CN105628848A - 一种唾液中6种醛类-dna加合物的测定方法 - Google Patents

一种唾液中6种醛类-dna加合物的测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105628848A
CN105628848A CN201610226337.3A CN201610226337A CN105628848A CN 105628848 A CN105628848 A CN 105628848A CN 201610226337 A CN201610226337 A CN 201610226337A CN 105628848 A CN105628848 A CN 105628848A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
saliva
guanine
acr
home
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610226337.3A
Other languages
English (en)
Inventor
侯宏卫
胡清源
陈欢
刘鲁娟
陈建
张小涛
张森
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center
Original Assignee
National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center filed Critical National Tobacco Quality Supervision and Inspection Center
Priority to CN201610226337.3A priority Critical patent/CN105628848A/zh
Publication of CN105628848A publication Critical patent/CN105628848A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials

Abstract

一种同时测定唾液中6种醛类-DNA加合物的方法，即唾液中HOMe-dA、HOMe-dG、Ethylidene-dG、CdG、α-Acr-dG和γ-Acr-dG的测定方法，包括采用OG-500唾液采集管收集唾液，对唾液进行DNA提取，DNA溶液进行酶水解并依次加入稳定同位素内标、还原剂NaBH3CN和DNA水解酶。水解液经Strata-X小柱固相萃取，收集洗脱液，室温下氮吹至干，复溶于甲醇水溶液，引入LC-MS/MS系统分析，可准确检测出上述六种物质的含量水平。采用稳定同位素作为内标定量分析物可以减少样品前处理过程中引起的误差，串联质谱法更好的提高了方法的选择性、准确性和灵敏度。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化，较好的提高了色谱分离过程，缩短了分析时间，减少了溶剂消耗。

