CN105646649A - Rgd肽型阳离子类脂化合物及其制备方法及其在药物、基因转运中的应用 - Google Patents

Rgd肽型阳离子类脂化合物及其制备方法及其在药物、基因转运中的应用 Download PDF

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Abstract

一种RGD肽型阳离子类脂化合物及制备方法，化合物结构通式如下：其中：X-为F-、Cl、Br-、I-、H2PO4 -、HCO3 -、NO3 -、HSO3 -、CH3COO-、葡萄糖酸根、葡萄糖醛酸根、半乳糖酸根、半乳糖醛酸根、丙酸根、甲磺酸根中的一种；R1为C1-20烷基、十八烯基、胆固醇基中的一种。本发明还包括该化合物与类脂助剂混合相互作用构成的组合物及该组合物与药物或遗传物质复合而成的复合物。本发明的物质具有降低细胞毒性、转染效率高、满足运载药物包括遗传物质以及相关物质等需要的高效低毒的特性。

Description

RGD肽型阳离子类脂化合物及其制备方法及其在药物、基因转运中的应用
技术领域
本发明涉及一类阳离子类脂、该类脂组合物和该组合物复合物，及它们的制备方法，具体地说涉及一种RGD肽型阳离子类脂、该类脂组合物和该组合物的复合物，及制备方法和应用。
背景技术
近年来，人们发明了许多治疗疾病的新方法，但是对于癌症等疾病的治疗还没有有效的方法。利用药物或基因进行的细胞内治疗是一种全新的、革命性的治疗手段，它的有效性已得到许多研究的验证，已经成为化学、生物学和医药工程等最活跃的研究领域之一，具有广阔的应用前景。实现药物或基因的靶向转运是细胞内治疗的关键技术之一，在转运过程中，通过适当的载体将有治疗作用的药物或基因输送到靶细胞内，释放以达到治疗目的。因此，获得高效、安全的药物或基因转运载体无疑成为细胞内治疗能否成功的关键。
病毒载体和非病毒载体是目前为止主要的两种基因或药物转运载体。虽然病毒载体在目前的细胞内治疗中使用较为广泛，但是病毒载体普遍存在生产成本高、存在免疫原性反应、有潜在的病毒复制性等缺点，这些极大地限制了其在临床治疗中的应用。同病毒载体相比，非病毒载体虽然具有容易制备、重复性好、毒性小以及能压缩大体积的DNA等优点，但是其转染效率与病毒载体还有一定差距，这也制约了其进行临床应用的研究。因此，开发高效、低毒的非病毒基因或药物载体成为细胞内治疗研究的重要内容之一。到目前为止，人们已经制备了多种新型阳离子类脂、阳离子聚合物和多肽等非病毒基因或药物载体材料。
阳离子脂质体作为非病毒基因或药物载体很受重视，其主要组分是阳离子类脂。1987年，Felgner等首次合成以甘油为骨架的阳离子类脂DOTMA。由于单价阳离子类脂不能有效的压缩基因，转染效率不能达到治疗的要求。所以人们又开发了一系列多价阳离子类脂，如DOGS、DPPES和DOSPA等，这些化合物的转染效率较DOTMA等单价阳离子类脂有一定的提高，但是还不能满足临床研究要求。
本发明利用新的合成方法，制备出一系列满足运载药物（包括遗传物质）以及相关物质等需要的高效低毒的RGD肽型阳离子类脂。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有降低细胞毒性的、转染效率高的、满足运载药物包括遗传物质以及相关物质等需要的高效低毒的RGD肽型阳离子类脂化合物及其制备方法及其组合物、复合物及应用。
本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物，结构通式如下：
其中：X-为F-、Cl、Br-、I-、H2PO4 -、HCO3 -、NO3 -、HSO3 -、CH3COO-、葡萄糖酸根、葡萄糖醛酸根、半乳糖酸根、半乳糖醛酸根、丙酸根、甲磺酸根中的一种；
其中所述葡萄糖酸根（A1）、葡萄糖醛酸根（A2）、半乳糖酸根（A3）、半乳糖醛酸根（A4）结构如下：
；
R1为C1-20烷基、十八烯基、胆固醇基中的一种。
其中所述胆固醇基（A5）结构如下：
本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物的制备方法，包括如下步骤：
⑴、使用多肽固相合成仪器，将Fmoc-Asp-Wang树脂、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg-OH按照摩尔比为1︰1︰1~1︰4︰4的比例反应，制备式i的化合物，i化合物的结构式如下：
反应温度为10~40℃，反应溶剂为DMF；
⑵、在碱性条件下将3-氨基-1,2-丙二醇和Fmoc-OSu按照摩尔比为1︰1~1︰20的比例反应，制备化合物a，化合物a的结构式如下：
a
反应温度为10~100℃，反应时间为1~48h，3-氨基-1,2-丙二醇的反应溶剂为水，Fmoc-OSu的反应溶剂为丙酮
⑶、将⑵步骤制备的化合物a和羰基二咪唑按照摩尔比为1︰1~1︰10的比例反应，制备化合物b，化合物b的结构式如下：
b
