CN105585597A - 葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。以葡萄糖为原料，合成了一系列不同结构的葡萄糖衍生物阳离子脂质：<i>di</i>-C12-Glu-TMA、<i>di</i>-C12-Glu-TMA、<i>di</i>-C12-Glu-TMA、<i>di</i>-C12-Glu-TMA、Glu-DiC12MA、Glu-DiC14MA、Glu-DiC16MA和Glu-DiC18MA。上述脂质体经水分散后得到一系列具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒，能实现核酸药物从胞外到胞内的转运，亦可用于非核酸药物的转运载体。
Description
技术领域
本发明涉及一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。
背景技术
近年来，基因治疗在治疗遗传疾病、多种传染病以及癌症方面起到越来越重要的作用。目前基因治疗面临最大的挑战是找到一种安全高效的基因载体将外援基因导入到人体细胞内。常用的基因载体有病毒载体和非病毒载体，病毒载体转导效率高、复杂的装配过程由细胞完成、不同病毒载体具有不同表达特点，但是由于存在无法控制病毒复制的风险并具内在免疫原性，而使其应用受到限制；相比于病毒载体而言非病毒载体具有毒性低、免疫反应低，而且所携带的基因不整合至宿主细胞基因组等优点。而作为非病毒性载体之一的阳离子脂质体在临床试验中具有较好的发展前景。阳离子脂质体本身带有正电荷，所以可作为带负电荷药物的传递载体，特别适用于蛋白、多肽、DNA 和RNA 类药物，故在抗病毒、抗癌症等方面的基因治疗研究中有独特应用。
以葡萄糖为原料，通过全乙酰化、脱1-O-乙酰基、三氯乙酰亚胺酯化、糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、4,6-O-异丙叉基保护、醚化、脱叉基保护、还原氨化和季铵盐化反应，合成不同疏水链长度和不同物理结构的一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质：di-C12-Glu-TMA、di-C12-Glu-TMA、di-C12-Glu-TMA和di-C12-Glu-TMA；以葡萄糖为原料，通过全乙酰化、脱1-O-乙酰基、三氯乙酰亚胺酯化、糖苷化、叠氮化、脱全部乙酰基、还原氨化、叔胺化、和季铵盐化反应，合成不同疏水链长度、和不同物理结构的一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质：Glu-DiC12MA、Glu-DiC14MA、Glu-DiC16MA和Glu-DiC18MA；利用上述八种葡萄糖衍生物阳离子脂质带正电荷的季铵盐头部可通过静电作用结合核酸药物，利用带长链的疏水端可与细胞壁膦脂双分子层结合的特征，可望通过融合内吞作用实现核酸药物从胞外到胞内的转运。
所制备的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉等优点，能满足核酸药物转运载体应具备的基本要求。
所制备的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒，亦可用于构建非核酸药物缓释给药系统，或用于非核酸药物的转运载体。
发明内容
本发明的目的是提供一种合成成本低、操作容易的一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。
本发明提供的这种丙二醇胺衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
(1) 以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为溶剂及反应物，经柱层析分离纯化得到白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖；
(2) 以二氧六环和甲醇为混合溶剂，1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖与氨气发生反应脱去1位乙酰基，经柱层析分离纯化得到淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖；
(3) 以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖与三氯乙腈发生施密特反应，经经柱层析分离纯化得到淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯；
(4) 以无水二氯甲烷为溶剂，TMSOTf为催化剂，步骤(3)所得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯与3-氯-1-丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得到白色晶体3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(5) 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(6) 以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得到淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷；
(7) 以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，2,2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化得到淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(8) 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷与烷基溴反应，经柱层析分离纯化得到3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(9) 以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷与乙酰氯反应脱去异丙叉基，经柱层析分离纯化得到3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(10) 以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分离纯化得到3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄苷；
(11) 步骤(10)得到的3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄 苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(12) 以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷；
(13) 步骤(12)所得产物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇、乙醇为溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下与溴代烷烃反应，经柱层析分离纯化得无色浆状物3’-(N,N-二正烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷；
(14) 步骤(13)得到的3’-(N,N-二正烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(15) 步骤(11)和步骤(14)得到的白色固体经超声波振荡水分散后得到相应的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。
以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为溶剂及酰化试剂，浓缩，结晶得白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖。反应温度：10oC ~ 20oC；反应时间：10 h；反应投料比为：葡萄糖(mol) : 乙酸酐(mol) : 高氯酸(mol) = 1 : 7.5
: 0.06；结晶使用溶剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 10
: 1(体积比)。所得1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，以环氧六环和甲醇为混合溶剂(环氧六环 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)，常温下通入氨气反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖。反应时间：20 min~40 min；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)。所得2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，常温下与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯。反应时间：24 h；反应投料比为：2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖(mol) : 三氯乙腈(mol) : 无水碳酸钾(mol) = 1 : 2.5
