CN105669482A - 一种联苯菊酯半抗原及其快速检验装置及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种联苯菊酯半抗原及其快速检验装置及其制备方法，所述联苯菊酯半抗原具有式（1）所示的化学结构式。采用本发明的技术方案，用于联苯菊酯代谢物的检测中，特异性强，检测灵敏度高，准确性高，重复性好，能更加快速、灵敏、简便地检测联苯菊酯残留，满足了联苯菊酯残留快速检测的需要，给食品安全提供了重要手段。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种联苯菊酯半抗原及其快速检验装置及其制备方法。
背景技术
联苯菊酯(Bifenthrin,BF)，是一种人工合成的拟除虫菊酯类农药。由于其具有杀虫谱广，击倒作用快，持续时间长，强大的胃毒和触杀作用而广泛用于棉花、茶树、果树、蔬菜等农业害虫及白蚁、螨虫等卫生害虫的防治。联苯菊酯化学性质稳定，进入环境后不易被分解，其广泛使用容易引起较大残留。虽然联苯菊酯在人体内代谢快，不具有积累的危险。但研究表明，它具有神经毒害作用，通过影响动物的神经系统和钠离子通道活性，干扰神经系统的正常功能。因而，长期低剂量接触联苯菊酯将对健康产生严重影响。世界卫生组织已将联苯菊酯归类为第2类农药，即中等毒性/中度危害的类别。世界上多个国家包括中国、美国、加拿大等先后对农产品中联苯菊酯残留做了限量规定，欧盟规定食品中联苯菊酯限量为5.0mg/kg。发展快速检测联苯菊酯残留的方法对保证食品安全，确保我国农产品顺利出口具有重要意义。
目前对联苯菊酯的残留分析主要采用气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、气相色谱-质谱联用-负化学离子源法、高效液相色谱法、高效薄层色谱法与酶联免疫分析方法。仪器检测方法具有结果可靠准确、检测限低等优点。然而，仪器检测的方法，样品前处理繁琐、时间长，需要经过专业培训、有丰富经验的人员操作，检测费用高，不适合批量样品的快速检测与现场检测。与仪器检测相比，酶联免疫分析方法可同时实现对多个样品的定性、定量检测，检测成本降低，然而，酶联免疫方法依然需要有一定经验的专业人员操作，实验结果受外界影响及样品基质影响较大。
发明内容
针对以上技术问题，本发明公开了一种联苯菊酯半抗原及其快速检验装置及其制备方法，针对现有检测联苯菊酯技术的不足，建立一种检测联苯菊酯残留的快速方法，使其能更加快速、灵敏、简便地检测联苯菊酯残留，满足了联苯菊酯残留快速检测的需要，给食品安全提供重要手段。
对此，本发明采用的技术方案为：
一种联苯菊酯半抗原，其具有式(1)所示的化学结构式：
上述化学结构式的化学名为3-(2-氯-3,3,3-三氟丙烯)-2,2-二甲基-环丙烷酸4’-(3-羧基-丙酰基氨基)-联苯-3-甲基酯；其分子量为521，其MS母离子峰为522.1；颜色：淡黄色，其熔点为115-122℃。
作为本发明的进一步改进，所述联苯菊酯半抗原采用以下步骤制备得到：
步骤S1：将功夫酸与氯化亚砜反应，回流蒸干后溶解到氯仿中，冰浴下加入反应物2对硝基联苯醇，20～30℃反应3～6h，蒸干，过柱纯化后得到中间产物2对硝基联苯醇功夫酸酯；
步骤S2：称取上述中间产物2对硝基联苯醇功夫酸酯，溶于无水乙醇中，加入氯化亚锡，70～80℃回流1～2h，蒸干溶剂后纯化，得到黄色油状物，将所述黄色油状物用无水吡啶溶解后，加入丁二酸酐，反应3～6h，过硅胶柱纯化得到所述联苯菊酯半抗原。
进一步优选的，采用如下反应路线制备联苯菊酯半抗原：
优选的，制备所述联苯菊酯半抗原的步骤为：
(1)称取1.2g功夫酸，如式(2)中的反应物1，向其中加入8ml氯化亚砜，回流3h后，蒸干后得到式(2)中的中间产物1，用氯仿溶解；冰浴下滴加到溶有1g反应物2的氯仿吡啶溶液中，室温反应4h，蒸干，过柱纯化后得到淡黄色结晶物，如式(2)中的中间产物2。
