかなり遅いグルコース注入速度を必要とし（パネルＡに示す）、グルコースを代謝することができないことを示唆する。白色脂肪組織（ＷＡＴ）およびヒラメ筋での^１４Ｃグルコースの測定は、主要なグルコース消費末梢器官でのグルコース取込みの減少を確認する（それぞれ、パネルＢおよびＣに示す）。

図９は、ＬＸＲアゴニストおよびメトホルミンによるＭｅｃｐ２／Ｙマウスの処置の後の例示的なグラフを示す。各群のために試験するマウスの数は、関連するバーの下に示す。スタチン処置のいずれもいかなる作業に関しても野生型の成績を変化させなかったので、黒色破線は野生型の平均を示す。週２回、マウスを３０ｍｇ／ｋｇ用量のメトホルミンおよび３ｍｇ／ｋｇ用量のＬＸＲアゴニストＴ０９０１９１７で処置し、図６のプロトコールにより分析した。ＡＮＯＶＡと、続いてＤｕｎｎｅｔｔ ＰｏｓｔＨｏｃを使用し、処置を関連する対照群と比較することによってデータを分析した。^＊ｐ≦０．０５、＃ｐ≦０．１０

図１０は、グルコース代謝モジュレーター、２，４−ジニトロフェノール−メチルエーテル（ＤＮＰＭＥ）によるＭｅｃｐ２／Ｙマウスの処置の後の例示的なグラフを示す。週２回、５ｍｇ／ｋｇ用量でマウス処置し、図６のプロトコールにより分析した。野生型Ｎ＝４、Ｍｅｃｐ２／Ｙ Ｎ＝６および１匹のビヒクル対照ヌルマウスは、Ｐ７０の前に死んだ。ＡＮＯＶＡと、続いてボンフェローニＰｏｓｔＨｏｃを使用し、処置を関連する対照群と比較することによってデータを分析した。^＊ｐ≦０．０５、＃ｐ≦０．１０

ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害および状態（例えば、レット症候群）
本発明は、ＭＥＣＰ２活性の破壊に関連する疾患、障害および状態の処置に関する。ＭＥＣＰ２突然変異は、様々な疾患、障害および状態と関連することが公知である。様々な実施形態では、本開示の教示は、その症状が１つまたは複数のＭＥＣＰ２改変（例えば、ＭＥＣＰ２タンパク質のレベル、活性もしくは形および／またはＭＥＣＰ２遺伝子の１つまたは複数の特定の突然変異）と関連するおよび／または相関する、任意の疾患、障害または状態に適用できることを当業者は理解する。

本開示の教示は、レット症候群（ＲＴＴ）に特に適用可能であることを当業者は理解し、レット症候群症例の９５％が１つまたは複数のＭＥＣＰ２突然変異と関連することに注意する。レット症候群は、１０，０００人の女児のおよそ１人を侵すＸ連鎖の障害である。患者は、４つのステージを経る：ステージＩ）出産からの見かけ上正常な発達の期間の後、児童は、６カ月齢から１８カ月齢の間に、他の自閉症スペクトラム障害で見られるものに類似する社会的なおよび意志伝達の欠陥を示し始める。児童は、特に座るおよび這うなどの運動能力に関する、それらの発達上の里程標において遅れを示す。ステージＩＩ）１歳から４歳の間に始まり、児童は、会話および運動の能力を失い、常同性の正中手動作および歩行障害を発症する退行期間を経る。無呼吸および過呼吸を含む不規則呼吸も、このステージの間に起こる。自閉症の症状は、このステージでなお多発する。ステージＩＩＩ）２歳から１０歳の間に、退行期間は終了し、症状は安定期に達する。社会的なおよび意志伝達の技術はこの安定期間の間に小さい向上を示すことがあり、それは患者の寿命の大部分の間持続することがある。ステージＩＶ）運動能力および筋肉の衰退は続く。多くの女児は重度の側弯症を起こし、歩行能力を失う。古典的なレット症候群は単一遺伝子性であり、ＭＥＣＰ２の突然変異によって引き起こされる。

トランケーション型または機能喪失ＭＥＣＰ２突然変異をもつヘミ接合性ヒト雄は、ＲＴＴをもつ雌より重度の表現型を有し、２歳までに通常死ぬ。ＭＥＣＰ２が関与する低形態突然変異または複製は、様々な知的障害ＩＤ、自閉症および他の精神病学的特徴にも関連している。

さらに、ＭＥＣＰ２がコレステロール代謝に関与することを考慮すると、一部の実施形態では、本開示は、脂質および／またはコレステロール生合成に関連する１つまたは複数の代謝経路の他の構成要素が、本明細書に記載される代謝モジュレーターで処置可能であるＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態であると考えることができることを教示する。コレステロール代謝は、アルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病などの神経疾患、ならびに筋萎縮性側索硬化症および脆弱Ｘ染色体症候群と結びつけられている。さらに、一部の実施形態では、特にレット症候群の１つまたは両方に関連する症候群関連の自閉症を含む自閉症のある特定の形は、本明細書に記載されるＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態と考えることができる。自閉症は、最も広義には、単一の療法に応答する可能性が低い、複雑な病因による遺伝的に多様な障害群である。

ある特定の実施形態では、本発明は、これらのいずれかまたは全ての処置、ならびに／またはそれらのための療法および／もしくはバイオマーカーの同定、特徴付けおよび／もしくは使用を記載する。

ある特定の実施形態では、本発明は、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に脳の脂質および／またはコレステロール代謝をモジュレートする少なくとも１つの薬剤またはモダリティを投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、少なくとも１つの薬剤またはモダリティは、以下から選択される：スタチン、ＬＸＲモジュレーター、グルコース代謝モジュレーター、ＳＲＥＢＰモジュレーター、ＰＰＡＲＧモジュレーターおよびその組合せ。

代謝経路
本明細書に記載されるように、本発明は、ある特定の代謝経路（例えば、脂質および／またはコレステロール生合成経路）のモジュレーターは、レット症候群の処置において役立つことができるとの認識、ならびに／またはそのような経路の１つまたは複数の構成要素を含む系は、そのようなモジュレーターの同定および／もしくは特徴付けで役立つことができるとの認識を包含する。本発明は、活動または本明細書に記載される代謝経路の１つまたは複数の特徴の性格に基づいて個々のレット症候群患者をお互いから区別することが一部の場合には有用であるとの識見も提供する。本発明の教示は、脳および／もしくは肝臓のコレステロールおよび／もしくは脂質生合成に関与する代謝経路ならびに／または他の全身の代謝構成要素に特に関連する。

コレステロールは脳の主要な構成要素であり、そこでは、それは食事からの吸収または肝臓合成によって供給することができないので、スクアレンエポキシダーゼ（ＳＱＬＥ）およびラノステロール合成酵素（ＬＳＳ）によるラノステロールへのスクアレンの変換を通して同一である、半ば独立した経路を通して合成される（Dietchy、TurleyおよびSpady J Lipid Res３４巻：１６３７〜１６５９頁、１９９３年）（図２ａ）。一般的に、血液中の高い循環コレステロールが注目されるが、その理由はそれが心血管疾患の発生率の増加と関連するからである。しかし、膜輸送、シグナル伝達、ミエリン形成、樹状突起リモデリング、神経ペプチド形成およびシナプス形成を含めて、コレステロールは神経組織で多くの機能を有する（PfriegerおよびUngerer、Prog Lipid Res５０巻：３５７〜３７１頁、２０１１年）。脳コレステロール代謝の調節不全は、過剰に存在するときに正常な発達を乱すコレステロールタンパク質中間体の蓄積をもたらすことができ、ハンチントン病およびアルツハイマー病を含む加齢疾患に影響することができる（Waterham、FEBS Lett５８０巻：５４４２〜５４４９頁、２００６年）。

心血管疾患でのコレステロールの役割のために、正常より高いコレステロールレベルのために、または有害作用をもたらす上昇したコレステロールレベルのために、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン）が医療用に処方される。コレステロールの正常なレベルは、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤の治療的使用を一般に正当化しないレベルである。当技術分野で理解されているように、正確な「正常な」レベルは、対象ならびに年齢、性別、食事および母集団型に関して観察されるコレステロールレベルの変動にある程度依存することができる。一般に、コレステロールレベルは、対象が急性の病気を患っていないとき、ストレス下でないとき、および女性の場合には妊娠していないときに測定される。

多くの実施形態では、本明細書で使用されるコレステロールのレベルは、血清総コレステロールレベルを指し、それは、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、中間密度リポタンパク質（ＩＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の形態で血清中に見出される複合コレステロールを含む。コレステロールレベルは、脂質、トリグリセリドまたはトリアシルグリセロールの貯蔵形態に関連して一般的に測定される。コレステロールレベルは、合わせたリポタンパク質分画中の全コレステロールの量に基づくことができる。血清中に見出されるコレステロールおよびトリグリセリドは、様々な構成要素：ＨＤＬ、ＩＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬに分かれる。ＬＤＬ分画はＶＬＤＬに由来し、血清総コレステロールおよびＬＤＬ（ｃ−ＬＤＬ）分画中のコレステロールの上昇したレベルは、アテローム硬化症の危険の増加と相関する。

ヒト成人のための例示的な正常な血清コレステロールレベルは、対象の年齢、食事および性別などの様々な因子次第で、２００ｍｇ／ｄＬ未満から約１４０ｍｇ／ｄＬである範囲であり、対象にとって健康であると考えられる範囲である。児童または青年のために健康であると考えられるレベルは、約１２０ｍｇ／ｄＬから約１７０ｍｇ／ｄＬの間にある。本明細書の方法を使用して処置できる対象の母集団は、児童または青年を含む。ヒトのためのｃ−ＬＤＬの正常なレベルは、約１５０ｍｇ／ｄＬ未満、約１３０ｍｇ／ｄＬ未満、または約１１０ｍｇ／ｄＬ未満であり、下限は健康なレベルと考えられているｃ−ＬＤＬのレベルである。児童または青年のために健康であると考えられるレベルは、１１０ｍｇ／ｄＬ未満である。

末梢代謝と異なり、脳のコレステロール代謝については、ほとんど知られていない。本開示は、レット症候群での脳のコレステロールホメオスタシスの重要性を初めて指摘する。コレステロールは脳機能にとって重要であるが、脳血液関門（ＢＢＢ）を通過することができないので、脳はそれ自身のコレステロールを製造する。しかし、それは古いコレステロールを循環中へと再利用または代謝回転させ、新たに製造しなければならず、さもなければコレステロールは酸化され、炎症につながる可能性がある。神経細胞シナプスでコレステロールの代謝回転が必要とされることが知られている。ミエリンに存在しない成体脳中のほとんどの循環コレステロールは星状神経膠細胞によって生成され、ＨＤＬ様粒子にパッケージされて、細胞内空間を通ってニューロン上のＬＤＬ様受容体に送達される（PfriegerおよびUngerer、Prog Lipid Res５０巻：３５７〜３７１頁、２０１１年）。ニューロンが過剰のコレステロールまたはその中間体を蓄積するときは、チトクロームＰ４５０オキシダーゼＣｙｐ４６ａ１がコレステロールをヒドロキシル化して２４ＳＯＨＣを生成し、一方向拡散によるＢＢＢを超えての循環中への代謝回転を可能にする（Lund、GuileyardoおよびRussell、Proc Natl Acad Sci USA９６巻：７２３８〜７２４３頁；LundらJ Biol Chem２７８巻：２２９８０〜２２９８８頁、２００３年）。

代謝経路モジュレーター
本明細書に記載されるように、本発明は、ある特定の代謝経路モジュレーターがレット症候群および／または他のＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態の処置において有用であるとの認識を包含する。特に、本発明は、脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路の、特に脳の脂質および／またはコレステロール経路のある特定のモジュレーターが、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態の処置において有用であることを立証する。一部の実施形態では、本発明は、レット症候群の処置でのＭＥＣＰ２モジュレーターの使用を教示する。

