CN105661016A - 一种熊蜂饲料的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种熊蜂饲料的制备方法，包括菌种选取、酵母菌培养基、乳酸片球菌培养基、基础培养基、发酵培养基、种子培养，将酵母菌菌种接种到发酵培养基，温度28℃真菌培养箱培养，将发酵培养基升温到50℃保温，降低温度到35℃；再添加乳酸片球菌菌种，搅拌均匀后35℃培养1天，继续35℃培养；无菌制成饲料，成本降低1/3，工蜂存活期10-12周占55%，熊蜂的活性、抗病力强，熊蜂抗病能力提高，熊蜂活跃度高；每小时平均5.4次出入蜂巢，比自主采集草莓花粉的高8%，比自主采集花粉并在蜂巢直接辅助喂食花粉的高20%，出巢时间平均每天4.8小时/蜂，熊蜂繁殖力比只采集草莓花粉的提高60%，比自主采集花粉并在蜂巢直接辅助喂食花粉的提高14.3%。

Description

一种熊蜂饲料的制备方法

发明领域

本发明涉及一种熊蜂饲料，具体地说，涉及熊蜂（Bombusterresris）饲料的制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

熊蜂属蜜蜂总科昆虫，熊蜂属，是一类多食性的社会性昆虫，具有采集力强、耐光照、趋光性差，对低温适应性强等特点和优势，在恶劣条件下仍然能够授粉，因熊蜂没有蜜蜂那样灵敏的信息交流系统，能专心在室温内的作物上采集授粉，从而成为温室中比蜜蜂更理想的授粉昆虫。万军等研究了不同授粉处理方式对番茄产量和品质的影响，表明熊蜂授粉处理平均单果重与激素处理、自然授粉比分别增加了26.84%和29.27%。随着经济的发展和人们生活水平的提高，对反季蔬菜和瓜果的需求日益增多，推动了大棚种植面积的逐年扩大，由于种植季节的差异以及棚膜和墙体等，室内种植作物很难接受自然授粉，传统农业常采用人工、机械振动和激素等授粉，劳动强度大，成本和畸形果高，影响了果实的产量和质量，而利用熊蜂为室内作物授粉已经发展成一项现代农业必备的配套措施。西方一些农业发达国家从上世纪初就开始研究熊蜂人工繁殖技术，并于80年代就实现了熊蜂的工厂化生产，提供室内农业授粉应用。我国有许多大型的规模化温室，尤其是冬季，温室内缺乏自然授粉昆虫，所以利用熊蜂授粉可以显著提高蔬菜作物的产量和质量，并节省劳动力和药物的使用。由于我国熊蜂培育技术起步晚，目前尚没有成熟有效的熊蜂培育技术，世界上只有少数国家，如英国，荷兰等掌握了熊蜂的人工繁育技术，因此从国外进口优质熊蜂成为一些蔬果种植企业的迫切需求，然而，由于国内外环境和培养作物以及花粉原料的差异，进境熊蜂在饲料配方上若喂养不好，容易喂养饲料成本高，抗病能力弱，饲料利用率低，工蜂生命周期短，蜂王产卵少，熊蜂采集花粉动力缺失等缺点，间接拉高了熊蜂授粉的成本，降低了熊蜂授粉效率，影响了授粉作物的产量。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种熊蜂饲料的制备方法，采用本方法所得饲料生产熊蜂，实现了以下目的：

1、成本低。

2、工蜂存活期长。

3、蜂王产卵稳定，繁殖力强。

4、熊蜂活跃度高。

5、出巢时间长。

6、授粉率高。

7、减少了人工授粉成本，提高了作物的产量。

为解决以上问题，本发明采用以下技术方案：一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、菌种选取：酵母菌和乳酸片球菌，4℃斜面冰箱保存；

b、酵母菌培养基：土豆去皮切块，每200g加入500mL水，煮沸30min，双层纱布过滤至烧杯中，加入20g蔗糖和5g玉米花粉，加水至1L，每100mL溶液分装入250mL三角瓶，121℃高压灭菌20min；

c、乳酸片球菌培养基：取大豆蛋白胨5.0g、牛肉膏粉5.0g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖20g和乳糖20g，加水至1L，每100mL溶液分装入250mL三角瓶，121℃高压灭菌20min。

