CN105766812A - 一种室内繁殖斑翅果蝇的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种繁殖果蝇的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)、香蕉培养基的制备；(2)、选用50cm*50cm*30cm养虫笼，温度为25±1℃，湿度80±5％，将一定数量雌：雄＝1:1的斑翅果蝇成虫释放在养虫笼内，使成虫进行交配，并将步骤1制作好的培养基放在养虫笼中间，供其产卵，每个星期补充50‑100头果蝇成虫，保证养虫笼内有足够多的成虫产卵，达到规模繁育的目的。本发明所提供的果蝇生理年龄一致，提供一种便捷、经济、易于标准化操作饲养果蝇，可以此为基础快速大量扩繁毛角锤角细蜂，为产业化生产提供技术基础，最终达到对害虫生物防治的目的。

Description

一种室内繁殖斑翅果蝇的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，本发明涉及一种供试昆虫的人工饲养方法，特别涉及到一种斑翅果蝇的人工饲养方法以及利用斑翅果蝇来人工繁殖毛角锤角细蜂的室内繁殖方法。

背景技术

斑翅果蝇，又名樱桃果蝇(Drosophila suzukii Matsumura，1931)，铃木氏果蝇，属双翅目(Diptera)果蝇科(Drosophilidae)果蝇属(Drosophila)水果果蝇亚属(SubgenusSophop-hora)，是樱桃、葡萄等软皮水果上的重要害虫。该果蝇最早1916年在日本山梨县草莓果园中发现并命名，但日本并非其原产地，目前尚未有关于斑翅果蝇确切原产地的报道，20世纪80年代在美国夏威夷被发现。樱桃果蝇寄主广泛，可为害草莓、蓝莓、苹果、枇杷、猕猴桃以及无花果等60多种水果。近年来，随着杨梅、樱桃、蓝莓等果树产业的发展，斑翅果蝇开始在这些果树上严重为害。与其他果蝇不同的是，该果蝇在成熟和未成熟果实中都能产卵，并在其中孵化、取食为害，对水果产业发展是一大危害和威胁。

毛角锤角细蜂属Trichopria drosophilae，隶属膜翅目(Hymenoptera)，细蜂总科(Phaenopria)，锤角细蜂科(Diapriidae))在我国为首次发现和室内饲养。据2012年新西兰政府对斑翅果蝇的风险评估报告中，提到了斑翅果蝇的寄生蜂类天敌种类，在文献检索中只有Kanzawa T(1935)年对锤角细蜂进行了研究。作者是通过采集野外蓝莓收集斑翅果蝇，带回室内饲养，发现此蜂，由福建农业大学黄建初步鉴定及华南农业大学许再福鉴定种类。为寻求对斑翅果蝇经济、有效、安全、持续的控制方法，研究斑翅果蝇的天地资源及其优势天敌种类的应用，这就需要大量人工繁殖毛角锤角细蜂。

发明内容

为了解决以上问题，本发明首先提供一种繁殖果蝇的方法，通过大量繁殖果蝇，从而为人工繁殖毛角锤角细蜂提供重要的技术支撑。

该方法包括以下步骤：

(1)香蕉培养基的制备：将香蕉去皮切成长2-3cm香蕉段，每1段的重量约为20g，先放入冰箱-4℃的环境下进行冷冻24小时后取出；然后在实验室内利用直径9cm培养皿，底部垫上3mm厚的干燥并经过高温消毒的细沙；在培养皿正中放入重量为50g经过冷冻过的香蕉。等待恢复到室温，在表面撒上3g的酵母细粉，其中细沙用清水洗净，用60目滤网过滤掉石头，在高温灭菌锅内消毒晾干。

