CN105581978A - 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，合成了一系列不同结构的氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质：di-C12-GluNAc-TMA、di-C14-GluNAc-TMA、di-C16-GluNAc-TMA、di-C18-GluNAc-TMA、GluNAc-DiC12MA、GluNAc-DiC14MA、GluNAc-DiC16MA和GluNAc-DiC18MA。上述脂质体经水分散后得到一系列具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒，能实现核酸药物从胞外到胞内的转运，亦可用于非核酸药物的转运载体。
Description
技术领域
本发明涉及一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。
背景技术
基因治疗是近年来医学界公认的治疗方法，该方法是将外来遗传基因导入靶细胞或组织，通过特定细胞的遗传表达从而达到治疗目的的一种生物医学技术。其中，非病毒载体相关研究日趋广泛，涉及载体种类颇多，在基因治疗中的应用也越来越活跃，且在提高转基因效率和深入研究转染机制等方面取得了重大进展。非病毒载体具有低毒性、免疫反应低、化学结构可修饰、生物相容性优良等特点。而作为非病毒性载体种类之一，阳离子脂质体在临床医学试验中具有广阔的发展前景。阳离子脂质体本身带有正电荷，所以可作为带负电荷药物的传递载体，特别适用于蛋白、多肽、DNA 和RNA 类药物，故在抗病毒、抗癌症等方面的基因治疗研究中有独特应用。
以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，通过全乙酰化、脱1-O-乙酰基、三氯乙酰亚胺酯化、糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、4,6异丙叉基保护、苄氧基保护、脱叉基、醚化、还原氨化和季铵盐化反应，合成不同疏水链长度和不同物理结构的一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体：di-C12-GluNAc-TMA
、di-C14-GluNAc-TMA、di-C16-GluNAc-TMA和di-C18-GluNAc-TMA；以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，通过全乙酰化、脱1-O-乙酰基、三氯乙酰亚胺酯化、糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、还原氨化、叔胺化、和季铵盐化反应，合成不同疏水链长度、和不同物理结构的一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体：GluNAc-DiC12MA、GluNAc-DiC14MA、GluNAc-DiC16MA和GluNAc-DiC18MA；利用上述八种氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体带正电荷的季铵盐头部可通过静电作用结合核酸药物，利用带长链的疏水端可与细胞壁膦脂双分子层结合的特征，通过融合细胞内吞作用和膜融合作用，实现核酸药物从胞外到胞内的转运。
氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉等优点，能满足DNA转运载体应具备的基本要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种合成成本低、操作容易的一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。
本发明提供的这种氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
(1) 以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，以吡啶为反应溶剂和缚酸剂，乙酸酐为酰化试剂，进行乙酰化反应。经柱层析分离纯化得到白色粉末状固体1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- D-吡喃葡萄糖；
(2) 以一定比例为混合的四氢呋喃和甲醇溶剂，1, 3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- D-吡喃葡萄糖与氨气反应，选择性脱1-O-乙酰基，经柱层析分离纯化得到无色浆状物3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖；
(3) 以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾固体提供弱碱性环境，3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖与三氯乙腈发生反应，经柱层析分离纯化得到黄色粉末状固体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯；
(4) 以二氯甲烷为溶剂，TMSOTf为催化剂，步骤(3)的到得的黄色粉末状固体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯与3-氯-1-丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(5) 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(6) 以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(7) 以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，2,2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化得到无色油状液体3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(8) 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与溴化苄反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(9) 以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与乙酰氯反应脱去异丙叉基，不经分离纯化直接进行下一步反应。以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与正烷基溴发生威廉姆逊醚化反应，经柱层析分离纯化得到3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(10) 以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分离纯化得到3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(11) 步骤(10)得到的3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(12) 以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得黄色油状液体3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(13) 步骤(12)得到的3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以一定比例为混合的四氢呋喃和甲醇溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下与溴代烷烃反应，经相应的分离纯化处理得白色固体3’-(N, N-二-正烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(14) 步骤(13)得到的3’-(N,N-二-正烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(15) 步骤(11)和步骤(14)得到的白色固体经超声波振荡水分散后得到相应的氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。
以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，以吡啶为反应溶剂和缚酸剂，乙酸酐为酰化试剂，进行乙酰化反应，反应温度：10oC
- 20oC；反应时间：12 h；反应投料比为：氨基葡萄糖盐酸盐(mol) : 乙酸酐(mol)
= 1 : 7.5 ；结晶使用溶剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 10
: 1(体积比)；所得1,
3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- D-吡喃葡萄糖，以四氢呋喃和甲醇为混合溶剂(四氢呋喃: 甲醇 = 5 : 2，体积比)，常温下通入氨气反应，经柱层析分离纯化得无色油状液体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖，反应时间：40 min - 50 min；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1(体积比)；所得3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖，以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，常温下与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得黄色固体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，反应时间：4 h；反应投料比为：3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(mol) : 三氯乙腈(mol)
: 无水碳酸钾(mol) = 1 : 2.5 : 1；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1: 1(体积比)；所得3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，以无水二氯甲烷为溶剂，4Ǻ分子筛为除水剂，以TMSOTf为催化剂，在氮气的保护下与3-氯-1-丙醇反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：-20oC至室温；反应时间：10min；反应投料比为：3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(mol) : 3-氯-1-丙醇(mol) : TMSOTf(mol) = 1 : 3 : 0.01；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 2(体积比)；所得3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，在加热条件下与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC，反应时间：24 h；反应投料比为：3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 叠氮化钠(mol) = 1 : 6；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1(体积比)。3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，通入氨气至饱和条件下反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：12 h；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以2,2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：4 h，柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1(体积比)；所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与溴化苄反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 溴化苄(mol) = 1 : 4 :
2。柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8
: 1(体积比)；所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，反应结束后不经分离纯化直接进行下一步反应。以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 月桂基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)。以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 10，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h；反应投料比：3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：反应混合液经冰浴冷却析晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为di-C12-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与肉豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 肉豆蔻基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)。以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 10，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h；反应投料比：3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：反应混合液经冰浴冷却析晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为di-C14-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与鲸蜡基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 鲸蜡基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)。以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 10，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h；反应投料比：3’-(N,N-二甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：反应混合液经冰浴冷却析晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳-O离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为di-C16-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 硬脂基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)。以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 10，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h；反应投料比：3’-(N,N-二甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：反应混合液经冰浴冷却析晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为di-C18-GluNAc-TMA)。
以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的叠氮基为氨基，分离纯化得到3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：6 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 三苯基膦(mol) = 1 : 1.2；纯化：加水除去杂质；所得3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 月桂基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶的到3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,
N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为GluNAc-DiC12MA)纳米颗粒。
以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下，3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与肉豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 肉豆蔻基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶的到3’-(N-甲基-N,N-二-正十四烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为GluNAc-DiC14MA)纳米颗粒。
以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下，3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与与鲸蜡基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 鲸蜡基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶的到3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为GluNAc-DiC16MA)纳米颗粒。
以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下，3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 硬脂基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶的到3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为GluNAc-DiC18MA)纳米颗粒。
本发明方法的主要优点是成本低廉并且操作容易，能高效制备不同结构的一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体。
具体实施方式：
下面结合实施例进一步阐述本发明的内容，但这些实施例并不限制本发明的保护范围。各氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体的合成路线如图1所示，各氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体的代号与相应的化学结构分别在表1中列出。
实施例1. 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体di-C12-GluNAc-TMA纳米颗粒的制备：
向250 mL单口圆底烧瓶中，加入氨基葡萄糖盐酸盐(6.0
g，27.9 mmol)、无水吡啶(60.0
mL)和乙酸酐(30.0 mL)。反应混合物在室温下搅拌过夜，TLC(石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 4，体积比)监测反应。反应结束后，反应混和液用二氯甲烷(200.0
mL)溶解，然后依次用水、饱和碳酸氢钠溶液和水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，用石油醚和乙酸乙酯混合液重结晶，真空干燥得白色固体1,
3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- D-吡喃葡萄糖(8.1 g，72%).
向100 mL单口圆底烧瓶中，依次加入1,
3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- D-吡喃葡萄糖 (3.0 g，7.4 mmol)，四氢呋喃(40.0 mL)，甲醇(10.0 mL)。磁力搅拌下通入氨气至饱和，室温下搅拌反应大约40 min，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 4，体积比) 监测。反应完全后，用旋转蒸发器常温脱除氨气，再升温浓缩得浆状物。浆状物经柱层析分离纯化(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1)，真空干燥，得到无色浆状物3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖 (1.8 g，67.0%).