一般に、本明細書に記載される通り有用な代謝経路モジュレーターは、例えば核酸、ポリペプチド、脂質、炭水化物および／または小分子薬剤またはその組合せを含む、任意の化学クラスの薬剤であるかまたはそれを含むことができる。当業者は、例えば、抗体薬剤および／または標的核酸薬剤（例えば、アンチセンスおよび／またはｓｉＲＮＡ薬剤）によって多くのタンパク質標的を阻害することができることを理解する。一部の実施形態では、代謝経路阻害剤は、脳血液関門（ＢＢＢ）を通過することができる。

スタチン
本明細書に記載されるように、スタチン薬はＭＥＣＰ２関連の疾患、障害および状態の処置において有用である。

例えば、本実施例は、Ｍｅｃｐ２ヌルマウスでＳｑｌｅサプレッサー突然変異によって示される症状の改善をスタチン薬が再現することを実証する。試験した特定の条件下で、聴覚驚愕応答または聴覚驚愕応答の前パルス阻害を含む全ての症状をスタチンが改善するわけではなかった。

出願人は、「Treating Learning Deficits with Inhibitors of HMG-CoA Reductase」（「Silva公報」）という題名のSilvaによる公報（２００５年５月２３日に出願の米国特許出願第１１／５６９４２６号からの、および２００４年５月２４日および２００５年３月１５日にそれぞれ出願された米国特許仮出願第６０／５７４４４２号および第６０／６６１７６４号への優先権を主張する、２００７年１２月２７日に公開された米国特許出願公開第２００７／０２９９０９６号）が、コレステロール生合成のために使用されるイソプレノイド中間体メバロネートへのＨＭＧ ＣｏＡの変換を触媒する酵素、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素の阻害剤が、認知障害の処置のために一般に有用かもしれないことを示唆する表明を含む点に注意する。少なくとも一部のスタチンはＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤であると考えられており、Silva公報はそのような処置のためのスタチンの使用を特に推奨する。しかし、当技術分野での理解と一貫して、Silva公報自体は、認知が複雑な神経過程であり、多様な分子機構群が認知機能と結びつけられる点にも注意する。

Silva公報は、異なる疾患、障害または状態に関連する学習欠陥に関与するかもしれないいくつかの異なる生物学的経路を規定する。特に、Silva公報は、神経線維腫症−１に関与するニューロフィブロミンシグナル伝達経路を強調する。Silva公報は、神経線維腫症−１（「ＮＦ−１」）のマウスモデルで、ｐ２１Ｒａｓ／ＭＡＰＫ活性、長期増強、空間学習欠陥ならびに注意および感覚ゲーティング欠陥へのロバスタチンの穏やかな有益な影響を示すデータを提供する。

Silva公報は、レット症候群の処置での、特にスタチンは言うまでもなくＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤一般の使用を特に推奨しない。実際、レット症候群自体は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤で適切に処置できるとしてSilva公報が掲載する認知障害の１つでない。しかし、Silva公報は、その背景技術およびその序論において、一部のレット症候群患者は自閉症状を示すこと、および／または１つまたは複数の遺伝的特徴を自閉症の個体と共有することを記している。Silva公報は、処置できる障害として自閉症を掲載しているが、それが自閉症の発達と関連すると記す生物学的経路はＮＦ−１関連のものと異なる。

残念なことに、Silvaの参考文献によって動機付けされ、学習障害および注意欠陥を改善するように設計されたＮＦ−１患者の臨床試験は不成功であると証明された。シンバスタチンは有意な効果を示すことが観察されなかった（例えば、KrabらJAMA３００巻：２８７頁、２００８年を参照のこと）。同様に、シンバスタチンを使用するアルツハイマー病の臨床試験は失敗した（SanoらNeurology７７巻：５５６頁、２０１１年）。これらの試験の失敗は、ＮＦ−１マウスおよび／またはマウスで実行された関連する認知試験がヒト認知機能の適当なモデルでなかったことを実証する。そのような失敗は、Silvaの参考文献で提案された、Ｒａｓ活性のモジュレーションを通した機構が、示唆されているように作動しないかもしれないことを示唆する。当業者はこれらの失敗には慣れており、Silvaの参考文献の教示とのそれらの関連性をよく理解するだろう。

本開示は、対照的に、スタチンが神経学的欠陥の根底にあるかもしれない運動欠陥の改善を達成することができることを実証し、スタチンの作用が脂質沈着をモジュレートする能力にあることをさらに立証する。我々が知る限り、本開示は、脂質またはコレステロール生合成経路のモジュレーター、特にＭＥＣＰ２モジュレーター（例えば、スタチン）が、レット症候群の処置において有用であるとの最初の教示となる。疑いなく、本開示は、自閉症関連の遺伝子突然変異（すなわち、ＭＥＣＰ２以外の遺伝子座に）を有しないレット症候群患者でのそのような使用の最初の提案である。

したがって、一部の実施形態では、本発明は、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態（例えば、レット症候群）を処置する方法であって、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態を患っているかまたは感受性の関連する対象にスタチンを投与するステップを含む方法を提供する。様々な実施形態により、例えば、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンを含む、任意のスタチンを使用することができる。一部の実施形態では、スタチンは、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチンおよびその組合せから選択される。

肝臓受容体Ｘ（ＬＸＲ）モジュレーター
スタチンは体によるその生成を遅らせることによって高コレステロールを処置するが、それは、排泄のために胆汁酸に変換することができる肝臓による血液コレステロールの再取込みを誘導することによってコレステロールレベルを低下させることもできる。この再取込みは、ＬＸＲによって媒介される。ＬＸＲは脳特異的な役割も有するが、正確な機構は未知である。ＬＸＲ活性を直接的にモジュレートする薬物には、ヒポコラミド、Ｔ０９０１３１７、ＧＷ３９６５、ＳＲ９２３８およびベキサロテンが含まれる。これらのＬＸＲアゴニストは、アテローム硬化症および糖尿病のマウスモデルの処置で有効であり、一部の化合物、特にベキサロテンは脳血液関門を通過することが示された。他の薬物、例えば、そのいくつかは現在開発中のＰｓｃｋ９阻害剤は、ＬＸＲレベルに間接的に影響する。これらのいずれも、レット症候群および／または本明細書に記載される他のＭＥＣＰ２関連の疾患、障害および状態のモデルでコレステロールを調節するための、スタチンの代わりのまたは補助的なアプローチの優れた候補である。

一部の実施形態では、ＬＸＲモジュレーターは、任意のオキシステロールまたはＲＸＲアゴニストであってもよいかまたはそれを含むことができる。上記のもの以外の非限定例には、限定されずに、ヒポコラミド、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２７−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール（脳特異的）、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール（肝臓特異的）、コレステン酸およびその組合せが含まれる。ＬＸＲアゴニスト５，６−２４（Ｓ），２５−ジエポキシコレステロールおよび６アルファ−ヒドロキシ胆汁酸は、ＬＸＲアルファに選択的である。

グルコース代謝モジュレーター
グルコース代謝は、脂質、コレステロール、グルコースおよびタンパク質代謝のマスター調節因子として作用し、小分子前駆体およびエネルギーを１つの活性から別のものにシャントする、５’ＡＭＰ活性化タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）と呼ばれるタンパク質の作用によるコレステロールおよび脂質の代謝に密接不可分に関連付けられている。ＦＤＡ承認薬物メトホルミンはＡＭＰＫを活性化させ、２型糖尿病を処置するために使用される。この場合でのその一次的役割は肝臓によるグルコース生成を阻害することであるが、糖尿病患者で一般的なコレステロール関連の心臓合併症を予防することも示された。本明細書で実証されるように（図２および３を参照のこと）、Ｍｅｃｐ２突然変異体マウスは、２型糖尿病と類似したコレステロール調節不全ならびにグルコースおよびインスリン代謝の調節不全の両方を示す。したがって、本発明の一部の実施形態により、メトホルミンおよび他の関連ビグアニドクラスの薬物は、レット症候群および／または他のＭＥＣＰ２関連の疾患、障害および状態の処置において有用な薬剤である可能性がある。一部の実施形態では、２，４−ジニトロフェノール−メチルエーテル（ＤＮＰＭＥまたはＤＮＰ−ＭＥ）などのグルコース代謝モジュレーターも、Ｍｅｃｐ２関連の機能不全の１つまたは複数の症状の処置において有用であるかもしれない。

したがって、一部の実施形態では、本発明は、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態（例えば、レット症候群）を処置する方法であって、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態を患っているかまたは感受性の対象にグルコース代謝モジュレーターを投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態では、グルコース代謝モジュレーターは、ビグアニド薬、２，４−ジニトロフェノール−メチルエーテル（ＤＮＰーＭＥ）、２，４−ジニトロフェノール−エチルエーテル（ＤＮＰ−ＥＥ）、２，４−ジニトロフェノール−ビニルエーテル（ＤＮＰ−ＶＥ）、そのような化合物の誘導体、および／またはその組合せから選択される。一部の実施形態では、ビグアニド薬は、メトホルミン、プログアニル、クロルプログアニルから選択される。

ＳＲＥＢＰモジュレーター
ＳＲＥＢＰは、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素の上流であるがＡＭＰＫの下流でコレステロールおよび脂質の代謝を調節する。少なくとも１つの間接的なＳＲＥＢＰ阻害剤、ファトスタチンは、マウスおよびラットで肥満、高コレステロール血症および高血糖を効果的に予防および処置することが示されている。一部の実施形態では、ファトスタチンまたは別の間接的なＳＲＥＢＰ阻害剤は、本明細書に記載される代謝モジュレーターとして有用である。一部の実施形態では、本明細書に記載される代謝モジュレーターとして、ＳＲＥＢＰを阻害するより直接的な作用機構を有する１つまたは複数の薬剤が有用である。例えば、一部の実施形態では、ファトスタチン、ＳＲＥＢＰ１、ＳＲＥＢＰ２および／または１つまたは複数の非特異的なＳＲＥＢＰ阻害剤は、レット症候群などのＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態を患っているかまたはそれに感受性である個体で行動および／または代謝症状を改善するために利用される。

ＰＰＡＲＧモジュレーター
本発明の一部の実施形態により、ペルオキシゾーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲＧ）を標的にする薬剤は、本明細書に記載の使用のための代謝モジュレーターと考えることができる。例えば、そのいくつかはＰＰＡＲＧ活性化因子である、２型糖尿病の処置のための食品医薬品局（ＦＤＡ）承認の薬剤は、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態の処置において有用である。特に、チアゾリジンジオンは、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態の処置において有用である可能性がある。チアゾリジンジオンは、膵臓のインスリン分泌を増加させることなく血糖レベルを効果的に低下させるが、脂肪酸、ＬＤＬコレステロールおよびトリグリセリド産生を減少させることも示されているので、２型糖尿病の処置において使用される。

組合せ
本発明の一部の実施形態では、本明細書に記載される代謝経路モジュレーターは、お互いと一緒におよび／またはＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態の１つまたは複数の症状を処置する、ならびに／または療法の１つまたは複数の望ましくない副作用の発生率、頻度および／もしくは強さを低減する１つまたは複数の他の薬剤または治療モダリティと一緒に利用される。

本明細書で使用されるように、「一緒に」という語句は、対象を両方（または全て）の薬剤またはモダリティに同時に曝露させるように、１つまたは複数の他の所望の治療手段と並行して、その前またはその後に投与される薬剤またはモダリティを指す。２つまたはそれを超える薬剤またはモダリティの各々は、異なるスケジュールに従って投与されてもよい。異なる薬剤の個々の用量が同時に、または同じ組成物中で投与される必要はない。むしろ、両方の（またはより多くの）薬剤が若干の期間、対象の体に同時に存在する限り、それらは「一緒に」投与されると考えられる。