: 1；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 3
: 1(体积比)。所得2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，以无水二氯甲烷为溶剂，4Ǻ分子筛为除水剂，以TMSOTf为催化剂在氮气的保护下与3-氯-1-丙醇反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：-20 oC -室温；反应时间：2 h；反应投料比为：2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(mol) : 3-氯丙醇(mol)
: TMSOTf(mol) = 1 : 2.4 : 0.01；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1(体积比)。所得产物3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，在加热条件下与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：75oC，反应时间：24 h；反应投料比为：3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 叠氮化钠(mol) = 1 : 6；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1(体积比)。3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，通入氨气至饱和条件下反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：24 h；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 2 : 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以2,2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：4 h，柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 月桂基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16 : 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：0oC至室温；反应时间：1 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 乙酰氯(mol) = 1 : 8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷。反应时间：24 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 8，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)。所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷。反应时间：3 h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：反应混合液经冰浴冷却析晶。所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C12-Glu-TMA)纳米颗粒。
以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖与肉豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 肉豆蔻基溴(mol) = 1 : 6 :
4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16
: 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：0oC至室温；反应时间：1 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 乙酰氯(mol) = 1 : 8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷。反应时间：24 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 8，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)。所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷。反应时间：3 h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：反应混合液经冰浴冷却析晶。所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C14-Glu-TMA)纳米颗粒。
以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖与鲸蜡基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol) : 鲸蜡基溴(mol) = 1 : 6 :
4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16
: 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：0oC至室温；反应时间：1 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 乙酰氯(mol) = 1 : 8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷。反应时间：24 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 8，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)。所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷。反应时间：3 h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：反应混合液经冰浴冷却析晶。所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C16-Glu-TMA)纳米颗粒。
以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖与硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：10 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 硬脂基溴(mol) = 1 : 6 :
4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16
: 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：0oC至室温；反应时间：1 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 乙酰氯(mol) = 1 : 8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)。所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷。反应时间：24 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 8，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)。所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷。反应时间：3 h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：反应混合液经冰浴冷却析晶。所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C18-Glu-TMA)纳米颗粒。
以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷的叠氮基为氨基，分离纯化得到3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：75oC；反应时间：3 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(mol)
: 三苯基膦(mol) = 1 : 2；纯化：加水除去杂质。所得产物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 月桂基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)。所得产物3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得到白色固体3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶。所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为Glu-DiC12MA)纳米颗粒。