向50 mL单口烧瓶中，依次加入3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖(1.2 g，3.4 mmol)、无水二氯甲烷(25.0 mL)、无水碳酸钾(2.5 g)和三氯乙腈(1.4 mL)。常温下搅拌反应3 h，TLC(石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料基本消失。将反应混合液过滤，浓缩，柱层析分离纯化(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1)，真空干燥得到黄色粉末状固体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(1.2 g，70.4%).
向50 mL单口烧瓶中，依次加入3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯 (3.3 g，6.73
mmol)，60oC水浴真空干燥2 h后，加入新活化的分子筛(2.0 g)，3-氯-1-丙醇(1.8 mL, 6.73 mmol)和无水DCM(30.0
mL)。反应混合物在氮气保护下搅拌反应，降温至-20oC后，加入TMSOTf (75.0 μL,
0.4 mmol)，自然升温至室温。TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 4，体积比)监测反应至原料点完全消失。滴加三乙胺 (0.2 mL)，过滤，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得浆状物。浆状物经过柱层析分离纯化(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1，体积比)，得到白色粉末状固体白色固体3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.2 g，42.1%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 5.49 (d,
1 H, J N-H,H-2= 9.0 Hz, NHAc), 5.20 (dd, 1 H, J 3,2
= 10.5 Hz, J 3,4 = 9.5 Hz, H-3), 5.07 (dd, 1 H, J 4,3
= J 4,5 = 9.5 Hz, H-4), 4.58 (d, 1 H, J 1,2 =
8.5 Hz, H-1), 4.26 (dd, 1 H, J 6a,5 = 4.5 Hz, J 6a,6b
= 12.0 Hz, H-6a), 4.16 (dd, 1 H, J 6b,5 = 2.0 Hz, J 6b,6a
= 12.0 Hz, H-6b), 4.04-4.00 (m, 1 H, OCH2CH2CHHCl),
3.94 (ddd, J H-2,N-H= 9.0 Hz, J 2,1 = 8.5 Hz,
J 2,3 = 10.5 Hz, H-2), 3.71-3.59 (m, 4 H, H-2, OCH2 CH2CHHCl),
2.08-1.96 ( m, 14 H, 4 CH 3CO, OCH2CH 2CH2N3);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 169.2, 169.2, 169.2, 169.2 (4 C, 4 CH3 CO), 100.1 (1 C,
C-1), 72.2 (1 C, C-3), 71.7(1 C, C-2), 68.3 (1 C, C-5), 66.1 (1 C, C-4), 61.9
(1 C, OCH2CH2 CH2Cl), 54.3 (1 C,
C-6), 41.4 (1 C, OCH2CH2CH2Cl), 31.9 (1
C, OCH2 CH2CH2Cl), 23.1 (1 C, NHCOCH3),
20.6, 20.5, 20.4 (3 C, 3 CH3CO).
向10 mL单口烧瓶中依次加入3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (200.0 mg，0.5
mmol)、DMF (3 mL)、18-冠-6-醚(200.0 mg)和叠氮化钠(180.0 mg，2.8 mmol)。在75~80oC下搅拌24 h，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。用乙酸乙酯(10.0 mL)稀释，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，加热浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1)分离纯化，得到白色固体3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(160.0 mg，81.6%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 5.76 (d, 1 H, J N-H,H-2= 9.0 Hz,
NHAc), 5.22 (dd, 1 H, J 3,2 = 10.5 Hz, J 3,4
= 9.5 Hz, H-3), 5.05 (dd, 1 H, J 4,3 = J 4,5
= 9.5 Hz, H-4), 4.60 (d, 1 H, J 1,2 = 8.5 Hz, H-1), 4.23 (dd,
1 H, J 6a,5 = 12.5 Hz, J 6a,6b = 5.0 Hz,
H-6a), 4.12 (dd, 1 H, J 6b,5 = 2.5 Hz, J 6b,6a =
5.0 Hz, H-6b), 3.94-3.89 (m, 2 H, H-2, OCH2CH2CHHN3),
3.70-3.67 (m, 1 H, OCH2CH2CHHN3), 3.57
(ddd, 1 H, J 5,4 = 9.5 Hz, J 5,6a = 12.5 Hz, J 5,6b
= 2.5 Hz, H-5), 3.37-3.33 (m, 2 H, OCH 2CH2CH2N3),
2.06 (s, 3 H, CH 3CO), 2.01 (s, 3 H, CH 3CO),
2.01 (s, 3 H, CH 3CO), 1.93 (s, 3 H, NHCOCH 3),
1.88-1.84 (m, 2 H, OCH2CH 2 CH2N3);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.9, 170.6, 170.2, 169.3 (4 C, 4 CH3 CO), 100.9 (1 C,
C-1), 72.3 (1 C, C-3), 71.7 (1 C, C-2), 68.5 (1 C, C-5), 66.1 (1 C, C-4), 62.0
(1 C, OCH2CH2 CH2Cl), 54.4 (1 C, C-6),
47.9 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
28.8 (1 C, OCH2 CH2CH2N3),
23.2 (1 C, NHCOCH3), 20.6, 20.6, 20.5 (3 C, 3 CH3CO).
向25 mL单口烧瓶加入3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (2.2 g，4.7 mmol)和甲醇(15.0 mL)，磁力搅拌下通入氨气1 h后，常温搅拌反应。TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 4，体积比)监测反应，反应完全后，浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇: 乙酸乙酯 = 1 : 4)分离纯化，得到白色固体3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.5 g，96.7%)。1H NMR
(500 MHz, MeOD): δ (ppm) 4.39 (d,
1 H, J 1, 2= 8.5 Hz, H-1), 3.98-3.94 (m, 1 H, OCH 2 CH2CHHN3),
3.89 (dd, 1 H, J 6a,5 = 12.0 Hz, J 6a,6b =
2.0 Hz, H-6a), 3.70 (dd, 1 H, J 6b,5 = 5.5 Hz, J 6b,6a
= 2.0 Hz, H-6b), 3.65 (dd, 1 H, J 3,2 = J 3,4
= 8.5 Hz, H-3), 3.56 (ddd, 1 H, J 5,4 = 8.5 Hz, J 5,6a
= 12.0 Hz, J 5,6b = 5.5 Hz, H-5), 3.88 (d, 1 H, J 4,3
= J 4,5 =8.5 Hz, H-4), 3.40-3.26 (m, 5 H, H-2, NHAc,
OCH2CH2CHHN3, OCH 2CH2CH2N3),
1.99 (s, 3 H, NHCOCH3 ), 1.83-1.79 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3);
13C NMR (125 MHz, MeOD): δ
(ppm) 173.7 (1 C, CH3 CO), 102.8 (1 C, C-1), 77.9 (1 C,
C-3), 75.9 (1 C, C-2), 72.1 (1 C, C-5), 67.1 (1 C, C-4), 62.8 (1 C, OCH2CH2 CH2Cl),
57.3 (1 C, C-6), 48.4 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
30.0 (1 C, OCH2 CH2CH2N3),
23.0 (1 C, NHCOCH3).
向25 mL单口烧瓶依次加入白色固体3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.0 g，3.29 mmol)、2,2-二甲氧基丙烷(15.0 mL)，磁力搅拌15 min后，缓慢滴加浓硫酸5滴，溶液变为澄清，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 4，体积比)监测反应至原料消失。反应混合液用无水K2CO3调节pH值至中性，过滤，浓缩。浆状物经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1)分离纯化，得到无色油状液体3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(550.0 mg，51.6%).
向100 mL单口烧瓶加入3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (3.9 g，11.6 mmol)和DMF
(50.0 mL)，分批加入氢化钠(930.0 mg)，待反应液不再冒气泡时，缓慢滴加溴化苄(2.1
mL)，常温下搅拌反应。TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料消失。无水二氯甲烷稀释反应液，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，加热浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1)分离纯化，得到白粉末状固体3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(3.1 g，63.4%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.35-7.28 (m, 5 H, Ph-H), 5.45 (d, 1 H, J H-2,N-H
= 9.5 Hz, NHAc), 4.83-4.79 (m, 2 H, H-1, OCHHPh), 4.60 (d,
1 H, J = 12.0 Hz, OCHHPh), 3.95-3.87 (m, 3 H, H-4, H-6a, OCH2CH2CHHN3),
3.77 (dd, 1 H, J 6b,5 = J 6b,6a =2.5
Hz,H-6b), 3.72 (dd, 1 H, J 4,3 = J 4,5 =10.5
Hz,H-3), 3.56-3.52 (m, 1 H, OCH2CH2CHHN3),
3.37-3.30 (m, 4 H, H-2, OCH 2CH2CHHN3,
H-5), 1.89 (s, 3 H, NHCOCH 3),1.83-1.64 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3);
1.49 (s, 3 H,C(CH 3)2); 1.43 (s, 3 H, C(CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.3 (1 C, CH3 CO), 138.6, 128.3, 128.1, 127.7 (6
C, Ph-C, some signals were overlapped), 100.8 (1 C, C-1), 99.2 (1 C, C(CH3)2),
76.7 (1 C, C-4), 75.2 (1 C, C-3), 73.8 (1 C, CH2Ph), 66.8 (1
C, C-2), 62.3 (1 C, OCH2CH2 CHHN3), 62.2
(1 C, C-6), 57.0 (1 C, C-5), 48.0 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
29.1 (1 C, C(CH3)2), 28.9 (1 C, OCH2 CH2CH2N3),
23.5 (1 C, NHCOCH3), 19.0 (1 C, C(CH3)2).