(2)选用50cm*50cm*30cm养虫笼，温度为25±1℃，湿度80±5％，将一定数量雌：雄＝1:1的斑翅果蝇成虫释放在养虫笼内，使成虫进行交配，并将步骤1制作好的培养基放在养虫笼中间，供其产卵，在养虫笼的顶部和角落放置有蒸馏水的脱脂棉，供斑翅果蝇成虫取食；每个星期补充50-100头果蝇成虫，保证养虫笼内有足够多的成虫产卵，达到大规模繁育的目的。

(3)收集日龄为0-2期的果蝇蛹作为后期为寄生蜂毛角锤角细蜂使用。

在一些优选的方式中，其中，在养虫笼内提供新鲜香蕉以3天最为合适，供斑翅果蝇成虫产卵，然后3天后将放置香蕉的培养皿从养虫笼内取出，放入人工气候箱内保持温度28±1℃，湿度80±5％中进行培养。

另一方面，本发明提供一种室内繁殖斑翅果蝇优势寄生蜂毛角锤角细蜂的方法，该方法包括如下步骤：(1)提供斑翅果蝇蛹为1-2日龄果蝇蛹(也可以是0-2日龄)，其中，果蝇蛹位于直径9cm的培养皿中；(2)、将毛角锤角细蜂雌雄蜂1:1交配后，放入果蝇蛹的培养皿(直径9cm)中，在培养皿里放入一小团棉花，滴入2-3滴50％浓度的蜂蜜水，果蝇蛹和雌蜂的比例为20:1，保持温度为25℃，湿度80％，并让其寄生。

在一些优选的方式中，饲养果蝇的方法采用前述本发明的方法进行饲养。

在一些优选的方式中，在培养皿中还包括香蕉培养基，香蕉培养的制备方法如下：将香蕉去皮切成长2-3cm香蕉段，每1段的重量约为20g，先放入冰箱-4℃的环境下进行冷冻24小时后取出；然后在实验室内利用直径9cm培养皿，底部垫上3mm厚的干燥并经过高温消毒锅的细沙，在培养皿正中放入重量为50g经过冷冻过的香蕉。等待冷冻香蕉解冻之后，在表面撒上3g的酵母细粉，其中细沙用清水洗净，用60目滤网过滤掉碎石子，在高温灭菌锅内消毒晾干。

在一些优选的方式中，斑翅果蝇在25℃,湿度80％，8-10天为一代，从香蕉块上和培养皿内以及底部，用毛笔和镊子小心将斑翅果蝇的蛹收集到培养皿中,并用清水冲洗干净晾干备用。

本发明所提供的扩繁毛角锤角细蜂的方法，环境条件为：温度25±1℃，湿度75％-80％，光周期为L：D＝14h:10h。在本发明的一个实施例中，所述繁殖斑翅果蝇温度为28±1℃，湿度为80±5％。

在一些优选的方式中，从步骤2中收集寄生的蛹不经过存储并让其直接羽化为成虫。优选的，对毛角锤角细蜂蛹做短时期储存20-30d为适宜，存储的温度为10℃。

在一些优选的方式中，毛角锤角细蜂成虫在10℃低温时，饲喂50％蜂蜜水的条件下进行存储。

有益效果

(1)针对现有供试斑翅果蝇饲养方法存在诸多不足，本发明提供了一种斑翅果蝇的人工饲养方法，用香蕉培养基取代了现有的葡萄和人工饲料的饲养方法，同时配合本发明所述的饲养方法后，较之现有的供试斑翅果蝇饲养方法其存活率、化蛹率、羽化率、单雌产卵量等比较，为供试斑翅果蝇的正常供应提供了有利条件。