反应温度为10~100℃，反应时间为1~12h，反应溶剂为甲苯或DMF；
⑷、将⑶制备的化合物b和ii的化合物按照摩尔比为1︰1~1︰10的比例反应，制备iii的化合物，其中ii的化合物和iii的化合物结构式如下：
⑸、将⑴步骤制备的i的化合物和⑷步骤制备的iii的化合物按照摩尔比为1︰1~1︰30的比例反应，制备式RGD肽型阳离子类脂化合物，其中反应温度为10~100℃，反应时间为1~48h，反应溶剂为DMF或甲苯或苯。
本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物，所述组合物由RGD肽型阳离子类脂化合物和一种或两种以上等量的类脂助剂混合相互作用构成，所述的类脂助剂选自卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘髓磷脂、脑磷脂、心肌磷脂、磷脂酸、糖脂、磷脂三十二烷酯、二油酰磷脂酰氯、二棕榈酰磷脂酰氯、棕榈酰油酰磷脂酰氯、二油酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺和二油酰磷脂酰乙醇胺4-（N-马来酰亚胺-甲基）环己烷-1-羧酸酯、硬脂酰胺、十六烷胺、十四烷胺、十二烷胺、乙酰十六酸酯、甘油蓖麻醇酸酯、硬脂酸十六烷酯、肉豆蔻酸异丙酯、两性丙烯酸聚合物、三乙醇胺-十二烷基硫酸酯、烷基-芳基硫酸酯聚乙氧基化的脂肪酸酰胺、二十八烷基二甲基溴化铵、麦角甾醇、胆固醇、雄甾醇、胆酸、脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、壳聚糖、蔗糖酯；
所述的RGD肽型阳离子类脂化合物和类脂助剂的质量比为20︰1~1︰10。
所述组合物为悬浮液、乳浊液、微胶粒或脂质体。
本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物作为药物或遗传物质载体的应用。
本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物的复合物，所述的复合物是由RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物与药物或遗传物质复合而成的，RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物与药物或遗传物质的质量比为10︰1~1︰10；所述药物为阿霉素、阿巴瑞克、5-氟尿嘧啶、干扰素、丝裂霉素、多肽中的一种或两种以上混合物；所述遗传物质为多核苷酸、DNA、RNA、MicroRNA、siRNA中的一种或两种以上混合物。
上述的类脂组合物与所述药物或遗传物质结合形成类脂复合物，所述复合物为悬浮液、乳浊液、微胶粒或脂质体。
本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物采用氨基甲酸酯作为类脂的连接键。连接键决定了阳离子脂质体的化学结构稳定性和被生物降解的能力。连接键类型对转染效率和细胞毒性也会产生影响。在最早研究的类脂分子中，极性与非极性的连接键多为醚键或C-N键，阳离子类脂分子的稳定性好，转染后在体内不易分解，但容易积存从而导致细胞毒性。针对这个问题，易分解的酯键引起人们的重视，酯键可以有效降解代谢，却又不够稳定，采用这种连接键的脂质体往往未到达目标组织是便已在循环系统中分解，从而影响转染效率。类似的还有酰胺键，虽能降解，但转染活力小，且稳定性不好。本发明采用了一种pH敏感的连接键-—氨基甲酸酯键，因为氨基甲酸酯连接键具有酸敏感特性，由于细胞内涵体的pH值较之循环系统中的要低1~2，由此可预期由这种连接键连接的阳离子类脂在循环系统中保持稳定，当进入细胞时由于pH降低而分解，释放出药物（包括核酸等），从而达到既提高转染效率，又降低细胞毒性的目的。
传统观点认为，目标化合物中的氨基甲酸酯连接键可以通过异氰酸酯与醇羟基的加成而形成。但是异氰酸酯是一种难闻的催泪性液体，其分子中的一个碳原子与两个双键相连，有类似烯酮的结构，具有极高的化学活泼性，易与具有活泼氢的各类化合物发生反应，如水、醇和胺等，给使用和存储带来不便。制备目标分子的异氰酸酯需自行制备，现有的合成方法通常会引入剧毒的光气、氰酸化合物或易爆炸的叠氮化合物等，存在巨大的潜在性事故隐患。近年来也有其他异氰酸酯的制备方法，但操作较复杂，且产率不高。
鉴于传统方法的缺陷，考虑到实验室制备和工业化的条件，本发明采用一种安全高效的方法制备氨基甲酸酯。羰基二咪唑（CDI）可与-COOH、-NH2、-OH等官能团进行反应，合成许多用一般方法难以得到的酮、酯、脲等化合物。本发明采用具有较强活泼性的羰基二咪唑为原料，与醇和氨反应，构建氨基甲酸酯连接键。该方法具有环保、安全等特点，适于实验室制备以及工业化生产。