向25 mL单口烧瓶加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.0 g，2.37 mmol)，甲醇(15.0 mL)，缓慢滴加乙酰氯(1. 4 mL)，常温搅拌下反应。TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 9，体积比)监测反应至原料消失。加热浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇: 乙酸乙酯 = 1 : 15)分离纯化，得到无色透明浆状物3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(510.0 mg，55.0%).
向100 mL单口烧瓶中加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (3.7 g，9.4 mmol)和DMF(15.0 mL)，分批加入氢化钠(2.3 g)，待反应液不再冒气泡时，缓慢滴加月桂基溴(9.0
mL)，磁力搅拌下常温过夜反应。TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 4 : 1，体积比)监测反应至原料消失。无水二氯甲烷稀释反应液，水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1)分离纯化，得到白色粉末状固体3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(3.3 g，47.8%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.35-7.29
(m, 5 H, Ph-H), 5.41 (d, 1 H, J H-2,N-H = 8.0 Hz, NHAc),
4.81 (d, 1H, J=11.5 Hz, OCHHPh), 4.69-4.62 (m, 2 H, H-1, OCHHPh),
3.89-3.66 (m, 2 H, H-6a, H-6b), 3.62-3.61 (m, 2 H, OCHH(CH2)10CH3,H-4),
3.55-3.50 (m, 4 H, OCH2 (CH2)10CH3,
OCH 2 CH2CHHN3, H-5),
3.43-3.32 (m, 6 H, OCH2CH2CH2 N3,
OCH2 (CH2)10CH3, H-2, H-3),
1.84 (s, 3 H, NHCOCH 3),1.62-1.61 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.58-1.54 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)9CH3),
1.29 (m, 36 H, 2 OCH2CH2(CH2 )9CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)9CH3 );13C
NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.1 (1 C, CH3 CO), 138.4, 128.4, 127.9, 127.7 (6 C,
Ph-C, some signals were overlapped), 100.1 (1 C, C-1), 80.2 (1 C,
C-6),76.7(1 C, C-3), 74.9 (1 C, OCH2(CH2)10CH3),
74.3 (1 C, OCH2(CH2)10CH3),
72.7 (1 C, CH2Ph), 71.7 (1 C, C-2), 69.5 (1 C,C-4), 65.8 (1
C, OCH2CH2 CH2N3), 56.2
(1 C, C-5), 48.1 (2 C, OCH2CH2CH2N3),
31.8, 30.3, 29.6, 29.6, 29.3, 28.9, 26.1, 23.4, 22.6 (21 C, some signals were
overlapped, 2 OCH2 (CH2)10CH3,
OCH2 CH2CH2N3),
14.0(2C, 2 OCH2CH2(CH2)9 CH3).
向25 mL茄形瓶依次加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (77.0 mg，100.0 mmol)、甲醇(5.0
mL)、36%甲醛水溶液(2.0
mL)和5%Pd/C (100.0 mg)。磁力搅拌下通入氢气，常温过夜反应。TLC(甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。静置溶液，过滤，加热浓缩得黄色浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇: 乙酸乙酯 = 1 : 10)分离纯化，得到无色浆状物3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(30.0 mg，38.8%).
向10 mL单口烧瓶中依次加入3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (150.0 mg，200.0 mmol)、四氢呋喃(3.0
mL)和碘甲烷(38.3μL)。氮气保护下常温搅拌反应，TLC(甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。浓缩后得黄色液体，乙酸乙酯-甲醇混合液重结晶，过滤后得到白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(42.0 mg，23.4%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.32-7.31
(m, 5 H, Ph-H), 7.09 (d, 1 H, J H-2,N-H = 9.0 Hz, NHAc),
4.78 (d, 1H, J=11.5 Hz, OCHHPh), 4.72-4.69 (m, 2 H, H-1, OCHHPh),
4.00-3.90 (m, 2 H, H-6a, H-6b), 3.83-3.73 (m, 3 H, OCH2CH2CHHN3,
H-4), 3.72-3.56 (m, 4 H, OCH2 (CH2)10CH3,
H-2, H-5), 3.52-3.32 (m, 5 H, OCH2CH2CH 2N3,
OCH2 (CH2)10CH3, H-3), 3.29
(s, 9 H, OCH 2 CH2CH2N(CH3 )3),
2.15-2.02 (m, 2 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
1.96 (s, 3 H, NHCOCH 3), 1.56-1.53 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)9CH3),
1.27-1.24 (m, 36 H, 2 OCH2CH2(CH 2)9CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)9CH 3);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.8 (1 C, CH3 CO), 138.5, 128.3, 128.0, 127.6 (6 C,
Ph-C, some signals overlapped), 100.4 (1 C, C-1), 81.2, 78.4, 75.1, 74.7,
72.9, 71.6, 69.4, 65.1, 55.4, 53.8 (13 C, C-2, C-3, C-4, C-5, C-6, CH2Ph,
2 OCH2(CH2)10CH3, OCH2CH2CH2N(CH3)3,
OCH2CH2 CH2 CH2N(CH3)3,OCH2CH2CH2N(CH3)3,
some signals overlapped), 31.8, 30.4, 29.6, 29.5, 29.3, 26.1, 23.8, 23.4, 22.6,
22.1 (21 C, 2OCH2(CH2)10CH3,
OCH2 CH2CH2 N(CH3)3,
some signals were overlapped, 14.0, 14.0 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)9 CH3).
取3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(8.7 mg, 0.01
mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体di-C12-GluNAc-TMA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径87.34
nm，PDI分布0.29，表面电势+48.5 mv，pH = 6.3。
实施例2. 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体di-C14-GluNAc-TMA纳米颗粒的制备：
向25 mL单口烧瓶加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.1 g，2.60 mmol)，甲醇(15.0 mL)，缓慢滴加乙酰氯(1. 5 mL)，常温搅拌下反应。TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 9，体积比)监测反应至原料消失。加热浓缩得到无色透明浆状物3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.0 g).
向25 mL单口烧瓶中加入无色透明浆状物3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.0 g，2.5 mmol)和DMF(15.0 mL)，分批加入氢化钠(0.6 g, 15.0 mmol)，待反应液不再冒气泡时，缓慢滴加肉豆蔻基溴(3.1
mL, 10.1 mmol)，磁力搅拌下常温过夜反应。TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 4 : 1，体积比)监测反应至原料消失。无水二氯甲烷稀释反应液，水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1)分离纯化，得到白色粉末状固体3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (0.9 g，43.4%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.33-7.29
(m, 5 H, Ph-H), 5.44 (d, 1 H, J H-2,N-H = 8.0 Hz, NHAc),
4.81 (d, 1H, J=11.5 Hz, OCHHPh), 4.68-4.61 (m, 2 H, H-1, OCHHPh),
3.93-3.85 (m, 2 H, H-6a, H-6b), 3.77-3.66 (m, 2 H, OCHH(CH2)12CH3,
H-4), 3.62-3.51 (m, 4 H, OCH2 (CH2)12CH3,
OCH 2 CH2CHHN3,H-5), 3.47-3.32 (m,
6 H, OCH2CH2CH2 N3, OCH2 (CH2)12CH3,
H-2, H-3), 1.84 (s, 3 H, NHCOCH 3),1.83-1.79 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.56-1.54 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)11CH3),
1.24 (m, 44 H, 2 OCH2CH2(CH2 )11CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)11CH3 );13C
NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 169.9 (1 C, CH3 CO), 138.7, 128.9, 128.4, 127.7, 127.2
(6 C, Ph-C, some signals were overlapped), 100.8 (1 C, C-1), 80.2
(1 C, C-6), 78.9(1 C, C-3), 74.9 (1 C, OCH2(CH2)12CH3),
74.5 (1 C, OCH2(CH2)12CH3),
72.8 (1 C, CH2Ph), 71.7 (1 C, C-2), 69.6 (1
C,C-4), 65.8 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
55.7 (1 C, C-5), 48.3,47.1 (2 C, OCH2CH2CH2N3),
31.8, 30.6, 29.6, 29.6, 29.2, 29.1, 28.6, 28.3, 27.1, 26.1, 23.6, 22.9,
22.6 (25 C, some signals were overlapped, 2OCH2(CH2)12
CH3, OCH2 CH2CH2N3),
14.4, 13.4 (2C, 2 OCH2CH2(CH2)12 CH3).
