CN105613362A - 一种应用海洋寡糖提高刺参附着变态率的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种应用海洋寡糖提高刺参幼虫附着变态率的方法，其特征在于，包括以下步骤：准备刺参幼虫培养液、培养液中诱导刺参幼虫、普通海水中继续培养、观察计数及计算刺参幼虫附着变态率，上述培养液包括：不同浓度的壳寡糖工作液、未添加壳寡糖的对照海水；上述壳寡糖工作液浓度为0.001-1.0克/升，诱导培养持续时间为8-24小时。本发明的有益之处在于：壳寡糖属于海洋虾蟹壳来源的动物寡糖，使用安全无毒，整个诱导处理过程操作简便，易于实现，提高刺参苗种的出苗率，减少刺参幼苗在附着变态中的死亡，有效增加了刺参育苗的经济收益。

Description

一种应用海洋寡糖提高刺参附着变态率的方法
技术领域
本发明涉及一种提高海洋水产动物幼虫附着变态率的方法，具体涉及一种应用海洋寡糖提高刺参幼虫附着变态率的方法，属于水产动物养殖和育苗技术领域。
背景技术
随着人们生活水平的提高，人们对水产品的需求日益增长，这就要求加快水产养殖业的健康发展，而育苗问题却是目前水产养殖业中的重要环节。刺参作为北方水产养殖的重要产品，具有很高的营养保健和医用价值。近10余年来，随着全球海参自然资源日趋枯竭与国内海参消费持续增长，国内刺参养殖呈现迅猛发展的态势，这促使了工厂化育苗技术的产生、发展和成熟。刺参幼虫发育到一定阶段，具有附着变态的能力，遇到合适的附着基，完成附着变态反应。在人工刺参育苗生产中，幼虫在附着变态阶段对外界环境因子的变化比较敏感，容易引起幼虫大量死亡。幼虫附着变态成功与否往往决定着出苗量和育苗的成败。因此提高幼虫的附着变态率，减少幼苗死亡成为人工育苗中一个亟待解决的问题。壳寡糖是源于海洋虾蟹壳提取的一种氨基寡聚糖，具有抑制肠道有害菌生长、促进有益菌增殖、抗氧化、促进吸收等多项生理功能，有望在刺参育苗阶段加以应用。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种操作简单，可有效提高刺参幼虫附着变态率的方法。
为实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种应用海洋寡糖提高刺参幼虫附着变态率的方法，包括以下步骤：
(一)、准备壳寡糖培养液：将壳寡糖溶于海水中配成浓度0.001-1.0克/升的工作液，以未添加壳寡糖的海水为对照，每组至少设置三个平行处理；
(二)、壳寡糖培养液中诱导幼虫：用200目筛绢取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步骤(一)的培养液中通氧气培养，诱导培养时间为8-24小时；
(三)、普通海水继续培养：将经步骤(二)诱导后的刺参幼虫用200目筛绢捞出，放到设置有聚乙烯附着板的海水中继续培养；
(四)观察计数和计算附着变态率：经壳寡糖培养液诱导和普通海水继续培养后，统计聚乙烯附着板上刺参幼苗摄食后所留空斑的数目，附着变态率＝(附着变态幼虫数/总幼虫数)×100％，附着变态提高率＝试验组幼虫附着变态率平均值-对照组幼虫附着变态率平均值。
上述的提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于，在步骤(一)中，壳寡糖聚合度在2～30之间，脱乙酰度在90％以上，平均分子量在300～6000Da之间。
上述的提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于，在步骤(二)中，幼虫培养密度为150-300个/L，壳寡糖诱导刺参幼苗培养时间为8-24小时。
上述的提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于，在步骤(三)中，幼虫的培养密度为150-300个/L，每升海水中至少放置表面积至少为0.2平方米的(优选0.2-0.5)聚乙烯附着板。
上述的提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤(三)中，饵料为鼠尾藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥中的一种一种或二种以上。
本发明的有益之处在于：壳寡糖属于海洋虾蟹壳来源的动物寡糖，使用安全无毒，整个诱导处理过程操作简便，易于实现，提高刺参苗种的出苗率，减少刺参幼苗在附着变态中的死亡，有效增加了刺参育苗的经济效益。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1-4
一、准备培养液：将壳寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的浓度依次为0.001克/升、0.01克/升、0.1克/升、1.0克/升，然后取1升工作液放置于2升烧杯中，每个浓度设置三个平行处理；同时，以未添加壳寡糖的海水为对照组，取1升海水放置于2升烧杯中，设置三个平行处理。
二、培养液中诱导幼虫：用200目筛绢取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步骤一中的培养液中充氧培养，每个烧杯中放置300个幼虫，诱导时间为8小时。
三、普通海水继续培养：将经步骤二诱导后的幼虫用200目筛绢捞出，放到设置有两片聚乙烯附着板的1升普通海水中继续培养，幼虫的培养密度为300个/升，饵料为鼠尾藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥。
四、观察计数：刺参幼虫经普通海水培养40小时后观察计数，统计聚乙烯附着板上刺参幼虫摄食后所留空斑的数目。附着变态率＝(附着变态幼虫数/总幼虫数)×100％，附着变态提高率＝试验组幼虫附着变态率平均值-对照组幼虫附着变态率平均值。
不同浓度的壳寡糖诱导幼虫8小时，对刺参樽形幼虫附着变态率提高见表1。
表1不同浓度壳寡糖诱导8小时对刺参附着变态率的影响
实施例5-8
一、准备培养液：将壳寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的浓度依次为0.001克/升、0.01克/升、0.1克/升、1.0克/升，然后取1升工作液放置于2升烧杯中，每个浓度设置三个平行处理；同时，以未添加壳寡糖的海水为对照组，取1升海水放置于2升烧杯中，设置三个平行处理。
二、培养液中诱导幼虫：用200目筛绢取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步骤一中的培养液中充氧培养，每个烧杯中放置300个幼虫，诱导时间为16小时。
三、普通海水继续培养：将经步骤二诱导后的幼虫用200目筛绢捞出，放到设置有两片聚乙烯附着板的1升普通海水中继续培养，幼虫的培养密度为300个/升，饵料为鼠尾藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥。
四、观察计数：刺参幼虫经普通海水培养32小时后观察计数，统计聚乙烯附着板上刺参幼虫摄食后所留空斑的数目。附着变态率＝(附着变态幼虫数/总幼虫数)×100％，附着变态提高率＝试验组幼虫附着变态率平均值-对照组幼虫附着变态率平均值。
不同浓度壳寡糖诱导幼虫16小时，对刺参樽形幼虫附着变态率提高见表2。
表2不同浓度壳寡糖诱导16小时对刺参附着变态率的影响
实施例9-12
一、准备培养液：将壳寡糖溶于海水中得到工作液，工作液的浓度依次为0.001克/升、0.01克/升、0.1克/升、1.0克/升，然后取1升工作液放置于2升烧杯中，每个浓度设置三个平行处理；同时，以未添加壳寡糖的海水为对照组，取1升海水放置于2升烧杯中，设置三个平行处理。
二、培养液中诱导幼虫：用200目筛绢取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步骤一中的培养液中充氧培养，每个烧杯中放置300个幼虫，诱导时间为24小时。
三、普通海水继续培养：将经步骤二诱导后的幼虫用200目筛绢捞出，放到设置有两片聚乙烯附着板的1升普通海水中继续培养，幼虫的培养密度为300个/升，饵料为鼠尾藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥。
四、观察计数：刺参幼虫经普通海水培养24小时后观察计数，统计聚乙烯附着板上刺参幼虫摄食后所留空斑的数目。附着变态率＝(附着变态幼虫数/总幼虫数)×100％，附着变态提高率＝试验组幼虫附着变态率平均值-对照组幼虫附着变态率平均值。
不同浓度壳寡糖诱导幼虫24小时，对刺参樽形幼虫附着变态率提高见表3。
表3不同浓度壳寡糖诱导24小时对刺参附着变态率的影响
由实施例1-12的统计数据可知，以不同浓度的壳寡糖工作液诱导刺参樽形幼虫，幼参的附着变态率有了不同程度的提高，尤其是浓度为0.1克/升的壳寡糖诱导刺参幼虫24小时，对幼虫附着变态率的影响最为明显，附着变态率提高了13.6％。同时，本发明采用的壳寡糖来源于海洋虾蟹壳，无毒副作用，不会对刺参幼虫产生不良的影响，降低了人工诱导刺参幼虫附着变态的成本，减少刺参幼虫在附着变态过程中的死亡，提高刺参幼苗的出苗率，增加刺参育苗的经济收益。

