CN105671206A - 高危型人乳头状瘤病毒检测方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探针 - Google Patents

高危型人乳头状瘤病毒检测方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探针 Download PDF

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江华
王周平
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    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means

Abstract

本发明公开了一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探针，包括设计并合成捕获DNA序列和显示DNA序列；分别制备CdTe量子点、硅纳米粒子以及磁性纳米粒子；将显示DNA序列分别与CdTe量子点和硅纳米粒子结合得到显示探针；将捕获DNA序列与磁性纳米粒子结合得到捕获探针；将待测样品先后与捕获探针以及显示探针混合，根据混合液的荧光强度判断待测样品中是否含有高危型人乳头状瘤病毒。本发明的检测方法具有操作简便、成本低、稳定性好、准确性高、灵敏度高等特点，克服了现有高危型人乳头状瘤病毒检测方法的不足，可作为一种快速、超灵敏的新型技术来检测人乳头状瘤病毒。

Description

高危型人乳头状瘤病毒检测方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探针
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探针。
背景技术
人乳头状瘤病毒（HumanPapillomaVirus，HPV）是一种嗜上皮性病毒，具有高度的特异性，属于双链闭环的小DNA病毒，包含约8000个碱基对。迄今为止，已发现的HPV有100多个型别，各型别与体内特定感染部位和病变有关，其中有40多个型别与人类生殖道疾病有关。HPV感染主要是通过性生活传播，感染后通常没有明显的临床症状，感染的高峰年龄在18～28岁。然而大部分妇女的HPV感染为一过性，经2～3年内一般可自行消失，大约只有10%～15%的35岁以上的妇女有持续感染的情况，HPV持续感染将有患宫颈癌的风险。
在临床上，根据HPV亚型致病力大小或致癌危险性大小不同，将HPV分为低危型和高危型两大类。低危型主要导致尖锐湿疣和低度宫颈上皮内瘤变CINⅠ，如HPV6、HPV11、HPV30、HPV39、HPV42、HPV43、HPV44亚型。高危型除可引起生殖器疣病外，更重要的是引起外生殖器癌、宫颈癌和CINⅡ、CINⅢ，如HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV66等。有报道称99.8%的子宫颈癌活检标本中可以检测到HPV-DNA，其中，HPV16和HPV18型致病率最强，约占70%。HPV16型感染多见于宫颈鳞癌，而HPV18型感染多见于宫颈腺癌。在妇女的一生中，可反复感染HPV，也可同时感染多种不同型别的HPV。随着年龄的增长，宫颈HPV的感染率明显下降，这可能与机体免疫功能增强以及对病毒的限制或清除有关。
HPV检测已成为宫颈癌的常用筛查方法，通过HPV的筛查可发现宫颈癌的早期患者，或者具有患宫颈癌的高危人群，有利于宫颈癌的早期发现和早期治疗，对于宫颈癌的预防及治疗，以及降低宫颈癌的发病率和死亡率具有非常重要的意义。
目前已存在的HPV检测方法主要有细胞学检查（主要包括薄层液基制片技术、巴氏涂片法等）、核酸杂交技术（如荧光原位杂交法、斑点杂交法、southen杂交法等）、PCR技术（如实时荧光定量PCR等）、HPV-DNA分型检测、杂交捕获二代、基因芯片技术和SP法。而目前临床上常用的检测方法主要是HPV分型检测、杂交捕获二代（HCⅡ）以及实时荧光定量PCR。然而这些方法都存在一定的不足，比如，HPV分型检测操作较为繁琐；而HCⅡ虽然特异性和灵敏性均较好，也已广泛认可，但是试剂较昂贵，成本较高，而且发光信号不稳定；而PCR技术也存在标本易污染、假阳性率高等问题。因此，探索一种操作简便、特异性强、灵敏度高、成本低并且适合临床大规模筛查的新方法就显得很有意义。
随着生命科学的不断发展，近年来的研究也越来越关注纳米技术在生物技术方面的应用，目前纳米生物技术已成为国际生物领域最前沿的研究热点。虽然我国在这方面已取得了一些成果，但由于研究时间较短，今后还要在纳米医用材料、纳米农药、纳米生物传感器等方面进行深入研究，这些纳米技术主要应用的就是纳米粒子。近年来，四种类型的纳米粒子已经得到了广泛的研究和应用：（1）纳米金颗粒；（2）量子点；（3）核壳型荧光纳米颗粒；（4）高分子纳米微球。其中以金纳米颗粒、量子点、核壳型荧光纳米颗粒为代表的纳米粒子在生物芯片、免疫检测分析、基因突变检测、遗传病和肿瘤诊断、药物研究、食品及环境中的检测等领域发挥着重要作用，这方面的研究进展和研究成果引人注目，尤其是新型发光纳米材料——量子点。