向25 mL茄形瓶依次加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (0.3 g，0.38 mol)、甲醇(10.0 mL)、36%甲醛水溶液(1.7 mL)和5%Pd/C (130.0 mg)。磁力搅拌下通入氢气，常温过夜反应。TLC(甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。静置溶液，过滤，加热浓缩得黄色浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇: 乙酸乙酯 = 1 : 10)分离纯化，得到无色浆状物3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(120.0 mg，40.1%).
向10 mL单口烧瓶中依次加入3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (120.0 mg，150.0 mmol)、四氢呋喃(5.0
mL)和碘甲烷(14.2 µL)。氮气保护下常温搅拌反应，TLC(甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。浓缩后得黄色液体，乙酸乙酯-甲醇混合液重结晶，过滤后得到白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(52.0 mg，35.7%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.29-7.24 (m, 5 H, Ph-H), 7.09 (d, 1 H, J H-2,N-H
= 9.0 Hz, NHAc), 4.77 (d, 1H, J=11.0 Hz, OCHHPh),
4.71-4.68 (m, 2 H, H-1, OCHHPh), 3.98-3.81 (m, 2 H, H-6a, H-6b),
3.79-3.65 (m, 3 H, OCH2CH2CHHN3, H-4),
3.63-3.55 (m, 4 H, OCH2 (CH2)12CH3,
H-2, H-5), 3.51-3.31 (m, 5 H, OCH2CH2CH 2N3,
OCH2 (CH2)12CH3, H-3), 3.27
(s, 9 H, OCH 2 CH2CH2N(CH3 )3),
2.09-1.95 (m, 2 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
1.94 (s, 3 H, NHCOCH 3), 1.54-1.52 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)11CH3),
1.24 (m, 44 H, 2 OCH2CH2(CH 2)11CH3),
0.86 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)11CH 3));
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.8 (1 C, CH3 CO), 138.5, 128.3, 128.0, 127.5 (6
C, Ph-C, some signals overlapped), 100.4 (1 C, C-1), 82.0, 78.4, 75.0,
74.7, 72.9, 71.6, 69.4, 65.0, 64.4, 55.4, 53.8 (13 C, C-2, C-3, C-4, C-5, C-6, CH2Ph,
2 OCH2(CH2)12CH3, OCH2CH2CH2N(CH3)3,
OCH2CH2 CH2N(CH3)3,
OCH2CH2CH2N(CH3)3,
some signals were overlapped), 31.8, 30.4, 29.6, 29.5, 29.3, 26.2, 26.1,
23.8, 23.4, 22.6 (25C, 2 OCH2(CH2)12CH3,
OCH2 CH2CH2N(CH3)3,
some signals were overlapped, 14.0, 14.0 (2 C, 2OCH2CH2 (CH2)9 CH3).
取3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷(9.3 mg, 0.01 mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体di-C14-GluNAc-TMA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径149.9
nm，PDI分布0.241，表面电势+46.2 mv，pH = 6.7。
实施例3. 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体di-C16-GluNAc-TMA纳米颗粒的制备：
向25 mL单口烧瓶加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.2 g，2.70 mmol)，甲醇(15.0 mL)，缓慢滴加乙酰氯(1. 6 mL)，常温搅拌下反应。TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 9，体积比)监测反应至原料消失。加热浓缩得无色透明浆状物3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.0 g).
向25 mL单口烧瓶中加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.0 g，2.5 mmol)和DMF(15.0 mL)，分批加入氢化钠(0.6 g, 15.0 mmol)，待反应液不再冒气泡时，缓慢滴加鲸蜡基溴(3.2
mL, 10.8 mmol)，磁力搅拌下常温过夜反应。TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 4 : 1，体积比)监测反应至原料消失。无水二氯甲烷稀释反应液，水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1)分离纯化，得到白色粉末状固体3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.1 g，52.2%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.33-7.28
(m, 5 H, Ph-H), 5.46 (d, 1 H, J H-2,N-H = 8.0 Hz, NHAc),
4.81 (d, 1H, J=11.5 Hz, OCHHPh), 4.68-4.62 (m, 2 H, H-1, OCHHPh),
3.93-3.87 (m, 2 H, H-6a, H-6b), 3.77-3.66 (m, 2 H, OCHH(CH2)14CH3,
H-4), 3.62-3.48 (m, 4 H, OCH2 (CH2)14CH3,
OCH 2 CH2CHHN3,H-5), 3.45-3.30 (m,
6 H, OCH2CH2CH2 N3, OCH2 (CH2)14CH3,
H-2, H-3), 1.84 (s, 3 H, NHCOCH 3),1.84-1.83 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.56-1.54 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)13CH3),
1.24 (m, 52 H, 2 OCH2CH2(CH2 )13CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)13CH3 );13C
NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.1 ( 1 C, CH3 CO), 138.9, 129.0,128.5, 127.7,
127.3 (6 C, Ph-C, some signals were overlapped), 100.8 (1 C, C-1), 80.1
(1 C, C-6),79.4(1 C, C-3), 75.7 (1 C, OCH2(CH2)14CH3),
74.4 (1 C, OCH2(CH2)14CH3),
72.8 (1 C, CH2Ph), 71.8 (1 C, C-2), 69.8 (1 C, C-4), 65.9 (1
C, OCH2CH2 CH2N3), 55.9 (1 C,
C-5), 48.4 (2 C, OCH2CH2CH2N3),
32.9, 31.9, 30.6, 29.6, 29.6, 29.3, 29.1, 28.6, 27.2, 26.2, 23.6, 21.6 (29 C,
some signals were overlapped, 2OCH2(CH2)14CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 14.4
(2C, 2 OCH2(CH2)14 CH3).
向25 mL茄形瓶依次加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (280 mg，0.33 mol)、甲醇(10.0 mL)、36%甲醛水溶液(1.8 mL)和5%Pd/C (120.0 mg)。磁力搅拌下通入氢气，常温过夜反应。TLC(甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。静置溶液，过滤，加热浓缩得黄色浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇: 乙酸乙酯 = 1 : 10)分离纯化，得到无色浆状物3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(60.0 mg，21.4%).
向10 mL单口烧瓶中依次加入3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 (60.0 mg，70.1 mmol)、四氢呋喃(5.0
mL)和碘甲烷(10.0 µL)。氮气保护下常温搅拌反应，TLC(甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。浓缩后得黄色液体，乙酸乙酯-甲醇混合液重结晶，过滤后得到白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(28.0 mg，40.1%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.30-7.26 (m, 5 H, Ph-H), 7.09 (d, 1 H, J H-2,N-H
= 9.0 Hz, NHAc), 4.80-4.68 (m, 4 H, H-1, OCHHPh, OCHHPh),
4.00-3.87 (m, 2 H, H-6a, H-6b), 3.83-3.70 (m, 3 H, OCH2CH2CHHN3,
H-4), 3.68-3.62 (m, 4 H, OCH2 (CH2)14CH3,
H-2, H-5), 3.59-3.31 (m, 5 H, OCH2CH2CH 2N3,
OCH2 (CH2)14CH3, H-3), 3.28
(s, 9 H, OCH 2 CH2CH2N(CH3 )3),
2.07-2.01 (m, 2 H, OCH2CHHCH2 N(CH3)3),
1.96 (s, 3 H, NHCOCH 3), 1.55-1.52 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)13CH3),
1.24 (m, 52 H, 2 OCH2CH2(CH 2)13CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, 2 OCH2CH2 (CH2)13CH 3);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.8 (1 C, CH3 CO), 138.5, 128.3, 128.0, 127.6 (6 C,
Ph-C, some signals overlapped), 100.4 (1 C, C-1), 82.0, 78.4, 75.0,
75.0, 74.8, 71.6, 69.4, 65.0, 64.4, 55.4, 53.8 (13 C, C-2, C-3, C-4, C-5, C-6, CH2Ph,
2 OCH2(CH2)14CH3, OCH2CH2CH2N(CH3)3,
OCH2CH2 CH2N(CH3)3,
OCH2 CH2CH2N(CH3)3,
some signals were overlapped), 31.9, 30.4, 29.6, 29.5, 29.3, 26.2, 26.1, 24.1,
23.8, 22.6 (29 C, 2 OCH2(CH2)14CH3,
OCH2 CH2CH2N(CH3)3,
some signals were overlapped, 14.0, 14.0 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)13 CH3).