(2)本发明所提供的扩繁毛角锤角细蜂的方法，便捷、经济、易于标准化操作，可快速大量扩繁毛角锤角细蜂，乃至标准化批量扩繁，达到对斑翅果蝇优势天敌大量扩繁的基础。

具体实施方式

本发明提供以下的具体实施方式来阐述本发明如何实现，这种说明并不是对本发明的范围的限制，本发明的范围由本发明的权利要求所保护。

具体实施方式

实施例子1：寄主(斑翅果蝇)的扩繁

6-9月份在云南澄江蓝莓基地采集被寄生的蓝莓果实，移至实验室内，收集斑翅果蝇成虫，进行室内人工扩繁。

1.1斑翅果蝇饲养

选用50cm*50cm*30cm养虫笼，温度为25±1℃，湿度80±5％，将300只斑翅果蝇成虫(雌：雄＝1:1)释放在养虫笼内，使成虫进行交配，并将制作好的培养基放在中间(见下面1.2节的具体描述)，供其产卵，在养虫笼的顶部和角落放置有蒸馏水的脱脂棉，供斑翅果蝇成虫取食。每个星期补充50-100头果蝇成虫，保证养虫笼内有足够多的成虫产卵，达到大规模繁育的目的。

采用蒸馏水的脱脂棉只是补充成虫水分，并且能够使成虫大部分集中在培养基上取食和产卵，不使之在脱脂棉上面产卵。而采用蜂蜜水等营养物质饲喂果蝇，会导致其在脱脂棉上产卵和孵化出幼虫，不利于果蝇集中产卵和收集。

1.2斑翅果蝇成虫产卵培养基的制作

将香蕉去皮切成长2-3cm香蕉段，每1段的重量约为20g(或者其它重量，例如45g,35g,30g,25g,18g,15g)，先放入冰箱-4℃的环境下进行冷冻(例如-8℃或-6℃或者其它0℃以下的温度)，冷冻一天(24小时)取出使用。冷冻香蕉最长保存6个月，冷冻时间太长香蕉的品质会改变，进而影响果蝇发育。

在实验室内利用直径9cm培养皿，底部垫上3mm厚的干燥并经过高温消毒锅的细沙(细沙用清水洗净，用60目滤网过滤掉石头，在高温灭菌锅内消毒晾干)，在培养皿正中放入2或3(重量约为50克)段冷冻过的香蕉，等待香蕉解冻后(一般为25或者28摄氏度，或者环境温度)，在表面撒上3g(也可是其它重量4.5g)酵母细粉，促进果蝇取食产卵，并帮助幼虫发育。在培养皿内加入蒸馏水，使细沙和香蕉段充分湿润，加入的蒸馏水以不滴出为益。将制作好的培养基放入1.1节中的养虫笼内提供斑翅果蝇取食产卵。

1.3不同水果作为培养基对其果蝇产卵以及化蛹和羽化的影响。

同样，与上述1.2节培养基的制作方法相同，除了水果的种类不同，分别采用杨梅、草莓和蓝莓以及葡萄作为培养基进行人工饲养果蝇并供其产卵。并且每样称重50g，接入1.1节描述的养虫笼内，斑翅果蝇成虫2头，雌：雄＝1:1，重复10次，一天后取出，观察斑翅果蝇在不同水果上的产卵量以及对应的化蛹数量和羽化数量。结果见表1，

表1：不同水果的单雌产卵量的结果比较

饲料	50g平均产卵量	化蛹数量	羽化数量
				香蕉	25±5.12Bb	19±1.62Aa	15±1.79Aa
杨梅	23±4.83Bb	11±0.92Bb	5±0.83Bb
				蓝莓	22±6.11Bb	11±1.58Bb	8±1.07Bb
草莓	40±4.16Aa	18±0.96Bb	2±0.97Bb
				葡萄	23±3.87Bb	14±1.78Bb	5±1.62Bb

从以上表格1可以看出，不同的水果的产卵量除了草莓外，它们之间没有显著的差异，但是化蛹数却是香蕉更高，达到19±1.62，而且羽化数是草莓的7倍多，也就说，从循环培养果蝇的角度进行评价，香蕉的产卵量虽然不是最高，究其原因估计是产卵时间为1天较短，并且为单个果蝇产卵量，但是其化蛹数量和羽化数量较高，与其它处理达到显著差异。对于大量繁殖上比较经济适用，而且可以持续大量繁殖果蝇。

