CN105622447A - 克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用，该克罗烷型二萜类化合物的制备方法如下：将海南暗罗组织经过阴干、粉碎后，用提取溶液回流提取，减压浓缩后得浸膏；浸膏中加入蒸馏水悬浮后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取；将乙酸乙酯部位先经硅胶柱层析，然后经石油醚-丙酮体系梯度洗脱，合并相同流份，得到丙酮洗脱部分组分1和组分2；组分1经薄层层析色谱分离得到化合物A，组分2依次经柱层析分离和高效液相色谱分离得到化合物B。本发明的克罗烷型二萜类化合物对肿瘤细胞，尤其是Hela（宫颈癌细胞）、MCF-7（人乳腺癌细胞）和A549（人肺癌细胞）具有增殖抑制作用。

Description

克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物化学医药技术领域，具体涉及一种克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
海南暗罗（PolyalthialauiMerr.）为番荔枝科（Annonaceae）暗罗属（Polyalthia）植物，常为直立灌木。据中国植物志记载，该属植物全世界约有200种，分布于马来西亚、菲律宾、印度、斯里兰卡等亚热带地区，我国分布于云南、广东、广西南部及海南。我国有17种，海南有7种，分别为：细基丸（P.cerasoides），沙煲暗罗（P.consanguinea），海南暗罗（P.laui），陵水暗罗（P.nemoralis），斜脉暗罗（P.plagioneura），香花暗罗（P.rumphii）和暗罗（P.suberosa）。其中，海南暗罗和沙煲暗罗为海南特有种。
克罗烷型二萜类化合物最早是在1988年由PhadnisA.P.等从P.longifolia中分离得到，化学名称为16-hydroxycleroda-3,13(14)E-dien-15-oicacid；1990年KijjoaA.等从P.viridis中分离得到了5个克罗烷型二萜类化合物16(R)-3,13Z-kolavadien-15,16-olide、Methyl-2E,6E-farnesoate-3,13E-kolavadien-15-oicacid、16(R&S)-3,13Z-kolavadien-15,16olide-2-one、14,15-bisnor-3,11E-kolavadien-13-one、(4→2)-abeo-16(R&S)-2,13Z-kolavadien-15,16-olide-3-ol；1992年ChakrabortyM.等从P.longifolia中分离得到了2个克罗烷型二萜类化合物16α-hydroxylcleroda-3,13Z-dien-16,15-olide和4β,16α-dehydroxycleroda-13(14)Z-dien-15,16-olide；1994年HasanC.等从P.longifolia中分离得到了3个克罗烷型二萜类化合物16-oxocleroda-3,13(14)E-dien-15-oicacid、Kolavenicacid和16β-hydroxycleroda-3,13(14)Z-dien-15,16-olide。
发明内容
本发明的目的在于解决上述问题，提供一种新的具有抗肿瘤活性的克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用。
实现本发明上述目的的技术方案之一是：一种克罗烷型二萜类化合物，其结构如式A所示：
（A）。
实现本发明上述目的的技术方案之二是：一种克罗烷型二萜类化合物，其结构如式B所示：
（B）。
上述克罗烷型二萜类化合物A的制备方法包括以下步骤：
①将海南暗罗组织经过阴干、粉碎后，用提取溶液回流提取，减压浓缩后得浸膏；浸膏中加入蒸馏水悬浮后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取；
②将乙酸乙酯部位先经硅胶柱层析，然后经石油醚-丙酮体系梯度洗脱，合并相同流份，得到丙酮洗脱部分组分1和组分2；
③对组分1进行薄层层析色谱分离，得到克罗烷型二萜类化合物A。
上述克罗烷型二萜类化合物B的制备方法包括以下步骤：
①将海南暗罗组织经过阴干、粉碎后，用提取溶液回流提取，减压浓缩后得浸膏；浸膏中加入蒸馏水悬浮后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取；
②将乙酸乙酯部位先经硅胶柱层析，然后经石油醚-丙酮体系梯度洗脱，合并相同流份，得到丙酮洗脱部分组分1和组分2；
③对组分2依次进行柱层析分离和高效液相色谱分离，得到克罗烷型二萜类化合物B。
其中，海南暗罗组织具体为海南暗罗的根或茎。
上述步骤①中所述的提取溶液为体积分数为75%的乙醇水溶液；上述步骤①中所述浸膏与所述蒸馏水的体积比为1∶1。
上述制备化合物A的步骤③中的薄层层析色谱分离采用的展开剂为乙酸乙酯-石油醚混合溶剂，其中乙酸乙酯的体积百分数为10%～30%，优选为25%。
上述制备化合物B的步骤③中的高效液相色谱分离采用的流动相为46%H2O和54%MeCN。
上述化合物A和化合物B在增殖抑制肿瘤细胞上的应用。
上述肿瘤细胞包括Hela（宫颈癌细胞）、MCF-7（人乳腺癌细胞）和A549（人肺癌细胞）。
本发明具有的积极效果：（1）本发明的克罗烷型二萜类化合物对肿瘤细胞，尤其是Hela（宫颈癌细胞）、MCF-7（人乳腺癌细胞）和A549（人肺癌细胞）具有增殖抑制作用。（2）本发明的克罗烷型二萜类化合物制备工艺简单、成本低廉。
附图说明
图1为化合物A的1H-1HCOSY（━）相关和主要的HMBC（→）相关。
图2为化合物A的NOESY谱图。
图3为化合物B的1H-1HCOSY（━）相关和主要的HMBC（→）相关。