取3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷(9.8 mg, 0.01 mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体di-C16-GluNAc-TMA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径97.82
nm，PDI分布0.323，表面电势+47.5 mv，pH = 6.8。
实施例3. 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体di-C18-GluNAc-TMA纳米颗粒的制备：
向25 mL单口烧瓶加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.5 g，3.55 mmol)，甲醇(20.0 mL)，缓慢滴加乙酰氯(2.0 mL)，常温搅拌下反应。TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 9，体积比)监测反应至原料消失。加热浓缩得浆状物3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.4 g).
向25 mL单口烧瓶中加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.4 g，3.5 mmol)和DMF(20.0 mL)，分批加入氢化钠(0.9 g, 21.0 mmol)，待反应液不再冒气泡时，缓慢滴加硬脂基溴(4.8
mL, 14.0 mmol)，磁力搅拌下常温过夜反应。TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 4 : 1，体积比)监测反应至原料消失。无水二氯甲烷稀释反应液，水洗，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1)分离纯化，得到白色粉末状固体3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(1.3 g，40.6%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.34-7.29
(m, 5 H, Ph-H), 5.41 (d, 1 H, J H-2,N-H = 8.0 Hz, NHAc),
4.81 (d, 1H, J=11.5 Hz, OCHHPh), 4.69-4.62 (m, 2 H, H-1, OCHHPh),
3.93-3.85 (m, 2 H, H-6a, H-6b), 3.77-3.66 (m, 2 H, OCHH(CH2)16CH3,
H-4), 3.62-3.48 (m, 4 H, OCH2 (CH2)16CH3,
OCH 2 CH2CHHN3,H-5), 3.45-3.32 (m,
6 H, OCH2CH2CH2 N3, OCH2 (CH2)16CH3,
H-2, H-3), 1.84 (s, 3 H, NHCOCH 3),1.84-1.63 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.57-1.54 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)15CH3),
1.28 (m, 60 H, 2 OCH2CH2(CH2 )15CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)15CH3 );13C
NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.1 (1 C, CH3 CO), 138.8, 129.0, 128.4, 127.9, 127.7 (
6 C, Ph-C, some signals were overlapped), 100.1 (1 C, C-1), 80.2 (1 C,
C-6), 78.7 (1 C, C-3), 75.0 (1 C, OCH2(CH2)16CH3),
74.3 (1 C, OCH2(CH2)16CH3),
72.7 (1 C, CH2Ph), 71.7 (1 C, C-2), 69.6 (1 C,C-4),
65.8 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
56.3 (1 C, C-5), 48.2 (2 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.4, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 29.0, 26.2, 23.5, 22.6 (33 C, some signals
were overlapped, 2OCH2(CH2)16CH3,
OCH2 CH2CH2N3),
14.0(2C, 2 OCH2(CH2)16 CH3).
向25 mL茄形瓶依次加入3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(300 mg，0.33 mol)、甲醇(10.0 mL)、36%甲醛水溶液(2.0 mL)和5%Pd/C (120.0 mg)。磁力搅拌下通入氢气，常温过夜反应。TLC(甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。静置溶液，过滤，加热浓缩得黄色浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇: 乙酸乙酯 = 1 : 10)分离纯化，得到无色浆状物3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(66.0 mg，22.0%).
向10 mL单口烧瓶中依次加入3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(66.0 mg，73.2 mmol)、四氢呋喃(5.0
mL)和碘甲烷(10.0 µL)。氮气保护下常温搅拌反应，TLC(甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应至原料消失。浓缩后得黄色液体，乙酸乙酯-甲醇混合液重结晶，过滤后得到白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(30.0 mg，39.2%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.29-7.23(m, 5 H, Ph-H), 7.09 (d, 1 H, J H-2,N-H
= 9.0 Hz, NHAc), 4.77 (d, 1H, J=11.0 Hz, OCHHPh), 4.70-4.68
(m, 2 H, H-1, OCHHPh), 3.97-3.95 (m, 2 H, H-6a, H-6b), 3.82-3.70 (m, 3
H, OCH2CH2CHHN3, H-4), 3.67-3.56 (m, 4
H, OCH2 (CH2)16CH3, H-2,
H-5), 3.49-3.30 (m, 5 H, OCH2CH2CH 2N3,
OCH2 (CH2)16CH3, H-3), 3.26
(s, 9 H, OCH 2 CH2CH2N(CH3 )3),
2.07-2.02 (m, 2 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
1.96 (s, 3 H, NHCOCH 3), 1.53-1.51 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)15CH3),
1.23 (m, 60 H, 2 OCH2CH2(CH 2)15CH3),
0.86 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)15CH 3));
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.8 (1 C, CH3 CO), 138.5, 128.3, 127.9, 127.5 (6
C, Ph-C, some signals overlapped), 100.4 (1 C, C-1), 82.0, 78.4, 75.0,
74.7, 72.9, 71.6, 69.4, 65.1, 64.3, 55.4, 53.7 (13 C, C-2, C-3, C-4, C-5, C-6, CH2Ph,
2 OCH2(CH2)16CH3, OCH2CH2CH2N(CH3)3,
OCH2CH2 CH2N(CH3)3,
OCH2CH2CH2N(CH3)3,
some signals overlapped), 31.8, 30.4, 29.6, 29.5, 29.5, 29.3, 26.2, 26.1, 23.7,
23.4, 22.6(33 C, 2 OCH2(CH2)16CH3,
OCH2 CH2CH2N(CH3)3,
some signals were overlapped, 14.0, 14.0 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)15 CH3).
取3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(10.4 mg, 0.01
mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体di-C18-GluNAc-TMA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径182.4
nm，PDI分布0.43，表面电势+53.3 mv，pH = 6.9。
实施例5. 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体GluNAc-DiC12MA纳米颗粒的制备：
在50.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 1.0 g , 3.3 mmol)、PPh3
( 1.1 g , 3.9 mmol)、THF (15.0 mL)、H2O (3.0 mL)。混合物在油浴锅内70oC回流反应4 h，TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 5，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入水20.0
mL，烧瓶内有白色固体析出。过滤，浓缩，抽真空干燥得黄色浆状化合物3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.79 g ,
86.8%).
向50.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 0.65 g , 2.3 mmol)、月桂基溴（2.2
ml, 9.3 mmol）、碳酸钾（1.5 g）、CH3CH2OH
(10.0 mL)、CH3OH (6.0 mL)。反应混合物在75oC条件下回流反应48 h，TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应情况。用干燥二氯甲烷(20.0 mL)稀释，水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，加热浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3)分离纯化，得到白色粉末状固体3’-(N, N-二-正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.35 g, 24.5%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 8.49 (s,
1 H, NHAc),4.45(d, 1 H, J 1,2 = 6.5 Hz,
H-1), 3.82-3.80 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
3.80-3.75 (m, 2 H, H-6), 3.68-3.62 (m, 2 H, H-3, H-4), 3.53-3.51 (m, 2 H, OCHHCH2
CH2N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
H-2), 3.33-3.32 (m, 1 H, H-5), 2.62-2.59 (m, 2 H, OCH2CH2CH 2N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
2.57-2.52 (m,4 H, N(CH 2CH2(C9H18)
CH3)2), 2.00 (s, 3 H, CH 3CO),1.79- 1.75
(m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH2CH2
(C9H18)CH3)2), 1.49-1.45 (m,
4 H, N(CH2CH 2(C9H18)CH3)2),
1.28-1.24 (m, 36 H, N(CH2CH2 (C9 H 18)CH3)2),
0.86 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, N(CH2CH2(C9H18)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ (ppm) 172.4 (1 C, CH3 CO),101.1 (1 C,
C-1), 76.7 (1 C, C-3), 75.9 (1 C, C-5), 74.3 (1 C, C-2), 70.4 (1 C, C-4),
67.6 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
61.4 (1 C, C-6), 53.3, 53.3 (2 C, N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
50.8 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
31.8, 30.8, 29.7, 29.6, 29.3, 27.4, 26.5, 25.5, 23.3, 22.6 (21 C, some signals
were overlapped, N(CH2(C 10H20)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
14.0, 14.0 (2 C, N(CH2(C10H20)CH3)2).