Description

一种唾液中6种醛类-DNA加合物的测定方法
技术领域
本发明属于唾液样本的理化检验技术领域，主要涉及唾液中N6-羟甲基-腺嘌呤（HOMe-dA）、N2-羟甲基-鸟嘌呤（HOMe-dG）、N2-亚乙基-鸟嘌呤（Ethylidene-dG）、1,N2-丙醇-鸟嘌呤（CdG）、6-羟基-1,N2-丙醇-2'-鸟嘌呤（α-Acr-dG）和8-羟基-1,N2-丙醇-2'-鸟嘌呤（γ-Acr-dG）DNA加合物的测定技术领域，具体说是一种采用液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）测定唾液中6种醛类-DNA加合物的方法。
背景技术
甲醛、乙醛、丙烯醛和巴豆醛是一类广泛存在于环境基质中的污染物。它们主要产生于有机物的不完全燃烧，如工业生产、卷烟烟气、机动车尾气和烹饪油烟等。活泼的醛基不需要经过机体代谢就能够直接攻击生物体内亲核基团，如核酸中的鸟嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶及胸腺嘧啶形成DNA加合物。上述醛类形成的主要DNA加合物包括N6-羟甲基-腺嘌呤（HOMe-dA），N2-甲基-鸟嘌呤（HOMe-dG），N2-亚乙基-鸟嘌呤（Ethylidene-dG），1,N2-丙醇-鸟嘌呤（CdG），α-Acr-dG和γ-Acr-dG，其中HOMe-dA、HOMe-dG和ethylidene-dG在单核苷酸状态下不稳定，需要将其在DNA酶水解阶段还原为N6-甲基-腺嘌呤（Me-dA）、N2-甲基-鸟嘌呤（Me-dG）和N2-乙基-鸟嘌呤（Et-dG）才能被检出。
唾液是一种非侵入式的样本采集方式，对受试者不造成影响样本易获得，是现成可用的DNA来源。口腔是烟气等有害成分直接暴露的靶器官，相关研究表明唾液中DNA的损伤与口腔癌相关。唾液中较丰富的细胞类型为口腔上皮细胞与白细胞，因其生命周期较短，唾液中DNA加合物的含量更加能显示致癌物的近期暴露情况，唾液在检测卷烟和食品致癌物产生的DNA加合物方面具有很大的应用前景。
目前，关于DNA加合物的分析检测方法报道的较多，主要有32P-后标记技术、酶联免疫技术（ELISA）、高效液相色谱法（HPLC-UV）和液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）。其中LC-MS/MS由于其较高的灵敏度和选择性被广泛应用于DNA加合物的检测分析。目前，在唾液中HOMe-dA、HOMe-dG、Ethylidene-dG、CdG、α-Acr-dG和γ-Acr-dG的高通量分析方法尚未见报道。
发明内容
本发明的目的正是基于上述现有技术状况而采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术建立的唾液中6种醛类-DNA加合物（HOMe-dA、HOMe-dG、Ethylidene-dG、CdG、α-Acr-dG和γ-Acr-dG）的测定方法。该方法具有快速、准确、灵敏度高等特点，可用于唾液中6种醛类-DNA加合物的同时定性定量分析。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种唾液中6种醛类-DNA加合物的测定方法，即HOMe-dA、HOMe-dG、Ethylidene-dG、CdG、α-Acr-dG和γ-Acr-dG的测定方法，包括以下具体步骤：
a、唾液采集：用Oragene·DNA唾液采集器（OG-500）对人体唾液进行标准化采集。
b、唾液DNA的提取：Oragene唾液混合液于50℃水浴孵育至少1h后，加入Oragene净化液，涡旋振荡，冰浴孵育10min；于室温下离心；移取上层清液于一新的微量离心管中，加入纯乙醇，轻轻震荡数秒；静置使DNA分子完全沉淀，离心并去上清液；加入70%的乙醇水溶液清洗DNA团块。用超纯水复溶DNA。用NanoDrop2000超微量分光光度计在260nm处检测DNA的含量，对于双链DNA一个吸收单位（OD）相当于50μg/mL。