半导体量子点，简称量子点（QuantumDots，QDs），是一种在空间三维尺度均属于纳米尺度的零维材料，由于尺寸达到了临界值，结构和性质转变为微观层次而表现出量子特性。半导体量子点通常是由两种或两种以上的Ⅰ-Ⅶ、Ⅱ-Ⅵ族或Ⅲ-Ⅴ族元素组成，而目前较成熟的量子点是由Ⅱ-Ⅵ或Ⅲ-Ⅴ族元素组成，如CdSe、CdS、ZnS等。量子点的研究粒径范围一般在2～20nm，与传统的有机荧光染料相比，量子点主要具备以下优点：①可以较易地通过控制反应的时间来制得不同发射波长的量子点；②量子点光稳定性更高，不易发生光漂白现象，且较易地对其进行表面修饰和连接，而不易发生荧光猝灭；③量子点的生物相容性更好，且对生物体危害小；④量子点可以用小于其发射波长10nm的任意波长的激发光进行激发，从而可以同时标记检测多种物质。鉴于量子点的上述优点，将其运用到生命科学领域吸引了很多科学家的关注，因此对量子点的合成制备、修饰以及在各个领域的应用研究都取得了突破性进展。目前已报道的应用领域有：量子点在生物分子标记方面的应用（如乳腺癌细胞、抗体和DNA等）；量子点在生物成像方面的应用（如肝癌细胞、巨噬细胞、Hela细胞的标记成像、胚胎干细胞、淋巴管等的成像）；量子点在生物检测方面的应用（如癌胚抗原、免疫球蛋白、大肠杆菌、蛋白质、DNA等）。
磁性纳米粒子是一种具有磁导向性、低毒性、生物相容性好等特性的纳米级材料。由于磁性纳米材料的优良特性，在磁性材料的制备和应用上也做了较多的研究，尤其是在应用方面，受到了广大研究者的普遍关注。已报道的磁性纳米粒子在生物领域的应用主要有：细胞分离和免疫分析、医学检测和诊断、药物载体等，但今后的重点仍然是将磁性纳米材料用于医学方面的检测治疗，尤其是对各种肿瘤的诊疗。基于20世纪70年代提出的“基因治疗”的概念，对在基因水平上用磁性纳米材料治疗肿瘤的研究也将不断得到发展。
发明内容
本发明的目的之一在于解决上述问题，提供一种操作简便、特异性强、灵敏度高、成本低、适合临床大规模筛查的高危型人乳头状瘤病毒检测方法。
本发明的目的之二在于提供一种上述检测方法采用的寡核苷酸序列。
本发明的目的之三在于提供一种上述检测方法采用的寡核苷酸探针。
实现本发明上述目的之一的技术方案是：一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法，具有以下步骤：
S1：设计并合成特异性寡核苷酸序列；
所述特异性寡核苷酸序列为下述Seq1和Seq3、或者为下述Seq2和Seq4；
Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；
Seq2：5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3'；
Seq3：5'-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'；
Seq4：5'-NH2-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3'；
上述Seq1和Seq2为捕获DNA序列；上述Seq3和Seq4为显示DNA序列；
S2：分别制备CdTe量子点、硅纳米粒子以及磁性纳米粒子；
S3：将步骤S1中的显示DNA序列分别与CdTe量子点和硅纳米粒子结合得到显示探针；将步骤S1中的捕获DNA序列与磁性纳米粒子结合得到捕获探针；将待测样品先后与捕获探针以及显示探针混合，根据混合液的荧光强度判断待测样品中是否含有高危型人乳头状瘤病毒。
上述步骤S2中所述的CdTe量子点为亲和素化的CdTe量子点。
上述步骤S2中所述的CdTe量子点的平均粒径为3～5nm。
上述步骤S2中所述的硅纳米粒子为戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子。
上述步骤S3中所述的硅纳米粒子的平均粒径为90～110nm。
上述步骤S2中所述的磁性纳米粒子为亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子。
上述步骤S2中所述的磁性纳米粒子的平均粒径为45～50nm。
上述步骤S3中显示DNA序列的生物素化端与CdTe量子点结合，氨基化端通过戊二醛交联剂与硅纳米粒子结合。
上述步骤S3中硅纳米粒子的浓度为0.1mg/mL～0.1g/mL，优选1mg/mL～10mg/mL，更优选4mg/mL。
上述步骤S3中捕获探针的浓度为10μg/mL～10mg/mL，优选0.1mg/mL～1mg/mL，更优选0.5mg/mL。
实现本发明上述目的之二的技术方案是：上述高危型人乳头状瘤病毒检测方法采用的寡核苷酸序列，为下述Seq1和Seq3、或者为下述Seq2和Seq4；
Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；
Seq2：5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3'；
Seq3：5'-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'；
Seq4：5'-NH2-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3'；
上述Seq1和Seq2为捕获DNA序列；上述Seq3和Seq4为显示DNA序列。
实现本发明上述目的之三的技术方案是：上述高危型人乳头状瘤病毒检测方法采用的寡核苷酸探针，包括捕获探针和显示探针；所述捕获探针由上述捕获DNA序列与上述磁性纳米粒子结合得到；所述显示探针由上述显示DNA序列分别与上述CdTe量子点和上述硅纳米粒子结合得到。