向10.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 0.2 g , 0.32 mmol)、碘甲烷( 0.1 g , 0.64 mmol) 40.0 µL)，THF (5.0 mL)，常温下过夜反应，TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 3 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入(CH3)2CO
(5.0 mL)，有白色固体析出，过滤，真空干燥后得到白色固体3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.18 g , 73.2%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.87 (d, 1 H, J H-2,N-H = 7.0
Hz, NHAc), 5.17 (s, 1 H, OH), 5.13 (s, 1 H, OH),
4.46 (d, 1 H, J 1,2 = 7.0 Hz, H-1), 4.45 (s, 1 H, OH),
4.00-3.99 (m, 2 H, OH, OCHHCH2CH2N(CH3)(C12H25)2),
3.81-3.72 (m, 3 H, H-6, OCHHCH2CH2N(CH3)
(C12H25)2), 3.66-3.49 (m, 4 H, H-3, H-4, OCH2CH2CH 2N(CH3)
(C12H25)2), 3.41-3.28 (m, 6 H, H-2, H-5, (CH3)N(CH 2CH2(C9H18)CH3)2),
3.15 (s, 3 H, (CH 3)N(CH2CH2 (C9H18)CH3)2),2.14-2.07
(m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH3)(C12H25)2),
2.05 (s, 3 H, CH 3CO), 1.67-1.66 (m, 2 H, (CH3)N(CH2CH 2(C9H18)CH3)2),
1.33-1.23 (m, 36 H, (CH3)N(CH2CH2(C9 H 18)CH3)2),
0.85 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, (CH3)N(CH2CH2(C9H18)
CH 3)2); 13C NMR (125 MHz, CDCl3):
δ (ppm) 172.3 (1 C, CH3 CO),
100.8 (1 C, C-1), 76.9 (1 C, C-3), 76.7 (1 C, C-5), 75.9 (1 C, C-2), 70.3 (1 C,
C-4), 65.7 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH3)(C12H25)2),
61.6, 61.2, 61.2 (3 C, OCH2CH2 CH2N(CH3)
(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
60.6 (1 C, C-6), 49.2 (1 C, (CH3)N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
31.8, 29.6, 29.5, 29.4, 29.2, 29.1, 26.2, 23.6, 23.2, 22.6, 22.4 (21 C, some
signals were overlapped, (CH3)N(CH2(C 10H20)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH3)(C12H25)2),
14.0, 14.0 (2 C, (CH3)N(CH2(C10H20)CH3)2).
取3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(7.5 mg, 0.01
mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体GluNAc-DiC12MA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径93.7 nm，PDI分布0.38，表面电势+38.4 mv，pH = 6.6。
实施例6. 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体GluNAc-DiC14MA纳米颗粒的制备：
向50.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 0.9 g , 3.2 mmol)、豆蔻基溴（3.8
ml, 12.9 mmol）、碳酸钾（2.0 g）、CH3CH2OH
(10.0 mL)、CH3OH (6.0 mL)。反应混合物在75oC条件下回流反应48 h，TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应情况。用干燥二氯甲烷(25.0 mL)稀释，水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，加热浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3)分离纯化，得到白色粉末状固体3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.41 g, 18.9%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.56 (s, 1 H, NHAc),4.45(d, 1 H, J 1,2
= 5 Hz, H-1), 3.80-3.70 (m, 3 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2(C11H22)CH3)2,
H-6), 3.66-3.65 (m, 2 H, H-3, H-4), 3.52-3.51 (m, 2 H, OCHHCH2 CH2N(CH2CH2(C11H22)
CH3)2), H-2), 3.33-3.32 (m, 1 H, H-5), 2.53-2.52 (m,
2 H, OCH2CH2CH 2N(CH2CH2
(C11H22)CH3)2), 2.43-2.42 (m,4
H, N(CH 2CH2(C11H22)CH3)2),
2.00 (s, 3 H, CH 3CO), 1.72-1.71 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH2CH2
(C11H22)CH3)2), 1.41-1.39 (m,
4 H, N(CH2CH 2(C11H22)CH3)2),
1.25-1.23 (m, 44 H, N(CH2CH2 (C11 H 22)CH3)2),
0.87 (t, 6 H, J = 6.75 Hz, N(CH2CH2(C11H22)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 172.3 (1 C, CH3 CO), 101.0 (1 C, C-1), 76.7 (1 C, C-3),
75.8 (1 C, C-5), 74.5 (1 C, C-2), 70.5 (1 C, C-4), 68.0 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
61.4 (1 C, C-6), 56.1, 53.3 (2 C, N(CH2CH2(C11H22)
CH3)2), 50.6 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH2
CH2(C11H22)CH3)2),
31.9, 30.8, 29.7, 29.6, 29.3, 27.6, 27.0, 25.9, 23.3,22.6 (25 C, some signals
were overlapped, N(CH2(C 12H24)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH2CH2 (C11H22)CH3)2),
14.0, 14.0 (2 C, N(CH2(C12H24)CH3)2).
向10.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-(N, N-二正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 0.2 g , 0.29
mmol)、碘甲烷( 0.08 g , 0.60 mmol , 37.1 µL)，THF (5.0 mL)，常温下过夜反应，TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 3 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入(CH3)2CO
(5.0 mL)，有白色固体析出，过滤，真空干燥后得到无定形白色固体3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.16 g , 66.1%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.87 (d, 1 H, J H-2,N-H = 7.0 Hz,
NHAc),5.13 (s, 2 H, OH), 4.68 (d, 1 H, J 1,2 =
7.0 Hz, H-1), 4.43 (s, 1 H, OH), 4.01-4.00 (m, 2 H, OH, OCHHCH2CH2N(CH3)(C14H29)2),
3.82-3.76 (m, 3 H, H-6, OCHHCH2CH2N(CH3)
(C14H29)2), 3.75-3.50 (m, 4 H, H-3, H-4, OCH2CH2CH 2N(CH3)(C14H29)2),
3.40-3.16 (m, 6 H, H-2, H-5, (CH3)N(CH 2CH2(C11H22)CH3)2),
3.09 (s, 3 H, (CH 3)N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
2.15-2.08 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH3)(C14H29)2),
2.02 (s, 3 H, CH 3CO), 1.68-1.67 (m, 4 H, (CH3)N(CH2CH 2(C11H22)CH3)2,)
1.34-1.23 (m, 44 H, (CH3)N(CH2CH2(C11 H 22)CH3)2),
0.86 (t, 6 H, J = 6.75 Hz, (CH3)N(CH2CH2(C11H22)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 172.4 (1 C, CH3 CO), 100.8 (1 C, C-1), 76.9 (1 C,
C-3), 76.7 (1 C, C-5), 75.9 (1 C, C-2), 74.3 (1 C, C-4), 65.8 (1 C,
OCH2CH2CH2N(CH3)(C14H29)2),
61.7, 61.3, 61.2 (3 C, OCH2CH2 CH2N(CH3)(CH2
CH2(C11H22)CH3)2),
60.6 (1 C, C-6), 49.2 (1 C, (CH3)N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
31.8, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 29.1, 26.3, 23.7, 23.2, 22.6, 22.4 (25 C, some
signals were overlapped, (CH3)N(CH2(C 12H24)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH3)(C14H29)2),
14.0, 14.0 (2 C, (CH3)N(CH2(C12H24)CH3)2).