本发明的有益成果：本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物采用pH敏感的氨基甲酸酯作为类脂的连接键，达到了降低细胞毒性的目的。本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物具有RGD三肽头部，含有较多的正电荷，可以有效的压缩核酸，达到提高转染效率的目的。本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物的制备方法具有环保、安全等特点，适用于实验室制备以及工业化生产。本发明的RGD肽型阳离子类脂化合物，应用于药物或遗传物质的细胞内转染，其转染效率相当于或高于目前常用的转染试剂的转染效率，且对细胞的毒性低，是一种新型的高效的非病毒载体。
附图说明
图1是实施例3脂质体的TEM照片；
图2是实施例4阳离子脂质体-DNA复合物的电泳图谱，其中泳道1为2kbDNAmarker，泳道2为裸DNA，泳道3~10为脂质体与DNA质量比分别为1/1、2/1、3/1、4/1、6/1、8/1、10/1的脂质体-DNA复合物；
图3是实施例5的阳离子脂质体-DNA复合物对Hela细胞内转染后绿色荧光蛋白检测结果：使用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白信号，考察不同脂质体与DNA比例的转染效率；
图4是实施例6的阳离子脂质体转染细胞后对细胞存活率的影响：使用MTT法测定。
具体实施方式
除了另有说明外，本文中使用的术语具有以下含义。
本文中使用的术语“烷基”包括直链烷烃和直链烷烃。例如“C1-6烷基”包括C1-4烷基、C1-3烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基。类似的规则也适用于本说明中使用的其他基团。
本发明中使用的术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
本发明中使用的X-表示阴离子，其可为可药用平衡阴离子，包括但不限于无机阴离子或有机阴离子，例如卤素离子、磷酸二氢根（H2PO4 -）、碳酸氢根（HCO3 -）、硝酸根（NO3 -）、亚硫酸氢根（HSO3 -）、葡萄糖酸根、葡萄糖醛酸根、半乳糖酸根、半乳糖醛酸根、丙酸根或甲磺酸根。
本发明的一类RGD肽型阳离子类脂化合物，具有通式I的结构：
Ⅰ
本发明的通式I的化合物中，X-为卤素离子、H2PO4 -、HCO3 -、NO3 -、HSO3 -、CH3COO-、葡萄糖酸根、葡萄糖醛酸根、半乳糖酸根、半乳糖醛酸跟、丙酸根（CH3CH2COO-）和甲磺酸根（CH3SO3 -）；X-优选自卤素离子、NO3 -、HSO3 -、CH3COO-、葡萄糖酸根、半乳糖酸根、半乳糖醛酸跟、丙酸根（CH3CH2COO-）和甲磺酸根（CH3SO3 -）中的一种；更优选X-选自卤素离子或半乳糖酸根。所属卤素离子为F-、Cl-、Br-、I-。
本发明的通式I的化合物中，R1选自C1-20烷基、十八烯基（C17H34CH2 -）和胆固醇基（C27H45 -）中的一种；在优选的技术方案中，R1选自C12-18烷基、十八烯基（C17H34CH2 -）和胆固醇基（C27H45 -）；更优选自R1选自C12烷基、C14烷基、十八烯基（C17H34CH2 -）和胆固醇基（C27H45 -）。
本发明提供所述一类RGD肽型阳离子类脂化合物的制备方法，所述方法包括如下步骤：
⑴使用多肽固相合成仪器，Fmoc-Asp-Wang树脂、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg-OH按照摩尔比1:1:1~1:4:4反应，制备式i化合物：
反应温度为10~40℃，反应溶剂为DMF；
在一个优选的实施方式中,反应温度为10~30℃,反应溶剂为DMF，Fmoc-Asp-Wang树脂、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg-OH按照摩尔比1:1:1~1:3:3反应。
在一个更优选的实施方式中，反应温度为15~25℃，反应溶剂为DMF，Fmoc-Asp-Wang树脂、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg-OH按照摩尔比1:1:1~1:2:2反应。
⑵在碱性条件下3-氨基-1,2-丙二醇和Fmoc-OSu按照摩尔比1:1~1:20反应，制备化合物a：
a
反应温度为10~100℃，反应时间为1~48h，反应溶剂为丙酮和水；
在一个优选的实施方式中，反应温度为20~80℃，反应时间为2~30h，反应溶剂为丙酮和水，3-氨基-1,2-丙二醇和Fmoc-OSu按照摩尔比1:1~1:15反应。
在一个更优选的实施方式中，反应温度为30~60℃，反应时间为3~24h，反应溶剂为丙酮和水，3-氨基-1,2-丙二醇和Fmoc-OSu按照摩尔比1:1~1:10反应。
⑶化合物a和羰基二咪唑按照摩尔比1:1~1:10反应，制备化合物b：
b