スタチンおよびエゼチミブの場合のように、異なる作用機構を有するコレステロール低下薬が一緒に使用されることは一般的である。さらに、スタチンが阻害するＨＭＧ Ｃｏ−Ａ還元酵素の生成物が、コレステロール生成だけでなく複数の生物学的経路のために必要とされるので、所望の標的でない経路を下方調節することによって引き起こされる望ましくない影響を阻止するために、スタチンはメバロネートなどの補助剤と一緒に一般的に与えられる。

本発明の多くの実施形態では、ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態の処置は、２つまたはそれを超える代謝経路モジュレーターまたは本明細書に記載される他の薬剤もしくはモダリティの組合せを含むかまたは必要とすることがある。１つの例は、ＰＰＡＲＧアゴニストまたはスタチンと組み合わせたメトホルミンであろう。あるいは、またはさらに、多くの実施形態では、１つまたは複数のＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態（例えば、レット症候群）を患っているかまたはそれに感受性である患者は、てんかんおよび活動過多などの一般的な共存症に対処するための薬剤または他の治療モダリティで処置される。実際、レット症候群でコレステロールおよび脂質調節不全に対処する主な利点は代謝プロファイルおよび運動症状の改善であるので、多くの実施形態では、本明細書に記載される代謝経路モジュレーター療法が現行の症状特異的処置を置き換えるのでなく、それらと一緒に働くと予想される。

医薬組成物
本明細書に記載される脂質および／またはコレステロール代謝をモジュレートする提供される薬剤およびモダリティは、医薬組成物との関係で利用することができる。一般に、利用される医薬組成物は、少なくとも１つの活性薬剤および少なくとも１つの薬学的に許容される担体または添加剤を含む。そのような医薬組成物は、１つまたは複数の追加の治療活性物質を任意選択で含むことができ、および／またはそれと組み合わせて投与することができる。一部の実施形態では、提供される医薬組成物は、医療において有用である。一部の実施形態では、提供される医薬組成物は、予防薬剤として有用である。一部の実施形態では、提供される医薬組成物は、治療適用において有用である。一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒトへの投与のために製剤化される。

例えば、一部の実施形態では、ここで提供される医薬組成物は、無菌の注射可能な形（例えば、皮下注射または静脈内注入に適する形）および／または注射に適する他の液体剤形で提供することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、任意選択で真空下の粉末（例えば、凍結乾燥および／または滅菌される）として提供され、それらは注射の前に水性賦形剤（例えば、水、バッファー、塩溶液など）で再構成される。一部の実施形態では、医薬組成物は、水、塩化ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、ベンジルアルコール溶液、リン酸緩衝食塩水などで希釈および／または再構成される。一部の実施形態では、粉末は、水性賦形剤と静かに（例えば、振盪しないで）混合するべきである。

一部の実施形態では、提供される医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される添加剤（例えば、保存剤、不活性の賦形剤、分散剤、界面活性剤および／または乳化剤、緩衝剤など）を含む。一部の実施形態では、提供される医薬組成物で使用するのに適当な添加剤には、例えば、所望の特定の剤形に適するものとして、１つまたは複数の薬学的に許容される溶媒、分散媒体、造粒媒体、賦形剤または他の液体ビヒクル、分散液もしくは懸濁助剤、界面活性剤および／または乳化剤、等張剤、増粘もしくは乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤などが含まれてもよい。あるいは、またはさらに、カカオ脂および／または坐剤ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および／または香料などの薬学的に許容される添加剤を利用することができる。

一部の実施形態では、適当な添加剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％純粋である。一部の実施形態では、添加剤は米国食品医薬品局に承認される。一部の実施形態では、添加剤は医薬品グレードである。一部の実施形態では、添加剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方および／または他の国際薬局方の規格を満たす。

一部の実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の保存剤を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、保存剤を含まない。

一部の実施形態では、医薬組成物は、冷蔵および／または冷凍することができる形態で提供される。一部の実施形態では、医薬組成物は、冷蔵および／または冷凍できない形態で提供される。一部の実施形態では、再構成される溶液および／または液体剤形は、再構成の後に一定期間保存することができる（例えば、２時間、１２時間、２４時間、２日間、５日間、７日間、１０日間、２週間、１カ月、２カ月またはそれより長く）。一部の実施形態では、指定された時間より長い組成物の保存は、活性薬剤の分解をもたらす。

一部の実施形態では、液体剤形（例えば、経口および／または非経口投与のための）には、限定されずに、乳剤、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤および／またはエリキシル剤が含まれる。提供される可溶性リピド化リガンド剤に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般的に使用される不活性の賦形剤、例えば水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジル安息香酸、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実、落花生、トウモロコシ、胚芽、オリーブ、ヒマおよびゴマの油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、およびそれらの混合物を含むことができる。不活性賦形剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤などのアジュバント、甘味剤、香味剤ならびに／または香料を含むことができる。非経口投与のためのある特定の実施形態では、組成物は、可溶化剤、例えばＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、アルコール、油、加工油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、重合体および／またはその組合せと混合される。液体剤形および／または再構成された溶液は、投与の前に粒子状物質および／または変色を含むことができる。一部の実施形態では、変色したかもしくは濁っている場合、および／または濾過の後に粒子状物質が残っている場合は、溶液を使用するべきでない。

一部の実施形態では、注射可能な調製物、例えば無菌の水性または油性の懸濁液は、適する分散剤、湿潤剤および／または懸濁化剤を使用して公知の方法によって製剤化することができる。無菌の液体調製物は、例えば、無毒の非経口的に許容される賦形剤および／または溶媒中の溶液、懸濁液および／または乳剤、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液であってもよい。用いることができる許容されるビヒクルおよび溶媒は、例えば水、リンガー液Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張性の塩化ナトリウム溶液である。無菌の不揮発性油は、溶媒または懸濁化媒体として従来用いられている。この目的のために、合成のモノ−またはジグリセリドを含む、任意の刺激の少ない不揮発性油を用いることができる。液体製剤の調製においてオレイン酸などの脂肪酸を使用することができる。

液体製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって、および／または使用前に無菌水または他の無菌の注射可能な媒体に溶解または分散させることができる無菌の固体組成物の形態で滅菌剤を混和することによって、滅菌することができる。

一部の実施形態では、送達後の提供される可溶性リピド化リガンド剤の効果を延長するおよび／または遅らせるために、１つまたは複数の戦略を利用することができる。

一部の実施形態では、固体剤形（例えば、経口投与のための）には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および／または顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形では、提供される可溶性リピド化リガンド剤（複数可）は、少なくとも１つの不活性の薬学的に許容される添加剤、例えばクエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム、および／または充填剤もしくは増量剤（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプンなどのデンプン；ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトールなどの糖、およびケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアラビアゴム）、保湿剤（例えば、グリセロール）、崩壊剤（例えば、寒天、Ｅｘｐｌｏｔａｂ、グリコール酸ナトリウムデンプン、アンバーライト、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ウルトラミロペクチン、オレンジピール、天然の海綿、ベントナイト、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプン、タピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩、１つまたは複数の不溶性カチオン性交換樹脂および炭酸ナトリウム）、溶液緩和剤（例えば、パラフィン）、吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール）、吸収剤（例えば、カオリンおよびベントナイト粘土）ならびに滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム）、およびそれらの混合物と混合することができる。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形は緩衝剤を含むことができる。

一部の実施形態では、類似の型の固体組成物は、ラクトースまたはミルク糖のような添加剤ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用したソフトおよび／またはハードに充填したゼラチンカプセルで、充填剤として用いることができる。錠剤、糖衣剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、腸溶コーティングおよび医薬製剤技術分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルで調製することができる。

例示的な腸溶コーティングには、限定されずに以下の１つまたは複数が含まれる：酢酸フタル酸セルロース；アクリル酸メチル−メタクリル酸コポリマー；酢酸コハク酸セルロース；フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース；酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（酢酸コハク酸ヒプロメロース）；ＨＰ５５；ポリ酢酸フタル酸ビニル（ＰＶＡＰ）；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０Ｄ；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｓ；Ａｑｕａｔｅｒｉｃ；メタクリル酸メチル−メタクリル酸コポリマー；メタクリル酸コポリマー、酢酸セルロース（ならびにそのコハク酸およびフタル酸バージョン）；マレイン酸スチロールコポリマー；ポリメタクリル酸／アクリル酸コポリマー；フタル酸ヒドロキシエチルエチルセルロース；酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース；酢酸テトラヒドロフタル酸セルロース；アクリル樹脂；セラックおよびそれらの組合せ。一部の実施形態では、腸溶コーティングは少なくともｐＨ５．０まで実質的に不透過性である。

一部の実施形態では、固体剤形は乳白剤を任意選択で含むことができ、それらが、腸管のある特定部位（例えば、十二指腸、空腸または回腸）で、任意選択で遅延的に、提供される可溶性リピド化リガンド剤（複数可）だけを、または優先的に放出する組成のものであってもよい。使用することができる埋封組成物の例には、重合物質およびワックスが含まれる。類似の型の固体組成物は、ラクトースまたはミルク糖のような添加剤ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用したソフトおよびハードに充填したゼラチンカプセルで、充填剤として用いることができる。

一部の実施形態では、本発明は、局所および／または経皮送達のための組成物を、例えば、クリーム剤、リニメント剤、軟膏剤、油剤、フォーム剤、スプレー剤、ローション剤、液剤、散剤、増粘ローション剤またはゲル剤として提供する。特定の例示的なそのような製剤は、例えば、皮膚軟化剤、栄養ローション型乳剤、クレンジングローション、クレンジングクリーム、皮膚乳液、皮膚軟化ローション、マッサージクリーム、皮膚軟化クリーム、化粧基剤、口紅、顔パックもしくは顔ゲル、洗浄剤、例えばシャンプー、リンス、ボディクレンザ、ヘアトニックまたは石鹸、または皮膚科の組成物、例えばローション剤、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、リニメント剤、パッチ剤、デオドラント剤もしくはスプレー剤などの製品として調製することができる。

本明細書に記載される医薬組成物は、公知であるかまたは今後薬学分野で開発される任意の方法によって調製することができる。一部の実施形態では、そのような調製方法は、有効成分を１つまたは複数の添加剤および／または１つまたは複数の他の副成分と関連させ、次に、必要に応じておよび／または望ましい場合、生成物を所望の単一用量または複数用量単位に成形および／またはパッケージするステップを含む。

本発明による医薬組成物は、バルクで、単一の単位用量としておよび／または複数の単一の単位用量として調製、パッケージおよび／または販売することができる。本明細書で使用されるように、「単位用量」は、有効成分の所定量を含む医薬組成物の個別の量である。有効成分の量は、対象に投与されるだろう用量および／またはそのような用量の都合のよい割合、例えばそのような用量の１／２もしくは１／３に一般に等しい。

本発明による医薬組成物中の有効成分、薬学的に許容される添加剤および／または任意の追加の成分の相対量は、処置対象の個性、サイズおよび／もしくは状態によって、ならびに／または組成物が投与される経路によって異なることができる。例として、組成物は、０．１％から１００％（ｗ／ｗ）の有効成分を含むことができる。