取3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(8.1 mg, 0.01 mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体GluNAc-DiC14MA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径115.2
nm，PDI分布0.271，表面电势+52.3 mv，pH = 6.0。
实施例7. 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体GluNAc-DiC16MA纳米颗粒的制备：
向50.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 0.9 g , 3.2 mmol)、鲸蜡基溴（4.0
ml, 12.9 mmol）、碳酸钾（2.1 g）、CH3CH2OH
(10.0 mL)、CH3OH (6.0 mL)。反应混合物在75oC条件下回流反应48 h，TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应情况。用干燥二氯甲烷(20.0 mL)稀释，水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，加热浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3)分离纯化，得到白色粉末状固体3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.75 g, 31.9%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 7.41 (s, 1 H, NHAc),4.45(d, 1 H, J 1,2
= 6 Hz, H-1), 3.81-3.80 (m, 3 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2,
H-6), 3.66-3.64 (m, 2 H, H-3, H-4), 3.53-3.51 (m, 2 H, OCHHCH2 CH2N(CH2CH2(C13H26)
CH3)2), H-2), 3.32-3.31 (m, 1 H, H-5), 2.50-2.49 (m, 2 H,
OCH2CH2CH 2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
2.43-2.37 (m,4 H, N(CH 2CH2(C13H26)CH3)2),
2.00 (s, 3 H, CH 3CO), 1.72-1.70 (m, 4 H, OCH2CH 2CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
1.41-1.39 (m, 4 H, N(CH2CH 2(C13H26)CH3)2),
1.39-1.25 (m, 52 H, N(CH2CH2 (C13 H 26)CH3)2),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, N(CH2CH2(C13H26)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 172.3 (1 C, CH3 CO),100.9 (1 C, C-1), 76.7 (1 C, C-3),
75.8 (1 C, C-5), 74.6 (1 C, C-2), 70.5 (1 C, C-4), 68.1 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
61.5 (1 C, C-6), 56.3, 53.6 (2 C, N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
50.6 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH2CH2
(C13H26)CH3)2), 31.9, 29.7,
29.6, 29.3, 27.7, 27.2, 26.0, 23.3, 22.7 (29 C, some signals were overlapped,
N(CH2(C 14H28)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
O CH2 CH2CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
14.0, 14.0 (2 C, N(CH2(C14H28)CH3)2).
向10.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-(N, N-二正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 0.3 g , 0.41
mmol)、碘甲烷( 0.11 g , 0.82 mmol , 51.4 µL)，THF (5.0 mL)，常温下过夜反应，TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 3 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入(CH3)2CO
(5.0 mL)，有白色固体析出，过滤，真空干燥后得到无定形白色固体3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.21 g , 58.5%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 7.87 (d, 1 H, J H-2,N-H = 7.0
Hz, NHAc),5.12 (s, 2 H, OH), 4.69 (d, 1 H, J 1,2 =
7.0 Hz, H-1), 4.42 (s, 1 H, OH), 4.01-4.00 (m, 2 H, OH, OCHHCH2N(CH3)(C16H33)2),3.84-3.80
(m, 3 H, H-6, OCHHCH2CH2N(CH3)(C16H33)2),
3.76-3.60 (m, 4 H, H-3, H-4, OCH2CH2CH 2N(CH3)(C16H33)2),
3.41-3.30 (m, 6 H, H-2, H-5, (CH3)N(CH 2CH2(C13H26)CH3)2),
3.17 (s, 3 H, (CH 3)N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
2.19-2 .16 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH3)(C16H33)2),
2.09 (s, 3 H, CH 3CO), 1.69-1.67 (m, 4 H, (CH3)N(CH2CH 2(C13H26)CH3)2),
1.35-1.25 (m, 52 H, (CH3)N(CH2CH2 (C13 H 26)CH3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 172.5 (1 C, CH3 CO), 100.8 (1 C, C-1), 76.9 (1 C,
C-3), 76.7 (1 C, C-5), 76.0 (1 C, C-2), 74.3 (1 C, C-4), 65.8 (1 C, OCH2CH2N(CH3)(C16H33)2),
61.7, 61.3, 61.2 (3 C, OCH2CH2 CH2N(CH3)
(CH2CH2(C13H26) CH3)2),
60.7 (1 C, C-6), 49.3 (1 C, (CH3)N(CH2CH2 (C13H26)CH3)2),
31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 29.1, 26.3, 23.7, 23.3, 22.6, 22.6 (29 C, some
signals were overlapped, (CH3)N(CH2(C 13H26)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH3)(C16H33)2),
14.0, 14.0 (2 C, (CH3)N(CH2(C14H28)CH3)2).
取3’-(N, N-二-正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(8.7 mg, 0.01
mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体GluNAc-DiC16MA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径84.21
nm，PDI分布0.301，表面电势+57.0 mv，pH = 6.9。
实施例8. 氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体GluNAc-DiC18MA纳米颗粒的制备：
向50.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 1.1 g , 3.9 mmol)、硬脂基溴（5.2
ml, 15.8 mmol）、碳酸钾（1.9 g）、CH3CH2OH
(10.0 mL)、CH3OH (6.0 mL)。反应混合物在75oC条件下回流反应48 h，TLC (甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3，体积比)监测反应情况。用干燥二氯甲烷(15.0 mL)稀释，水洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，加热浓缩得浆状物。浆状物经柱层析(洗脱剂：甲醇 : 乙酸乙酯 = 1 : 3)分离纯化，得到白色粉末状固体3’-(N, N-二正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.42 g , 13.6%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 8.13 (s, 1 H, NHAc),4.57(d, 1 H,
J 1,2 = 5 Hz, H-1), 3.95-3.81 (m, 3 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2,
H-6), 3.71-3.65 (m, 2H, H-3, H-4), 3.18-3.10 (m, 2 H, OCHHCH2 CH2N(CH2CH2
(C15H30)CH3)2), H-2),
3.39-3.30 (m, 1 H, H-5), 2.53-2.52 (m, 2 H, OCH2CH2 CH 2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),3.30-2.85
(m,4 H, N(CH 2CH2(C15H30)CH3)2),
2.00 (s, 3 H, CH 3CO),1.72- 1.71 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
1.31-1.30 (m, 4 H, N(CH2CH 2(C15H30)CH3)2),
1.25-1.23 (m, 60 H, N(CH2CH2 (C15 H 30)CH3)2),
0.85 (t, 6 H, J = 6.75 Hz, N(CH2CH2(C15H30)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 172.5 (1 C, CH3 CO),100.8 (1 C, C-1), 77.2 (1 C, C-3),
75.8 (1 C, C-5), 74.8 (1 C, C-2), 70.6 (1 C, C-4), 65.8 (1 C, OCH2CH2
CH2 N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
61.5 (1 C, C-6), 52.4 (2 C, N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
51.1 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH2CH2
(C15H30)CH3)2), 31.8, 29.6, 29.6,
29.5, 29.4, 29.3, 26.7, 24.2, 23.3, 23.0, 22.6 (29 C, some signals were
overlapped, N(CH2(C 16H32)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH2CH2 (C15H30)CH3)2),
14.0, 14.0 (2 C, N(CH2(C16H32)CH3)2).
向10.0 mL圆底烧瓶中，依次加入化合物3’-(N, N-二正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷( 0.17 g , 0.21
mmol)、碘甲烷( 0.03 g , 0.42 mmol) 27.0 µL)，THF (5.0 mL)，常温下过夜反应，TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 3 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入(CH3)2CO
(5.0 mL)，有白色固体析出，过滤，真空干燥后得到无定形白色固体3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(0.12 g , 60.1%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ (ppm): 8.08 (d, 1 H, J H-2,N-H = 7.0
Hz, NHAc),5.29 (s, 2 H, OH), 4.59 (m, 2 H, OH, H-1), 3.96
(m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH3) (C18H37)2),3.84-3.79
(m, 3 H, H-6, OCHHCH2CH2N(CH3)(C18H37)2),
3.78-3.71 (m, 4 H, H-3, H-4, OCH2CH2 CH 2N(CH3)(C18H37)2),
3.49-3.20 (m, 6 H, H-2, H-5, (CH3)N(CH 2CH2(C15H30)CH3)2),
3.03 (s, 3 H, (CH 3)N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
2.14 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH3)(C18H37)2),
2.05 (s, 3 H, CH 3CO), 1.70 (m, 4 H, (CH3)N(CH2CH 2(C15H30)CH3)2),
1.30-1.23 (m, 60 H, (CH3)N(CH2 CH2(C15 H 30)CH3)2),
0.85 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, (CH3)N(CH2CH2(C15H30)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 172.6 (1 C, CH3 CO), 100.8 (1 C, C-1), 77.0 (1 C, C-3),
76.7 (1 C, C-5), 76.0 (1 C, C-2), 74.3 (1 C, C-4), 66.0 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH3)(C18H37)2),
61.3, 61.3, 61.2 (3 C, OCH2CH2 CH2 N(CH3)(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
55.7 (1 C, C-6), 51.3 (1 C, (CH3)N(CH2CH2 (C15H30)CH3),
31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 26.7, 23.7, 24.2, 23.0, 22.6 (33 C, some
signals were overlapped, (CH3)N(CH2(C 16H32)CH3)2),
14.0, 14.0 (2 C, (CH3)N(CH2(C16H32)CH3)2).