c、DNA的酶水解及纯化富集：将上述DNA溶于500μL的10mMTris-HCl/5mMMgCl2缓冲液（pH=7）中，在DNA溶液加入30mgNaBH3CN，加入20μL混合内标，加入30U脱氧核糖核酸酶Ⅰ，在37℃中孵育2h，随后加入0.008U磷酸二酯酶Ⅰ和15U碱性磷酸酶在37℃中继续孵育2h。水解液经Strata-X固相萃取，收集洗脱液液氮吹至干，复溶于100μL30%甲醇水溶液，即为样品待测液。此过程的目的是为了使双链DNA酶解成单核苷酸状态，通过固相萃取和氮吹浓缩纯化分离并富集所需的DNA加合物。所述混合内标为10ng/mL的[13C10 15N5]Me-dG、[15N5]Et-dG、[15N5]CdG、[15N5]α-Acr-dG、[15N5]γ-Acr-dG和50ng/mL的[15N5]Me-dA。
d、标准工作液的配制：用甲醇分别配制不同浓度的6种醛类-DNA加合物标准工作溶液。
e、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定，吸取配制好的不同浓度混合标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，得到线性回归方程，对样品待测液进行测定，测得分析物与内标峰面积的比值，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量。
色谱条件：选取ThermoAcclaimTMPolarAdvantageIIC18色谱柱（4.6×150mm，3μm），流动相体系选取A：0.01%甲酸甲醇和B：10mM乙酸铵水溶液，洗脱条件为梯度洗脱：0-2min：25%A，2-17min：35%A，17-25min：25%A；流速为0.38mL/min。分析时间为25min，进样量为5μL。
质谱条件：电喷雾离子源（ESI），多反应监测正离子扫描方式；喷雾电压：5500V，离子源温度：550℃，气帘气的量为20psi，雾化气为70psi，干燥气为75psi，碰撞气为9psi，射入电压：10V,碰撞能：9eV，驻留时间：50ms。各分析物及内标的MRM参数见表1。
整个分析过程由AppliedBiosystemsAnalystversion1.5.1软件来控制。
表1多反应监测模式下6种醛类-DNA加合物及其内标的MRM参数
*为定量离子
本发明方法的线性范围和检出限：
将系列标准工作溶液注入LC-MS/MS，得到标准工作曲线、线性回归方程以及相关系数。Me-dG、Et-dG、CdG、α-Acr-dG和γ-Acr-dG标准曲线的点为0.02，0.05，0.1，0.2，0.3，0.5，1.0和2.0ng/mL，Me-dA标准曲线的点为0.02，0.05，0.5，1.0，2.0，5.0，10，20和50ng/mL，目标物的线性良好，相关系数均大于0.9990。利用加标稀释得到方法的定量限和检出限，目标峰十倍信噪比对应的浓度为定量限，三倍信噪比对应的浓度为检出限。分析物的标准曲线及定量限和检出限见表2。
表2目标物的标准工作曲线及LOD和LOQ
（4）本发明方法加标回收率和重复性：
采取唾液DNA样本中加标的方法获得方法的加标回收率，总共选取了三个添加水平，每个添加水平重复测定3次，得到的方法的回收率和重复性，结果见表3。目标物的回收率在78.4%-110.7%之间，RSD小于10%，证明方法的准确性和重复性结果较好。
表3分析物的加标回收率和重复性
本发明的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，针对唾液中6种醛类-DNA加合物的色谱条件进行了优化，并对LC-MS/MS的相关检测条件进行了优化。与现有技术相比本发明方法具有如下优良效果：
①与传统的液相色谱方法比较，由于选取了串联质谱，使得方法的选择性和灵敏度提高，更有利于唾液中低含量的醛类-DNA加合物的测定。
②本方法具有操作简便、快速、准确、灵敏度高及重复性好的优点。
