CN105028262B - 一种南美白对虾半同胞家系构建方法 - Google Patents

一种南美白对虾半同胞家系构建方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了南美白对虾半同胞家系构建方法，该方法包括成熟亲虾的挑选、亲虾个体的标记与交配方案的设定、精荚的获得、精子的活化、雌虾产卵及卵子的收集、人工授精、受精卵的孵化、无节幼体的收集等步骤。本发明方法与传统的人工精荚移殖法相比，不会对雌虾造成伤害，可同时建立多个半同胞家系；将精子通过人工释放于产卵水体中，可避免自然交配导致的不交配或者交配后雌虾精荚脱落的缺陷；本发明在设定的近交系数的前提下，人为地设计交配方案，可有效避免所建家系的近交衰退，是一种高效的南美白对虾家系构建方法。

Description

一种南美白对虾半同胞家系构建方法
技术领域
本发明涉及对虾家的系选育方法，具体是一种南美白对虾半同胞家系构建方法，属于水产养殖技术领域。
背景技术
南美白产对虾业是我国渔业经济的支柱性产业，每年我国南美白对虾种苗需求量巨大。然而，我国南美白对虾优质亲虾仍主要依靠进口，这严重制约了我国对虾产业的发展。所以，加强南美白对虾优良品种选育，是实现我国南美白产业持续发展的关键。
近年来，美国夏威夷海洋研究所通过家系选育结合综合指数选育法，培育出生长快品系和抗桃拉病南美白对虾品系；法国海洋开发研究院通过家系选育法选育出蓝对虾抗传染性皮下与造血组织坏死病毒品系；澳大利亚通过家系选育法提高了日本对虾的生长速度。可见，采用大规模家系选育是对虾遗传改良的有效方法。在家系选育过程中，准确估计选育性状的遗传参数，是提高育种值预测准确性，加快育种进程的重要保障。而大量构建半同胞家系是遗传力、遗传相关等遗传参数准确估计的必要技术手段。
目前，已报道的南美白对虾家系构建方法有定向交尾技术和人工授精法。其中，定向交尾技术存在交配率低、交尾雄虾难确定、精荚容易脱落等、特别是两个半同胞的建立时间难于同步等问题；传统的人工授精法，采用挤压或刺激雄虾腹部使精荚排除，然后将精荚贴在成熟雌虾第三、第四步足的纳精囊上，这种方法可能对雄虾和雌虾造成伤害，且存在精荚容易脱落、受精率低等问题（Arce S M, Moss S M, Argue B J. Artificialinsemination and spawning of Pacific white shrimp, Litopenaeus vannamei:implications for a selective breeding program[J]. Spawning and Maturation ofAquatic Species. Proceedings of the Twenty-Eighth US-Japan Natural ResourcesAquaculture Panel. UJNR Technical Report, 2000, 28: 5-8.）。另外，两种方法均难于同时建立多个半同胞。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种南美白对虾半同胞家系构建方法，该方法受精率高，无需人工精荚移殖，不会对雌虾造成伤害，可同时建立多个半同胞家系，将精子通过人工释放于产卵水体中，可避免自然交配导致的不交配或者交配后雌虾精荚脱落的缺陷，在设定的近交系数的前提下可人为地设计交配方案，有效避免所建家系的近交衰退，是一种高效的南美白对虾家系构建方法。
本发明技术方案如下：一种南美白对虾半同胞家系构建方法，采用如下步骤：