以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下，3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷与肉豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 肉豆蔻基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)。所得产物3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得到白色固体3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶。所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为Glu-DiC14MA)纳米颗粒。。
以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下，3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷与鲸蜡基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 鲸蜡基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)。所得产物3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得到白色固体3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶。所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为Glu-DiC16MA)纳米颗粒。
以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下，3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷与硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 硬脂基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)。所得产物3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得到白色固体3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷。反应时间：3 h，反应投料比：3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶。所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为Glu-DiC18MA)纳米颗粒。
本发明方法的主要优点是成本低廉并且操作容易，能高效制备不同结构的一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体。
具体实施方式：
下面结合实施例进一步阐述本发明的内容，但这些实施例并不限制本发明的保护范围。各葡萄糖衍生物阳离子脂质体的合成路线如图1所示，各葡萄糖衍生物阳离子脂质体的代号与相应的化学结构分别在说明书附图1中列出。
实施例1. 葡萄糖衍生物阳离子脂质体di-C12-Glu-TMA纳米颗粒的制备：
在1.0 L的圆底烧瓶中加入乙酸酐(393.5
mL, 4.2 mol)，磁力搅拌，冰浴降温至0oC，滴加HClO4 (2.0 mL)。控制温度小于20
oC，分批加入葡萄糖(100.0 g, 555.5 mmol)。加完后，自然升至常温，继续反应至TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)表明反应基本完成，得黄色透明混合液。往反应混合液中加入DCM (500.0 mL)，将反应混合液倾入装有冰水混合物的烧杯中，分液。有机相再用冷水洗涤两遍。有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得一浆状物。用石油醚-乙酸乙酯结晶，得到白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖(205.4 g, 94.8%).
在500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖 (50.0 g, 128.2 mmol)，用甲醇和二氧六环的混合液(250.0
mL, 甲醇 : 二氧六环= 2 :
5，体积比)溶解。磁力搅拌下通入氨气至饱和，用TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应。反应完全后，用旋转蒸发器常温脱除氨气，再升温浓缩得浆状物。经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)分离纯化得化合物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖 (33.0 g, 73.9%).
在500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖 (33.0 g , 94.7 mmol)和无水DCM(200.0
mL)，磁力搅拌溶解。然后加入无水K2CO3 (14.0
g, 101.4 mmol)和三氯乙腈(22.6 mL, 225.4 mmol)。室温反应至TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1，体积比)表明反应基本完成。过滤，浓缩得深褐色浆状物，经柱层析柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1，体积比)分离纯化，得化合物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯 (39.7 g, 85.1%).
往500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯 (32.0 g, 65.0
mmol)，60oC水浴真空干燥2 h后，加入新活化的分子筛(2.0 g)、3-氯-1-丙醇(13.0 mL, 155.5 mmol)和无水DCM(200.0
mL)。反应混合物在搅拌和氮气保护下，降温至-20℃后，加入TMSOTf (106.0 μL,
0.6 mmol)。搅拌并自然升温至室温，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1，体积比)监测反应至原料点完全消失。滴加三乙胺 (0.2
mL)，过滤，滤液用水洗涤三遍，有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到黄色油状物。残留物经柱层析分离 (洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1，体积比)，再用石油醚-乙酸乙酯结晶，得到白色晶型固体3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (14.0 g, 50.7%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 5.19 (dd, 1 H, J 2,3 = J 3,4
= 9.5 Hz, H-3), 5.06 (dd, 1 H, J 4,3 = J 4,5 =
9.5 Hz, H-4), 4.95 (dd, 1 H, J 2,1 = 8.0 Hz, J 2,3 =
9.5Hz, H-2), 4.90 (d, 1 H, J 1,2 = 8.0 Hz, H-1), 4.25 (dd, 1
H, J 6a,5 = 3.5 Hz, J 6a,6b = 12.5 Hz, H-6a),
4.13 (dd, 1 H, J 6b,5 = 2.5 Hz, J 6a,6b =
12.5 Hz, H-6a), 3.99-3.95 (m, 1 H, OCH2CH2CHHCl),
3.70-3.65 (m, 2 H, H-5, OCH2CH2CHHCl), 3.59-3.56
(m, 2 H, OCH 2CH2CH2Cl), 2.06 (s, 3 H, CH 3CO),
2.03 (s, 3 H, CH 3CO), 2.00 (s, 3 H, CH 3CO),
1.98 (s, 3 H, CH 3CO), 1.97-1.88 (m, 2 H, OCH2CH2 CH2Cl);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.6 (1 C, CH3 CO), 170.2 (1 C, CH3 CO),
169.4, 169.4 (2 C, 2 CH3 CO), 101.0 (1 C, C-1), 72.7 (1 C,
C-3), 71.8 (1 C, C-2), 71.3 (1 C, C-5), 68.4 (1 C, C-4), 66.4 (1 C, OCH2CH2 CH2Cl),
61.9 (1 C, C6), 41.3 (1 C, OCH2CH2CH2Cl),
32.2 (1 C, OCH2 CH2CH2Cl), 20.7(1 C, CH3CO),
20.6(1 C, CH3CO), 20.5,20.5 (2 C, CH3CO).