本方法能同时检测唾液样本中的6种醛类-DNA加合物，检测通量较高，有利于多种醛类污染物暴露的风险评估。
本发明方法采用稳定同位素作为内标定量分析物可以减少样品前处理过程中引起的误差，串联质谱法更好的提高了方法的选择性与准确性和灵敏度。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化，较好的提高了色谱分离过程，缩短了色谱分析的时间，减少了有机溶剂的消耗量。
附图说明
图1：6种醛类-DNA加合物的总离子流图。
具体实施方式
本发明以下结合实例做进一步描述，但并不是限制本发明。
一种唾液中6种醛类-DNA加合物的测定方法，其测试过程是用OG-500唾液采集管收集唾液，对唾液进行DNA提取，DNA溶液进行酶水解并依次加入稳定同位素内标、还原剂NaBH3CN和DNA水解酶。水解液经Strata-X小柱固相萃取，收集洗脱液，室温下氮吹至干，复溶于100μL的30%甲醇水溶液，引入LC-ESI-MS/MS系统分析。
实例1：
1.仪器与试剂：
ABSCIEX三重四级杆串联质谱仪（美国加州应用生物系统公司），Agilent1200高效液相色谱（美国安捷伦公司），NanoDrop2000超微量分光光度计（美国赛默飞科技公司），恒温培养箱（美国赛默飞科技公司），氮气浓缩干燥仪（瑞典拜泰齐公司），Milli-Q水纯化系统（德国默克集团），Analyst1.5.1数据采集与处理软件。
脱氧核糖核酸酶Ⅰ、碱性磷酸酶（美国纽英伦生物技术公司），磷酸二酯酶Ⅰ、乙酸铵、甲酸、和小牛胸腺DNA（美国西格玛公司），NaBH3CN（上海阿拉丁试剂公司），甲醇（韩国德山试剂公司），Strata-X聚合物小柱（33μm,30mg/1mL，广东菲罗门科学仪器有限公司），Oragene·DNA唾液采集器（OG-500，加拿大DNAGenotek公司）。标准品Me-dA、Me-dG、Et-dG、CdG、α-Acr-dG、γ-Acr-dG和内标物[13C10 15N5]Me-dG、[15N5]Me-dA、[15N5]Et-dG、[15N5]CdG、[15N5]α-Acr-dG、[15N5]γ-Acr-dG。试剂均为色谱纯。
2．样品处理：
唾液采集：用Oragene·DNA唾液采集器（OG-500）对人体唾液进行标准化采集。
唾液DNA的提取：Oragene唾液混合液于50℃水浴孵育至少1h后，加入Oragene净化液，涡旋振荡，冰浴孵育10min；于室温下离心；移取上层清液于一新的微量离心管中，加入纯乙醇，轻轻震荡数秒；静置使DNA分子完全沉淀，离心并去上清液；加入70%的乙醇水溶液清洗DNA团块。用超纯水复溶DNA。用NanoDrop2000超微量分光光度计在260nm处检测DNA的含量，对于双链DNA一个吸收单位（OD）相当于50μg/mL。
DNA的酶水解及纯化富集：将上述DNA溶于500μL的10mMTris-HCl/5mMMgCl2缓冲液（pH=7）中，依次加入30mgNaBH3CN和20μL混合内标；加入30U脱氧核糖核酸酶Ⅰ，在37℃中孵育2h，随后加入0.008U磷酸二酯酶Ⅰ和15U碱性磷酸酶在37℃中继续孵育2h。水解液经Strata-X固相萃取，收集洗脱液液氮吹至干，复溶于100μL30%甲醇水溶液，即为样品待测液。所述混合内标为10ng/mL的[13C10 15N5]Me-dG、[15N5]Et-dG、[15N5]CdG、[15N5]α-Acr-dG、[15N5]γ-Acr-dG和50ng/mL的[15N5]Me-dA。
3．测定方法：吸取不同浓度的标准溶液和前处理之后的唾液DNA样品各5μL，注入LC-MS/MS系统进行分离分析，测得样本中6种醛类-DNA加合物的含量。
实例2：如实施例1所述，利用本研究建立的方法对5个唾液样本中醛类-DNA加合物进行了检测（每个样本平行检测三次）。依据标准曲线和峰面积计算获得各个样品中DNA加合物的浓度，根据公式
计算获得各个样品中DNA加合物相对于核苷酸的含量，结果乘以108换算成DNA加合物个数/108个核苷酸。实验结果见表4。
表4唾液样本中6种醛类-DNA加合物的含量