反应温度为10~100℃，反应时间为1~12h，反应溶剂为甲苯或DMF；
在一个优选的实施方式中，反应温度为20~80℃，反应时间为2~10h，反应溶剂为甲苯或DMF，化合物a和羰基二咪唑按照摩尔比1:1~1:8反应。
在一个更优选的实施方式中，反应温度为30~60℃，反应时间为3~8h，反应溶剂为甲苯或DMF，化合物a和羰基二咪唑按照摩尔比1:1~1:5反应。
⑷化合物b和式ii的化合物按照摩尔比1：1~10:1反应，制备式iii的化合物：
⑸式i的化合物和式iii的化合物按照摩尔比1:1~1:30反应，制备式I的化合物：
反应温度为10~100℃，反应时间为1~48h，反应溶剂为DMF、甲苯或苯。
在一个优选的实施方式中，反应温度为20~80℃，反应时间为2~30h，反应溶剂为DMF、甲苯或苯，式i的化合物和式iii的化合物按照摩尔比1:1~1:20反应。
在一个更优选的实施方式中，反应温度为25~60℃，反应时间为3~24h，反应溶剂为DMF、甲苯或苯，式i的化合物和式iii的化合物按照摩尔比1:1~1:10反应。
上述对本发明的一类RGD肽型阳离子类脂化合物制备方法的描述中，各个取代基的定义及优选，均与本发明中对化合物的描述中的定义及优选相同。上述制备方法中，所属化合物a的化学名为3-芴甲氧羰酰氨基-1,2-丙二醇（简称FA）；化合物b的化学名为N-芴甲氧羰酰基-（2,3-双咪唑基甲酸酯）丙胺。
本发明采用上述方法合成的RGD肽型阳离子类脂化合物，采用红外光谱（IR）、核磁共振谱（1HNMR）或质谱来确认其结构。
本发明提供一种RGD肽型阳离子类脂组合物，该组合物包括上述的RGD肽型阳离子类脂化合物和一种或两种以上类脂助剂。
所述类脂助剂选自卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘髓磷脂、脑磷脂、心肌磷脂、磷脂酸、糖脂、磷脂三十二烷酯、二油酰磷脂酰氯、二棕榈酰磷脂酰氯、棕榈酰油酰磷脂酰氯、二油酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺和二油酰磷脂酰乙醇胺4-（N-马来酰亚胺-甲基）环己烷-1-羧酸酯、硬脂酰胺、十六烷胺、十四烷胺、十二烷胺、乙酰十六酸酯、甘油蓖麻醇酸酯、硬脂酸十六烷酯、肉豆蔻酸异丙酯、两性丙烯酸聚合物、三乙醇胺-十二烷基硫酸酯、烷基-芳基硫酸酯聚乙氧基化的脂肪酸酰胺、二十八烷基二甲基溴化铵、麦角甾醇、胆固醇、雄甾醇、胆酸、脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、壳聚糖、蔗糖酯中的一种或两种以上的混合物；在优选的技术方案中，类脂助剂选自卵磷脂、二油酰磷脂酰氯（DOPC）、二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）、胆固醇、壳聚糖、蔗糖酯，更优选自二油酰磷脂酰氯（DOPC）、二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）、胆固醇、壳聚糖、蔗糖酯，最优选自DOPE和胆固醇。
本发明的RGD肽型阳离子类脂组合物，所述组合物中各组分的用量:所述的RGD肽型阳离子类脂化合物与类脂助剂的质量比为20:1~1:10；在优选的技术方案中，RGD肽型阳离子类脂化合物与类脂助剂的质量比为10:1~1:5；更优选3:1~1:3。
本发明中的RGD肽型阳离子类脂组合物有选为悬浮液、乳浊液、微胶粒或脂质体。
含有本发明RGD肽型阳离子类脂的脂质体可用本领域所熟知的方法进行制备。一般是将阳离子类脂（带有一个或多个类脂助剂）的有机溶液干燥得到类脂膜，然后再将其水化得到脂质体的悬浮液。从所需类脂成分制备干燥类脂膜的适宜溶剂可理解为是能溶解所有成分并可在其后通过蒸发或冷冻干燥而方便去除的任何溶剂。所述适宜溶剂为氯仿、二氯甲烷、乙醚、石油醚、环己烷、环戊烷、苯、甲苯、甲醇或其他脂肪族醇如乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、异丁醇、戊醇、己醇中的一种或两种以上的混合物。
用于由干燥类脂膜水化形成脂质体的合适水性介质可以是水、缓冲水溶液或组织培养基。合适的缓冲液为磷酸盐缓冲液，即：pH7.4的10mM的磷酸钾在0.9%NaCl中的溶液。水性介质的pH值应该在2~12的范围内，但优选5~9，最有选7。在某种情况下，药物将包括在水化介质中，形成阳离子脂质体复合物，而在其他情况下，如对于核酸，它们将在脂质体形成后再加入。
水化得到的脂质体悬浮液可经过超生处理、逆向蒸发、冷冻-熔化或挤压方法以生成尺寸范围的脂质体。优选制备直径为50~200nm的单层脂质体。
上述本发明的RGD肽型阳离子类脂组合物按一定的配比与药物或遗传物质结合形成复合物，用于细胞内转染。其中，所属药物为阿霉素、阿巴瑞克、5-氟尿嘧啶、干扰素、丝裂霉素、多肽中的一种或两种以上的混合物；所述遗传物质为核苷酸、DNA、RNA、MicroRNA、siRNA中的一种或两种以上的混合物。