本発明の医薬組成物は、所望の特定の剤形に適するものとして、１つまたは複数の溶媒、分散媒体、賦形剤または他の液体ビヒクル、分散液もしくは懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘もしくは乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤などをさらに含むことができる。Remington's The Science and Practice of Pharmacy、第２１版、A. R. Gennaro（Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD、２００６年）は、医薬組成物の製剤化において使用される様々な添加剤およびその調製のための公知の技術を開示する。任意の従来の添加剤媒体が、例えば望ましくない生物学的作用を起こすかさもなければ医薬組成物の任意の他の構成要素（複数可）と有害な相互作用を起こすことによって物質またはその誘導体と相容れない場合以外は、その使用は、本発明の範囲内にあると考える。

投与経路
一部の実施形態では、提供される薬剤は、任意の適当な送達経路のために製剤化することができる。一部の実施形態では、提供される薬剤は、限定されずに、筋肉内（ＩＭ）、静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）、皮下（ＳＱ）、気管支点滴注入および／もしくは吸入；口内、腸内、皮膚間、動脈内（ＩＡ）、胃内（ＩＧ）、髄内、鼻腔内、クモ膜下、気管内点滴注入（による）、心室内、関節内、粘膜、鼻内スプレー、および／またはエアゾール、経口（ＰＯ）、口内スプレーとして、直腸（ＰＲ）、舌下；局所および／または経皮（例えば、ローション剤、クリーム剤、リニメント剤、軟膏剤、散剤、ゲル剤、ドロップ剤などによる）、経皮、膣内、障子体（vitreal）、および／または門脈カテーテル；および／またはそれらの組合せを含む送達経路のために製剤化することができる。一部の実施形態では、本発明は、直接的な注射（例えば、脳などの特定の組織への）による提供される薬剤の投与の方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、静脈内投与による提供される薬剤の投与の方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、経口投与による提供される薬剤の投与の方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、皮下投与による提供される薬剤の投与の方法を提供する。

一部の実施形態では、薬剤は、組織特異的に投与される。一部の実施形態では、薬剤は、脳に直接的に投与される。

投薬
様々な用量のいずれも、様々な実施形態に適合すると考える。特定用途での適切な用量は、健全な医学的判断に従って判定されると考える。様々な薬剤ならびに力価、相対的生物学的利用能、患者体重、有害副作用の重症度および好ましい投与様式などの評価因子から選択することによって、実質的な望ましくない毒性を引き起こさず、なお特定の対象の処置に有効である、有効な予防的または治療的処置レジメンを計画することができる。任意の特定用途のための有効量は、投与される本発明の特定の薬剤、対象のサイズおよび／または疾患もしくは状態の重症度などの因子に従って異なることができる。

一部の実施形態では、最大用量、すなわち、健全な医学的判断による最高安全用量を使用するのが好ましい。一部の実施形態では、提供される薬剤の適当な全身レベルを達成するために、１日につき複数の用量が有用であると考える。適当な全身レベルは、例えば、対象における薬剤のピークのまたは持続的血漿レベルを測定することによって判定することができる。

一部の実施形態では、ヒト対象については、薬剤の日用量は１日につき約０．０１ｍｇ／ｋｇから１日につき１，０００ｍｇ／ｋｇ（例えば、約１．５〜３０ｍｇ／ｋｇ／日）である。具体的な用量は、局所であれ全身であれ所望の薬物レベルを達成するように、投与様式によって適切に調整することができる。一部の実施形態では、１日に複数の用量は、薬剤の適当な全身レベルを達成すると考える。提供される薬剤は、制御放出および／または持続放出の形態に製剤化することができる。

一部の実施形態では、薬剤は、ＦＤＡ承認薬であるかまたはそれを含む。一部の実施形態では、そのような薬剤は、薬物のＦＤＡ承認の投薬レジメンに従って投与される。一部の実施形態では、そのような薬剤は、ＦＤＡ承認の投薬レジメンと異なる投薬レジメンに従って投与される。一部の実施形態では、そのような薬剤は、ＦＤＡ承認の投薬レジメンと比較してより低い用量、頻度のより低い投薬スケジュールおよび／またはより少ない全用量の１つまたは複数で投与される。一部の実施形態では、そのような薬剤は、ＦＤＡ承認の用量の１０倍低い用量からＦＤＡ承認の用量の１０倍高い用量で投与される。

代謝経路モジュレーターの同定および／または特徴付け
一部の実施形態では、本発明は、例えば異常なＭＥＣＰ２と関連する疾患、障害または状態の処置において使用するための、有用な代謝経路モジュレーターを同定および／または特徴付けるための系を提供する。特に、本発明は、脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路の、特に脳の脂質および／またはコレステロール経路のモジュレーターの同定および／または特徴付けのための系を提供する。

一部の実施形態では、本発明は、代謝経路、詳細には脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路、最も詳細には脳の脂質および／またはコレステロール代謝（例えば、生合成）経路の１つまたは複数の特定の構成要素に及ぼすそれらの効果に基づいて、薬剤を同定および／または特徴付けをする。一部の特定の実施形態では、本発明は、スクアレンモノオキシゲナーゼとしても知られるスクアレンエポキシダーゼ（Ｓｑｌｅ）、またはＳｑｌｅが関与する経路の他の構成要素に及ぼすそれらの効果に基づいて、薬剤を同定するおよび／または特徴付ける。一部の特定の実施形態では、本発明は、２４Ｓ−ＯＨＣの存在、レベル、活性および／または形態に及ぼすそれらの効果に基づいて、薬剤を同定するおよび／または特徴付ける。

一部の実施形態では、本発明は、脂質および／またはコレステロール代謝に及ぼす１つまたは複数の薬剤またはモダリティの効果（複数可）を、１つまたは複数のそのような薬剤またはモダリティに曝露させた対象で２４ＳＯＨＣのレベルを評価することによって評価する方法をさらに提供する。一部の実施形態では、２４ＳＯＨＣの評価は、対象からの血液試料を使用して行われる。一部の実施形態では、２４ＳＯＨＣの評価は、血液試料以外の生体試料（例えば、脳脊髄液）を使用して行われる。２４ＳＯＨＣの検出／評価は、限定されずに、抗体ベースの検出（例えば、ＥＬＩＳＡ）、放射能標識、リガンド結合アッセイ、質量分析、高圧液体クロマトグラフィーおよび／または酵素活性アッセイを含む任意の適する方法論によることができる。

一部の実施形態では、本発明は、１つまたは複数のそのような代謝経路構成要素を含む系と接触させ、１つまたは複数の指標（例えば、関連する経路（複数可）の構成要素、生成物および／またはマーカー）の存在、レベル、活性および／または形態に及ぼすそれらの影響を評価することによってそのような薬剤を同定および／または特徴付けるための系を提供する。一部の実施形態では、提供される系は、完全および／または活性な代謝経路（例えば、脂質またはコレステロール生合成経路）を含む。

一部の実施形態では、提供される同定および／または特徴付けの系は、１つまたは複数の細胞、組織および／または生物体を含む。一部の実施形態では、そのような系は、マウスの細胞、組織および／または生物体であるかまたはそれらを含む。一部の実施形態では、そのような系は、ＭＥＣＰ２の発現および／または活性の低減を示す（例えば、遺伝子突然変異および／または化学的改変の結果）、１つまたは複数のマウスの細胞、組織および／または生物体であるかまたはそれらを含む。

本発明の具体的な実施形態により、潜在的モジュレーター薬剤が認知能力、運動機能および／または生理的パラメーターを変化させる程度を判定するために、ある特定の表現型分析（症状）評価が確立された。一部の実施形態では、モデル生物体（例えば、操作されたマウス）が利用される。一部の実施形態では、ＭＥＣＰ２欠損マウスが利用される。一部の実施形態では、結果は、ＭＥＣＰ２欠損が例えばＳｑｌｅの突然変異によって補償される参照マウスと比較される。

一部の実施形態では、潜在的モジュレーターの効果は、雌細胞（例えば、雌マウスの）の中またはその上で評価される。近年の刊行物は、雌での救済程度を我々が評価することも可能にするある特定のアッセイで、ヘテロ接合Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／＋雌が好成績をあげることを示す（SamacoらHum Mol Genet２２巻：９６〜１０９頁、２０１３年）。

一部の実施形態では、潜在的モジュレーターの効果は、聴覚驚愕応答（ＡＳＲ）、驚愕応答の前パルス阻害（ＰＰＩ）、オープンフィールド活動、３チャンバー社会的交流および／またはそれらの組合せのための行動アッセイ（例えば、マウスで）を使用して評価される。一部の実施形態では、体重増加および全体の健康に及ぼす潜在的モジュレーターの効果が評価される（例えば、周期的に、例えば毎日、毎週、隔週または毎月）。

一部の実施形態では、潜在的モジュレーターの効果は、呼吸異常に関して評価される。例えば、７週時に雌雄のマウスで実行されるＢｕｘｃｏ全身プレチスモグラフィーチャンバーでのメタコリンチャレンジ分析は、呼吸異常を正確に評価し、この欠陥もスタチン薬の使用で改善される。

下の表は、目的の薬剤を同定するおよび／または特徴付けるために本発明に従って利用することができる、代表的な時間経過および例示的な順序を示す。

一部の実施形態では、血清化学、ならびに／または脳および肝臓の脂質が評価される。詳細には、脂質モジュレーションの証拠が明白である場合は、腹腔内グルコース耐性試験（ＩＰＧＴＴ）、インスリン耐性（ＩＴＴ）および熱量測定を含む代謝状態のための追加のアッセイを実行することができる。

一部の実施形態では、潜在的モジュレーターの効果（複数可）は、行動試験、認知試験、運動機能試験、１つまたは複数の生理的パラメーターの試験およびそれらの組合せの１つまたは複数により評価される。

一部の実施形態では、関連する行動試験は、聴覚驚愕応答試験、驚愕応答試験の前パルス阻害、オープンフィールド活動試験、３チャンバー社会的交流試験、ホームケージ活動試験および／またはそれらの組合せから選択される。

一部の実施形態では、関連する運動機能試験は、呼吸チャレンジ、ロータロッド試験、オープンフィールド歩行活動試験、歩行を監視するＤｉｇｉＧａｉｔ系（Ｍｏｕｓｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｓ製）およびそれらの組合せから選択される。

一部の実施形態では、１つまたは複数の生理的パラメーターの試験は、二重Ｘ線吸収測定（ＤＥＸＡ）試験、メタコリンチャレンジによる全身プレチスモグラフィー呼吸試験、グルコース耐性試験、インスリン耐性試験、血清コレステロール試験、熱量測定試験およびそれらの組合せから選択される。

特記しない限り、本明細書で指摘される全ての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれることが具体的および個々に示されているかのように、参照により本明細書に完全に組み込まれる。紛争の場合、本明細書のあらゆる定義を含め、本出願が支配する。

材料および方法：特記しない限り、以下の実施例では下の材料および方法が利用される。

動物実験
動物で実行された全ての実験は、米国国立衛生研究所によって制定されたガイドラインに従って、Ｂａｙｌｏｒ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＭｅｄｉｃｉｎｅのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。薬物処置実験は、遺伝子型および処置群に関して盲検化された。特記しない限り、全ての動物実験は、Buchoveckyら、A genetic suppressor screen in Mecp2 mice implicates cholesterol metabolism in Rett Syndrome、２０１３年、Nat. Genet.、４５巻（９号）：１０１３〜１０２０頁に詳述され、ここで要約される、条件およびプロトコールに従って実施された。簡潔には、スタチンで処置した全ての動物は、１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙまたは１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／＋およびそれらの性別をマッチさせた野生型の同腹仔であった。特記しない限り、マウスは１３時間および１１時間の明暗が交互する部屋の中で穂軸敷料を有するプラスチック製のＬａｂ Ｐｒｏｄｕｃｔｓケージに収容し、酸性化水およびＨａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ ２９２０Ｘ食餌（１９．１％タンパク質、６．５％脂肪；０％コレステロール）を無制限に提供した。処置群につき６匹のＭｅｃｐ２−ヌルマウスを含んだフルバスタチンによる試験的研究の後に、実験者を処置群に盲検化して全ての行動評価を実施した。他のスタチン処置については、実験者を処置群に盲検化して全ての行動評価を実施した。全ての化学的アッセイは、遺伝子型および処置群を盲検化して実施した。特記しない限り、４〜６時間の絶食後に午後の２時間ウィンドウの間に組織および血液を採取した。脳分析は、脳梁、線状体、視床、視床下部および海馬を含有する皮質下領域で実施した。