2、如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

d、基础培养基：取葡萄糖35g、果糖35g、蔗糖10g、豆粉100g、黄芪粉5g、大枣粉10g、山药粉5g、蜂蜜20g和水200mL，搅拌均匀，装入500mL烧杯，121℃高压灭菌30min。

3、如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

e、发酵培养基：取荷花粉150g、茶花粉150g，在0.8ppm臭氧/立方米下杀菌30min，与降温到60℃的基础培养基混匀，用无菌水控制混合物水分含量在30%，保温30min后，冷却到室温置冰箱4℃保存。

4、如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

f、种子培养1：取冰箱4℃保藏的酵母菌种在超净台接种到酵母菌培养基，28℃，转速160转/分钟摇床培养3天；获得酵母菌菌种；

种子培养2：取冰箱4℃保藏的乳酸菌在超净台接种到一瓶乳酸片球菌培养基，37℃，转速140转/分钟摇床培养2天，获得乳酸片球菌菌种。

5、如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

g、将步骤f培养好的酵母菌菌种取20mL接种到发酵培养基，无菌搅拌均匀，温度28℃真菌培养箱培养2天。

6、如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

h、将步骤g培养后的发酵培养基升温到50℃保温3小时，降低温度到35℃；

再添加步骤f所得乳酸片球菌菌种20mL，搅拌均匀后35℃培养1天后将瓶口密封，继续35℃培养2天；

i、将步骤h所得物升温到55℃保持3小时；

j、将步骤i所得物降温到室温后，无菌操作分制成柱状饲料，4℃冰箱保存。

乳酸菌的发酵，可以显著抑制单核细胞增多性李斯特菌（见专利2015102547559），熊蜂主要以糖水和花粉为食，若温室种植中植物花粉较少时，需要给其添加饲料辅料。熊蜂工蜂的生命周期一般4-12周，长短取决于花粉的数量和质量。

本发明采用以上技术方案，具有以下优点：

1、成本低，降低1/3。

2、工蜂存活期长，生命周期4-6周占21%，7-9周占24%，10-12周占55%。

3、熊蜂的活性、抗病力强，熊蜂抗病能力提高，熊蜂活跃度高；每小时平均5.4次出入蜂巢，比自主采集草莓花粉的高8%，比自主采集花粉并在蜂巢直接辅助喂食花粉的高20%。

4、工艺操作简便，适于商品化生产。

5、出巢时间长，平均每天4.8小时/蜂，比第二组直接辅助喂食花粉的提高26.3%。

6、熊蜂繁殖力比只采集草莓花粉的提高60%，比自主采集花粉并在蜂巢直接辅助喂食花粉的提高14.3%。

7、本发明所得熊蜂授粉处理平均单果重与激素处理、自然授粉比分别增加了29.69%和33.98%。

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

具体实施方式

实施例1，一种熊蜂饲料的制备方法，包括以下步骤：

a、菌种：酵母菌（食用安琪酵母），4℃斜面冰箱保存；乳酸片球菌（菌种保藏号CGMCCNo.10574），4℃斜面冰箱保存。

b、酵母菌培养基（种子培养基）：土豆去皮切块，每200g加入500mL水，煮沸30min。双层纱布过滤至烧杯中，加入20g蔗糖，5g玉米花粉，加水至1L，每100mL溶液分装入250mL三角瓶，121℃高压灭菌20min。

c、乳酸片球菌培养基（种子培养基）：取大豆蛋白胨5.0g、牛肉膏粉5.0g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖20g、乳糖20g，加水至1L，每100mL溶液分装入250mL三角瓶，121℃高压灭菌20min。