Claims (5)

1.一种唾液中6种醛类-DNA加合物的测定方法，即唾液中N6-羟甲基-腺嘌呤（HOMe-dA）、N2-羟甲基-鸟嘌呤（HOMe-dG）、N2-亚乙基-鸟嘌呤（Ethylidene-dG）、1,N2-丙醇-鸟嘌呤（CdG）、6-羟基-1,N2-丙醇-2'-鸟嘌呤（α-Acr-dG）和8-羟基-1,N2-丙醇-2'-鸟嘌呤（γ-Acr-dG）的测定方法，其特征在于：包括以下具体步骤：
a、唾液采集：用Oragene·DNA唾液采集器（OG-500）对人体唾液进行标准化采集；
b、唾液DNA的提取：Oragene唾液混合液于50℃水浴孵育至少1h后，加入Oragene净化液，涡旋振荡，冰浴孵育10min；于室温下离心；移取上层清液于一新的微量离心管中，加入纯乙醇，轻轻震荡数秒；静置使DNA分子完全沉淀，离心并去上清液；加入70%的乙醇水溶液清洗DNA团块，用超纯水复溶DNA，用NanoDrop2000超微量分光光度计在260nm处检测DNA的含量，对于双链DNA一个吸收单位OD相当于50μg/mL；
c、DNA的酶水解及纯化富集：将上述DNA溶于500μL的10mMTris-HCl/5mMMgCl2缓冲液中，加入30mgNaBH3CN，将N6-羟甲基-腺嘌呤（HOMe-dA）、N2-羟甲基-鸟嘌呤（HOMe-dG）和N2-亚乙基-鸟嘌呤（Ethylidene-dG）还原为N6-甲基-腺嘌呤（Me-dA）、N2-甲基-鸟嘌呤（Me-dG）和N2-乙基-鸟嘌呤（Et-dG）进行检测，加入20μL混合内标；添加30U脱氧核糖核酸酶Ⅰ，在37℃中孵育2h，随后加入0.008U磷酸二酯酶Ⅰ和15U碱性磷酸酶在37℃中继续孵育2h，水解液经Strata-X固相萃取，收集洗脱液液氮吹至干，复溶于100μL30%甲醇水溶液，即为样品待测液；
d、标准工作液的配制：用甲醇配制不同浓度的6种醛类-DNA加合物标准工作溶液；
e、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定，吸取配制好的不同浓度混合标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，得到线性回归方程，对样品待测液进行测定，测得分析物与内标峰面积的比值，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量。
2.根据权利要求1所述的唾液中6种醛类-DNA加合物的测定方法，其特征在于：步骤c中所述的混合内标为10ng/mL的[13C10 15N5]Me-dG、[15N5]Et-dG、[15N5]CdG、[15N5]α-Acr-dG、[15N5]γ-Acr-dG和50ng/mL的[15N5]Me-dA。
3.根据权利要求1所述的唾液中6种醛类-DNA加合物的测定方法，其特征在于：步骤e中选取了ThermoAcclaimTMPolarAdvantageIIC18色谱柱，规格4.6×150mm，3μm，流动相体系选取A：0.01%甲酸甲醇，B：10mM乙酸铵水溶液，梯度洗脱，分析时间为25min，进样量为5μL。
4.根据权利要求3所述的唾液中6种醛类-DNA加合物的测定方法，其特征在于：梯度洗脱程序：0-2min：25%A，2-17min：35%A，17-25min：25%A；流速为0.38mL/min。
5.根据权利要求1所述的唾液中6种醛类-DNA加合物的测定方法，其特征在于：步骤e中串联质谱检测器的条件：电喷雾离子源（ESI），多反应监测正离子扫描方式；喷雾电压：5500V，离子源温度：550℃，气帘气的量为20psi，雾化气为70psi，干燥气为75psi，碰撞气为9psi，射入电压：10V,碰撞能：9eV，驻留时间：50ms。
CN201610226337.3A 2016-04-13 2016-04-13 一种唾液中6种醛类-dna加合物的测定方法 Pending CN105628848A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610226337.3A CN105628848A (zh) 2016-04-13 2016-04-13 一种唾液中6种醛类-dna加合物的测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610226337.3A CN105628848A (zh) 2016-04-13 2016-04-13 一种唾液中6种醛类-dna加合物的测定方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105628848A true CN105628848A (zh) 2016-06-01