本发明所述的RGD肽型阳离子类脂化合物具备以下特点：
本发明的化合物采用对pH敏感的氨基甲酸酯键作为类脂的连接键，达到提高转染效率，降低毒性的目的。
本发明的化合物产品毒副性小，原料易得，制备方法简单，具有环保、安全，适于实验室制备以及工业化生产。
本发明的化合物与上述类脂助剂形成盐离子类脂组合物，应用于药物或遗传物质的细胞内转染，其转染效率相当于或高于目前常用的转染试剂的转染效率，且对细胞的毒性低。
实施例1化合物RGDA14的制备
⑴Fmoc-RGD三肽的合成
使用多肽固相合成仪器，将连有Fmoc保护的天冬氨酸王树酯放入反应釜中，，然后将需要连接的甘氨酸和精氨酸配置成溶液，之后配置等量浓度的HBTU、HOBt和DIEA加入到容器中，通过计算机的程序操作仪器，控制反应进行。反应完毕使用三氟乙酸对树脂进行切割，通过提纯后得到Fmoc-RGD三肽纯品。其表征结果如下：1HNMR（400MHz，CDCl3）δ:8.56（s,2H,NH2）,7.28-7.87（m,8H,2×CCHCHCHC），4.76（m,1H,CHCOOH）,4.53（m,1H,CHCO）,2.90（d,2H,CH2COOH）.IR，（KBr）υ/cm-1:3331.15（υN-H），3054.95（υ芳环不饱和C-H），2939.33（υ饱和C-H），1691.52（υC=O），1614.3、1537.08（υ芳环C=C），794.54（δ芳环C-H）；ESI-MSm/z：Found[M+H]+，568.56。
⑵3-芴甲氧羰酰氨基-1,2-丙二醇（FA）的合成
在装有回流管和恒压滴液漏斗的50ml三口瓶中加入0.45g3-氨基-1,2-丙二醇加入9ml蒸馏水溶解，再加入0.43gNaHCO3。将1.72gFmoc-OSu溶于14ml丙酮中，并将其缓慢滴加入三口瓶中，室温下搅拌过夜。反应结束后，旋转蒸发除去溶剂丙酮，加100ml蒸馏水洗涤沉淀，减压抽滤得到白色固体，红外干燥。用乙酸乙酯重结晶，得到白色絮状产物FA。其结构表征如下：1HNMR（400MHz，CDCl3）δ:7.57（d,2H,2×CH）,7.39（t,2H,2×CH）,7.28（d,2H,2×CH）,4.21（m,1H,CH）,4.46（d,2H,OCH2）3.29（m,2H,NHCH2）,3.68（d,1H,HOCH）.IR，（KBr）υ/cm-1:3329.62（υN-H），3058.33（υ芳环不饱和C-H），2942.51（υ饱和C-H），1692.97（υC=O），1543.37（δN-H），1449.35（υ芳环C=C），1268.29（υC-O），743.14（δ芳环C-H）。ESI-MSm/z：Found[M+Na]+，336.2。
⑶2,3-双十四烷基氨基甲酸酯丙胺（A14）的合成
在装有氮气保护、温度计、回流管和恒压滴液漏斗的50ml三口瓶中加入5ml甲苯、2mlDMF和0.47gFA，40℃恒温水浴，磁力搅拌下缓慢滴加入溶有0.5g羰基二咪唑（CDI）的甲苯溶液5ml，40℃反应3h。然后磁力搅拌下缓慢滴加入溶有0.64g十四胺的甲苯溶液10ml，40℃再反应2h。最后假日0.06g氢氧化钠反应2h。反应结束后，将反应混合物旋转减压蒸干溶剂，得到胶状淡黄色固体。用乙腈重结晶，得到白色固体，真空干燥。再用DMF重结晶得到白色固体A14。其结构表征如下：1HNMR（400MHz，CDCl3）δ:8.56（s,2H,CNH2）5.18（m,1H,NOCH）4.8（m,1H,OCH）,4.20（d,2H,OCH2）,3.18（m,4H,2×NCH2）,1.26-1.31（m,48H,2×(CH2)12）,0.89（t,6H,2×CH3）.IR，（KBr）υ/cm-1:3358.94（υN-H），2920.08、2858.39（υC-H），1699.38（υC=O），1581.78、1536.65（δN-H）,1469.57（υ芳环C=C），1267.91（υC-N），735.82（δC-H）。ESI-MSm/z：Found[M+H]+，569.90，[M+Na]+，592.89。
⑷N-[1-（2,3-双十四烷基氨基甲酰基）丙基]-N-RGD肽（RGDA14）的合成
在25℃下，将0.42gHATU和1.49gHOBt溶于5mL乙腈后加入至装有回流管、恒压滴液漏斗和温度计的50mL的三口瓶中。将0.57gFmoc-RGD溶于3mL乙腈中，加入152μL的三乙胺，慢慢滴加至三口瓶中，25℃反应1h。再将0.55gA14溶于5mLDMF溶液，缓慢滴加至上述反应液中，室温下反应过夜。将反应结束后会有产生大量沉淀，减压抽滤得到白色固体，用DMF溶液冲洗，再用乙醇水溶液（乙醇：水=4:1）重结晶，得到白色粉末状固体FRGDA14。取FRGDA14固体，加入哌啶的DMF溶液（哌啶：DMF=1:4），充分搅拌反应30min，减压抽滤得到白色粉末状固体，使用乙醇/水重结晶，得到我们的目标产物RGDA14阳离子类脂。其结构表征如下：1HNMR（400MHz，CDCl3）δ:4.8（m,1H,OCH）,4.20（d,2H,OCH2）,1.26-1.52（m,48H,2×(CH2)12）,0.88（t,6H,2×CH3）.IR，（KBr）υ/cm-1:3316.07（υN-H），2918.98、2846、18（υC-H），1689（υC=O），1605.3（δN-H），1454,32（δC-H），1185.88（υC-N），705.24（δC-H）。