d、基础培养基：取葡萄糖35g、果糖35g、蔗糖10g、豆粉100g、黄芪粉5g、大枣粉10g、山药粉5g、蜂蜜20g、水200mL，搅拌均匀，装入3000mL三角瓶，121℃高压灭菌30min。

e、发酵培养基：取荷花粉150g、茶花粉150g，在0.8ppm臭氧/立方米下杀菌30min，与降温到60℃的基础培养基混匀，用无菌水控制混合物水分含量在30%，保温30min后，冷却到室温置冰箱4℃保存。

f、将配制的酵母菌培养基和乳酸片球菌种子培养基，分别100mL/瓶分装，121℃高压灭菌20min。

g、种子培养1：取冰箱4℃保藏的酵母菌种在超净台放置到室温，无菌操作接种到酵母菌培养基，放置到摇床培养，温度控制28℃，转速160转/分钟，培养时间3天；获得酵母菌菌种。

种子培养2：取冰箱4℃保藏的乳酸片球菌菌种在超净台放置到室温，无菌操作接种到乳酸片球菌培养基，放置到摇床培养，温度控制37℃，转速140转/分钟，培养时间2天；获得乳酸片球菌菌种。

h、发酵：将步骤g培养好的酵母菌种取20mL接种到发酵培养基（3000mL三角瓶中），无菌搅拌均匀，用6层无菌纱布包扎三角瓶，28℃真菌培养箱培养2天。

i、将步骤h所得物升温到50℃保温3小时，确保将酵母菌杀死，防止和乳酸菌竞争。降低温度到35℃将步骤g乳酸片球菌菌种20mL接入三角瓶，搅拌均匀后35℃培养1天后将瓶口密封，继续35℃培养2天。

j、将步骤i所得物升温到55℃保持3小时，杀死乳酸片球菌。

k、将步骤j所得物降温到室温后，无菌操作分装成1cm粗，5厘米长柱状饲料，4℃冰箱保存。

选定三组蜂巢（每组6个新蜂巢，每个蜂巢均含80头工蜂）在草莓温室做实验对比，第一组只自主采集草莓花粉，第二组自主采集花粉并在蜂巢直接辅助喂食花粉（荷花粉和茶花粉各50%），第三组自主采集草莓花粉并在蜂巢辅助喂食本发明所得花粉饲料。

实验发现，第一组蜂巢15天后平均工蜂个数达到100头/蜂巢，一个月后达到高点150头/蜂巢。第二组蜂巢15天后平均工蜂个数达到150头/蜂巢，一个月后达到高点210头/蜂巢。第三组蜂巢15天后平均工蜂个数达到160头/蜂巢，比第一组提高60%，比第二组提高6.7%；一个月后达到高点240头/蜂巢，比第一组提高60%，比第二组提高14.3%。说明喂食饲料后，可以显著提高工蜂的生命力和蜂王的繁殖力。

实验进一步发现，在同样的环境条件下，第一组和第三组工蜂出巢采集花粉时间明显优于第二组，第一组平均每天5.0小时/蜂，第二组平均每天3.8小时/蜂，第三组平均每天4.8小时/蜂。经分析，第二组工蜂出巢时间短，说明在蜂巢中直接给熊蜂添加花粉，使熊蜂出巢采集自然花粉的动力缺失，反而影响了熊蜂授粉的功能。花粉可为熊蜂提供重要的能量和蛋白，第一组因没有辅料补充，工蜂需要频繁工作采集够每日的必须量，过量工作和蛋白量不足也是第一组工蜂生命周期短的一个原因。与花粉饲料相比熊蜂更喜好采食花粉，然而在花粉量不足时花粉饲料可为熊蜂提供必需的蛋白营养，同时一些中药成本的加入，提高了第三组工蜂的抗病能力，使第三组蜂巢工蜂数量比第二组多14.3%。虽然第三组不如第一组出巢时间长，但第一组工蜂寿命短，蜂群总数小，在花粉供应不足的情况下过度采粉，减少了工蜂的寿命并抑制蜂王产量，说明给蜂巢补充食物非常有必要。