在50.0 mL圆底烧瓶中依次加入化合物3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (3.0 g, 7.1
mmol)、DMF (5.0 mL) 和NaN3 (2.8 g, 42.6 mmol)。反应混合物在75oC反应24 h。TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1，体积比)监测反应至原料消失。过滤，往滤液中加入DCM (150 mL)，用水洗涤三遍，有机相用无水Na2SO4干燥，浓缩，柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 4 : 1，体积比)分离纯化，得到淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (2.6 g, 84.9%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 5.19
(dd, 1 H, J 2,3 = J 3,4 = 9.5 Hz, H-3), 5.07
(dd, 1 H, J 4,3 = J 4,5 = 9.5 Hz, H-4), 4.97
(dd, 1 H, J 2,1 = 8.0 Hz, J 2,3 = 9.5 Hz,
H-2), 4.90 (d, 1 H, J 1,2 = 8.0 Hz, H-1), 4.25 (dd, 1 H, J 6a,5
= 4.5 Hz, J 6a,6b = 12.5 Hz, H-6a), 4.14 (dd, 1 H, J 6b,5
= 3.6 Hz, J 6a,6b = 12.5 Hz, H-6a), 3.94-3.92 (m, 1 H,
OCH2CH2CHHN3), 3.70-3.67 (m, 1 H, OCH2CH2CHHN3),
3.61-3.58 (ddd, 1 H, J 5,4 = 9.5 Hz, J 5,6a =
4.5 Hz, J 5,6b = 3.6 Hz, H-5), 3.34-3.37 (m, 2 H, OCH 2CH2CH2Cl),
2.07 (s, 3 H, CH 3CO), 2.04 (s, 3 H, CH 3CO),
2.01 (s, 3 H, CH 3CO), 1.99 (s, 3 H, CH 3CO),
1.80-1.86 (m, 2 H, OCH2CH2 CH2Cl); 13C
NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 170.6 (1 C, CH3 CO), 170.2 (1 C, CH3 CO),
169.3(1 C, CH3 CO), 169.2, 169.2 (2 C, CH3 CO),
100.8 (1 C, C-1), 72.8 (1 C, C-3), 71.8 (1 C, C-2), 71.3 (1 C, C-5), 68.4 (1 C,
C-4), 66.4 (1 C, OCH2CH2 CH2Cl), 61.9 (1
C, C-6), 47.9 (1 C, OCH2CH2CH2Cl), 28.9
(1 C, OCH2 CH2CH2Cl), 20.7 (1 C, CH3CO),
20.6 (1 C, CH3CO), 20.5,20.5 (2 C, CH3CO).
在50.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (2.6 g , 6.0
mmol)，用甲醇(20.0 mL) 溶解。磁力搅拌下通入氨气至饱和，用TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应。反应完全后，用旋转蒸发器常温脱除氨气，再升温浓缩得浆状物。经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)分离纯化得化合物3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.5 g, 95.0%).