实施例2阳离子脂质体的制备
上述实施例1得到的RGD肽型阳离子类脂化合物（RGDA14），在紫外灯下照射1h，称取1mg的阳离子类脂，分别与一定量的助类脂DOPE加入到1ml氯仿/甲醇（v/v=2:1）中充分溶解，均匀氮气吹干，形成薄膜，真空干燥10h，除净有机溶剂。加入1ml无菌超纯水，恒温50℃下超声1-3h，使之变得透明澄清，终浓度为1.00mM的阳离子脂质体。
实施例3脂质体的形态观察
按照实施例2所述的方法得到RGD肽型阳离子类脂和助类脂制备的阳离子脂质体。其中所述的脂质体为RGDA14和DOPE的1:1的混合物。
将上述脂质体，使用透射电镜观察其形态结构，采用重金属复染色法，染色剂为2%磷钨酸溶液，400目铜网制模，在100k倍镜下观察。电镜照片如图1所示：脂质体的形态基本呈球形，脂质体的粒径在30-50nm之间，粒径范围在有效转染粒径范围（小于1μm）内。
实施例4阳离子脂质体压缩核酸的能力
使用DNA延滞实验检验测定实施例2制备的脂质体结合DNA的能力。
具体方法如下：首先将一定量的质粒DNA（pGFP-N2质粒）稀释在DMEM中；分别取一定体积的浓度为1μg/μL的实施例2的脂质体稀释于DMEM中，使其分别制成10μL的体系，然后将10μL脂质体稀释液滴加到10μL质粒DNA的稀释液中，使得类脂和DNA的质量比分别为1/1、2/1、3/1、4/1、6/1、8/1和10/1，使用旋涡振荡器使其充分混匀，室温复合20min。取20μL上述复合物溶液与1.6μL的上样缓冲液（loadingbuffer）混匀，加入到1.2%琼脂糖凝胶中，在90V的电压下电泳1h。在凝胶成像系统中观察DNA电泳图谱并照相，如图2所示。图2两图分别为单独RGDA14的脂质体和RGDA14:DPE=1:1的脂质体。
图2两图中：第1泳道为2kbDNAmarker（ΛDNA/EcoRI+HindIIIMarkers，购自SABC），第2泳道为裸DNA，第3-9泳道为脂质体与DNA比例分别为1/1、2/1、3/1、4/1、6/1、8/1和10/1的脂质体-DNA复合物。在未加入脂质体时（裸DNA），出现典型的质粒条带。在加入脂质体后，DNA条带明显减弱，随着脂质体的加入量的增加，DNA的延滞能力明显增加，说明本发明所制备的脂质体具有与DNA结合的能力。
实施例5转染效率的测定
⑴脂质体-核酸复合物的制备
按照实施例2所述的方法获得本发明的RGD肽型阳离子类脂和类脂助剂制备的阳离子脂质体。其中所述的脂质体分别采用不同比例混合的RGDA14和DOPE的混合物，按质量比其比例为1/2、1/1、2/1，以评价DOPE的加入量对脂质体转染效率的影响。
首先将一定量的质粒DNA（pGFP-N2或pGL-3）稀释于DMEM中；分别取一定体积的浓度为1μg/μl所述阳离子脂质体稀释于DMEM中，使其分别制成25μl的体系，然后将25μl脂质体稀释液滴加到25μl质粒DNA的稀释液中，使得脂质体和DNA的质量比（μg/μg）分别为1/1、2/1、3/1、4/1、6/1和8/1，用漩涡震荡器充分摇匀，室温温育20min，使其形成50μl脂质体-DNA复合物。
脂质体-DNA复合物也可利用两种商业上可获得的类脂转染试剂Lipofectamine2000（与质粒的质量比为3：1）和DOTAP（与质粒的质量比为6：1）来制备。这些转染的商业试剂将作为标准来评价所合成类脂的转染效率。
⑵复合物转染效率的测定
取步骤⑴制备的脂质体-DNA复合物在不同细胞系Hep-2（人喉癌上皮细胞）和Hela（人宫颈癌细胞）中进行条件实验，考察不同条件下的转染效率，优化试剂的使用条件。
将细胞种植于96孔细胞培养板中，每孔接种适量的细胞，细胞培养液（含血清和抗生素）总体积100μl。将细胞放置在37℃、5%CO2培养箱中孵育16-24h，使在转染时细胞密度达到1-1.5*104。
移去生长培养基，用等量（100μl，无血清和抗生素）培养基替换。直接将50μl步骤⑴的脂质体-DNA复合物样品加入孔板中，每个样品设3个平行孔，摇动培养板，轻轻混匀。在37℃、5%CO2培养箱中培养4h-5h，更换含血清和抗生素的培养基，培育48h后进行基因表达分析。
基因表达分析：
绿色荧光蛋白检测（Hep-2细胞中）：用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白信号。阳性细胞发出明亮的绿色荧光，而阴性细胞则无，结果如图3所示。