(2)称取1.2g上述中间产物2，溶于无水乙醇中，加入1.0g氯化亚锡，75℃回流1.5h，蒸干溶剂后过硅胶柱纯化，得到黄色油状物，即式(2)中的中间产物3，用无水吡啶溶解后，加入0.5g丁二酸酐，即式(2)中的反应物3，反应4h，过硅胶柱纯化得到联苯菊酯半抗原，即式(2)中的半抗原。
本发明还公开了一种联苯菊酯抗原，采用如上所述的联苯菊酯半抗原制备得到，利用碳二亚胺法，将所述联苯菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到联苯菊酯抗原。
进一步优选的，所述联苯菊酯抗原采用以下步骤制备：将所述联苯菊酯半抗原与BSA(牛血清蛋白)溶于pH值为8.5～9.5的碳酸缓冲溶液中，并加入碳二亚胺，搅拌12～24h，透析纯化，得到联苯菊酯抗原。
本发明还公开了一种联苯菊酯单克隆抗体，采用如上所述的联苯菊酯抗原与免疫Balb/c小鼠经细胞融合，筛选得到联苯菊酯单克隆抗体细胞株，用获得的联苯菊酯单克隆抗体细胞株诱导小鼠产生腹水，纯化后获得联苯菊酯单克隆抗体。
优选的，所述联苯菊酯单克隆抗体的制备步骤为：取所述联苯菊酯抗原首次与弗氏完全佐剂等量混合乳化，第2、3和4次分别与不完全弗氏佐剂等量混合乳化后，免疫Balb/c小鼠共4次，取小鼠的脾细胞与杂交瘤细胞融合，直接和间接竞争ELISA方法筛选联苯菊酯的单克隆抗体细胞株，并用获得的细胞诱导小鼠产生腹水，纯化后获得联苯菊酯单克隆抗体。采用此技术方案，产量大，纯度高。
本发明还公开了一种联苯菊酯的快速检验装置，包括反应杯和检验试纸，所述检验试纸包括衬板以及衬板上依次粘附包被膜、吸水垫、样品垫，并使得样品垫、吸水垫分别位于包被膜的两侧；所述反应杯里含有如上所述联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金，所述包被膜上喷涂有检测区和质控区，所述检测区采用如上所述的联苯菊酯抗原溶液喷制。
其中，所述的衬板为不吸水的韧性材料，优选硬质塑胶条或不吸水硬纸条；所述的样品垫优选玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；所述的吸水垫优选吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸；所述的包被膜优选硝酸纤维素膜或醋酸纤维塑膜。
优选的，所述联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金的制备方法为：将胶体金与所述联苯菊酯单克隆抗体混合形成金标抗体，离心复溶后得到联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金。
作为本发明的进一步改进，所述检测区包括直线式隐形检测线T线，所述质控区包括羊抗鼠IgG溶液喷制的直线式隐形控制线C线，检测线T线和控制线C线相互平行。优选的，所述检测线T线和控制线C线间距至少0.5cm。
本发明还公开了一种如上所述的联苯菊酯的快速检验装置的制备方法，其包括以下步骤：
步骤A：联苯菊酯半抗原及抗原的制备；
将功夫酸与氯化亚砜反应，回流蒸干后溶解到氯仿中，冰浴下加入反应物2对硝基联苯醇，室温反应3～6h，蒸干，过柱纯化后得到中间产物2对硝基联苯醇功夫酸酯；称取上述中间产物2，溶于无水乙醇中，加入氯化亚锡，75℃回流1～2h，蒸干溶剂后纯化，得到黄色油状物，将所述黄色油状物用无水吡啶溶解后，加入丁二酸酐，反应3～6h，过硅胶柱纯化得到所述联苯菊酯半抗原；利用碳二亚胺法将所述联苯菊酯半抗原与载体蛋白牛血清偶联，制备得到所述联苯菊酯抗原；
步骤B：联苯菊酯单克隆抗体的制备；