Claims (5)

1.一种应用海洋寡糖提高刺参幼虫附着变态率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(一)、准备壳寡糖培养液：将壳寡糖溶于海水中配成浓度0.001-1.0克/升的工作液；
(二)、壳寡糖培养液中诱导幼虫：取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫，放到步骤(一)的培养液中通氧气培养，诱导培养时间为8-24小时；
(三)、普通海水继续培养：将经步骤(二)诱导后的刺参幼虫捞出，放到设置有聚乙烯附着板的普通海水中继续培养。
2.按照权利要求1所述提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤(一)中，壳寡糖聚合度在2～30之间，脱乙酰度在90％以上，平均分子量在300～6000Da之间。
3.按照权利要求1所述提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤(二)中，幼虫培养密度:150-300个/L。
4.按照权利要求1所述提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤(三)中，幼虫的培养密度:150-300个/L，每升海水中至少放置表面积为0.2平方米的(优选0.2-0.5)聚乙烯附着板。
5.按照权利要求1所述提高刺参幼苗附着率的方法，其特征在于：在步骤(三)中，饵料为鼠尾藻、海洋红酵母、角毛藻和无菌底泥中的一种或二种以上。
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韩丽蓉等: "壳寡糖对刺参生长、免疫反应和抗病力的影响", 《中国海洋大学学报》 *

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