图3的结果显示，合成类脂所表现出的转染效率略低于或相当于商品试剂Lipofectamine2000，如RGDA14/DOPE=1/1在脂质体/DNA比例为3/1的条件下（见图3）。合成类脂所表现出的转染效率要高于商品试剂DOTAP。随着阳离子类脂的结构以及实验方案和条件的进一步优化，还有继续提高其转染效率的可能。
实施例6MTT法毒性测定
在96孔细胞培养板上种植Hela细胞，平行3控，取平均值。每孔种植5*105个细胞/100μl培养液，在37℃、5%CO2环境下培养至90%汇合度。移去培养基，用D-Hank,s洗1次。将实施例5制备得到的部分脂质体25μl滴加到质粒DNA（pGFP-N2）稀释液25μl中（脂质体和DNA的质量比为1/1、2/1、3/1、4/1、6/1和8/1），边加边漩涡振荡器振荡后加入到96孔细胞培养板里；同样Lipofectamine2000（与质粒的质量比为3：1）和DOTAP（与质粒的质量比为6：1）的复合物作为阳性对照加入到96孔细胞培养板里；采用不含阳离子脂质体的100μl培养基（无血清和无抗生素）作为阴性对照。在37℃、5%CO2培养箱中继续培养，24h后向每孔加入20μl3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)溶液（5mg/mlinPBS,pH7.4）继续培养4-5h，移除培养基。生成的甲瓒结晶用150μl二甲基亚砜(DMSO）溶解，剧烈混合使甲瓒溶解。在酶标仪上进行读数，吸收波长570nm，酶标仪用无细胞的培养基调零。阳离子脂质体相对于对照细胞的相对存活率按下式计算：
细胞存活率=[A]样品/[A]对照*100
[A]样品为测试孔的吸光值，[A]对照为阴性对照孔的吸光值。
实验结果如图4所示，本发明所合成部分基因载体阳离子脂质体在两种人体癌细胞中的细胞毒性普遍较低，细胞存活率与商品试剂Lipofectamine2000和DOTAP相当，上述转染效率可见本发明的RGD肽型阳离子脂质体具有作为基因载体的应用前景。

Claims (6)

1.一种RGD肽型阳离子类脂化合物，其特征在于：结构通式如下：
其中：X-为F-、Cl、Br-、I-、H2PO4 -、HCO3 -、NO3 -、HSO3 -、CH3COO-、葡萄糖酸根、葡萄糖醛酸根、半乳糖酸根、半乳糖醛酸根、丙酸根、甲磺酸根中的一种；
R1为C1-20烷基、十八烯基、胆固醇基中的一种。
2.一种根据权利要求1所述的RGD肽型阳离子类脂化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
⑴、使用多肽固相合成仪器，将Fmoc-Asp-Wang树脂、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg-OH按照摩尔比为1︰1︰1~1︰4︰4的比例反应，制备式i的化合物，i化合物的结构式如下：
反应温度为10~40℃，反应溶剂为DMF；
⑵、在碱性条件下将3-氨基-1,2-丙二醇和Fmoc-OSu按照摩尔比为1︰1~1︰20的比例反应，制备化合物a，化合物a的结构式如下：
a
反应温度为10~100℃，反应时间为1~48h，3-氨基-1,2-丙二醇的反应溶剂为水，Fmoc-OSu的反应溶剂为丙酮；
⑶、将⑵步骤制备的化合物a和羰基二咪唑按照摩尔比为1︰1~1︰10的比例反应，制备化合物b，化合物b的结构式如下：
b
反应温度为10~100℃，反应时间为1~12h，反应溶剂为甲苯或DMF；
⑷、将⑶制备的化合物b和ii的化合物按照摩尔比为1︰1~1︰10的比例反应，制备iii的化合物，其中ii的化合物和iii的化合物结构式如下：
⑸、将⑴步骤制备的i的化合物和⑷步骤制备的iii的化合物按照摩尔比为1︰1~1︰30的比例反应，制备式RGD肽型阳离子类脂化合物，其中反应温度为10~100℃，反应时间为1~48h，反应溶剂为DMF或甲苯或苯。
3.一种如权利要求1所述的RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物，其特征在于：所述组合物由RGD肽型阳离子类脂化合物和一种或两种以上等量的类脂助剂混合相互作用构成，所述的类脂助剂选自卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、鞘髓磷脂、脑磷脂、心肌磷脂、磷脂酸、糖脂、磷脂三十二烷酯、二油酰磷脂酰氯、二棕榈酰磷脂酰氯、棕榈酰油酰磷脂酰氯、二油酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺和二油酰磷脂酰乙醇胺4-（N-马来酰亚胺-甲基）环己烷-1-羧酸酯、硬脂酰胺、十六烷胺、十四烷胺、十二烷胺、乙酰十六酸酯、甘油蓖麻醇酸酯、硬脂酸十六烷酯、肉豆蔻酸异丙酯、两性丙烯酸聚合物、三乙醇胺-十二烷基硫酸酯、烷基-芳基硫酸酯聚乙氧基化的脂肪酸酰胺、二十八烷基二甲基溴化铵、麦角甾醇、胆固醇、雄甾醇、胆酸、脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、壳聚糖、蔗糖酯；