（1）成熟亲虾的挑选：家系建立当天，进行亲虾选择，选择体形强壮，附肢健全，体色透明，胃肠饱满，体表光滑，无附着物，规格在35-50克/尾，体长15-18cm，经定期抽检不携带特定病原，且事先在亲虾培育池中按照雌、雄虾分别进行强化培育、性腺已发育成熟的雌、雄虾作为亲虾；其中，雌虾的选择：性腺成熟的雌虾从表面观察生殖腺颜色为红色，每体节卵巢分叶清晰，性腺在第一、二腹节的突起大，卵粒饱满，根据性腺的发育情况判断当天可以产卵的雌虾，选出后分别单独暂养于体积为1立方米的小水槽中；雄虾的选择：观察雄虾第五步足基部的精荚囊饱满，精荚呈乳白色，选出后单独暂养于体积为1立方米的网箱或小水槽中；所述雌、雄虾暂养的养殖水体水环境与亲虾培育池相同，亲虾培育池中，雌、雄虾池水温分别为30±0.5℃、28±0.5℃，盐度均为31±1、溶氧均控制在5mg.L-1；
（2）亲虾个体的标记与交配方案的设定：雌雄亲虾用眼柄套环进行个体标记，并确定定向交配方案，一般是按一尾雄虾与二至三尾雌虾进行定向交配；
（3）精荚的获得：根据步骤（2）设定的交配方案，挑选一尾成熟的雄虾，记录亲虾套环编号，用大拇指和食指在雄虾第五部步足基部从虾体侧向腹部进行按压，精荚突出即用镊子将精荚取出，按压过程注意操作力度以免雄虾受伤，取完精荚的雄虾，于10ppm的聚维酮碘溶液中消毒1min后，放入原亲虾培育池中备用；
（4）精子的活化：将步骤（3）取得的精荚放入200目筛绢网中，于盛有灭菌的无钙生理盐水烧杯中充分搓洗让精子释放，获得精子释放液；将精子释放液视半同胞家系的构建个数，平均分成2~3份，备用；
（5）雌虾产卵及卵子的收集：将在暂养池中自然产卵后的雌虾移入亲虾培育池中备用，所产卵子分别用网目为100目的筛绢网收集后分别移入装有10L过滤海水的受精桶中；
（6）人工授精：将精子释放液分别泼入装有定向交配雌虾所产卵子的受精桶中，并用消毒过的玻璃棒进行充分搅拌，使精卵充分混合，直接结合授精；
（7）受精卵的孵化：精卵充分混合后10分钟，用网目为100目的筛绢网对各个受精桶中的受精卵进行收集，分别移入体积为1立方米的小水槽中单独孵化，孵化密度为20万粒/立方水体以下，孵化水温29±0.5℃，微充气或每隔2h搅拌水体一次，使卵子均匀分布于水孵化水体中；
（8）无节幼体的收集：受精13小时后，用200目筛绢网收集无节幼体，并计算无节幼体的量，进行半同胞家系的标准化育苗培养。
本发明技术方案中，所述用于活化精子的无钙生理盐水用量为：每个精荚所用无钙生理盐水不超过500mL。
步骤（6）人工授精时，受精桶中精子的浓度为：每L水体含精块质量在1g以上。
所述卵子产出至卵子进入精子释放液中的时间控制在1小时之内。
对虾成熟情况的鉴定方法如下：根据雌虾卵巢的形态、大小、色泽等特征，将其划分为形成期、增殖期、小生长期、大生长期、成熟期和恢复期共6期；雌虾在形成期和增殖期几乎看不出卵巢的形态和色泽，小生长后期卵巢明显增大，外观清晰，到成熟期可观察到雌虾卵巢几乎占满整个头胸部、并向背部延伸至尾节，呈橘红色；雄虾的性成熟主要通过观察其精荚和是否有追尾现象判别，精荚的发育情况可从外形上分为四个阶段：未发育阶段，特征为少量不透明乳白色粘液，没有精子和精子团，透过精荚囊可看到一点白色的区域；早发育阶段，精荚囊中可见白线状，内有大量粘液、薄而硬的片状物质；晚期发育阶段，精荚呈白色、柔软；成熟阶段，精荚饱满凸出，变硬呈乳白色，用手轻轻挤压时，精荚可随用力方向上下移动，雄虾在池中有明显的追尾现象。
本发明与传统的人工授精法相比，不用将精荚黏附在雌虾纳精囊上，不会对雌虾造成伤害；将精子通过人工释放于产卵水体中，可避免自然交配导致的不交配或者交配后雌虾精荚脱落的缺陷；本发明在设定的近交系数的前提下，人为地设计交配方案，可有效避免所建家系的近交衰退，是一种高效的南美白对虾家系构建方法。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1 采用以下步骤实现本发明：
（1）成熟亲虾的挑选：
a．事先在亲虾培育池中按照雌、雄虾分别进行强化培育、性腺已发育成熟的雌、雄虾作为备选亲虾；亲虾培育池中，雌、雄虾池水温分别为30±0.5℃、28±0.5℃，盐度均为31±1、溶氧均控制在5mg.L-1，