Ｑ−ＰＣＲ分析
製造業者の使用説明書に従って、脳ＲＮＡはＲＮＡｅａｓｙ脂質組織ミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用し、肝臓ＲＮＡはＴｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して単離した。製造業者の使用説明書通りに、肝臓ＲＮＡは、３７℃で１時間、１ＩＵ ＤＮアーゼ（Ａｍｂｉｏｎ Ｉｎｃ．）で処置した。第１の鎖の相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）は、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ合成系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造業者の使用説明書通りに使用して５０００ｎｇの総ＲＮＡから合成した。ＡＢＩ ７９００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＣＡ、ＵＳＡ）により、ＲＴ−ＰＣＲを各試料について３反復で実施した。Ｐｒｉｍｅｒ３ソフトウェアを使用して公開されたｍＲＮＡ配列に対してＱＲＴ−ＰＣＲのための遺伝子プライマーを設計し、統合ＤＮＡ技術（Ｉｏｗａ、ＵＳＡ）によって合成した。プライマー配列は、請求次第提供される。ＡＢＩ ７９００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＣＡ、ＵＳＡ）により、ＱＲＴ−ＰＣＲを３反復で実施した。反応は、１０ｎｇの総ＲＮＡからのｃＤＮＡ、０．１μＬのフォワードおよびリバースプライマー、５μＬのＰｏｗｅｒＳＹＢＲ（登録商標）グリーンマスターミックス、ならびに水を１０μＬの最終容量まで含有した。ＰＣＲ条件：９５℃で１０分間、９５℃で１５秒間を４０サイクル、６０℃で６０秒間。解離曲線およびアガロースゲル電気泳動によって単一の生成物増幅を確認した。遺伝子発現はＲｐＬ１９（Ｌ１９）内部負荷対照に標準化し、生の２^{−（ΔΔＣＴ）}として、またはＷＴに対するＭｅｃｐ２／Ｙ発現として表される２^{−（ΔΔＣＴ）}方法を使用して分析した。

マウスの脳および肝臓試料のタンデム型質量分析
上と同じに処置したマウスの組織からの抽出後に、以前に公開されたプロトコールに従ってタンデム型質量分析によってコレステロール中間体を測定した（McDonaldらJ Lipid Res５３巻：１３９９〜１４０９頁、２０１２年）。

ｉｎ ｖｉｖｏコレステロール合成分析
ｉｎ ｖｉｖｏコレステロール合成研究のために、１２時間のオン／オフ明暗サイクルの暗期遅くに給餌状態のマウスから試料を得た。分析の前にＰ３８から開始して、これらのマウスを個々のハウジングおよびＨａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ ７００１齧歯動物固形飼料（低コレステロール０．０２ｗ／ｗ％、低脂肪４ｗ／ｗ％）に順応させた。試料採取時のマウスの年齢は、Ｐ５４〜５６であった。公開された通り（XieらJ Lipid Res４４巻：１７８０〜１７８９頁、２００３年）、腹腔内注射の後、１００ｍＣｉ^３ Ｈ_２Ｏの取込みの後、けん化した組織からコレステロール合成を評価した。

薬物投与
２０ｇマウスのための所望の用量が１００μｌで与えられ、皮下に投与されるように、フルバスタチン（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ）を無菌の超純水に溶解した。５、６および７週時に単一の３ｍｇ／ｋｇの週用量を雄マウスに与え、次に、８週齢から開始して３ｍｇ／ｋｇの週（Ｍ、Ｗ、Ｆ）用量を３回投与した。雌マウスも３ｍｇ／ｋｇ用量を受けたが、６週齢から開始して週１回だけ処置した。ロバスタチン（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の調製は、製品情報ガイドライン通りにエタノールでの活性化と続くｐＨ７．２への調整を必要とした。活性化保存溶液をエタノールで注射用量の２０倍に希釈し、最高１カ月の間−２０℃で保存した。２０ｇマウスのための所望の用量が１００μｌで与えられるように、注射当日に無菌食塩水で保存溶液を希釈することによって１倍の使用液を調製した。雄マウスは、５週齢から開始して１．５ｍｇ／ｋｇ用量を週２回、皮下に注射した。

加速ロータロッド作業
加速回転ロッド（ロータロッド）（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ）を使用して、運動能力の態様を測定した。８週時（雄）または１２週時（雌）に、マウスを毎分４回転数の速度で回転する溝付きのロッドの上に置いた。５分の試験の間に、最大毎分４０回転数まで回転速度は着実に増加する。各マウスがロッドの上に留まることができる時間を８試験について記録し、各４試験は２日連続にわたり、試験の間隔は最低３０分であった。マウスがロッドから落下するとき、連続２回転ロッドと一緒に回転するとき、または５分間を無事完了するときに試験は終わる。

オープンフィールド歩行活動
Ｖｅｒｓａｍａｘ Ａｎｉｍａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｍｏｎｉｔｏｒｓを使用してオープンフィールド歩行活動を評価した。下向き光軸（２０〜２５ルクス）および人工ホワイトノイズ（５５〜６０ｄＢ）を有する閑静な部屋で記録をとった。各マウスをオープンフィールドチャンバーの中央に置き、活動を３０分の間記録した。これらの測定は、１０週時（雄）または５カ月時（雌）に最後の注射の２４時間後にとった。

前パルス阻害アッセイ
前パルス阻害は、ＳＲ−Ｌａｂ Ｓｔａｒｔｌｅチャンバー（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して測定した。１５分間の試験の間に、聴覚驚愕応答（５０デシベル）を導き出すように、ならびにデシベル（ｄＢ）パルス投与の前によりソフトなパルス（４、８または１２デシベル）が先行するときにその応答を軽減するように設計された、ランダムな一連の聴覚パルスまたはパルスの組にマウスを曝露させる。試験全体の間に、あらゆる可能な構成に各マウスを６回曝露させる。

脂質測定
ガス液体クロマトグラフィーの前に、ＣＨＣｌ_３：ＣＨ_３ＯＨ抽出と続いてＮ_２圧下での有機相の乾燥を使用して組織から脂質を単離した。次に、５００μｌのＰＢＳ−５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００に脂質を再溶解した。血清コレステロールは、Ｃｏｂａｓ Ｍｉｒａ臨床化学アナライザーで測定した。

統計分析
カプラン−マイヤー分析と続くログランク比較によるＳＰＳＳを使用して生存曲線を比較した。対応のない両側スチューデントのｔ検定を使用するＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ５で、２つの群（Ｍｅｃｐ２突然変異体と比較した野生型）の間の統計比較を実施した。Ｍｅｃｐ２突然変異体群は野生型と比較して増加する変動性を一般的に示したので、等分散性は仮定しなかった。多重比較を必要とする統計的検定は、ＳＰＳＳで分析した。ロータロッドデータを除いて、複数の群の間の比較は一元配置ＡＮＯＶＡによって分析し、球形度は仮定しなかった。２つを超える遺伝子型を比較するときにはボンフェローニ調整を適用し、スタチン処置群をビヒクル対照と比較するためにダネット事後検定を使用した。ロータロッドデータは、反復測定ＡＮＯＶＡを使用して分析した。

代謝アッセイ
雄では４および８週齢で、雌では１２および２４週齢で腹腔内グルコース耐性試験（ＩＰＧＴＴ）を実施した。４時間の絶食時間の後、イソフルランで動物を軽く麻酔にかけた。小さい尾の切断を実施し、０時点の血液を採取した。製造業者の使用説明書通りに、処置の前に、次にグルコース注射から１５、３０、６０および１２０分後に（ｔ＝１５、ｔ＝３０、ｔ＝６０およびｔ＝１２０）、ＡｌｐｈａＴＲＡＫ Ｂｌｏｏｄ Ｇｌｕｃｏｓｅ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇシステム（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＩＬ、ＵＳＡ）を使用して血糖試料を採取した。各マウスは、グルコース（２ｇ／ｋｇ体重）を腹腔内に注射した。

腹腔内インスリン耐性試験（ＩＰＩＴＴ）は、ＢＣＭのＴｈｅ Ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｐ３０ ＤＫ０７９６３８）によって実施された。簡潔には、４時間絶食させた後、マウスにインスリン（０．７５ミリ単位／ｇ体重）を投与し、０、１５、３０、６０および１２０分後にグルコースレベルを得た。

呼吸代謝機能はＯｘｙｍａｘ Ｄｅｌｕｘｅ Ｓｙｓｔｅｍの間接熱量計等流８チャンバーシステム（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ、Ｏｈｉｏ）を使用して評価し、Ｏｘｙｍａｘ Ｗｉｎｄｏｗｓ Ｖ３．３２ソフトウェアを使用して分析した。マウスは、３時間の明期順応期間（１２：００〜１５：００）で開始し、続いて４時間の明期（１５：００〜１９：００）、１２時間の暗期（１９：００〜０７：００）および最低５時間の明期（０７：００〜１２：００）が連続した２４時間の間、熱量測定ケージに個々に収容した。累積食物摂取、温度、酸素消費量および二酸化炭素発生量を測定した。これらのデータから、呼吸交換率およびエネルギー消費を導いた。

（実施例１）
ＲＴＴのための遺伝子標的の同定および特徴付け
本実施例は、レット症候群の広く認められたマウスモデルであるＭｅｃｐ２ヌルマウス（「Ｍｅｃｐ２マウス」）で実施され、ＲＴＴ療法のある特定の新しい標的を同定した遺伝子サプレッサースクリーニングを記載する。

「サプレッサー」遺伝子（すなわち、突然変異したときに、特定の「疾患」遺伝子の欠損と関連する疾患、障害または状態の症状の悪化を改善または阻止する遺伝子）を同定することは、疾患遺伝子がどのように機能するか、およびそのような機能の喪失の結果として関連する疾患、障害または状態がどのように起こるかについて理解する方向へ努力を集中することを助ける。さらに、そのようなサプレッサー遺伝子は、症状の進行を反転させるかまたは阻止するために標的にすることができる新しい経路を明らかにすることができる。

本実施例は、Ｍｅｃｐ２マウス（具体的には、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得たＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}マウス）でＲＴＴの症状を抑制する、スクアレンモノオキシゲナーゼとしても知られるスクアレンエポキシダーゼ（Ｓｑｌｅ）でのナンセンス（ＳＴＯＰ）サプレッサー突然変異の同定を実証する（図１を参照のこと）。Ｓｑｌｅは、コレステロール合成での律速酵素をコードする。したがって、本実施例は、ＲＴＴ療法のための適当な標的としてのコレステロール生合成経路を同定する。

詳細には、本実施例は、ゲノムの多くの遺伝子を同時に変化させる強力な突然変異原でＭｅｃｐ２ヌルマウスに突然変異を起こさせた「修飾因子」遺伝子スクリーニングを記載するが、わずかな突然変異だけが現存するＭＥＣＰ２破壊に関連する表現型を変化させると予想される。具体的には、適当なレベルの変異原性力を提供することが知られている化学物質であるスーパー突然変異原Ｎ−エチル−Ｎ−ニトロソ尿素（ＥＮＵ）で、野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄マウスに突然変異を起こさせた（Justice Nat Rev Genet１巻：１０９〜１１５頁、２０００年）。ＥＮＵは、点突然変異を一般的に引き起こす。ＥＮＵによる突然変異誘発の可能な遺伝的結果には、機能の喪失、機能の獲得、超活性および部分的活性のコード領域突然変異、ならびに非コードＲＮＡおよび調節突然変異が含まれる。突然変異は、配列決定によって同定された。