图4为化合物B的NOESY谱图。
具体实施方式
（实施例1）
本实施例为化合物A和化合物B的制备方法，包括以下步骤：
①取海南暗罗根或茎，阴干、粉碎后，用8倍重量的体积分数为75%的乙醇水溶液回流提取3次，每次6天，过滤、合并提取液，减压浓缩得到浸膏；向浸膏中加入蒸馏水（体积比为1∶1），悬浮后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取。
②将乙酸乙酯部位先经硅胶柱层析，然后经石油醚-丙酮体系梯度洗脱，合并相同流份，得到丙酮洗脱部分组分1和组分2。
③对组分1进行薄层层析色谱分离，展开剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（V∶V＝3∶1），得到化合物A（12.5mg）。
对组分2先进行柱层析分离，然后进行高效液相色谱分离，流动相为46%H2O和54%MeCN，得到化合物B（4.6mg）。
化合物A为无色针状晶体，易溶于氯仿、乙酸乙酯，254nm紫外灯下呈黑色暗斑。
化合物B为淡黄色油状液体，易溶于氯仿、乙酸乙酯，254nm紫外灯下呈黑色暗斑。
化合物A的结构式如下：
。
化合物A的核磁数据见表1，化合物A的1H-1HCOSY（━）相关和主要的HMBC（→）相关见图1和表1，化合物A的NOESY谱图见图2。
根据高分辨质谱数据（m/z=424.3221[M+H]+），推出化合物A的分子式为C28H41NO2，不饱和度为9。
表1
NO. δC δH（J in Hz） mult HMBC 1H-1H COSY
1 18.4 1.51m CH2 2,10 2,10
2 27.0 1.97m CH2 -- 1,3
3 120.5 5.20br,s CH -- 2,4
4 144.7 -- C -- 3,18
5 38.3 -- C -- --
6 36.9 1.73m CH2 -- 7
7 27.6 1.18m CH2 -- 6,8
8 36.4 1.48m CH -- 7,9,17
9 38.8 -- C -- 8
10 46.6 1.32m CH -- 1
11 36.5 1.48m CH2 -- 12
12 34.7 2.03m CH2 -- 11,13
13 157.8 -- C -- 12,14,16
14 117.8 5.66s CH 13,15 13
15 165.1 -- C -- --
16 19.0 2.20s CH3 12,13,14 13
17 16.1 0.83d（4.2） CH3 7,8,9 --
18 18.2 1.59s CH3 3,4,5 4
19 20.1 1.00s CH3 4,5,6,10 --
20 18.5 0.74s CH3 8,9,10,11 --
1’ 131.3 -- C -- --
2’,6’ 121.6 7.42d（8.4） CH -- 3’,5’
3’,5’ 114.8 6.80d（8.8） CH -- 2’,6’
4’ 155.7 -- C -- --
7’ 63.8 4.01q（7.8） CH2 4’ 8’
8’ 15.0 1.40t（7.8） CH3 7’ 7’
NH -- 7.02br,s NH -- --
化合物B的结构式如下：
。
化合物B的核磁数据见表2，化合物B的1H-1HCOSY（━）相关和主要的HMBC（→）相关见图3和表2，化合物A的NOESY谱图见图4。
根据高分辨质谱数据（m/z=329.2093[M+Na]+），推出化合物B的分子式为C19H30O3，不饱和度为5。
表2
NO. δC δH（J in Hz） mult HMBC 1H-1H COSY
1 35.0 2.35dd（11.2,4.80）、2.37m CH2 -- 2,10
2 200.1 -- C -- 1
3 125.7 5.72s CH 2 4,15
4 172.4 -- C -- 3,15
5 40.0 -- C -- --
6 35.7 1.35m、1.81m CH2 -- 7
7 27.0 1.51m、1.49m CH2 -- 6,8
8 36.3 1.40m CH -- 7,9,14
9 38.7 -- C -- 8
10 46.0 1.77dd（10.8,4.4） CH -- --
11 32.3 1.65m CH2 -- 12
12 28.2 2.15m、2.09m CH2 13 11
13 173.8 -- C -- --
14 15.9 0.854d（7.2） CH3 7,9 8
15 19.1 1.88s CH3 3,4,5 4
16 18.5 1.11s CH3 4,6,10 --
17 17.8 0.84s CH3 8.9.10.11 --
18 60.6 4.11q（8.2） CH2 13 19
19 14.4 1.24t（8.2） CH3 -- 18
（试验例、抗肿瘤活性实验）
本试验例为采用MTT法评价化合物A和化合物B对肿瘤细胞增殖抑制作用。
将对数生长期的Hela（宫颈癌细胞）、MCF-7（人乳腺癌细胞）和A549（人肺癌细胞）配制细胞悬液，分别接种于96孔培养板；细胞贴壁后分别加入用PBS配制的浓度梯度的（0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L共六个浓度）20μL化合物A和化合物B。每组设5个复孔，同时设空白对照和溶媒（DMSO）对照，置于37.0℃、5%CO2、饱和湿度条件下，培养44h后，每孔加入50μL的MTT溶液（1mg/mL，PBS配制），作用4h后弃上清，每孔加入150μL的DMSO，震荡10min，在酶联免疫检测仪上选择570nm波长处测吸光A值，抑制率（%）=（对照组A值-实验组A值）/对照组A值×100%。
表3
阿霉素a为阳性对照。
由表3可以看出：化合物A和化合物B对三种肿瘤细胞均具有较好的增殖抑制作用，能够用于制备抗肿瘤药物。