本发明具有的积极效果：（1）本发明的检测方法针对高危型人乳头状瘤病毒设计并合成出两组特异性寡核苷酸序列，将它们分别与量子点、硅纳米粒子结合以及与磁性纳米粒子结合后得到显示探针和捕获探针，通过检测量子点的荧光强度可以判断是否感染高危型人乳头状瘤病毒。（2）本发明的检测方法具有操作简便、成本低、稳定性好、准确性高、灵敏度高等特点，11次重复测量500fmol/L人乳头状瘤病毒的相对标准偏差为1.14%，检出限可达5fmol/L，克服了现有高危型人乳头状瘤病毒检测方法的不足，可作为一种快速、超灵敏的新型技术来检测人乳头状瘤病毒。
附图说明
图1为本发明的实施例1制得的CdTe量子点的透射电子显微镜图。
图2为本发明的实施例1制得的CdTe量子点的荧光光谱图。
图3为本发明的实施例1制得的氨基化硅纳米粒子的透射电子显微镜图。
图4为本发明的实施例1制得的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子的透射电子显微镜图。
图5为本发明的实施例1制得的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子的X射线衍射图。
图6为本发明的实施例1检测的不同浓度的目标DNA的荧光强度结果图。
图7为本发明的检测示意图。
图8为采用不同浓度的捕获探针检测的荧光强度结果图。
图9为采用不同浓度的硅纳米粒子检测的荧光强度结果图。
具体实施方式
（实施例1）
本实施例的高危型人乳头状瘤病毒检测方法具有以下步骤：
S1：设计并合成特异性寡核苷酸序列。
该特异性寡核苷酸序列包括作为捕获DNA序列的Seq1和作为显示DNA序列的Seq3。
Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；
Seq3：5'-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'。
上述特异性寡核苷酸序列委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。
将上述合成的捕获DNA序列用PBS缓冲液配制成10nM的贮存液，显示DNA序列用PBS缓冲液配制成10μM的贮存液，保存于-20℃，备用。
S2：分别制备亲和素化的CdTe量子点、戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子以及亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子。
S21：制备亲和素化的CdTe量子点。
S211：在50mL圆底烧瓶中依次加入0.0319g碲粉、5mL超纯水以及0.0380g硼氢化钠，通入氮气保护，室温（15～25℃，下同）条件下磁力搅拌至溶液变成淡紫色，得到碲氢化钠溶液；在250mL三口圆底烧瓶中依次加入200mL超纯水、0.1142g水合氯化镉以及0.1092g巯基丙酸，用NaOH调节pH至11.2，通入氮气约30min；然后加入前述制得的碲氢化钠溶液，通入氮气保护，加热至120℃回流；取反应7h后的CdTe量子点溶液。
通过透射电子显微镜（TEM）对其形貌进行表征，结果见图1；通过荧光分光光度计对其光谱性质进行表征，结果见图2。
S212：将20μL步骤S211制得的CdTe量子点溶液加入到40μL含有2mg的EDC【1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺】的PBS溶液中（0.01mol/L，pH=7.4），室温下混合5min，再反应15～20min；然后加入0.5mg的NHS【N-羟基琥珀酰亚胺】，混合15min；最后加入40μL亲和素（1mg/mL），混合2h，于4℃的温度以及5000rpm的转速下离心15min，以除去未反应的亲和素，用PBS溶液清洗一次后，再离心，得到亲和素化的CdTe量子点，保存于4℃，待用。
S22：制备戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子。
S221：在50mL圆底烧瓶中依次加入1.875mL的表面活性剂TX-100、7.5mL环己烷以及1.875mL正己醇，磁力搅拌5min；然后加入340μL超纯水作为分散相，磁力搅拌30min，形成均匀的油包水微胶囊；接着加入100μL的TEOS【正硅酸乙酯】和100μL的APTES【3-氨丙基三乙氧基硅烷】，磁力搅拌5min；接着再加入60μL的氨水，一步催化同时水解TEOS和APTES，磁力搅拌24h；最后加入适量的丙酮进行破乳分离，用乙醇和超纯水各清洗三次，12000rpm离心分离10min，得到氨基化硅纳米粒子，烘干，保存备用。通过TEM对其形貌进行表征，结果见图3。
S222：将5mg步骤S221制得的氨基化硅纳米粒子通过超声分散在含5wt%戊二醛的PBS溶液中，置于摇床上室温反应4h；12000rpm离心10min以除去未连接上的戊二醛溶液，用PBS清洗，再重复两次，最后再用PBS溶液溶解，得到戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子，保存于4℃，待用。
S23：制备亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子。