1.4果蝇不同培养天数对于产卵数量和幼虫日龄的影响(香蕉培养基为例)。

另外，为了果蝇产出大量的卵，同时希望卵孵化出的幼虫的日龄达到最大可能的一致性，利于后期繁殖毛角锤角细蜂，采用50g香蕉培养基，放入有选用50cm*50cm*30cm养虫笼，温度为25±1℃，湿度80±5％，提供300只斑翅果蝇成虫(雌：雄＝1:1)释放在养虫笼内，供其产卵，其培养基采用1.2节制作的香蕉培养基进行培养，考察培养的天数对产卵的数量和日龄的影响。具体见表2.

表2：斑翅果蝇产卵天数以(一个9cm培养皿为例)选择

从以上表格2可以看出，随着培养的天数的增加，产卵的数量也呈现逐渐增加的趋势，在第三天开始，卵孵化出现幼虫，能保证培养基上有一定数量的幼虫发育成为蛹，只有蛹的出现，才可能让毛角锤角细蜂进行寄生，对于幼虫的数量，3-8天的培养可以让毛角锤角细蜂进行寄生，但是幼虫的日龄并不相同，例如培养8天的日龄从0-7龄都有，而培养3天的幼虫的日龄却为0-2龄。所以，经过我们的实验，发现在在养虫笼内提供放置香蕉的9cm培养皿以3天最为合适。提供斑翅果蝇成虫产卵少于3天，则香蕉上的果蝇卵和幼虫比较少，造成供饲饲料的浪费；而多于3天后，幼虫的日龄参差不齐。如果再延长产卵时间，则会造成果蝇卵、幼虫、蛹不同虫态并存的情况，果蝇群体虫态参差不齐，不利于标准化饲养繁殖。也不利于后期的毛角锤角细蜂的寄生。

因此，3天后将培养皿从养虫笼内取出，放入人工气候箱内保持温度28±1℃，湿度80±5％，此时可以看见果蝇的低龄幼虫在香蕉上爬动取食，加入2mm的香蕉薄片1-2片，1-2日被幼虫取食完后添加香蕉片，保持培养皿的湿度，防止幼虫干死。待果蝇化蛹，将蛹放入纱网袋清水下冲洗，晾干收集备用。因为幼虫的龄期一致，获得的蛹的龄期也保证具有一致性，相反，如果幼虫的龄期不一致，获得的蛹的龄期也不一致，从而有幼虫、蛹的混合存在，不利于后期的毛角锤角细蜂的寄生(下面有实验进行说明，例如表5的实验结果说明)。

1.5考察人工饲料和香蕉饲料对于果蝇的饲养的影响。

在相同的条件下(1.1节的条件)，采用不同的天然饲料(香蕉饲料，制作方法与1.2节相同)和人工饲料(斑翅果蝇固体人工饲料配方：琼脂45g，玉米粉125g,糖200g混匀加入水2.8L煮15分钟，冷却到63℃。酵母液70g,加入1L蒸馏水混匀，加入17.7ml丙酸，33.3ml95％乙醇溶液，在加入到63℃冷却液中混匀。)饲养方法相比较，每个处理重复10次，每个处理接200-300粒卵，保证每个培养皿内的幼虫头数大于100。蛹期每天24h分三个时段观察，及时收集蛹，作好记录，称蛹重。然后将每种处理10次重复所的到的蛹混合，从中随机取蛹100对或200对，每一对放入直径为3cm的培养皿中产卵，培养皿铺上湿润滤纸，加带蜂蜜水的小棉球。计算斑翅果蝇的存活率，化蛹率，羽化率，蛹重。结果见表3.

表3：饲养斑翅果蝇的效果

饲料	存活率(％)	化蛹率(％)	羽化率(％)	平均蛹重(mg)
					香蕉	76.8±3.1	79.4±0.6	96.9±1.8	0.843±0.192
人工饲料	81.1±2.8	70.2±0.2	90.4±1.2	0.643±0.225

从表3可以明显看出，与传统的人工饲料相比，香蕉饲养在化蛹率，羽化率和平均蛹重方面要优于人工饲料，而且香蕉饲料的成本低，制作过程简单，为果蝇的大量繁殖提供一种新的途径和方法。经过显著性分析，发现采用香蕉饲料的化蛹率，羽化率与人工饲料达到显著差异，具体数据略。

实施例子2：毛角锤角细蜂的繁殖和饲养

2.1采用实施例子1中的香蕉作为培养基，制作过程同实施例子中的1.2节。

2.2斑翅果蝇蛹收集

斑翅果蝇在25℃,湿度80％，8-10天为一代，从香蕉块上和培养皿内以及底部，用毛笔和镊子小心将斑翅果蝇的蛹收集到培养皿中。并用清水冲洗干净晾干备用。使用50g香蕉的量，产出200头蛹左右，但是收蛹的时间会持续一周(喂养方式如实施例子1中的1.1节的具体描述)。

2.3果蝇蛹与蜂成虫比的确定

在四个9cm培养皿内，分别放入10、20、30、40、50个蛹(龄期一致)，每个养虫盒内各接入1头毛角锤角细蜂雌蜂(已交配)，将培养皿放入温度25±1℃，湿度75％-80％，光周期为L：D＝14h:10h。5-7天清理出羽化的果蝇成虫，15-25天后观察并统计出蜂数以及后代雌雄比例。实验重复4次，结果取平均值。结果如表4所示，不同接种果蝇数量对毛角锤角细蜂后代的出蜂数有显著影响，随着接种果蝇蛹数量的减少，每头果蝇蛹平均被寄生的卵量太大，导致出蜂较少，而接种太多，又造成寄生率不够而导致果蝇成虫羽化过多。所以以接蛹比例为1:20为益，毛角锤角细蜂的雌雄比例均为1:1，不同接种寄生数量对毛角锤角细蜂的后代雌雄比例无显著差异。可见接蛹比例以1:20较为适宜。

表4：果蝇蛹与蜂成虫比的确定

接蛹比	寄生蛹数量	出果蝇成虫数量	出蜂数	后代雌雄比率
					1:50	25.98±2.87Aa	17.13±2.58Aa	22.78±1.79Aa	1:1Aa
1:40	24.34±2.17Aa	11.25±3.84Aa	19.67±2.85Aa	1:1Aa
					1:30	21.75±3.45Aa	10.65±1.67Aa	21.04±0.67Aa	1:1Aa
1:20	19.67±0.83Aa	1.07±2.87Bb	18.64±1.82Aa	1:1Aa
					1:10	9.18±1.54Bb	3.67±0.62Bb	7.75±1.07Bb	1:1Aa

2.4毛角锤角细蜂寄生

将毛角锤角细蜂雌雄蜂1:1交配后，放入果蝇蛹的培养皿(直径9cm)中，在培养皿里放入一小团棉花，滴入2-3滴50％浓度的蜂蜜水，果蝇蛹和雌蜂的比例为20:1，保持温度为25℃，湿度80％，5-7天后待羽化的斑翅果蝇成虫清理出来，余下的果蝇蛹就是被寄生过的蛹，收集。15-25天后寄生的果蝇蛹内出蜂。其中，培养蛹的培养基为本发明实施例子1中的1.2节制备的香蕉培养基中进行培养。

考察不同日龄的果蝇蛹对毛角锤角细蜂的寄生的影响，结果如表5所示，毛角锤角细蜂对不同日龄期的果蝇蛹有选择性，所出成虫有明显的差异性，其中0龄的果蝇蛹所出的毛角锤角细蜂最多，5龄所出的毛角锤角细蜂为0头，因此在扩繁毛角锤角细蜂时应选择0-2日龄的果蝇蛹进行接种寄生。

表5：毛角锤角细蜂对不同日龄期的果蝇蛹寄生后的出蜂数表

龄期	寄生蛹数	出蜂数
			0	30.6±1.53Aa	25±1.87Aa
1	30.2±1.34Aa	22±1.67Aa
			2	31.0±1.41Aa	19±1.59Aa
3	25.8±1.89Bb	10±1.75Bb
			4	15.4±1.78Cc	2±1.69Cc
5	5.8±1.67Dd	0Cc

注：本发明中所有表格中大小写字母分别表示1％和5％差异显著水平，同一列不同字母为Duncan

氏多重比较差异显著。

从表5可以明显看出，接种0-2龄的果蝇蛹，寄生蜂的蛹数和出蜂数量与其他日龄的蛹达到显著差异。另外，也考察了生产周期的影响(表6)，发现采用0-2龄的果蝇蛹作为寄生的对象，生产周期只有21天，而其他时期的蛹的周期确需要更长的时间，而且出蜂的数量明显不高，显著低于接种0-2龄的果蝇蛹。

表6：毛角锤角细蜂的生产周期

2.5毛角锤角细蜂的保存方法：毛角锤角细蜂的低温贮存技术，采用成蜂保存和蛹保存结合的技术。结果见表7和表8。

表7：毛角锤角细蜂蛹的存储时间与羽化率的关系表(10℃为例)

存储天数	调查果蝇蛹数	毛角锤角细蜂出蜂数	羽化率％
				未低温储存	50	47±1.21Aa	94％
10	50	45±1.35Aa	90％
				20	50	38±1.79Aa	76％
30	50	30±2.68Aa	60％
				40	50	13±1.27Bb	26％
50	50	4±1.46Cc	8％
				60	50	1±0.58Cc	3％

表8：存储温度与成虫存活天数

表7，以10℃为例，发现储存时间越长可显著降低毛角锤角细蜂的羽化率，未经储存的毛角锤角细蜂的羽化率为94％，随着储存时间的推移，毛角锤角细蜂的羽化率明显降低，因此长时间储存毛角锤角细蜂的羽化率显著降低，以上结果表明对毛角锤角细蜂蛹做短时期储存(20-30d)为适宜。表8，毛角锤角细蜂成虫在10℃低温时，饲喂50％蜂蜜水，能存活60天以上，建议以成虫保存为主，辅以蛹保存为辅。

Claims (2)

1.一种室内繁殖斑翅果蝇的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)香蕉培养基的制备：将香蕉去皮切成长2-3cm香蕉段，每1段的重量约为20g，先放入冰箱-4℃的环境下进行冷冻24小时后取出；在实验室内利用9cm培养皿，底部垫上3mm深的干燥并经过高温消毒的细沙，在培养皿正中放入重量为50克经过冷冻过的香蕉，等待恢复到室温，在表面撒上3g的酵母细粉。其中细沙用清水洗净，用60目滤网过滤掉石头，在高温灭菌锅内消毒晾干；

(2)选用50cm*50cm*30cm养虫笼，温度为25±1℃，湿度80±5％，将一定数量雌：雄＝1:1的斑翅果蝇成虫释放在养虫笼内，使成虫进行交配，并将步骤1制作好的培养基放在养虫笼中间，供其产卵，在养虫笼的顶部和角落放置有蒸馏水的脱脂棉，供斑翅果蝇成虫取食；每个星期补充50-100头果蝇成虫，保证养虫笼内有足够多的成虫产卵，达到大规模繁育的目的；

(3)收集日龄为0-2期的果蝇蛹作为后期毛角锤角细蜂寄生的对象使用。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在养虫笼内提供放置香蕉的9cm培养皿以3天最为合适，给予斑翅果蝇成虫产卵，然后3天后将培养皿从养虫笼内取出，放入人工气候箱内保持温度28±1℃，湿度80±5％中进行培养。