取3’-(N-甲基-N,N二-正十八烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(9.2 mg, 0.01 mmol)，用二次蒸馏水(10
mL)经超声波分散得阳离子脂质体GluNAc-DiC18MA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径108.7
nm，PDI分布0.338，表面电势+45.8 mv，pH = 4.5。
各种阳离子脂质体经水超声分散后，所得阳离子脂质体纳米颗粒的平均粒径、PDI分布、Zeta表面电势以及pH值见表2。表中数据表明，所得阳离子脂质体纳米颗粒的平均粒径为80-200
nm；PDI值小，粒径分布相对集中；多数阳离子脂质体纳米颗粒具有较高的表面电势(40-60
mv)和适中的pH值。上述各物理参数表明，所得的氨基葡萄糖阳离子脂质体纳米颗粒具有通过静电作用结合和转运基因类药物的潜力。
表1 各种阳离子脂质体的化学结构
表2 水分散后阳离子脂质体的平均粒径、PDI分布、Zeta表面电势以及pH值
Claims (11)
1.一系列氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：
(1) 以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，以吡啶为反应溶剂和缚酸剂，乙酸酐为酰化试剂，进行乙酰化反应，经相应的分离纯化处理得到白色粉末状固体1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- D-吡喃葡萄糖；
(2) 以一定比例为混合的四氢呋喃和甲醇溶剂，1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- D-吡喃葡萄糖与氨气反应，选择性脱1-O-乙酰基，经相应的分离纯化处理得到无色浆状物3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖；
(3) 以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖与三氯乙腈发生反应，经柱层析分离纯化得到黄色粉末状固体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯；
(4) 以无水二氯甲烷为溶剂，以三氟甲磺酸三甲基硅酯(简称：TMSOTf)为催化剂，步骤(3)到得的黄色粉末状固体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯与3-氯-1-丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(5) 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(6) 以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(7) 室温下，以浓硫酸为催化剂，以步骤(6)所得产物与2,2-二甲氧基丙烷反应，经柱层析分离纯化得无色油状液体3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(8) 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与溴化苄反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(9) 以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与乙酰氯反应脱去异丙叉基，不经分离纯化直接进行下一步反应，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与正烷基溴发生威廉姆逊醚化反应，经柱层析分离纯化得到3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(10) 以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分离纯化得到3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(11) 以步骤(10)得到的3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(12) 以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得黄色油状液体3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(13) 以一定比例为混合的四氢呋喃和甲醇溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下，步骤(12)得到的3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与溴代烷烃反应，经柱层析分离纯化得白色固体3’-(N,N-二-正烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(14) 步骤(13)得到的3’-(N,N-二-正烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经相应的分离纯化处理得白色固体；
(15) 步骤(11)和步骤(14)得到的固体经超声波振荡水分散后得到相应的氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(4)
3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：以氨基葡萄糖盐酸盐为原料，以吡啶为反应溶剂和缚酸剂，乙酸酐为酰化试剂，浓缩，结晶得白色粉末状固体1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖，反应温度：10oC - 20oC；反应时间：12h；反应投料比为：氨基葡萄糖(mol)
: 乙酸酐(mol)= 1 :
7.5 ；结晶使用溶剂为：石油醚 :
乙酸乙酯 = 10 : 1(体积比)；所得产物1,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧- D-吡喃葡萄糖，以一定比例混合的四氢呋喃和甲醇为溶剂(四氢呋喃: 甲醇 = 5 : 2，体积比)，常温下与氨气反应，经柱层析分离纯化得无色油状液体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖，反应时间：40 min - 50 min；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1(体积比)；所得3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃葡萄糖，以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，常温下与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得黄色固体3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，反应时间：4 h；反应投料比为：3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(mol) : 三氯乙腈(mol) : 无水碳酸钾(mol) = 1 : 2.5 : 1；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1: 1(体积比)；所得3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，以无水二氯甲烷为溶剂，4Ǻ分子筛为除水剂，以TMSOTf为催化剂，在氮气的保护下与3-氯-1-丙醇反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：-20oC 至室温；反应时间：10 min；反应投料比为：3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(mol) : 3-氯丙醇(mol) : TMSOTf(mol) = 1 : 3 : 0.01；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 2(体积比)。
3.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(7)
3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，在加热条件下，3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC，反应时间：24 h；反应投料比为：3’-氯丙基 3,4,6-三-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 叠氮化钠(mol) = 1 : 6；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 1 : 1(体积比)；以甲醇为溶剂，通入氨气至饱和条件下，脱除3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的乙酰基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：12
h；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以2,2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：4
h，柱层析分离洗脱剂为：石油醚
: 乙酸乙酯 = 1 : 1(体积比)。
4.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)
3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成；所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与溴化苄反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 溴化苄(mol) = 1 : 4 : 2；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)；所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，在甲醇-乙酰氯条件下去异丙叉基，反应结束后不经分离纯化直接进行下一步反应；以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 月桂基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 10，3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h；反应投料比：3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，真空干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十二烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为di-C12-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
5.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)
3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷；所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，在甲醇-乙酰氯条件下去异丙叉基，反应结束后不经分离纯化直接进行下一步反应；所得3’-叠氮基丙基3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与肉豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 肉豆蔻基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)；所得3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 10，3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h；反应投料比：3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十四烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为di-C14-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
6.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)
3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成；所得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，在甲醇-乙酰氯条件下去异丙叉基，反应结束后不经分离纯化直接进行下一步反应；所得3’-叠氮基丙基3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与鲸蜡基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 鲸蜡基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)；所得3’-叠氮基丙基 3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 10，3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h；反应投料比：3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 碘甲烷(mol) =1 : 4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，真空干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十六烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为di-C16-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
7.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)
3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成；所得产物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙氧叉基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，在甲醇-乙酰氯条件下去异丙叉基，反应结束后不经分离纯化直接进行下一步反应；所得3’-叠氮基丙基3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基3-O-苄基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 硬脂基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 8 : 1(体积比)；所得3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 10，3’-叠氮基丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h；反应投料比：3’-(N,N-二-甲基氨基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，真空干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基3-O-苄基-4,6-二-O-正十八烷基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为di-C18-GluNAc-TMA)纳米颗粒。
8.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(14)
3’-(N,N-二-正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：以步骤(6)所得产物3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以一定比例为混合的四氢呋喃和水溶剂，用三苯基膦还原叠氮基团，分离纯化得到3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75
oC；反应时间：6 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 三苯基膦(mol) = 1 : 1.2；纯化：加水除去杂质；所得3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以一定比例为混合甲醇和乙醇溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75
oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 月桂基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 3 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得到3’-(N-甲基-N,N -二-正十二烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二-正十二烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷: 碘甲烷(mol) = 1 : 4；用丙酮结晶得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二-正十二烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为GluNAc-DiC12MA)纳米颗粒。
9.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(14)
3’-(N,N-二-正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：所得3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以一定比例为混合的四氢呋喃和水溶剂，用三苯基膦还原叠氮基团，分离纯化得到3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75
oC；反应时间：6 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 三苯基膦(mol) = 1 : 1.2；纯化：加水除去杂质；所得3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以一定比例为混合甲醇和乙醇溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75
oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 豆蔻基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 3 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得到3’-(N-甲基-N,N-二-正十四烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h，反应投料比：3’-(N,N-二-正十四烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷: 碘甲烷(mol) = 1 : 2；用丙酮结晶得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二-正十四烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为GluNAc-DiC14MA)纳米颗粒。
10.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(14)
3’-(N,N-二-正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：所得3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以一定比例为混合的四氢呋喃和水溶剂，用三苯基膦还原叠氮基团，分离纯化得到3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75
oC；反应时间：6 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 三苯基膦(mol) = 1 : 1.2；纯化：加水除去杂质；所得3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以一定比例为混合甲醇和乙醇溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与鲸蜡基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 鲸蜡基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 3 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得到3’-(N-甲基-N,N-二-正十六烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h，反应投料比：3’-(N,N-二-正十六烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷: 碘甲烷(mol) = 1 : 2 ；用丙酮结晶得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二-正十六烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为GluNAc-DiC16MA)纳米颗粒。
11.根据权利要求1所述氨基葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(14)
3’-(N,N-二-正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：所得3’-叠氮基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以一定比例为混合的四氢呋喃和水溶剂，用三苯基膦还原叠氮基团，分离纯化得到3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75
oC；反应时间：6 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 三苯基膦(mol) = 1 : 1.2；纯化：加水除去杂质；所得3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以一定比例为混合甲醇和乙醇溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二-正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75
oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 : 硬脂基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 3 : 1(体积比)；所得3’-(N,N-二-正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得到3’-(N-甲基-N,N-二-正十八烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h，反应投料比：3’-(N,N-二-正十八烷基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷: 碘甲烷(mol) = 1 : 2 ；用丙酮结晶得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二-正十八烷基碘化铵基)丙基 2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为GluNAc-DiC16MA)纳米颗粒。
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