b．家系建立当天，在步骤a的亲虾培育池中按以下条件进行亲虾选择：选择体形强壮，附肢健全，体色透明，胃肠饱满，体表光滑，无附着物，规格在35-50克/尾，体长15-18cm，经定期抽检不携带特定病原的亲虾；其中，雌虾的选择标准是：从表面观察雌虾生殖腺颜色为红色，每体节卵巢分叶清晰，性腺在第一、二腹节的突起大，卵粒饱满，根据性腺的发育情况判断当天可以产卵的雌虾为性腺成熟的雌虾，将其选出后分别单独暂养于体积为1立方米的小水槽中；雄虾的选择标准是：观察雄虾第五步足基部的精荚囊饱满，精荚呈乳白色，选出后单独暂养于体积为1立方米的小水槽中；雌、雄虾暂养的养殖水体水环境与亲虾培育池相同；
（2）亲虾个体的标记与交配方案的设定：雌雄亲虾用眼柄套环进行个体标记，确定定向交配方案，按一尾雄虾与二尾雌虾进行定向交配；
（3）精荚的获得：根据步骤（2）设定的交配方案，挑选一尾成熟的雄虾，记录亲虾套环编号，用大拇指和食指在雄虾第五部步足基部从虾体侧向腹部进行按压，精荚突出即用镊子将精荚取出，按压过程注意操作力度以免雄虾受伤，取完精荚的雄虾，于10ppm的聚维酮碘溶液中消毒1min后，放入原亲虾培育池中备用；
（4）精子的活化：将步骤（3）取得的精荚放入200目筛绢网中，于盛有灭菌的无钙生理盐水烧杯中充分搓洗让精子释放，获得精子释放液，每个精荚所用无钙生理盐水300mL；将精子释放液视半同胞家系的构建个数，平均分成3份，备用；
（5）雌虾产卵及卵子的收集：将在暂养池中自然产卵后的雌虾移入亲虾培育池中，所产卵子分别用网目为100目的筛绢网收集后分别移入装有10L过滤海水的受精桶中；卵子产出至卵子进入精子释放液中的时间控制在1小时之内；
（6）人工授精：将精子释放液分别泼入装有定向交配雌虾所产卵子的受精桶中，并用消毒过的玻璃棒进行充分搅拌，使精卵充分混合，直接结合授精；受精桶中精子的浓度为：每L水体含精块质量1.5g；
（7）受精卵的孵化：精卵充分混合后10分钟，用网目为100目的筛绢网对各个受精桶中的受精卵进行收集，分别移入体积为1立方米的小水槽中单独孵化，孵化密度为20万粒/立方水体以下，孵化水温29±0.5℃，微充气，使卵子均匀分布于水孵化水体中；
（8）无节幼体的收集：受精13小时后，用200目筛绢网收集无节幼体，并计算无节幼体的量，进行半同胞家系的标准化育苗培养。
采用此方法，受精率为43.27%。
实施例2 采用以下步骤实现本发明：
（1）成熟亲虾的挑选：家系建立当天，在实施例1的亲虾培育池中按以下条件进行亲虾选择：选择体形强壮，附肢健全，体色透明，胃肠饱满，体表光滑，无附着物，规格在35-50克/尾，体长15-18cm，经定期抽检不携带特定病原的亲虾；其中，雌虾的选择标准是：从表面观察雌虾生殖腺颜色为红色，每体节卵巢分叶清晰，性腺在第一、二腹节的突起大，卵粒饱满，根据性腺的发育情况判断当天可以产卵的雌虾为性腺成熟的雌虾，将其选出后分别单独暂养于体积为1立方米的小水槽中；雄虾的选择标准是：观察雄虾第五步足基部的精荚囊饱满，精荚呈乳白色，选出后单独暂养于体积为1立方米的网箱中；雌、雄虾暂养的养殖水体水环境与亲虾培育池相同；
（2）亲虾个体的标记与交配方案的设定：雌雄亲虾用眼柄套环进行个体标记，确定定向交配方案，按一尾雄虾与三尾雌虾进行定向交配；
（3）精荚的获得：根据步骤（2）设定的交配方案，挑选一尾成熟的雄虾，记录亲虾套环编号，用大拇指和食指在雄虾第五部步足基部从虾体侧向腹部进行按压，精荚突出即用镊子将精荚取出，按压过程注意操作力度以免雄虾受伤，取完精荚的雄虾，于10ppm的聚维酮碘溶液中消毒1min后，放入原亲虾培育池中备用；
（4）精子的活化：将步骤（3）取得的精荚放入200目筛绢网中，于盛有灭菌的无钙生理盐水烧杯中充分搓洗让精子释放，获得精子释放液，每个精荚所用无钙生理盐水400mL；将精子释放液视半同胞家系的构建个数，平均分成2份，备用；