マウスの遺伝子スクリーニングは、未知の遺伝子での任意の突然変異が症状の救済を付与することができる、ランダムな化学的突然変異誘発スクリーニングを利用した。以降の遺伝子の同定は、遺伝および配列決定研究を含んだ。ＥＮＵ処理Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ雄は、雌の１２９．Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｒｄ}／＋マウスと交配した（この系統は、１２９Ｓ６／ＳｖＥｖＴａｃで類遺伝子性の機能喪失系として維持されている）。離乳時に無症状の第一世代（Ｇ_１）の雄子孫を、突然変異体Ｍｅｃｐ２の存在について遺伝子タイピングし、神経学的症状を救済し、おそらく長命をもたらすであろう優性突然変異による疾患表現型の抑制について検査した。神経学的欠損の救済および生存の増加について、ヌルＭｅｃｐ２突然変異対立遺伝子を有する６７９匹の雄をスクリーニングした。５つのサプレッサーの間で、スクリーニングは、ＭＥＣＰ２突然変異体マウスでコレステロール代謝を改変することによって症状を抑制する、Ｓｑｌｅ突然変異を同定した。追加の３７００生殖体がスクリーニングされる。系での症状改善は、突然変異系につき最高３００匹の子孫の繁殖および評価によって確認される。

予備スクリーニングでは、マウスでのＭＥＣＰ２症状の５つのサプレッサーが同定された。データはある特定の代謝経路をＲＴＴと結びつけ、代謝障害を処置するために開発された薬物がＲＴＴおよび／またはＭＥＣＰ２関連の他の障害の症状を改善する可能性があることを示唆した。

目的の１つの特定のサプレッサー突然変異Ｓｕｍ３は、スクアレンエポキシダーゼ（Ｓｑｌｅ）の終止コドン突然変異であると判定された（BuchoveckyらNature Genetics、印刷中２０１３年）。Ｓｑｌｅは、コレステロールの委託生産における最初の酸素化反応を触媒する。コレステロールレベルは、その両方はコレステロールホメオスタシスのために重要である、独立した機構によるＳＱＬＥおよびＨＭＧ Ｃｏ−Ａ還元酵素（ＨＭＧＣＲ）の活性に影響を及ぼすためにフィードバックする（YamamotoおよびBloch J Biol Chem２４５巻：１６７０〜１６７４頁、２００８年；GillらCell Metab１３巻：２６０〜２７３頁、２０１１年）。Ｓｑｌｅは広く発現され、その一次生成物２，３−オキシドスクアレンは、ラノステロール合成酵素（Ｌｓｓ）によってラノステロールに直ちに環化される一過性の中間体である（CoryらJ Am Chem Soc８８巻：４７５０〜４７５１頁、１９６６年）。ＳＱＬＥは、進化の全体を通じてよく保存されている。マウスおよびヒトのタンパク質は、８４％同一である。

Ｍｅｃｐ２ヌル突然変異体の脳での高いコレステロール生合成は、神経性機能不全に寄与する可能性がある。終止コドン突然変異は、救済を付与する経路を下方調節する可能性が高い。本明細書で提供されるデータは、コレステロール代謝がレット症候群のマウスモデルの脳および肝臓で破壊されることを初めて示した。２つのＭｅｃｐ２ヌル対立遺伝子、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}およびＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｊａｅ}の脳および肝臓で、コレステロール代謝をＱ−ＲＴ−ＰＣＲ、ガス液体クロマトグラフィー、質量分析およびコレステロール合成の定量化（Xieら２００３年）によって評価した。Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙマウスが最小限の症状を示すときは、ヌル脳でＣｙｐ４６ａ１の発現は既に増加しており（野生型の３８倍；ｐ＞０．０５）、疾患の初期でのコレステロール代謝回転のより高い必要性を示す。

驚くことに、中等度の症候的なマウスの脳でコレステロール合成は組織１グラムにつき２３％減少し、多くの活動状態での様々な細胞型の存在を考慮すると、それは異常である。興味深いことに、１グラムあたりの脳のコレステロール濃度は、より低い新規合成にもかかわらずわずかに増加した。Ｃｙｐ４６ａ１−／−は、減少した脳コレステロール合成を示す唯一の他のマウス突然変異体であるが、それは１グラムの組織あたりのコレステロール濃度および脳質量に変化はない（LundらJ Biol Chem２７８巻：２２９８０〜２２９８８頁、２００３年）。Ｃｙｐ４６ａ１−／−の分析は、神経学的機能のための脳コレステロール代謝回転の重要性を実証した。コレステロール代謝回転は、学習およびシナプスの可塑性のために必須であるＳＱＬＥ上流のＨＭＧＣＲの生成物であるゲラニルゲラニオールを生成するために必要とされる可能性があり、シナプスでのニューロンと星状神経膠細胞の間の相互作用にとって重要であるかもしれない。したがって、本開示は、ニューロンでのコレステロール代謝の調節不全が、潜在的にＭｅｃｐ２ヌル雄での症状の発達への主要な寄与因子であると立証する。コレステロール代謝回転の不全は、非細胞自律的なＲＴＴ症状の軽減への神経膠特異的Ｍｅｃｐ２発現の寄与を説明することができる（BallasらNat Neurosci１２巻：３１１〜３１７頁、２００９年）。

雌雄Ｍｅｃｐ２ヌルマウスでは、異脂肪血症にはメタボリックシンドロームが付随する。Ｍｅｃｐ２ヌル異脂肪血症表現型が代謝疾患につながるかどうか判定するために、代謝および内分泌のチャレンジ実験を実行した。４時間、６時間および１６時間絶食させたＭｅｃｐ２マウスの基礎グルコースレベルは野生型対照と有意に異ならず、Ｍｅｃｐ２マウスが高血糖性でないこと、したがって糖尿病でないことを示唆する。しかし、Ｍｅｃｐ２マウスは腹腔内グルコース耐性試験（ＩＰＧＴＴ）の間のグルコースのボーラス投与への感受性が低下し、インスリンを生成する膵臓の内在性の無能力またはインスリン作用への組織の感受性の低下を示す。４週齢という早い時期に、グルコースチャレンジの後の曲線下面積（ＡＵＣ）の有意な増加から明白であるように、ＭＥＣＰ２ヌル雄マウスはグルコース耐性の障害を示し、それは８週齢でより顕著であった（Ｐ＝０．００３；図３）。ＭＥＣＰ２マウスはインスリンの外因性ボーラスに応答して血液からグルコースを消去する能力がより低く、それらがインスリン抵抗性であることを示す。したがって、ＭＥＣＰ２マウスで観察されたグルコース耐性は、膵臓の欠損ではなくインスリン作用への感受性の低下から生じる可能性がある。正常な膵臓機能を支持するように、ＭＥＣＰ２マウスは、０時間、６時間および２４時間の絶食後の血液中に同等のレベルのケトン体を有する。給餌および活動行動に基づき、脂質ホメオスタシスは日周的に調節される。夜間のマウスが不活発で摂食量が少ないとき、日中は、脂質の合成および隔離に関与する遺伝子は抑圧される。これは、正常血糖を維持するために、肝臓の代謝前駆体のプールが糖新生の方へ転じることを可能にする。夜間は、マウスが活動的で摂食しているとき、脂質生成経路に関与する遺伝子が発現され、糖新生転写産物の発現を直接的にもたらすことなく、無関係な代謝産物のトリグリセリドとしての保存を促進する。エネルギー消費は、間接熱量測定によって検査した。ＭＥＣＰ２ヌル雄マウスは、活動期間中はグルコースに優先して脂肪をエネルギー源として使用し、グルコースを使用するそれらの能力が損なわれることを示唆し、メタボリックシンドロームの徴候である。

（実施例２）
コレステロール生合成モジュレーターによるマウスのＲＴＴ様症状の処置
本実施例は、スタチンによるＭＥＣＰ２突然変異体マウス（本明細書に記載されるように、確立されたＲＴＴモデルである）の処置が、運動症状を改善して寿命を延ばすことを実証する。本実施例は、ＭＥＣＰ２雌雄マウスの脳および肝臓で脂質の異常な合成および沈着を改変することによって形質改善が起こることをさらに実証し、それによって、そのような異常な合成および沈着がＲＴＴ関連の代謝欠陥の一部または全部を引き起こすことを立証する。したがって、本実施例は、雌雄マウスで異常脂質沈着を軽減し、運動症状を改善するために、スタチン薬を使用することができることを立証する。この実施例を含む本明細書を読む当業者は、ある特定の代謝障害の処置で有効な化合物が本明細書に記載されるような使用のための代謝モジュレーターであるとの原理をそれが立証することを理解する。コレステロール低下薬によって助けることができる潜在的患者母集団は、ＭＥＣＰ２の突然変異をもつ個体、または、ＭＥＣＰ２が動員するかゲノムに固着させる複合体の投薬量、機能または局在化を変化させる突然変異をもつ個体である。

本実施例は、スタチンを含むコレステロール低下薬が、雌雄のマウスでＭＥＣＰ２突然変異の症状を緩和することを具体的に実証する。試験化合物は以下を含んだ：１）フルバスタチン；２）シンバスタチン、３）ロバスタチンおよび４）アトルバスタチン。症状救済に及ぼすそれらの効果を試験するために、雌雄マウスに齧歯動物でのそれらの公表された有効投薬量と同等であるかまたは１０倍高い、異なる用量で薬物を投与した。薬物は、肝臓代謝をバイパスするために皮下に投与した。我々が知る限り、レット症候群またはＭｅｃｐ２の突然変異に関連する任意の他の疾患、障害もしくは状態を処置するために、そのような薬物が以前に使用されたことはない。

形質改善の結果は、体重および体脂肪測定によって、ならびに神経学的および呼吸活動および健康状態の検査によって評価した（図６）。見られる通り、フルバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチンおよびアトルバスタチンを含むスタチン薬は、運動形質および寿命の異なる程度の救済を付与し、フルバスタチンおよびロバスタチンが雄マウスで最良の救済を付与した（図４）。スタチン薬の投与は、脳コレステロール合成への有益な影響、ならびに肝臓での脂質蓄積の緩和をもたらした。

スクアレンシンターゼ（（Ｅ）−２−［２−フルオロ−２−（キヌクリジン−３−イリデン）エトキシ］−９Ｈ−カルバゾールモノヒドロクロリド）またはスクアレンエポキシダーゼ（１−（エチルスルホニル）−２−ピペリジルエタン）を標的にする２つを含む様々な他の薬物が、症状を有意に改善しなかったことに留意する価値がある。しかし、これらの薬物の有効な用量および投与経路はスタチン薬に比べて確立されておらず、より新しい化合物も適当な投薬量でコレステロールを効果的に低下させることを可能にしている。ＭＥＣＰ２マウスの欠損がコレステロールおよび脂質の貯蔵に影響するので、その経路のさらなる上流でのＨＭＧＣＲのモジュレーションがより有効かもしれない。これは、この修飾因子が、形質の最良の改善を付与するＳｑｌｅでのランダムな突然変異なしで薬物ターゲッティング可能な経路を指し示したことを示唆する。