Family

ID=56043982

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610226337.3A Pending CN105628848A (zh) 2016-04-13 2016-04-13 一种唾液中6种醛类-dna加合物的测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105628848A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108551973A (zh) * 2018-03-08 2018-09-21 贵州安顺金黔虫草有限公司 一种蛹虫草培养方法及蛹虫草菌素提取方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006096973A1 (en) * 2005-03-16 2006-09-21 Dna Genotek Inc. Compositions and method for storage of nucleic acid from bodily fluids
CN202355427U (zh) * 2011-11-14 2012-08-01 湖北维达健基因技术有限公司 唾液dna样本采集器
US20140017672A1 (en) * 2007-10-31 2014-01-16 Rebecca HOLMBERG Method and kit for purifying nucleic acids
CN104502492A (zh) * 2015-01-14 2015-04-08 武汉大学 一种化学衍生化方法及其在lc-ms法检测核酸修饰中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006096973A1 (en) * 2005-03-16 2006-09-21 Dna Genotek Inc. Compositions and method for storage of nucleic acid from bodily fluids
US20140017672A1 (en) * 2007-10-31 2014-01-16 Rebecca HOLMBERG Method and kit for purifying nucleic acids
CN202355427U (zh) * 2011-11-14 2012-08-01 湖北维达健基因技术有限公司 唾液dna样本采集器
CN104502492A (zh) * 2015-01-14 2015-04-08 武汉大学 一种化学衍生化方法及其在lc-ms法检测核酸修饰中的应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MINGYAO WANG 等: "A Schiff Base Is a Major DNA Adduct of Crotonaldehyde", 《CHEM. RES. TOXICOL.》 *
SIYI ZHANG 等: "Analysis of Acrolein-Derived 1,N2-Propanodeoxyguanosine Adducts in Human Leukocyte DNA from Smokers and Nonsmokers", 《CHEM. RES. TOXICOL.》 *
刘鲁娟 等: "吸烟人群唾液中醛类-DNA加合物的定量分析", 《中国化学会第二届全国质谱分析学术报告会会议摘要集》 *
刘鲁娟 等: "液相色谱-串联质谱法检测甲醛暴露产生的两种DNA加合物", 《环境科学学报》 *
刘鲁娟 等: "醛类-DNA加合物检测技术研究进展", 《中国烟草学报》 *
张宁 等: "稳定同位素内标超高效液相色谱串联质谱法测定人体细胞中乙醛-DNA加合物的含量", 《第十届全国生物医药色谱及相关技术学术交流会论文集》 *
袭著革 等: "典型醛类污染物与细胞DNA分子的结合作用", 《环境科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108551973A (zh) * 2018-03-08 2018-09-21 贵州安顺金黔虫草有限公司 一种蛹虫草培养方法及蛹虫草菌素提取方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105021756B (zh) 一种禽蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍残留的多联检测方法
CN104614479A (zh) 一种食品中维生素的检测方法
CN105181839A (zh) 一种以多拉菌素为内标物使用液质联用仪检测羊肌肉组织中伊维菌素残留量的方法
CN104267120A (zh) 检测山药块茎内源激素的超高效液相色谱-串联质谱法
CN102980968A (zh) 一种尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法
CN105628848A (zh) 一种唾液中6种醛类-dna加合物的测定方法
CN105628847A (zh) 一种唾液中乙醛-dna加合物的测定方法
CN104849383A (zh) 快速溶剂萃取-凝胶色谱净化-lc/ms/ms结合测定蜂花粉中硝基咪唑类药物的方法
CN105938124A (zh) 一种唾液中甲醛-dna加合物的测定方法
CN105929034B (zh) 一种唾液中巴豆醛‑dna加合物的测定方法
CN103823010B (zh) 尿液中3-甲基腺嘌呤(3-MeA)的测定方法
CN105911167B (zh) 一种唾液中丙烯醛‑dna加合物的测定方法
CN103808836B (zh) 一种尿液中3-烷化腺嘌呤dna加合物的测定方法
CN109406643B (zh) 一种饲料中二氢吡啶的测定方法
CN103823009B (zh) 一种液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-烷化腺嘌呤的应用
CN111337611A (zh) 水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法
CN103852547B (zh) 尿液中3-乙基腺嘌呤(3- EtA)的测定方法
CN105911163B (zh) 一种乙醛‑dna加合物的测定方法
CN105911168B (zh) 一种丙烯醛‑dna加合物的测定方法
CN103852548B (zh) 尿液中3-羟乙基腺嘌呤(3-HOEtA)的测定方法
CN105911165B (zh) 一种巴豆醛‑dna加合物的测定方法
CN109324139A (zh) 一种烟叶中玉米素核苷液液萃取-液相色谱-串联质谱的测定方法
CN112285240B (zh) 基于固相萃取-液质联用的生物样品中浙贝母三种活性成分的检测方法
CN111487339B (zh) 一种基于污水中4-吡哆酸的浓度评估区域人口数量的方法
CN103822991B (zh) 一种液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-乙基腺嘌呤的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20160601

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication