CN105664232A - 止血材料及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

一种止血材料，其包括可生物降解多肽、黏性加强剂和水，所述可生物降解多肽与黏性加强剂相互交联，所述可生物降解多肽的份数为2～100，所述黏性加强剂的份数为1～60，所述水的份数为840～997。一种止血材料的制备方法及其应用。本发明的止血材料，具有良好的生物相容性和可降解性，不依赖于机体的凝血机制，且具有优异的止血效果以及促进创伤组织的修复。

Description

止血材料及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医学止血材料领域，特别涉及一种止血材料及其制备方法和应用。
背景技术
出血失控是导致诸多突发事故，如交通意外，台风、地震、海啸、泥石流等自然灾害以及重大医疗手术中大出血致死或战伤死亡的主要原因，实现对创伤部位有效、快速的止血，可以大大提高伤者的救治几率，扭转危急的生命。因此，开发针对现场、院前以及手术中急救用的，快速、安全、有效的新型医用可吸收止血材料具有十分重要的意义。
随着科学技术的迅速发展，止血材料得到了长足的发展。目前国内市场上常见的止血材料主要有纤维蛋白胶、明胶海绵、胶原和壳聚糖等。然而，纤维蛋白胶虽有良好的粘合性，但由于其不能压迫止血，无法单独应用于大创面止血，此外因其源自动物和人体的血液，易致过敏和病毒感染；明胶海绵的多孔结构使得对血液有很强的吸收作用，并激活血小板，促进血栓形成，但其对内脏创伤部位的粘附性较差，且在体内降解吸收性较差，大大地增加了伤口部位感染的风险；壳聚糖虽具有一定的抑菌性和止血作用，但因止血效果有限而对较大出血部位止血效果不很理想。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种安全性高、粘附性好且有利于创伤组织愈合的止血材料及其制备方法和应用。
本发明提供一种止血材料，其包括可生物降解多肽、黏性加强剂和水，所述可生物降解多肽与黏性加强剂相互交联，所述可生物降解多肽的份数为2～100，所述黏性加强剂的份数为1～60，所述水的份数为840～997。
本发明还提供一种上述止血材料的制备方法，包括如下步骤：
使用含有保护基团的氨基酸和苯硼酸或苯硼酸频哪醇酯制备可生物降解多肽；
向含有可生物降解多肽的溶液中，加入黏性加强剂并混合均匀，得到止血材料。
本发明还提供一种上述止血材料在作为组织损伤修复医用止血材料中的应用。
本发明的止血材料，具有良好的生物相容性和可降解性，不依赖于机体的凝血机制，且具有优异的止血效果以及促进创伤组织的修复。
具体实施方式
本发明提供一种止血材料，其包括可生物降解多肽、黏性加强剂和水，所述多肽可自组装形成纳米纤维的微观结构，所述可生物降解多肽与黏性加强剂相互交联，所述可生物降解多肽的份数为2～100，所述黏性加强剂的份数为1～60，所述水的份数为840～997。例如：所述可生物降解多肽的质量百分数为0.2～10％，所述黏性加强剂的质量百分数为0.1～6％，所述水的质量百分数为84～99.7％。
进一步的，所述黏性加强剂包括黏附蛋白和生物可兼容的金属离子中的一种或几种。
所述可生物降解多肽为生物体可自行降解可吸收并不会造成危害的多肽。其由离子自互补型多肽段、促细胞粘附多肽段和苯硼酸组成。
所述离子自互补型多肽段包括正电荷氨基酸、负电荷氨基酸和疏水性氨基酸，所述正电荷氨基酸、疏水性氨基酸和负电荷氨基酸交替连接。
进一步的，所述正电荷氨基酸包括但不限于精氨酸(Arg,R)、赖氨酸(Lys，K)和组氨酸(His，H)中的一种或几种。
进一步的，所述负电荷氨基酸包括但不限于谷氨酸(Glu,E)和天冬氨酸(Asp，D)中的一种或几种。
进一步的，所述疏水性氨基酸包括但不限于苯丙氨酸(Phe，F)、缬氨酸(Val，V)、亮氨酸(Leu，L)、异亮氨酸(Ile，I)和丙氨酸(Ala，A)中的一种或几种。
在具体实施例中，所述离子自互补型多肽段包括苯丙氨酸-赖氨酸-苯丙氨酸-谷氨酸(FKFE)、苯丙氨酸-赖氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸(FKFD)、苯丙氨酸-精氨酸-苯丙氨酸-谷氨酸(FRFE)、苯丙氨酸-精氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸(FRFD)、缬氨酸-赖氨酸-缬氨酸-谷氨酸(VKVE)、缬氨酸-赖氨酸-缬氨酸-天冬氨酸(VKVD)、亮氨酸-赖氨酸-亮氨酸-谷氨酸(LKLE)、亮氨酸-赖氨酸-亮氨酸-天冬氨酸(LKLD)、丙氨酸-赖氨酸-丙氨酸-谷氨酸(AKAE)、丙氨酸-赖氨酸-丙氨酸-天冬氨酸(AKAD)中的一种或几种。优选为2～5个同种或异种片段串联。
所述促细胞粘附多肽段包括精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)、酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸(YIGSR)，异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸(IKVAV)、赖氨酸-谷氨酰胺-丙氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(KQAGDV)、精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(REDV)、脯氨酸-组氨酸-丝氨酸-精氨酸-天冬酰胺(PHSRN)、甘氨酸-苯丙氨酸-吡咯赖氨酸-甘氨酸-谷氨酸-精氨酸(GFOGER)、甘氨酸-脯氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-异亮氨酸-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酰胺(GPQGIAGQ)中的一种或几种。
所述苯硼酸包括但不限于间氨基苯硼酸、间羧基苯硼酸、对氨基苯硼酸、对羧基苯硼酸中的一种或几种。例如3-氨基苯硼酸、4-氨基苯硼酸、3-羧基苯硼酸、4-羧基苯硼酸等中的一种。其中苯硼酸的羧基、氨基连接在离子自互补型多肽段的N端氨基酸上。
所述黏附蛋白包括贻贝足丝蛋白(musselfootprotein，Mfp)和贻贝粘附蛋白(musseladhesiveprotein，MAP)中的一种或多种。
进一步的，所述黏附蛋白包括但不限于厚壳贻贝足丝蛋白(Mytiluscoruscusfootprotein，Mcfp)、紫贻贝足蛋白(Mytilusedulisfootprotein，Mefp)、翡翠贻贝足丝蛋白(Pernaviridisfootprotein，Pvfp)中的一种或多种。例如厚壳贻贝足丝蛋白1(Mytiluscoruscusfootprotein1，Mcfp1)、厚壳贻贝足丝蛋白2(Mcfp2)、厚壳贻贝足丝蛋白3(Mcfp3)、厚壳贻贝足丝蛋白4(Mcfp4)、厚壳贻贝足丝蛋白5(Mcfp5)、厚壳贻贝足丝蛋白6(Mcfp6)、紫贻贝1类足蛋白(Mytilusedulisfootprotein1，Mefp1)、紫贻贝2类足蛋白(Mefp2)、紫贻贝3类足蛋白(Mefp3)、紫贻贝4类足蛋白(Mefp4)、紫贻贝5类足蛋白(Mefp5)和紫贻贝6类足蛋白(Mefp6)中的一种或多种。优选为Mefp1、Mefp3、Mefp5、Mcfp3、Mcfp4、Mcfp5中的一种或多种。
所述生物可兼容的金属离子为生物体可吸收并不会造成危害的金属离子，包括与人体生物兼容性较好的1价、2价或3价金属离子，特别是钠离子(Na+)、钾离子(K+)、钙离子(Ca2+)、铁离子(Fe3+)和锌离子(Zn2+)中的一种或多种。
所述可生物降解多肽的质量百分比浓度为0.2％～10％，所述黏附蛋白的质量百分比浓度为0.1％～6％，所述水的质量百分数为84～99.7％。
所述止血材料微观结构呈三维网络的纤维结构，所述纤维具有数十纳米至数十微米的直径以及数百微米以上的长度。
本发明的止血材料中的可生物降解多肽在生理盐水溶液(pH为7.0～7.4)、生理(pH为7.4)磷酸盐缓冲溶液中自发自组装形成纳米纤维，并进一步与黏附蛋白发生苯硼酸-邻二羟基的“点击化学”反应快速交联，形成纳米纤维的三维网络结构，该纤维网络可有效阻挡血液成分的渗出。并且可生物降解多肽中的离子自互补多肽段具有两性离子的特征，具有较好的抗生物分子粘附及抗菌作用。而促细胞粘附多肽段可以为细胞粘附提供作用位点，有利于特定细胞的粘附、增殖，促进伤口组织愈合、修复。
同时其黏附蛋白通过与创伤组织中的生物分子发生物理、化学作用起到快速黏合的作用，维持其稳固性和完整性，使得本发明的止血材料粘附性能良好。
生物可兼容的金属离子也能够与可生物降解多肽之间发生螯合作用，促发高分子交联形成网络结构，提高止血性能。进一步的，生物可兼容的金属离子也可以与黏附蛋白发生螯合作用，进行化学交联，形成互穿网络的结构，加强止血材料的稳定性和粘附性能。
本发明还提供一种上述止血材料的制备方法，包括如下步骤：
用含有保护基团的氨基酸和苯硼酸或其频哪醇酯制备可生物降解多肽，所述可生物降解多肽氮端至碳端依次为苯硼酸、离子自互补型多肽段、促细胞粘附多肽段。
向含有可生物降解多肽的溶液中，加入黏性加强剂并混合均匀，得到止血材料。
1.用含有保护基团的氨基酸和苯硼酸或其频哪醇酯制备可生物降解多肽，所述可生物降解多肽氮端至碳端依次为苯硼酸、离子自互补型多肽段、促细胞粘附多肽段。
所述制备可生物降解多肽包括如下步骤：采用固相多肽合成法，将所述可生物降解多肽碳端至氮端的含有保护基团的氨基酸和苯硼酸及其频哪醇酯依次连接在固相树脂上，加入加速剂、FMOC脱除剂和缩合剂，偶联循环至多肽链缩合完成，用切落剂将多肽从树脂上切割下来，得到多肽粗产品，将多肽粗产品分离纯化，得到可生物降解多肽。
所述苯硼酸或苯硼酸频哪醇酯包括但不限于间氨基苯硼酸、间羧基苯硼酸、对氨基苯硼酸、对羧基苯硼酸、间氨基苯硼酸频哪醇酯、间羧基苯硼酸频哪醇酯、对氨基苯硼酸频哪醇酯和对羧基苯硼酸频哪醇酯中的一种或几种。例如3-氨基苯硼酸、4-氨基苯硼酸、3-羧基苯硼酸、4-羧基苯硼酸、3-氨基苯硼酸频哪醇酯、4-氨基苯硼酸频哪醇酯、3-羧基苯硼酸频哪醇酯、4-羧基苯硼酸频哪醇酯等。本领域技术人员可以理解的，苯硼酸频哪醇酯在固相多肽反应过程中可酸解生成苯硼酸。
所述固相树脂包括但不限于氯-三苯甲基氯树脂(Cl-TrtResin)和RinkAmide树脂(RinkAmideAMResin)等，所述树脂预先用二氯甲烷、三氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylmethanamide，DMF)中的一种或几种溶剂溶胀。
所述保护基团包括但不限于保护氨基的N-芴-9-甲氧羰基(FMOC)和叔丁氧羰基(Boc)、保护羧基的叔丁氧基(OtBu)、保护胍基的2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基(Pbf)以及保护羟基的叔丁基(tBu)。例如：氨基被N-芴-9-甲氧羰基保护的丙氨酸(FMOC-Ala-OH)、氨基被N-芴-9-甲氧羰基保护的缬氨酸(FMOC-Val-OH)、氨基被N-芴-9-甲氧羰基保护的亮氨酸(FMOC-Leu-OH)、氨基以及侧基的羧基分别被N-芴-9-甲氧羰基和叔丁氧基保护的谷氨酸(FMOC-Glu(OtBu)-OH)、氨基以及侧基的羧基分别被N-芴-9-甲氧羰基和叔丁氧基保护的天冬氨酸(FMOC-Asp(OtBu)-OH)、氨基以及侧基的胍基分别被N-芴-9-甲氧羰基和2,2,4,6,7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基保护的精氨酸(FMOC-Arg(Pbf)-OH)、氨基以及侧基的氨基分别被N-芴-9-甲氧羰基和叔丁氧羰基保护的赖氨酸(FMOC-Lys(Boc)-OH)、氨基被N-芴-9-甲氧羰基保护的甘氨酸(FMOC-Gly-OH)、氨基以及侧基的羟基被N-芴-9-甲氧羰基和叔丁基保护的丝氨酸(FMOC-Ser(tBu)-OH)等。
所述缩合剂包括但不限于苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(O-Benzotriazol-1-yl-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorophosphate，HBTU)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(O-(7-Azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-te-tramethyluroniumhexafluorophosphate，HATU)、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐(O-Benzotriazol-1-yl-N,N,N',N'-tetramethyluroniumtetrafluoroborate，TBTU)、1-羟基苯并三氮唑(N-Hydroxybenzotrizole，HOBt)和1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(1-Hydroxy-7-azabenzotriazole，HOAt)中的一种或几种。