S231：在50mL圆底烧瓶中依次加入6.5g的1,6-己二胺、2.0g无水醋酸钠、1.0g氯化高铁及30mL乙二醇，50℃下磁力剧烈搅拌均匀；将上述溶液转移到50mL带聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中，198℃高温反应6h；将反应后的物料从反应釜中取出并自然冷却至室温，弃去上层液体，用外加磁力分离收集，再在超声条件下，用水和乙醇洗涤2次，将所得黑色固体在50℃条件下干燥5～10h，得到氨基化Fe3O4磁性纳米粒子。通过TEM对其形貌进行表征，结果见图4；通过X射线衍射（XRD）对其成分及结晶状态进行分析鉴定，结果见图5。
S232：将5mg步骤S231制得的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子通过超声分散在含5wt%戊二醛的PBS溶液中，置于摇床上室温反应4h；通过磁力收集并弃去未连接上的戊二醛溶液，并用PBS溶液清洗三次；加入300μL的亲和素（1mg/mL），室温反应4h，4℃过夜；将所得到的产物用PBS溶液通过磁力收集清洗三次，再用PBS溶液分散重悬，得到亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子，保存于4℃，待用。
S3：高危型人乳头状瘤病毒检测。
S31：将400μL步骤S21制得的亲和素化的CdTe量子点溶液与步骤S1中的显示DNA（385μL、10μM）混合24h，使亲和素化的CdTe量子点与显示DNA的生物素化端（3'端）结合；然后加入125μL步骤S22制得的戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子溶液【原液浓度为1mg/mL】，室温下温和摇晃反应4h，再放置过夜，然后12000rpm离心10min，弃上清；用含有0.1M的NaCl的PBS溶液（0.1M、pH=7.0）冲洗，再离心一次；最后用含有0.3M的NaCl的PBS溶液（0.1M、pH=7.0）溶解，得到显示探针，保存于4℃，待用。
S32：将100μL步骤S23制得的亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子加入到试管中，然后加入步骤S1中的捕获DNA（100μL、10nM），37℃反应2h，用PBS溶液磁力收集洗涤3次，得到捕获探针，保存于4℃，待用。
S33：高危型人乳头状瘤病毒的荧光检测分析：
S331：首先，向步骤S32制得的捕获探针【原液浓度为1mg/mL】中加入100μL不同浓度（50、100、400、600、800、1000fmol/L）的高危型人乳头状瘤病毒目标DNA（以下简称目标DNA）和100μL的杂交缓冲溶液，42℃反应2h，磁力收集洗涤3次。
S332：然后，加入100μL步骤S31制得的显示探针和100μL的杂交缓冲溶液，42℃反应2h，磁力收集洗涤3次。
S333：最后，加入100μL的PBS溶液，置于F-7000荧光光谱仪上测定荧光强度，结果见图6。
由图6可以看出：荧光强度与目标DNA浓度在0～1000fmol/L范围内呈良好的线性关系，回归方程为IF=0.1777[DNA]（fmol/L）+10.551，（R2=0.9945），最低检出限为5fmol/L。
本发明的检测示意图见图7。
（实施例2～实施例6）
各实施例与实施例1基本相同，不同之处在于：目标DNA浓度为1nM，捕获探针溶液的浓度分别为1.0mg/mL、0.5mg/mL、0.2mg/mL、0.1mg/mL和0.05mg/mL。
荧光强度检测结果见图8。
由图8可以看出：0.5mg/mL的捕获探针浓度荧光强度最强，因此，0.5mg/mL的捕获探针浓度为高危型人乳头状瘤病毒检测的最佳浓度。
（实施例7～实施例11）
各实施例与实施例1基本相同，不同之处在于：目标DNA浓度为1nM，制备显示探针的氨基化硅纳米粒子溶液的浓度分别为1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL和5mg/mL。
荧光强度检测结果见图9。
由图9可以看出：当硅纳米粒子浓度达到4mg/mL后，荧光强度趋于饱和，因此，4mg/mL的硅纳米粒子浓度为高危型人乳头状瘤病毒检测的最佳浓度。
SEQUENCELISTING
<110>常州市妇幼保健院
<120>高危型人乳头状瘤病毒检测方法及其采用的寡核苷酸序列和寡核苷酸探针
<160>4
<170>PatentInversion3.3
<210>1
<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<400>1
catctgcaaaaaaata16
<210>2
<211>14
<212>DNA
<213>人工序列
<400>2
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<210>3
<211>15
<212>DNA
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<210>4
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<400>4
aaaacttttccttta15