スタチン薬は、肝臓での脂質蓄積を阻止することによって、および脳でのコレステロール合成を維持することによって運動症状を改善する。ＦＤＡ承認のスタチン薬は、ＨＭＧＣＲを阻害することによってコレステロール生合成経路を下方調節するための薬理学的手段を提供する。予備試験では、年齢をマッチさせた１２９匹のＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}／Ｙおよび＋／Ｙ同腹仔をフルバスタチンの皮下注射で処置した。処置は、見せかけの用量を受けた対照マウスと比較して、血清コレステロールを低下させ、ロータロッド行動およびオープンフィールド活動を改善し、寿命を延ばした。スタチン薬は、ＲＴＴのマウスモデルに一般的に関連する、聴覚驚愕応答を含む全ての健康状態パラメーターを救済したわけではなかった。しかし、質量分析で評価したとき、それは、脳でコレステロール生合成生成物のレベルを野生型レベルの方へ改善した。これらのデータは、コレステロール生合成経路をモジュレートすることがマウスでＭｅｃｐ２突然変異の運動症状を改善するとの考えを裏付ける。認知機能のための学習および記憶試験は、それらがマウスの運動行動に依存し、誤って解釈されることがあるので含まれなかった。

Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ}ヌル雄は、その早すぎる死で役割を果たす可能性のある肝脂肪変性につながる、重度の代謝疾患を起こす。スタチン薬投与による症状の改善は、Ｍｅｃｐ２ヌルマウスで脳および全身のコレステロールホメオスタシスに影響する。フルバスタチンは、ＢＢＢを効率的に通過すると予測されない（Guillotら、J Cardiovasc Pharmacol２１巻：３３９〜３４６頁、１９９３年）。しかし、スタチン薬は、肝臓コレステロール代謝への全身的影響を通して脳コレステロール合成を低下させることができる（Cibickova L、J Clin Lipidol５巻：３７３〜３７９頁、２０１１年）。ロバスタチンはより親油性であり、より効率的にＢＢＢを通過する。

レット症候群に罹患した雌との関連性をより多く提供するために、救済の程度を判定するために雌マウスにフルバスタチンを投与した。６週齢から８カ月齢まで毎週１回、雌を処置した。雄マウスに類似して、フルバスタチンは運動行動、寿命を救済し、脂肪肝疾患を改善した（図５）。注目すべきことに、雄Ｍｅｃｐ２／Ｙマウスより遅い年齢であるが、Ｍｅｃｐ２／＋雌マウスは類似の代謝疾患を発症し、発症の時期は症状の重症度の増加と相関する。

スタチンによる陽性データを考慮して、レット症候群の症状を緩和するそれらの能力を評価するために、ＬＸＲ阻害剤および代謝モジュレーターを含む他の脂質モジュレーション薬を、ｓｕｂ−Ｑまたは経口投与経路を使用する我々の薬物試験プロトコール（図６）で評価している。そのような薬物には、ＳＲＥＢＰ２（コレステロール経路の調節因子）をモジュレートするファトスタチン、メトホルミン、ＡＭＰＫを活性化させる一般的に使用される代謝モジュレーター、ならびにＳＲ９２３８およびベキサロテン、ＬＸＲモジュレーターが含まれる。

（実施例３）
代謝モジュレーターによる療法に感受性であるＲＴＴ患者
本実施例は、本明細書に記載される代謝モジュレーターによる療法から恩恵を受ける可能性がある個体（例えば、レット症候群患者）の特性を規定する。

具体的には、本実施例は、ＳｑｌｅがＭｅｃｐ２ヌル雄マウスで上昇すること、ならびにコレステロール生合成経路がＭｅｃｐ２ヌル雄マウスの脳および肝臓の両方で不安定化されることを実証する（図２）。注目すべきは、上昇したコレステロール、トリグリセリドおよび低密度リポタンパク質は、マウスでは疾患の末梢特徴であり、コレステロール低下薬に応答することができる患者のバイオマーカーである可能性がある。コレステロール代謝経路の混乱は、ＭＥＣＰ２の突然変異を有するレット患者で、またはＭｅｃｐ２ヌルマウスで以前に報告されていなかった。本実施例は、不安定化された脂質代謝がマウスで脂肪肝疾患の、ならびにメタボリックシンドロームの発症につながることを証明する（図２および３）。

Ｍｅｃｐ２突然変異が存在するとき、スタチン薬はマウスの１つの近交系統（１２９Ｓ６／ＳｖＥｖ）で上昇した末梢コレステロールおよびトリグリセリドを低下させるが、別の系統、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊでは、上昇したコレステロールおよびトリグリセリドはＭｅｃｐ２突然変異で存在しない。この知見は、上昇した血清脂質が患者のサブセットだけのバイオマーカーであることを示唆する。

明らかになる証拠は、脂肪酸代謝の異常が自閉症およびレット症候群などの神経発生的障害に寄与することができることを示す（WiestらFatty Acids８０巻：２２１〜２２７頁、２００９年；SticozziらFEBS Letters doi.org／１０．１０１６、２０１３年）。後者の論文は、ＬＤＬおよびＨＤＬコレステロールを含む総コレステロールがレット患者で統計学的に上昇することを初めて示し、マウスモデルを使用する本明細書で提供されるデータが、ヒト母集団に翻訳されると予想されることを示唆する。さらに、最重度のＭＥＣＰ２突然変異を有する患者と相関するＲＴＴ患者の５４％は、彼らの診断の初期に血液で検出することができる高い脂質パラメーターも有する。本実施例は、異常な脂質パラメーターの証拠を有する患者は、脂質代謝を調節する薬物の投与によって助けることができること、および上昇した血清コレステロールまたはＬＤＬコレステロールが、脂質をモジュレートする薬物による処置に応答することができる患者のためのバイオマーカーの役割をすることができることを教示する。

したがって、本実施例は、脂肪肝疾患の１つまたは複数の症状を示す患者、ならびに／または脳および／もしくは肝臓組織で上昇したコレステロールトリグリセリド（例えば、上昇した血清コレステロール）および低密度リポタンパク質を示す患者は、本明細書に記載される代謝モジュレーター（例えば、スタチン）による療法の候補であることを教示する。当業者は、脂肪肝疾患のそのような症状、ならびに／または脳および／もしくは肝臓組織でそのような上昇したコレステロールトリグリセリドおよび低密度リポタンパク質を検出するために、ならびに／またはその代理（すなわち、相関する特徴またはアイテム）を検出するために、様々な方法論のいずれかを利用することができることを理解する。

（実施例４）
様々な程度の親油性を有するスタチンによるマウスのＲＴＴ様症状の処置
上の実施例２で示すように、スタチンは、レット症候群などのＭｅｃｐ２関連の疾患、障害または状態の処置のための以前に未知のクラスの潜在的療法を表す（図４を参照のこと）。本発明の様々な実施形態により、この実施例はそれらの知見を拡張して、親油性スタチンの使用が優れた結果をもたらすことができるとの識見を提供する。詳細には、フルバスタチンは、Ｍｅｃｐ２関連の疾患、障害または状態の処置で特に役立つことができる。

この実施例では、フルバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチンおよびアトルバスタチンを使用した。フルバスタチンは水溶性であり、処置の前に活性化を必要としないが、大多数のスタチン薬は活性化を必要とする。製造業者のガイドライン通りに、他のスタチン、ロバスタチン（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、シンバスタチン（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、アトルバスタチン（Ｃｒｅｓｃｅｎｔ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）はエタノールで活性化し、続いてｉｎ ｖｉｖｏで使用するのに適するレベル（ｐＨ７〜８）にｐＨを調整した。活性化保存溶液をエタノールで注射用量の２０倍に希釈し、最高１カ月の間−２０℃で保存した。２０ｇマウスのための所望の用量が１００μｌで与えられるように、注射当日に１８部の無菌食塩水および１部のＤＭＳＯで１部の保存溶液を希釈することによって１倍の使用液を調製した。５週齢で開始して週２回、表１に示す用量をマウスに皮下注射した。マウスは、図６の図により評価した。

表１に示すように、この実施例で使用するスタチン薬の各々は異なるクリアランス速度を有し、異なるチトクロームｐ４５０酵素によって代謝され、ラットで判定したときに動物の５０％が死ぬ異なる致死用量（ＬＤ_５０）を有する。さらに、各スタチン薬物は異なる半減期を有し、ロバスタチンはおよそ９時間の半減期を有し、アトルバスタチンはおよそ１４時間の半減期を有し、シンバスタチンはおよそ２〜３時間の半減期を有し、フルバスタチンはおよそ９６時間の半減期を有する。

図７は、Ｍｅｃｐ２マウスでの５週間のスタチン処置の結果を示す。図７に示すように、ビヒクル対照動物と比較して、ロバスタチンはロータロッド成績、オープンフィールド活動、血清コレステロールレベルおよび肝臓脂質パネルで有意な改善を示した。さらに、ロバスタチンマウスは、５週後に他のいかなる群より有意に低い体重を有していた。この実施例で使用した投薬スケジュール（週２回）と比較して、ロバスタチンの短い半減期（約９時間）を考慮すると、このデータは特に興味深い。したがって、特定の理論に拘束されることを望むことなく、より頻繁な間隔で投与されるならば、ロバスタチン（および、おそらく他のスタチンも）は有意に増加した有効性を示すことができるかもしれない。処置の前に５週齢で開始し、研究の終わりの１０週時に終了して、体重を毎週得た。図７に、処置後３週間（８週齢、パネルＡ）の、および処置後５週間（１０週齢、パネルＣ）の重量を示す。

（実施例５）
ＲＴＴ発症者での異常なグルコース取込み
実施例３での知見（図３を参照のこと）の確認および拡張のために、この実施例は、高インスリン血症−正常血糖性クランプの使用により示されるように、Ｍｅｃｐ２機能不全を患っている個体は異常なグルコース取込みおよびインスリン抵抗性を示すことを示す。具体的には、図８に示すように、Ｍｅｃｐ２マウスはインスリン抵抗性であり、メタボリックシンドロームを患う。

この実施例では、高インスリン血症−正常血糖性クランプの移植を以下の通りに行った。８週齢Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}雄マウスを麻酔にかけ、頸静脈を露出させるために正中頸部切開を行った。マイクロカニューレを頸静脈に挿入し、右心房にねじ込み、静脈切開部位に固定した。水および食糧を自由摂取させて、マウスを４日間回復させた。一晩の絶食の後、意識のあるマウスは一次注入（１０ｕＣｉ）を受け、次にシリンジ注入ポンプを使用してクロマトグラフィー精製［３−^３Ｈ］−グルコースの一定速度静脈内注入（０．１ｕＣｉ／分）を受けた。基礎グルコース生成の判定のために、標識グルコース注入の５０、５５および６０分後に尾静脈から血液試料を採取した。６０分後（グルコースが血流に入り、グルコース感受性組織によって取り込まれる時間を与えるために）、マウスはインスリンのプライミングボーラス（４０ｍＵ／ｋｇ体重）を受け、続いて２時間のインスリン注入（４ｍＵ／ｋｇ／分）を受けた。同時に、別の注入ポンプを使用して、血糖レベルを１００〜１４０ｍｇ／ｄＬ（正常血糖）に維持するように調整された速度で１０％グルコースを注入した。血糖濃度は、グルコメーターによって１０分おきに測定した。１００、１１０および１２０分後に、クランプ条件下での肝グルコース生成を測定するために血液を採取した。個々の組織でインスリン促進グルコース輸送活性を推定するために、クランプの終わりの４５分前に２−［^１４Ｃ］デオキシグルコースをボーラス（１０ｕＣｉ）として投与した。１２０分後に、マウスを安楽死させ、組織を抽出した。異なる組織でのグルコース取込みは、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣＭＳ）によって、２−［^１４Ｃ］デオキシグルコースの組織濃縮により血漿から計算した。