用所述联苯菊酯抗原与免疫Balb/c小鼠经细胞融合，筛选得到联苯菊酯单克隆抗体细胞株，用获得的联苯菊酯单克隆抗体细胞株诱导小鼠产生腹水，纯化后获得联苯菊酯单克隆抗体；
步骤C：胶体金，联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金的制备；
用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；将胶体金与所述联苯菊酯单克隆抗体混合形成金标抗体，离心复溶后得到联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金；
步骤D：胶体金反应杯、纤维膜的包被；
将步骤C得到的联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金分装至微孔反应杯中，低温干燥；将所述联苯菊酯抗原与羊抗鼠IgG分别喷涂在纤维膜的检测区和控制区，干燥得到包被膜；
优选的，将所述联苯菊酯抗原用0.01MPBS稀释成1.5mg/ml；将羊抗鼠IgG用0.01MPBS稀释成1mg/ml；用Biodot喷膜机将二者以1μl/cm的速度喷涂于硝酸纤维膜上，分别形成检测线和控制线。所述检测线和控制线两条线之间的间隔为至少0.5cm。把喷涂有抗原和抗体的硝酸纤维膜置37℃烤箱中燥干。
步骤E：试纸条的组装；
将包被膜、吸水垫和样品垫依次在粘附在衬板上组装得到所述联苯菊酯检测试纸。
作为本发明的进一步改进，所述的联苯菊酯的快速检验装置的制备方法还包括将粘好的所述联苯菊酯检测试纸切成等宽度的试纸条，将所述反应杯及试纸条密封干燥保存。优选的，采用铝箔袋密封保存。
优选的，所述胶体金的制备步骤为：在冷凝回流装置中的圆底烧瓶中加入100ml超纯水和1ml1％的氯金酸溶液，加热至沸腾后加入1ml1％浓度的柠檬酸三钠溶液，反应15min后，室温冷却。此方法制备的胶体金粒径为40nm，最大吸收峰在526nm处。
优选的，经实验确定，单克隆抗体标记胶体金的最佳结合pH值为9.0，胶体金和抗体的配比为16μg/ml胶体金。联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金的制备方法为：将胶体金与所述联苯菊酯单克隆抗体混合形成金标抗体，离心复溶后得到联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金，联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金经0.5％BSA稳定剂，pH值为9.0、0.01M的Tris缓冲液处理后，取50～150μl胶体金-抗体结合物溶液至微孔反应杯里，冷冻干燥，并在低温干燥环境中保存。
本发明的技术方案，采用胶体金免疫层析方法检测联苯菊酯代谢物提供了一种快速、简便的联苯菊酯检测方法，这是一种利用单克隆抗体标记胶体金，利用抗原抗体的特异性结合判断待测样品中被检测物质的含量。其制备方法包括联苯菊酯半抗原及其抗原的制备，联苯菊酯单克隆抗体的制备，柠檬酸三钠法制备胶体金，在适当的标记条件下制备联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金，然后离心纯化金标抗体，接着将纯化好的金标抗体分装至微孔反应杯里，冷冻干燥，同时将包被抗原联苯菊酯-牛血清蛋白抗原、二抗羊抗小鼠IgG包被在纤维膜上，将干燥好的纤维膜，吸水垫，样品垫依次有序粘贴在硬质衬板上，制备胶体金试纸条。
与现有技术相比，本发明具有以下突出优点：
第一，采用本发明的技术方案，特异性强，检测灵敏度高，准确性高，重复性好，能更加快速、灵敏、简便地检测联苯菊酯残留；
第二，本发明的技术方案的快速检验装置，具有特异性强，检测灵敏度高，检测限达到150pbb，检测快速，只需10min可完成检验，前处理简单。