所述加速剂用于催化多肽合成反应，包括但不限于二异丙基乙胺(N,N-Diisopropylethylamine，DIEA)、4-二甲氨基吡啶(4-Dimethylaminopyridine，DMAP)中的一种或几种。
所述FMOC脱除剂包括但不限于哌啶、吗啡啉中的一种或几种。
进一步的，可将含有保护基团的氨基酸、苯硼酸、加速剂、FMOC脱除剂和缩合剂溶解在有机溶剂中，所述有机溶剂包括但不限于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide，DMSO)和1，4-二氧六环中一种或几种。
其中，所述含有保护基团的氨基酸浓度为0.05～0.5mol/L，所述苯硼酸浓度为0.05～0.5mol/L，所述缩合剂浓度为0.06～0.6mol/L，所述加速剂浓度为0.3～3mol/L，所述FMOC脱除剂浓度百分比为10～50％。
所述切落剂包括但不限于三氟乙酸(Trifluoroaceticacid，TFA)、乙二硫醇(Ethane-1,2-dithiol，EDT)、二硫代苏糖醇(Dithiothreitol，DTT)、苯甲硫醚、三异丙基硅烷(Triisopropylsilane，TIS)和水中的一种或几种。例如，若采用几种进行混合时，其质量百分比浓度依次分别为80～95％、1～5％、1～5％、1～5％和1～5％。
进一步的，进行固相多肽合成时，可加入氮气、氩气等惰性气体提高反应效率，缩短反应时间。
进一步的，为确保每一步氨基酸缩合完全，可对反应后树脂进行检色验证是否有残余氨基未反应，包括但不限于紫外检测和茚三酮显色，本发明优选采用茚三酮显色。
本领域技术人员可以理解的，将多肽从树脂上切割下来后，还可以进一步对其浓缩，用有机溶剂沉淀、抽滤、洗涤、干燥后得到多肽粗产品。所述有机溶剂包括但不限于乙醚、丙酮和异丙醇的一种或几种。
本领域技术人员可以理解的，将多肽粗产品分离纯化可采用反向高效液相色谱法，分离液经冷冻干燥后，得到可生物降解多肽。
2.向含有可生物降解多肽的溶液中，加入黏性加强剂并混合均匀，得到止血材料。
进一步的，所述含有可生物降解多肽的溶液，包括将可生物降解多肽溶解于生理盐水和生理磷酸盐缓冲溶液的一种或几种。
所述生理盐水的pH值为7.4，主要成分为99.1％的水和0.9％的氯化钠。
所述生理磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4，主要成分为10mmol/L磷酸二氢钾、10mmol/L磷酸氢二钠、100mmol/L氯化钠、以及100mmol/L氯化钾。
本领域技术人员可以理解的，将可生物降解多肽溶解进一步可采用振荡、搅拌、超声、涡旋、加热等方法，本发明优先采用超声、加热、或联合使用，加热温度为35～80℃，超声至多肽分散溶解。
所述黏性加强剂包括黏附蛋白和生物可兼容的金属离子中的一种或几种。
本领域技术人员可以理解的，所述黏性加强剂即可以为黏附蛋白，又可以为生物可兼容的金属离子，进一步还可以为黏附蛋白和生物可兼容的金属离子。当同时为黏附蛋白和生物可兼容的金属离子时，黏附蛋白和生物可兼容的金属离子加入顺序并不限定。
可生物降解多肽溶液的浓度根据其序列的分子量及疏水氨基酸的强弱而定，所述可生物降解多肽溶液的质量百分比浓度约为0.4％～20％，可生物降解多肽占总体止血材料的质量百分比0.2％～10％。所述的黏附蛋白溶液的质量百分比浓度约为0.2％～12％，黏附蛋白占总体止血材料的质量百分比0.1％～6％。优选，所述加入的可生物降解多肽溶液和黏附蛋白溶液的体积为1:1。所述生物可兼容的金属离子的浓度约为0.2～2mol/L，占总体止血材料的质量百分比0.1％以下。按预设比例加入，所述比例根据可生物降解多肽的浓度及离子价位进行计算。
本发明还提供一种上述止血材料在作为组织损伤修复医用止血材料中的应用。尤其是作为常规创面出血、不规则的大动脉破裂以及实质脏器出血失控的止血材料中的应用。
本发明的止血材料具有良好的生物相容性和可降解性，可快速粘合皮肤、血管或器官破损区域，实现快速(<20s)、有效的止血，并可促进伤口组织的愈合和修复。
实施例
为让本发明更明显易懂，以下特举较佳实施例，作详细说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。凡在本发明的精髓和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例1
(1)制备可生物降解多肽B(OH)2FKFEFKFEFKFEGRGDS-OH(P-I)。
取1.0g的2-氯-三苯甲基氯树脂(取代度1.08mmol/g，1％DVB)于固相合成柱中，用8mLDMF溶胀1小时，排出DMF溶剂。取10mL含0.77gFMOC-Ser(tBu)-OH的DMF溶液加入上述溶胀后的树脂中，继续加入1.3mLDIEA，搅拌反应1.5小时，排出反应液，用10mLDMF洗涤四次。
取8mL浓度为20％的哌啶(Piperidine)/DMF溶液加入上述反应柱中，反应20分钟，脱除氨基端的FMOC保护基，用10mLDMF洗涤四次，继续加入12mL含0.82gFMOC-Asp(OtBu)-OH、0.91gHBTU、0.32gHOBt和0.65mLDIEA的DMF溶液，搅拌反应2小时，排出溶剂，用10mLDMF洗涤四次。取1mL10mg/mL的茚三酮/甲醇溶液加入到上述的少量树脂中，加热煮沸数分钟，呈无色，表明缩合完全，继续延长肽链，反之，继续进行氨基酸缩合步骤。重复上述FMOC脱除步骤、氨基酸缩合步骤、以及茚三酮检色步骤延长肽链至N端氨基酸、苯硼酸缩合完成。
上述连接多肽的固相树脂经二氯甲烷洗涤四次，于常温下真空干燥24小时，继而加入30mL的三氟乙酸(TFA)/三异丙基硅烷(TIS)/水(体积比为95:2.5:2.5)，反应1.5小时，收集滤液及TFA洗涤液，浓缩后用冷乙醚沉淀，抽滤、洗涤、干燥后得到白色粉末，用一定体积的去离子水溶解、经反向高效液相色谱分离，低温冷冻干燥得到所述多肽的粉末产品。
(2)可生物降解多肽的溶液的制备。
将多肽P-I溶解于pH约为7.4的生理盐水溶液中，制成质量百分比浓度为1.2％的溶液，超声分散，于室温下静置2小时，即得到可生物降解多肽的溶液。
(3)生物可兼容的金属离子增强交联的多肽止血材料制备
将CaCl2溶解于pH为7.4的生理盐水溶液中，制成0.5mol/L的溶液，按每毫升多肽溶液加入10μLCa2+溶液的比例，涡旋混合均匀，静置1分钟，即得到生物可兼容的金属离子交联的多肽止血材料。
实施例2
(1)制备可生物降解多肽B(OH)2FKFEFKFEFKFEGRGDS-OH(P-I)，如实施例1所示。
(2)可生物降解多肽溶液的制备。
将多肽P-I溶解于pH为7.4的生理盐水溶液中，制成质量百分比浓度为2.4％的溶液，超声分散，于室温下静置2小时，即得到可生物降解多肽的溶液。
(3)黏附蛋白交联的多肽止血材料制备。
将黏附蛋白Mefp-3溶解于pH为7.4的生理盐水溶液中，制成质量百分比浓度为1.2％的溶液，将Mefp-3溶液与(2)中的可生物降解多肽溶液等体积混合，涡旋1min，即得到黏附蛋白交联的多肽止血材料。
实施例3
(1)制备可生物降解多肽B(OH)2AKAEAKAEAKAEAKAEIKVAV-OH(P-II)，如实施例1所示。
(2)可生物降解多肽溶液的制备。
将多肽P-II溶解于pH为7.4的PBS溶液中，制成质量百分比浓度为4％的溶液，超声分散，于室温下静置3小时，即得到可生物降解多肽溶液。
(3)黏附蛋白交联的多肽溶液的制备。
将黏附蛋白Mcfp-5溶解于pH为7.4的生理磷酸盐缓冲溶液溶液中，制成质量百分比浓度为2％的溶液，将Mcfp-5溶液与(2)中的可生物降解多肽溶液等体积混合，涡旋1min，即得到黏附蛋白交联的多肽溶液。
(4)生物可兼容的金属离子增强交联的多肽/黏附蛋白复合止血材料的制备
将FeCl3溶解于pH为7.4的生理盐水溶液中，制成0.5mol/L的溶液，按每毫升复合黏附蛋白交联的多肽溶液加入8μLFe3+溶液的比例，涡旋混合均匀，即得到生物可兼容的金属离子交联的多肽/黏附蛋白复合止血材料。
实施例4
(1)制备可生物降解多肽B(OH)2FRFEFRFEYIGSR-OH(P-III)。
取1.0g的RinkAmideAM树脂(取代度0.61mmol/g，1％DVB)于固相合成柱中，用8mLDMF溶胀1小时，排出DMF溶剂。
取8mL浓度为50％的哌啶(Piperidine)/DMF溶液加入上述反应柱中，反应6分钟，脱除氨基端的FMOC保护基，用10mLDMF洗涤四次。取10mL含0.63gFMOC-Arg(Pbf)-OH、0.55gHBTU、0.19gHOBt和0.45mLDIEA的DMF溶液加入上述溶胀后的树脂中，搅拌反应1.5小时，排出反应液，用10mLDMF洗涤四次。取1mL10mg/mL的茚三酮/甲醇溶液加入到上述的少量树脂中，加热煮沸数分钟，呈无色，表明缩合完全，继续延长肽链，反之，继续进行氨基酸缩合步骤。继续上述FMOC脱除步骤、氨基酸缩合步骤、以及茚三酮检色步骤延长肽链至N端氨基酸、苯硼酸缩合完成。
上述连接多肽的固相树脂经二氯甲烷洗涤四次，于常温下真空干燥24小时，继而加入30mL的三氟乙酸(TFA)/乙二硫醇(EDT)/苯酚/苯甲硫醚/水(体积比为82.5:2.5:6:4.5:4.5)，反应1.5小时，收集滤液及TFA洗涤液，浓缩后用冷乙醚沉淀，抽滤、洗涤、干燥后得到白色粉末，用一定体积的去离子水溶解、经反向高效液相色谱分离，低温冷冻干燥得到所述多肽的粉末产品。
(2)可生物降解多肽溶液的制备。
将多肽P-III溶解于pH为7.4的生理盐水溶液中，制成质量百分比浓度为1.6％的溶液，超声分散，于室温下静置1小时，即得到可生物降解多肽的溶液。
(3)复合黏附蛋白交联的多肽止血材料的制备。
将黏附蛋白Mefp-4和Mefp-5溶解于pH为7.4的生理磷酸盐缓冲溶液溶液中，制成质量百分比浓度为分别为0.6％和1％的溶液，将此Mefp混合溶液与(2)中的多肽溶液等体积混合，涡旋1min，即得到黏附蛋白交联的多肽止血材料。
实施例5
(1)制备可生物降解多肽B(OH)2FRFEFRFEYIGSR-OH(P-III)，如实施例4所示。
(2)可生物降解多肽溶液的制备如实施例4所示。
(3)黏附蛋白交联的多肽止血材料的制备如实施例4所示。
(4)生物可兼容的金属离子增强交联的多肽/黏附蛋白复合止血材料的制备如实施例3所示。

Claims (14)

1.一种止血材料，其包括可生物降解多肽、黏性加强剂和水，所述可生物降解多肽与黏性加强剂相互交联，所述可生物降解多肽的份数为2～100，所述黏性加强剂的份数为1～60，所述水的份数为840～997。
2.如权利要求1所述的止血材料，其特征在于，所述黏性加强剂包括黏附蛋白和生物可兼容的金属离子中的一种或几种。
3.如权利要求1或2所述的止血材料，其特征在于，所述可生物降解多肽包括离子自互补型多肽段、促细胞粘附多肽段和苯硼酸。
4.如权利要求3所述的止血材料，其特征在于，所述离子自互补型多肽段包括正电荷氨基酸、负电荷氨基酸和疏水性氨基酸，所述正电荷氨基酸、疏水性氨基酸和负电荷氨基酸交替连接。
5.如权利要求4所述的止血材料，其特征在于，所述正电荷氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸中的一种或几种；所述负电荷氨基酸包括谷氨酸和天冬氨酸中的一种或几种；所述疏水性氨基酸包括苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和丙氨酸中的一种或几种。
6.如权利要求3所述的止血材料，其特征在于，所述促细胞粘附多肽段包括精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸、酪氨酸-异亮氨酸-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸，异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸、赖氨酸-谷氨酰胺-丙氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-缬氨酸、精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-缬氨酸、脯氨酸-组氨酸-丝氨酸-精氨酸-天冬酰胺、甘氨酸-苯丙氨酸-吡咯赖氨酸-甘氨酸-谷氨酸-精氨酸和甘氨酸-脯氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-异亮氨酸-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酰胺中的一种或几种。
7.如权利要求3所述的止血材料，其特征在于，所述苯硼酸包括间氨基苯硼酸、间羧基苯硼酸、对氨基苯硼酸和对羧基苯硼酸中的一种或几种。
8.如权利要求2所述的止血材料，其特征在于，所述黏附蛋白包括贻贝足丝蛋白和贻贝粘附蛋白中的一种或几种。
9.如权利要求8所述的止血材料，其特征在于，所述黏附蛋白包括厚壳贻贝足丝蛋白、紫贻贝足蛋白和翡翠贻贝足丝蛋白中的一种或多种。
10.如权利要求2所述的止血材料，其特征在于，所述生物可兼容金属离子包括Na+、K+、Ca2+、Fe3+和Zn2+中的一种或几种。
11.一种止血材料的制备方法，包括如下步骤：
用含有保护基团的氨基酸和苯硼酸或苯硼酸频哪醇酯制备可生物降解多肽；
向含有可生物降解多肽的溶液中，加入黏性加强剂并混合均匀，得到混合液。
12.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，用含有保护基团的氨基酸和苯硼酸或苯硼酸频哪醇酯制备可生物降解多肽包括如下步骤：采用固相合成法，将含有保护基团的氨基酸和苯硼酸或其频哪醇酯依次连接在固相树脂上，加入加速剂、FMOC脱除剂和缩合剂，偶联循环至多肽链缩合完成，用切落剂将多肽从树脂上切割下来，得到多肽粗产品，将多肽粗产品分离纯化，得到可生物降解多肽。
13.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述黏性加强剂包括黏附蛋白和生物可兼容的金属离子中的一种或几种。
14.一种如权利要求1～10任一项所述的止血材料在作为组织损伤修复医用止血材料中的应用。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007142757A2 (en) * 2006-04-25 2007-12-13 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for affecting movement of contaminants, bodily fluids or other entities and/or affecting other physiological conditions
CN102596275A (zh) * 2009-09-04 2012-07-18 亚洲大学校产学协力团 用于组织粘合剂的原位成型水凝胶及其生物医学用途
CN104031393A (zh) * 2008-06-18 2014-09-10 生命连结有限公司 改进的交联组合物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007142757A2 (en) * 2006-04-25 2007-12-13 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for affecting movement of contaminants, bodily fluids or other entities and/or affecting other physiological conditions
CN104031393A (zh) * 2008-06-18 2014-09-10 生命连结有限公司 改进的交联组合物
CN102596275A (zh) * 2009-09-04 2012-07-18 亚洲大学校产学协力团 用于组织粘合剂的原位成型水凝胶及其生物医学用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIHONG HE ET AL.: "pH responsive self-healing hydrogels formed by boronate–catechol complexation", 《CHEM.COMMUN.》 *
NIELS HOLTEN-ANDERSEN ET AL.: "pH-induced metal-ligand cross-links inspired by mussel yield self-healing polymer networks with near-covalent elastic moduli", 《PNAS》 *

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