在50.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.5 g, 5.7 mmol), 加入2,2-二甲氧基丙烷(10 mL, 81.3 mmol) 溶解，磁力搅拌下滴加4滴浓硫酸，常温下反应。TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1，体积比)监测反应至原料消失。反应混合液用无水K2CO3调节pH值至中性，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)分离纯化得化合物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (0.8 g, 46.3%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 4.34 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.98-3.90 (m, 2 H, H-6a, OCH2CH2CHHN3),
3.78 (dd, 1 H, J 6b,5 = 5.4 Hz, J 6a,6b =
10.5 Hz, H-6a), 3.68-3.64 (m, 2 H, H-3, OCH2CH2CHHN3),
3.57 (dd, 1 H, J 4,3 = J 4,5 = 9.5 Hz, H-4),
3.46-3.41 (m, 2 H, H-2, OCH 2CH2CH2N3),
3.27 (ddd, 1 H, J 5,4 = 9.5 Hz, J 5,6a = 4.5
Hz, J 5,6b = 5.4 Hz, H-5), 1.91-1.86 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.50 (s, 3 H, C(CH 3)2), 1.43 (s, 3 H, C(CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.2 (1 C, C-1), 99.8 (1 C, C(CH3)2), 74.6
(1 C, C-2), 73.5 (1 C, C-3), 73.0 (1 C, C-4), 67.3 (1 C, C-5), 67.0 (1 C, C-6),
62.0 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
48.3 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
29.0 (1 C, OCH2 CH2CH2N3),
28.9, 19.0 (2 C, C(CH3)2).
在25.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (200.0 mg, 0.65 mmol)，加入无水DMF
(2.0 mL)溶解，磁力搅拌下加入NaH (100.0 mg, 4.0 mmol)，缓慢滴加月桂基溴(0.65 mL, 2.6 mmol)。常温反应，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至无明显变化。向反应混合液中加入DCM
(10.0 mL)，用水洗涤三遍，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16 : 1，体积比)分离纯化得化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (170.0 mg,
41.5%)。1H NMR (500 MHz,
CDCl3): δ (ppm) 4.30 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.93-3.86 (m, 2 H, OCH 2 CH2CHHN3,
H-6a), 3.75-3.70 (m, 3 H, OCH2 (CH2)10CH3,
H-6b), 3.66-3.58 (m, 3 H, OCH 2 CH2CHHN3,
OCH2 (CH2)10CH3), 3.53 (dd, 1
H, J 4,3 = 8.5 Hz, J 4,5 = 9.5 Hz, H-4),
3.89-3.41 (m, 2 H, OCH2 CH2CH2N3),
3.25 (dd, 1 H, J 3,2 = 9.0 Hz, J 3,4 = 8.5
Hz, H-3), 3.16 (ddd,1 H, J 5,4 = 9.5 Hz, J 5,6a
= 5.5 Hz, J 5,6b = 3.6 Hz, H-5), 3.06 (dd, 1 H, J 2,1
= 7.5 Hz, J 2,3 = 9.0 Hz, H-2), 1.87-1.84 (m, 2 H, OCH2CH2 CH2N3),
1.55-1.51 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)9CH3),
1.46 (s, 3 H, C(CH3 )2), 1.38 (s, 3 H, C(CH3 )2),
1.38-1.20 (m, 36 H, 2 OCH2CH2(CH2 )9CH3),
0.88 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)9CH3 );
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 104.0 (1 C, C-1), 99.2 (1 C, C(CH3)2), 82.2
(1 C, C-2), 81.7 (1 C, C-3), 73.9 (1 C, C-4), 73.6 (1 C, OCH2(CH2)10CH3),
73.2 (1 C, OCH2(CH2)10CH3),
66.9 (1 C, C-5), 66.7 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
62.2 (1 C, C-6), 48.2 (2 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.3, 30.2, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 29.1, 26.4 (21 C, some signals
were overlapped, 2 OCH2(CH2)10CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 22.6
(1 C, C(CH3)2), 19.0 (1 C, C(CH3)2),
14.0, 14.0 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)9 CH3).