（5）雌虾产卵及卵子的收集：将在暂养池中自然产卵后的雌虾移入亲虾培育池中备用，所产卵子分别用网目为100目的筛绢网收集后分别移入装有10L过滤海水的受精桶中；卵子产出至卵子进入精子释放液中的时间控制在1小时之内；
（6）人工授精：将精子释放液分别泼入装有定向交配雌虾所产卵子的受精桶中，并用消毒过的玻璃棒进行充分搅拌，使精卵充分混合，直接结合授精；受精桶中精子的浓度为：每L水体含精块质量在2.2g；
（7）受精卵的孵化：精卵充分混合后10分钟，用网目为100目的筛绢网对各个受精桶中的受精卵进行收集，分别移入体积为1立方米的小水槽中单独孵化，孵化密度为20万粒/立方水体以下，孵化水温29±0.5℃，每隔2h搅拌水体一次，使卵子均匀分布于水孵化水体中；
（8）无节幼体的收集：受精13小时后，用200目筛绢网收集无节幼体，并计算无节幼体的量，进行半同胞家系的标准化育苗培养。
采用此方法，受精率为48.15%。

Claims (1)

1.一种南美白对虾半同胞家系构建方法，其特征在于：采用如下步骤：
（1）成熟亲虾的挑选：家系建立当天，进行亲虾选择，选择体形强壮，附肢健全，体色透明，胃肠饱满，体表光滑，无附着物，规格在35-50克/尾，体长15-18cm，经定期抽检不携带特定病原，且事先在亲虾培育池中按照雌、雄虾分别进行强化培育、性腺已发育成熟的雌、雄虾作为亲虾；其中，雌虾的选择：性腺成熟的雌虾从表面观察生殖腺颜色为红色，每体节卵巢分叶清晰，性腺在第一、二腹节的突起大，卵粒饱满，根据性腺的发育情况判断当天可以产卵的雌虾，选出后分别单独暂养于体积为1立方米的小水槽中；雄虾的选择：观察雄虾第五步足基部的精荚囊饱满，精荚呈乳白色，选出后单独暂养于体积为1立方米的网箱或小水槽中；所述雌、雄虾暂养的养殖水体水环境与亲虾培育池相同，亲虾培育池中，雌、雄虾池水温分别为30±0.5℃、28±0.5℃，盐度均为31±1，溶氧均控制在5mg.L-1；
（2）亲虾个体的标记与交配方案的设定：雌雄亲虾用眼柄套环进行个体标记，并确定定向交配方案，按一尾雄虾与二至三尾雌虾进行定向交配；
（3）精荚的获得：根据步骤（2）设定的交配方案，挑选一尾成熟的雄虾，记录亲虾套环编号，用大拇指和食指在雄虾第五部步足基部从虾体侧向腹部进行按压，精荚突出即用镊子将精荚取出，按压过程注意操作力度以免雄虾受伤，取完精荚的雄虾，于10ppm的聚维酮碘溶液中消毒1min后，放入原亲虾培育池中备用；
（4）精子的活化：将步骤（3）取得的精荚放入200目筛绢网中，于盛有灭菌的无钙生理盐水烧杯中充分搓洗让精子释放，获得精子释放液；将精子释放液视半同胞家系的构建个数，平均分成2~3份，备用；
（5）雌虾产卵及卵子的收集：将在暂养池中自然产卵后的雌虾移入亲虾培育池中备用，所产卵子分别用网目为100目的筛绢网收集后分别移入装有10L过滤海水的受精桶中；
（6）人工授精：将精子释放液分别泼入装有定向交配雌虾所产卵子的受精桶中，并用消毒过的玻璃棒进行充分搅拌，使精卵充分混合，直接结合授精；
（7）受精卵的孵化：精卵充分混合后10分钟，用网目为100目的筛绢网对各个受精桶中的受精卵进行收集，分别移入体积为1立方米的小水槽中单独孵化，孵化密度为20万粒/立方水体以下，孵化水温29±0.5℃，微充气或每隔2h搅拌水体一次，使卵子均匀分布于水孵化水体中；
（8）无节幼体的收集：受精13小时后，用200目筛绢网收集无节幼体，并计算无节幼体的量，进行半同胞家系的标准化育苗培养；所述用于活化精子的无钙生理盐水用量为：每个精荚所用无钙生理盐水不超过500mL；步骤（6）人工授精时，受精桶中精子的浓度为：每L水体含精块质量在1g以上；所述卵子产出至卵子进入精子释放液中的时间在1小时之内。
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