实验同时发现，在花源较多时，第三组辅助喂食花粉饲料的熊蜂活跃度（出巢频率）明显高于前两组，第一组单个熊蜂每小时平均5.0次出入蜂巢，第二组每小时平均4.5次出入蜂巢，第三组每小时平均5.4次出入蜂巢，比第一组高8%，比第二组高20%，经分析，在花粉饲料中添加的中药成分提高了熊蜂的活性和抗病能力，增加其活跃度。

通过调查统计，第一组熊蜂工蜂生命周期4-6周占56%，7-9周占33%，10-12周占11%；第二组熊蜂工蜂生命周期4-6周占38%，7-9周占36%，10-12周占26%；第三组熊蜂工蜂生命周期4-6周占21%，7-9周占24%，10-12周占55%。

重复以上试验多次后，发现结果与以上试验相符。

试验后分析，花粉饲料在花粉的基础上添加豆粉和其它成分后，其它饲料成分成本低，花粉饲料的生成成本可以降低三分之一。酵母和乳酸菌的联合发酵，熊蜂抗病力显著提高。

利用驯化的酵母菌和乳酸片球菌为破壁菌种，工艺简单，容易控制。酵母菌为食用酵母，乳酸片球菌从牛奶中筛选，两种菌背景清晰透明，不会对环境、动物和人员产生危害；工艺简单，指标清晰，操作方便。

除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

上述的具体实施方式只是示例性的，是为了使本领域技术人员能够更好的理解本发明内容，不应理解为是对本发明保护范围的限制，只要是根据本发明技术方案所作的改进，均落入本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、菌种选取：酵母菌和乳酸片球菌，4℃斜面冰箱保存；

b、酵母菌培养基：土豆去皮切块，每200g加入500mL水，煮沸30min，双层纱布过滤至烧杯中，加入20g蔗糖和5g玉米花粉，加水至1L，121℃高压灭菌20min；

c、乳酸片球菌培养基：取大豆蛋白胨5.0g、牛肉膏粉5.0g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖20g和乳糖20g，加水至1L，121℃高压灭菌20min。

2.如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

d、基础培养基：取葡萄糖35g、果糖35g、蔗糖10g、豆粉100g、黄芪粉5g、大枣粉10g、山药粉5g、蜂蜜20g和水200mL，搅拌均匀，121℃高压灭菌30min。

3.如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

e、发酵培养基：取荷花粉150g、茶花粉150g，在0.8ppm臭氧/立方米下杀菌30min，与降温到60℃的基础培养基混匀，用无菌水控制混合物水分含量在30%，保温30min后，冷却到室温置冰箱4℃保存。

4.如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

f、种子培养1：取冰箱4℃保藏的酵母菌种在超净台接种到酵母菌培养基，28℃，转速160转/分钟摇床培养3天；获得酵母菌菌种；

种子培养2：取冰箱4℃保藏的乳酸菌在超净台接种到一瓶乳酸片球菌培养基，37℃，转速140转/分钟摇床培养2天，获得乳酸片球菌菌种。

5.如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

g、将步骤f培养好的酵母菌菌种取20mL接种到发酵培养基，无菌搅拌均匀，温度28℃真菌培养箱培养2天。

6.如权利要求1所述的一种熊蜂饲料的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

h、将步骤g培养后的发酵培养基升温到50℃保温3小时，降低温度到35℃；

再添加步骤f所得乳酸片球菌菌种20mL，搅拌均匀后35℃培养1天后密封，继续35℃培养2天；

i、将步骤h所得物升温到55℃保持3小时；

j、将步骤i所得物降温到室温后，无菌操作分制成柱状饲料，4℃冰箱保存。