Claims (10)

1.一种克罗烷型二萜类化合物，其结构如式A所示：
（A）。
2.权利要求1所述的克罗烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
①将海南暗罗组织经过阴干、粉碎后，用提取溶液回流提取，减压浓缩后得浸膏；浸膏中加入蒸馏水悬浮后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取；
②将乙酸乙酯部位先经硅胶柱层析，然后经石油醚-丙酮体系梯度洗脱，合并相同流份，得到丙酮洗脱部分组分1和组分2；
③对组分1进行薄层层析色谱分离，得到克罗烷型二萜类化合物A。
3.根据权利要求2所述的克罗烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于：上述步骤①中所述的提取溶液为体积分数为75%的乙醇水溶液；上述步骤①中所述浸膏与所述蒸馏水的体积比为1∶1；上述步骤③中的薄层层析色谱分离采用的展开剂为乙酸乙酯-石油醚混合溶剂，其中乙酸乙酯的体积百分数为10%～30%。
4.权利要求1所述的克罗烷型二萜类化合物在制备抗肿瘤药物上的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述肿瘤包括宫颈癌、人乳腺癌和人肺癌。
6.一种克罗烷型二萜类化合物，其结构如式B所示：
（B）。
7.权利要求6所述的克罗烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
①将海南暗罗组织经过阴干、粉碎后，用提取溶液回流提取，减压浓缩后得浸膏；浸膏中加入蒸馏水悬浮后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取；
②将乙酸乙酯部位先经硅胶柱层析，然后经石油醚-丙酮体系梯度洗脱，合并相同流份，得到丙酮洗脱部分组分1和组分2；
③对组分2依次进行柱层析分离和高效液相色谱分离，得到克罗烷型二萜类化合物B。
8.根据权利要求7所述的克罗烷型二萜类化合物的制备方法，其特征在于：上述步骤①中所述的提取溶液为体积分数为75%的乙醇水溶液；上述步骤①中所述浸膏与所述蒸馏水的体积比为1∶1；上述步骤③中的高效液相色谱分离采用的流动相为46%H2O和54%MeCN。
9.权利要求6所述的克罗烷型二萜类化合物在制备抗肿瘤药物上的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述肿瘤包括宫颈癌、人乳腺癌和人肺癌。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110452113A (zh) * 2019-08-26 2019-11-15 海南师范大学 一种 （4→2）重排克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用
CN110687242A (zh) * 2019-07-03 2020-01-14 兰州大学 Neo-克罗烷型二萜类化合物对黑麦草的植物毒活性测试方法
CN115073283A (zh) * 2021-08-31 2022-09-20 海南师范大学 氧化克罗烷型二萜类化合物及其分离方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103980196A (zh) * 2014-06-03 2014-08-13 海南师范大学 一种海南暗罗根提取物的制备方法
CN105037472A (zh) * 2015-06-29 2015-11-11 海南师范大学 从沙煲暗罗中分离羊毛烷型三萜类化合物的方法
CN105037267A (zh) * 2015-06-29 2015-11-11 海南师范大学 从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103980196A (zh) * 2014-06-03 2014-08-13 海南师范大学 一种海南暗罗根提取物的制备方法
CN105037472A (zh) * 2015-06-29 2015-11-11 海南师范大学 从沙煲暗罗中分离羊毛烷型三萜类化合物的方法
CN105037267A (zh) * 2015-06-29 2015-11-11 海南师范大学 从沙煲暗罗中分离生物碱类化合物的方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110687242A (zh) * 2019-07-03 2020-01-14 兰州大学 Neo-克罗烷型二萜类化合物对黑麦草的植物毒活性测试方法
CN110452113A (zh) * 2019-08-26 2019-11-15 海南师范大学 一种 （4→2）重排克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用
CN110452113B (zh) * 2019-08-26 2021-09-14 海南师范大学 一种(4→2)重排克罗烷型二萜类化合物及其制备方法和应用
CN115073283A (zh) * 2021-08-31 2022-09-20 海南师范大学 氧化克罗烷型二萜类化合物及其分离方法和应用
CN115073283B (zh) * 2021-08-31 2023-12-01 海南师范大学 氧化克罗烷型二萜类化合物及其分离方法和应用

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