Claims (9)

1.一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法，其特征在于具有以下步骤：
S1：设计并合成特异性寡核苷酸序列；所述特异性寡核苷酸序列为下述Seq1和Seq3、或者为下述Seq2和Seq4；
Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；
Seq2：5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3'；
Seq3：5'-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'；
Seq4：5'-NH2-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3'；
上述Seq1和Seq2为捕获DNA序列；上述Seq3和Seq4为显示DNA序列；
S2：分别制备CdTe量子点、硅纳米粒子以及磁性纳米粒子；
S3：将步骤S1中的显示DNA序列分别与CdTe量子点和硅纳米粒子结合得到显示探针；将步骤S1中的捕获DNA序列与磁性纳米粒子结合得到捕获探针；将待测样品先后与捕获探针以及显示探针混合，根据混合液的荧光强度判断待测样品中是否含有高危型人乳头状瘤病毒。
2.根据权利要求1所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法，其特征在于：上述步骤S2中所述的CdTe量子点为亲和素化的CdTe量子点；上述步骤S2中所述的CdTe量子点的平均粒径为3～5nm；上述步骤S2中所述的硅纳米粒子为戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子；上述步骤S3中所述的硅纳米粒子的平均粒径为90～110nm；上述步骤S2中所述的磁性纳米粒子为亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子；上述步骤S2中所述的磁性纳米粒子的平均粒径为45～50nm。
3.根据权利要求1或2所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法，其特征在于：上述步骤S3中显示DNA序列的生物素化端与CdTe量子点结合，氨基化端通过戊二醛交联剂与硅纳米粒子结合。
4.根据权利要求1所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法，其特征在于：上述步骤S3中硅纳米粒子的浓度为1mg/mL～10mg/mL。
5.根据权利要求1所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法，其特征在于：上述步骤S3中捕获探针的浓度为0.1mg/mL～1mg/mL。
6.一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法采用的寡核苷酸序列，其特征在于：为下述Seq1和Seq3、或者为下述Seq2和Seq4；
Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；
Seq2：5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3'；
Seq3：5'-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'；
Seq4：5'-NH2-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3'；
上述Seq1和Seq2为捕获DNA序列；上述Seq3和Seq4为显示DNA序列。
7.一种高危型人乳头状瘤病毒检测方法采用的寡核苷酸探针，其特征在于：包括捕获探针和显示探针；所述捕获探针由捕获DNA序列与磁性纳米粒子结合得到；所述显示探针由显示DNA序列分别与CdTe量子点和硅纳米粒子结合得到；
所述捕获DNA序列为下述Seq1或者Seq2；所述显示DNA序列为下述Seq3或者Seq4；
Seq1：5'-CATCTGCAAAAAAATA-Biotin-3'；
Seq2：5'-TCAACATCCCAAAA-Biotin-3'；
Seq3：5'-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-Biotin-3'；
Seq4：5'-NH2-AAAACTTTTCCTTTA-Biotin-3'。
8.根据权利要求7所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法采用的寡核苷酸探针，其特征在于：所述的CdTe量子点为亲和素化的CdTe量子点；所述的CdTe量子点的平均粒径为3～5nm；所述的硅纳米粒子为戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子；所述的硅纳米粒子的平均粒径为90～110nm；所述的磁性纳米粒子为亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子；所述的磁性纳米粒子的平均粒径为45～50nm。
9.根据权利要求7或8所述的高危型人乳头状瘤病毒检测方法采用的寡核苷酸探针，其特征在于：所述显示DNA序列的生物素化端与CdTe量子点结合，氨基化端通过戊二醛交联剂与硅纳米粒子结合。
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WO2022201007A1 (es) * 2021-03-24 2022-09-29 Universidad El Bosque Biosensor para la detección óptica de la infección por el virus del papiloma humano en fluidos biológicos

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