第三，采用本发明技术方案的快速检验装置，检测结果准确性高，重复性好；不需要任何仪器设备，便于携带，检测成本低；试纸条使用简单，无需专业人士操作；试纸条储存方便，稳定性好，在室温下至少可以保存六个月，适合于中小型企业、基层普及应用，便于推广。
附图说明
图1是本发明一种实施例联苯菊酯的快速检验装置的组装结构示意图。图中，1为底板，2为检测线T线，3为控制线C线，4为样品垫，5为包被的硝酸纤维膜，6为吸水垫，7为层析方向，8为反应杯。
图2是本发明一种实施例联苯菊酯的检测试纸组装好后的结构示意图。
图3是本发明一种实施例联苯菊酯半抗原的MS谱图。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明。
实施例1
如图1和图2所示，一种联苯菊酯的快速检验装置，其包括反应杯8和检测试纸，所述反应杯8为金标微孔，所述检测试纸包括底板1，以及底板1上一端粘附的样品垫4、中间粘附的包被的硝酸纤维膜5、另一端端粘附的吸水垫6。其中，反应杯8中含有联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金，包被的硝酸纤维膜5上包被了联苯菊酯抗原和羊抗鼠IgG，检测线T线2、控制线C线3位于包被的硝酸纤维膜5上，其中，所述检测线T线采用的联苯菊酯抗原溶液喷制，为直线式隐形的检测线T线2；所述控制线C线3采用羊抗鼠IgG溶液喷制，为直线式隐形的控制线C线3，检测线T线2和控制线C线3相互平行，所述控制线C线3和检测线T线2间隔0.5cm。在检测时，待测样品溶液按照从样品垫4向另一端的层析方向7进行层析。其中，所述底板1为PVC衬板。
实施例2
该试纸条的制备方法包括的步骤如下：
步骤A：联苯菊酯半抗原及其抗原的制备：
按照如下式(2)的合成路线合成所述联苯菊酯半抗原。
称取1.2g功夫酸即反应物1，加入8ml氯化亚砜，回流3h后，蒸干后得到中间产物1，用氯仿溶解，冰浴下滴加到溶有1g反应物2的氯仿吡啶溶液中，室温反应4h，蒸干，过柱纯化后得到淡黄色结晶物中间产物2。
称取1.2g上述中间产物2，溶于无水乙醇中，加入1.0g氯化亚锡，75℃回流1.5h，蒸干溶剂后过硅胶柱纯化，得到黄色油状物即中间产物3，用无水吡啶溶解后，加入0.5g丁二酸酐即反应物3，反应4h，过硅胶柱纯化得到联苯菊酯半抗原。
称取将10mg联苯菊酯半抗原与50mgBSA溶于5ml的0.1M、pH值为9.0的碳酸缓冲液，加入0.1g碳二亚胺，搅拌过夜后，透析纯化后，制得联苯菊酯抗原。
对得到的联苯菊酯半抗原经过测试，其分子量为521，其MS母离子峰为522.1，谱图如图3所示；颜色为淡黄色，其熔点为115-122℃。
步骤B：联苯菊酯单克隆抗体制备：
取上述联苯菊酯抗原首次与弗氏完全佐剂等量混合乳化，第2、3和4次与不完全弗氏佐剂等量混合乳化后免疫Balb/c小鼠共4次，取小鼠的脾细胞与杂交瘤细胞融合，直接和间接竞争ELISA方法筛选联苯菊酯的单克隆抗体细胞株，并用获得的细胞诱导小鼠产生腹水，纯化后获得大量联苯菊酯单克隆抗体。
步骤C：胶体金的制备：
在冷凝回流装置中的圆底烧瓶中加入100ml超纯水和1ml1％的氯金酸溶液，加热至沸腾后加入1ml1％柠檬酸三钠溶液，反应15min后，室温冷却。此方法制备的胶体金粒径为40nm，最大吸收峰在526nm处。
步骤D：联苯菊酯单克隆抗体标记胶体金：
在pH值为9.0的条件下，胶体金和联苯菊酯单克隆抗体的配比为16μg/ml胶体金，并通过离心和清洗获得纯化的联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金。联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金经稳定剂0.5％BSA，pH9.0值的0.01M的Tris缓冲液处理后，取50～150μl胶体金-抗体结合物溶液至微孔反应杯里，冷冻干燥，并在低温干燥环境中保存。
步骤E：硝酸纤维膜的包被：
将所述联苯菊酯抗原用0.01M的PBS稀释成1.5mg/ml；将羊抗鼠IgG(羊抗鼠IgG从试剂公司购买)用0.01MPBS稀释成1mg/ml；用Biodot喷膜机将二者以1μl/cm的速度喷涂于硝酸纤维膜上，分别形成检测线和控制线；两条线之间的间隔为0.5cm。把喷涂有所述联苯菊酯抗原和羊抗鼠抗体的硝酸纤维膜置于37℃烤箱中干燥，得到包被的硝酸纤维膜。
步骤F：试纸条的组装：
将包被的硝酸纤维膜5、样品垫4和吸水垫6依次粘在PVC衬板上，如图1和图2所示，底板1中间先粘附包被的硝酸纤维膜5，其中包被的硝酸纤维膜5预先喷制好了检测线T线2和控制线C线3，然后在包被的硝酸纤维膜5上粘附吸水垫6和样品垫4，这样制得粘好的PVC材料的检验试纸。
然后将粘好的PVC材料的检验试纸切成等宽的试纸条，将反应杯和试纸条用铝箔袋封装即制成联苯菊酯检验试纸条，并放入4℃冰箱中冷藏。
在进行联苯菊酯的代谢物检测时，先将装有联苯菊酯检验试纸条的铝箔袋从4℃冰箱取出，室温放置5min后，从铝箔袋中取出试纸条和反应杯。将样品液加入反应杯中，混匀，将试纸条的样品垫端插入反应杯中，8-10min后取出，平放在干净的桌面上，并将样品垫移去，进行结果判断：
如果检测线T线不出现红色条带、或检测线T线的颜色比控制线C线的颜色浅，则表明有联苯菊酯残留存在，结果为阳性，联苯菊酯的含量在试纸条检测限以上；
如果检测线T线和控制线C线的红色条带颜色强度相当，则表明联苯菊酯的含量在试纸条检测限附近；
如果检测线T线的条带颜色比控制线C线的颜色深，结果为阴性，表明不含联苯菊酯残留或联苯菊酯的含量在试纸条检测限以下；
如果控制线不出现红色条带，则说明试纸条无效。
采用此技术方案，利用抗原抗体的特异性结合，可大致判断待测样品中被检测物质的含量，进行定性和半定量的分析，检测灵敏度高，准确性高，重复性好，实现了联苯菊酯代谢物的快速检测。
实施例3
对实施例2得到的试纸进行灵敏度、特异性和保持期的检测。
(1)灵敏度实验：
按实施例2中快速检测装置的检验的方法对样品进行试验，用本发明检测装置进行检测0ppb、100ppb、150ppb、300ppb和500ppb浓度的联苯菊酯样品，重复20次，其中150ppb的联苯菊酯样品检测的结果为T线与C线颜色强度相当，即为弱阳性；300ppb和500ppb的联苯菊酯样品的检测结果为T线颜色明显弱于C线，即为强阳性；对0ppb和100ppb的联苯菊酯样品的检测结果为T线颜色明显深于C线的颜色，即为阴性。此20次结果显色深度均一，检测结果显示一致。
(2)特异性实验：
按照实施例2中快速检测装置的检验的方法对样品进行试验，本检测装置对八种菊酯类农药样品，分别为顺-氯菊酯、胺菊酯、反-氯菊酯、氟氯氰菊酯、醚菊酯、溴氰菊酯、S-氰戊菊酯和氰戊菊酯，在浓度为5ppm时，样品的检测结果均为阴性，没有交叉反应，说明该检测装置具有很好的特异性，检测时不会受到其他样品的干扰。
(3)快速检测装置的保质期：
该检测装置在室温下保存6个月后均具有良好的性能，即检测其它农药无交叉反应，灵敏度达150ppb。该检测装置的在4℃的保存18个月以后依然具有良好的性能。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种联苯菊酯半抗原，其特征在于：其具有式(1)所示的化学结构式：
2.根据权利要求1所述的联苯菊酯半抗原，其特征在于，采用以下步骤制备得到：
步骤S1：将功夫酸与氯化亚砜反应，回流蒸干后溶解到氯仿中，冰浴下加入对硝基联苯醇，20～30℃下反应3～6h，蒸干，过柱纯化后得到对硝基联苯醇功夫酸酯；
步骤S2：称取上述对硝基联苯醇功夫酸酯，溶于无水乙醇中，加入氯化亚锡，70～80℃回流1～2h，蒸干溶剂后纯化，得到黄色油状物，将所述黄色油状物用无水吡啶溶解后，加入丁二酸酐，反应3～6h，过硅胶柱纯化得到所述联苯菊酯半抗原。
3.一种联苯菊酯抗原，其特征在于：采用权利要求1或2所述的联苯菊酯半抗原制备得到，利用碳二亚胺法，将所述联苯菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到联苯菊酯抗原。
4.根据权利要求3所述的联苯菊酯抗原，其特征在于：所述联苯菊酯抗原采用以下步骤制备：将所述联苯菊酯半抗原与BSA溶于pH值为8.5～9.5的碳酸缓冲溶液中，并加入碳二亚胺，搅拌12～24h，透析纯化，得到联苯菊酯抗原。
5.一种联苯菊酯单克隆抗体，其特征在于：采用权利要求3或4所述的联苯菊酯抗原与免疫Balb/c小鼠经细胞融合，筛选得到联苯菊酯单克隆抗体细胞株，用获得的联苯菊酯单克隆抗体细胞株诱导小鼠产生腹水，纯化后获得联苯菊酯单克隆抗体。
6.一种联苯菊酯的快速检验装置，其特征在于：包括反应杯和检验试纸，所述检验试纸包括衬板以及衬板上依次粘附包被膜、吸水垫、样品垫，并使得样品垫、吸水垫分别位于包被膜的两侧；所述反应杯里含有胶体金标记的如权利要求5所述联苯菊酯单克隆抗体，所述包被膜上喷涂有检测区和质控区，所述检测区采用权利要求3或4所述的联苯菊酯抗原溶液喷制。
7.根据权利要求6所述的联苯菊酯的快速检验装置，其特征在于：所述胶体金标记的联苯菊酯单克隆抗体的制备方法为：将胶体金与所述联苯菊酯单克隆抗体混合形成金标抗体，离心复溶后得到联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金。
8.根据权利要求7所述的联苯菊酯的快速检验装置，其特征在于：所述检测区包括直线式隐形检测线T线，所述质控区包括羊抗鼠IgG溶液喷制的直线式隐形控制线C线，检测线T线和控制线C线相互平行。
9.权利要求6～8任意一项所述的联苯菊酯的快速检验装置的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
步骤A：将功夫酸与氯化亚砜反应，回流蒸干后溶解到氯仿中，冰浴下加入对硝基联苯醇，室温反应3～6h，蒸干，过柱纯化后得到对硝基联苯醇功夫酸酯；称取上述中间产物2，溶于无水乙醇中，加入氯化亚锡，75℃回流1～2h，蒸干溶剂后纯化，得到黄色油状物，将所述黄色油状物用无水吡啶溶解后，加入丁二酸酐，反应3～6h，过硅胶柱纯化得到所述联苯菊酯半抗原；利用碳二亚胺法将所述联苯菊酯半抗原与载体蛋白牛血清偶联，制备得到所述联苯菊酯抗原；
步骤B：用所述联苯菊酯抗原与免疫Balb/c小鼠经细胞融合，筛选得到联苯菊酯单克隆抗体细胞株，用获得的联苯菊酯单克隆抗体细胞株诱导小鼠产生腹水，纯化后获得联苯菊酯单克隆抗体；
步骤C：用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；将胶体金与所述联苯菊酯单克隆抗体混合形成金标抗体，离心复溶后得到联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金；
步骤D：将步骤C得到的联苯菊酯单克隆抗体标记的胶体金分装至微孔反应杯中，低温干燥；将所述联苯菊酯抗原与羊抗鼠IgG分别喷涂在纤维膜的检测区和控制区，干燥得到包被膜；
步骤E：将包被膜、吸水垫和样品垫依次在粘附在衬板上组装得到所述联苯菊酯检测试纸。
10.权利要求9所述的联苯菊酯的快速检验装置的制备方法，其特征在于：还包括将所述联苯菊酯检测试纸切成等宽度的试纸条，将所述反应杯及试纸条密封干燥保存。
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