所述的RGD肽型阳离子类脂化合物和类脂助剂的质量比为20︰1~1︰10。
4.根据权利要求3所述的RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物，其特征在于：所述的RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物为悬浮液、乳浊液、微胶粒或脂质体。
5.一种根据权利要求3所述的RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物作为药物或遗传物质载体的应用。
6.一种根据权利要求3所述的RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物的复合物，其特征在于：所述的复合物是由RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物与药物或遗传物质复合而成的，RGD肽型阳离子类脂化合物的组合物与药物或遗传物质的质量比为10︰1~1︰10；所述药物为阿霉素、阿巴瑞克、5-氟尿嘧啶、干扰素、丝裂霉素、多肽中的一种或两种以上混合物；所述遗传物质为多核苷酸、DNA、RNA、MicroRNA、siRNA中的一种或两种以上混合物。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018137658A1 (zh) * 2017-01-25 2018-08-02 四川大学 CP-iRGD多肽、iDPP纳米粒、载药复合物及其制备方法和应用
CN109851799A (zh) * 2018-12-17 2019-06-07 浙江大学 一种c(RGDfk)环肽-壳聚糖硬脂酸嫁接物载药胶束及制备与应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103599549A (zh) * 2013-11-22 2014-02-26 大连民族学院 一种siRNA/抗癌药物联合转运复合载体及其制备方法和应用
CN103613516A (zh) * 2013-11-22 2014-03-05 大连民族学院 一类双子型阳离子类脂的制备及其在药物或基因转运中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103599549A (zh) * 2013-11-22 2014-02-26 大连民族学院 一种siRNA/抗癌药物联合转运复合载体及其制备方法和应用
CN103613516A (zh) * 2013-11-22 2014-03-05 大连民族学院 一类双子型阳离子类脂的制备及其在药物或基因转运中的应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DEFU ZHI等: "In Vitro Study of Carbamate-Linked Cationic Lipid for Gene Delivery Against Cervical Cancer Cells", 《ADVANCES IN MATERIALS PHYSICS AND CHEMISTRY》 *
XIAO-BING XIONG等: "Intracellular Delivery of Doxorubicin with RGD-Modified Sterically Stabilized Liposomes for an Improved Antitumor Efficacy: In Vitro and In Vivo", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES》 *
刘雷明等: "AoGDW肽固相合成工艺研究", 《化学试剂》 *
李茜等: "RGD肽在肿瘤靶向纳米给药系统中的应用", 《海峡药学》 *
赵铁男等: "多肽型阳离子脂质体的研究进展", 《化学世界》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018137658A1 (zh) * 2017-01-25 2018-08-02 四川大学 CP-iRGD多肽、iDPP纳米粒、载药复合物及其制备方法和应用
CN109851799A (zh) * 2018-12-17 2019-06-07 浙江大学 一种c(RGDfk)环肽-壳聚糖硬脂酸嫁接物载药胶束及制备与应用
CN109851799B (zh) * 2018-12-17 2020-07-10 浙江大学 一种c(RGDfk)环肽-壳聚糖硬脂酸嫁接物载药胶束及制备与应用

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