各動物は同量のインスリンを受けるので、１００〜１４０ｍｇ／ｄＬのグルコースの定常状態に到達するのに必要とされるグルコース注入の量は、全身インスリン作用の指標を提供する。図８に示すように、野生型マウスと比較して、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスは、１００〜１４０ｍｇ／ｄＬのグルコースの定常状態に到達するためにグルコースのより低い注入を必要とし、インスリン抵抗性を示している。パネルＡは、野生型およびＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスの両方で所望の定常状態レベルに到達するために必要なグルコース注入の全体的速度を示し、パネルＢおよびＣは、野生型およびＭｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスの両方の白色脂肪組織（ＷＡＴ）およびヒラメ筋でのグルコース取込み量を示す。これらのデータは、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスがインスリン抵抗性であり、メタボリックシンドロームを有することを確認する。特定の理論に拘束されることを望むことなく、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスでの末梢脂質の過剰生産が、少なくとも部分的に、観察されたグルコース代謝の欠乏の原因であるかもしれない。

（実施例６）
ＲＴＴ発症者に及ぼす糖尿病処置および／または脂質療法の効果
Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスでの代謝機能不全を示す上の実施例５に記載のデータを考慮して、代謝障害の処置のために使用される療法の効果を評価した。具体的には、糖尿病治療薬、メトホルミン、ＬＸＲアゴニストＴ０９０１３１７およびミトコンドリアの脱共役剤ＤＮＰＭＥの効果を、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスで評価した。この実施例では、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスに図６を含む上の実施例４に記載されるプロトコールを受けさせ、ビヒクル、メトホルミン、ＬＸＲアゴニストＴ０９０１３１７またはミトコンドリア脱共役剤ＤＮＰＭＥの１つを受けさせた。

この実施例で使用した薬剤の調製は、以下の通りだった：塩酸メトホルミンを食塩水（Ｓｉｇｍａ）に溶解した。注入当日に、２０ｇマウスのための所望の用量が１００μｌで与えられるように、メトホルミンを１８部の保存溶液、１部のＤＭＳＯおよび１部のエタノールに希釈した。用量＝３０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内（ＩＰ）に注射。ＬＸＲアゴニストＴ０９０１３１７（Ｃａｙｍｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）およびＤＮＰＭＥについては、薬物を１００％ＤＭＳＯに溶解し、次に１８部の無菌食塩水、１部の保存液、１部のエタノールに希釈した。Ｔ０９０３１７の最終用量はＳｕｂ−Ｑ注射によって送達された２５ｍｇ／ｋｇであり、ＤＮＰＭＥについてはＩＰ送達された５ｍｇ／ｋｇであった。動物は、５週齢に開始して１０週齢まで、または５週間処置した。処置の前に５週齢で開始し、研究の終わりの１０週時に終了して、体重を毎週得た。図９に、処置後３週間（８週齢、パネルＡ）の、および処置後５週間（１０週齢、パネルＤ）の重量を示す。

図９は、ビヒクル投与と比較した、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスへのメトホルミンまたはＴ０９０３１７の投与の結果を示す。この実施例でメトホルミンはほとんど効果がないようであるが、ロータロッドおよびオープンフィールド活動アッセイが示すようにＴ０９０３１７は運動能力を改善した。しかし、Ｔ０９０３１７は、末梢脂肪の尺度を改善しないようであった。このように、特定の理論に拘束されることを望むことなく、Ｔ０９０３１７で観察された改善は、全身脂質ではなく脳脂質（例えば、コレステロール）の変化によるのかもしれない。さらに、ＦＤＡ推奨の日投薬スケジュールに従って投与されるならば、メトホルミンは有意な効果を有するかもしれない。

ＤＮＰＭＥは、ＡＴＰによるエネルギー生成をグルコースから脱共役させ、代わりに脂質の使用を可能にする、ミトコンドリアの脱共役剤である。特定の理論に拘束されることを望むことなく、Ｍｅｃｐ２機能不全の発症者へのＤＮＰＭＥの投与は、体内での脂質分解を引き起こし、このように、脳内のある特定の脂質（例えば、コレステロール）の利用可能性を増加させる、または、マウスがエネルギー源としてグルコースではなく脂質を使用することを可能にするのかもしれない。ＤＮＰＭＥのミトコンドリア脱共役活性は以前に示された（Perry RJら、Reversal of hypertriglyceridemia, fatty liver disease, and insulin resistance by a liver-targeted mitochondrial uncoupler、２０１３年、Cell Metabolism、１８巻：７４０〜７４８頁を参照のこと）が、この研究は、ＤＮＰＭＥが脳での脂質および／またはコレステロール生合成の状態に影響を及ぼすことが示された最初になる。図１０に示すように、ＤＮＰＭＥの投与は、Ｍｅｃｐ２^{ｔｍ１．１Ｂｉｒｄ／Ｙ}マウスによるロータロッドおよびＯＦＡアッセイでの有意に向上した成績をもたらした。日ごとの投薬がさらにより優れた結果をもたらし、例えばスタチン薬または他の治療化合物との併用療法がさらなる恩恵をもたらすことができる可能性がある。

この実施例は、ＩＩ型糖尿病および／または脂質沈着の処置で効果的であることが示される治療化合物が、レット症候群などのＭｅｃｐ２関連の疾患、障害または状態の処置のための魅力的な療法である可能性があることを示す。

すなわち、上記の実施例は、脳で脂質および／またはコレステロールの代謝をモジュレートする薬剤またはモダリティが、レット症候群などのＭｅｃｐ２関連の疾患、障害または状態の処置で使用するための、以前に未知のクラスの治療手段となることを明らかに実証し、確認する。様々な実施形態により、そのような薬剤は、Ｍｅｃｐ２機能不全を患っている対象で運動能力を向上させ、脂質レベルを低下させ、寿命を延長することができる。

他の実施形態および同等物
当業者は、単にルーチンの実験操作を使用して、本明細書に記載された発明の特定の実施形態の多くの同等物を認識し、または確認することができる。本発明の範囲は、上の明細書に限定されるものではなく、むしろ以下の特許請求の範囲に示される通りである。

Claims (34)

1. ＭＥＣＰ２関連の疾患、障害または状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に脳の脂質および／またはコレステロール代謝をモジュレートする少なくとも１つの薬剤またはモダリティを投与するステップを含む方法。
2. 前記少なくとも１つの薬剤またはモダリティが、スタチン、ＬＸＲモジュレーター、グルコース代謝モジュレーター、ＳＲＥＢＰモジュレーター、ＰＰＡＲＧモジュレーターおよびその組合せから選択される、請求項１に記載の方法。
3. 前記スタチンがロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチンおよびフルバスタチンの１つまたは複数である、請求項２に記載の方法。
4. 前記ＬＸＲモジュレーターが、オキシステロール、ＬＸＲアゴニストおよび／またはＲＸＲアゴニストの少なくとも１つである、請求項２に記載の方法。
5. 前記ＬＸＲモジュレーターが、ヒポコラミド、Ｔ０９０１３１７、ＧＷ３９６５、ＳＲ９２３８、２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール、２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール、２７−ヒドロキシコレステロール、コレステン酸およびベキサロテンの少なくとも１つである、請求項４に記載の方法。
6. 前記グルコース代謝モジュレーターが、ビグアニド薬および２，４−ジニトロフェノール−メチルエーテル（ＤＮＰ−ＭＥ）またはその誘導体の少なくとも１つである、請求項２に記載の方法。
7. 前記少なくとも１つのビグアニド薬が、メトホルミン、プログアニル、クロルプログアニルから選択される、請求項６に記載の方法。
8. 前記ＳＲＥＢＰモジュレーターが、ファトスタチン、Ｎ−（４−（２−（２−プロピルピリジン−４−イル）チアゾール−４−イル）フェニル）メタンスルホンアミド（ＦＧＨ１００１９）、ＳＲＥＢＰ１およびＳＲＥＢＰ２の少なくとも１つである、請求項２に記載の方法。
9. 前記ＰＰＡＲＧモジュレーターがチアゾリジンジオンである、請求項２に記載の方法。
10. 前記チアゾリジンジオンが、ロジグリタゾン、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ネトグリタゾン、リボグリタゾンおよびシグリタゾンの少なくとも１つのである、請求項９に記載の方法。
11. 前記少なくとも１つの薬剤またはモダリティが、少なくとも１日１回投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記少なくとも１つの薬剤またはモダリティが、少なくとも週１回投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記少なくとも１つの薬剤またはモダリティが、少なくとも週２回投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記少なくとも１つの薬剤またはモダリティが、皮下、腹腔内、静脈内または経口投与される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。
15. レット症候群の処置のための有用なモダリティを同定および／または特徴付ける方法であって、脳の脂質および／またはコレステロール代謝の１つまたは複数の態様に及ぼす候補治療剤の効果を判定するステップを含む方法。
16. 脂質および／またはコレステロール代謝の前記１つまたは複数の態様がコレステロール生合成である、請求項１５に記載の方法。
17. 脂質および／またはコレステロール代謝の前記１つまたは複数の態様が、３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡレダクターゼ（ＨＭＧＣＲ）の阻害である、請求項１５に記載の方法。
18. 脂質および／またはコレステロール代謝の前記１つまたは複数の態様がスクアレンモノオキシゲナーゼの阻害である、請求項１５に記載の方法。
19. 脂質および／またはコレステロール代謝の１つまたは複数の態様に及ぼす治療剤の前記効果が、行動試験、認知試験、運動機能試験、１つまたは複数の生理的パラメーターの試験およびそれらの組合せの１つまたは複数によって評価される、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記行動試験が、聴覚驚愕応答試験、驚愕応答試験の前パルス阻害、オープンフィールド活動試験、３チャンバー社会的交流試験、ホームケージ活動試験および／またはそれらの組合せから選択される、請求項１９に記載の方法。
21. 前記運動機能試験が、ロータロッド試験、オープンフィールド歩行活動試験、ＤｉｇｉＧａｉｔモニタリング系およびそれらの組合せから選択される、請求項１９に記載の方法。
22. １つまたは複数の生理的パラメーターの前記試験が、二重Ｘ線吸収分析法（ＤＥＸＡ）試験、メタコリンチャレンジによる全身プレチスモグラフィー呼吸試験、グルコース耐性試験、インスリン耐性試験、血清コレステロール試験、熱量測定試験およびそれらの組合せから選択される、請求項１９に記載の方法。
23. レット症候群を患っているかまたはそれに感受性である対象にスタチンを投与するステップを含む、レット症候群の処置方法。
24. 前記スタチンが、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチンおよびそれらの組合せから選択される、請求項２３に記載の方法。
25. 前記スタチンが少なくとも１日１回投与される、請求項２３または２４に記載の方法。
26. 前記スタチンが少なくとも週１回投与される、請求項２３または２４に記載の方法。
27. 前記スタチンが少なくとも週２回投与される、請求項２３または２４に記載の方法。
28. 前記スタチンが皮下または経口投与される、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の方法。
29. レット症候群を患っているかまたはそれに感受性である対象にグルコース代謝モジュレーターを投与するステップを含む、レット症候群の処置方法。
30. 前記グルコース代謝モジュレーターが、ビグアニド薬；２，４−ジニトロフェノール−メチルエーテル（ＤＮＰ−ＭＥ）、２，４−ジニトロフェノール−エチルエーテル（ＤＮＰ−ＥＥ）、２，４−ジニトロフェノール−ビニルエーテル（ＤＮＰ−ＶＥ）またはその誘導体；およびそれらの組合せから選択される、請求項２９に記載の方法。
31. 前記ビグアニド薬が、メトホルミン、プログアニル、クロルプログアニルから選択される、請求項３０に記載の方法。
32. 前記グルコース代謝モジュレーターが少なくとも週１回投与される、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記グルコース代謝モジュレーターが少なくとも週２回投与される、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の方法。
34. 前記グルコース代謝モジュレーターが、皮下、腹腔内、静脈内または経口投与される、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の方法。