在50.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (170.0 mg, 0.27 mmol)，加入甲醇(5.0
mL)溶解，冰浴。 磁力搅拌下滴加乙酰氯(0.2 mL, 2.4
mmol)，自然升温至室温，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液浓缩，经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)分离纯化得无色油状物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(100.0 mg, 61.7%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.30 (d,
1 H, J 1,2 = 8.0 Hz, H-1), 3.96-3.87 (m, 1 H, OCH 2 CH2CHHN3),
3.88-3.87 (m, 2 H, OCHH(CH2)10CH3,
H-6a), 3.79-3.73 (m, 2 H, OCHH(CH2)10CH3,
H-6b), 3.64-3.56 (m, 3 H, OCH2 (CH2)10CH3,
OCH 2 CH2CHHN3), 3.47-3.40 (m, 3
H, OCH2CH2CH2 N3, H-4), 3.34-3.28
(m, 1 H, H-5), 3.19 (dd,1 H, J 3,2 = J 3,4 =
9.0 Hz, H-3), 3.06 (dd, 1 H, J 2,1 = 8.0 Hz, J 2,3 =
9.0 Hz, H-2), 1.88-1.85 (m, 2 H, OCH2CH2 CH2N3),
1.57-1.55 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)9CH3),
1.24 (m, 36 H, 2 OCH2CH2(CH2 )9CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)9CH3 );
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.7 (1 C, C-1), 84.2 (1 C, C-2), 82.1 (1 C, C-3), 74.8 (1 C, C-4), 73.6
(1 C, OCH2(CH2)10CH3), 73.0
(1 C, OCH2(CH2)10CH3), 70.4
(1 C, C-5), 66.7 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
62.8 (1 C, C-6), 48.2 (2 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.4, 30.3, 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 26.2, 26.1, 22.7 (21 C, some signals
were overlapped, 2 OCH2(CH2)10CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 14.1,
14.1 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)9 CH3).
在100.0 mL圆底烧瓶中依次加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.0 g, 1.7
mmol)、36%甲醛水溶液(1.1
mL, 13.6 mmol)、5%Pd/C (300.0 mg) 和甲醇(60.0 mL)，搅拌下通入氢气。TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)分离纯化得无色油状物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(0.5 g, 48.8%).
在25.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (240.0 mg, 0.4
mmol)、CH3I (48.0 μL , 1.6 mmol)和THF
(3.0 mL)，常温下磁力搅拌。TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液用冰水浴冷却，有晶体析出，过滤，用丙酮洗涤，真空干燥得白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(100.0 mg,
32.5%)。1H NMR (500 MHz,
CDCl3): δ (ppm) 4.31 (d,
1 H, J 1,2 = 8.0 Hz, H-1), 3.92-3.85 (m, 4 H, OCH 2 CH2CH2 N(CH3)3,
H-6a, OH), 3.78-3.64 (m, 6 H, OCHH(CH2)10CH3,
OCH2 (CH2)10CH3, OCH2 CH2CH2N(CH3)3,
H-6b), 3.57-3.52 (m, 1 H, OCHH(CH2)10CH3),
3.46-3.32 (m, 11 H, OCH 2 CH2CH2N(CH3 )3,H-4,
H-5), 3.25 (s,1 H, OH), 3.19 (dd, 1 H, J 3,2 = 8.5 Hz , J 3,4
= 8.0 Hz, H-3), 3.01 (dd, 1 H, J 2,1 = 8.0 Hz, J 2,3
= 8.5 Hz, H-2), 2.27-2.19 (m, 1 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
2.06-2.02 (m, 1 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
1.56-1.48 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)9CH3),
1.24 (m, 36 H, 2 OCH2CH2(CH2 )9CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)9CH3 )
; 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ (ppm) 103.8 (1 C, C-1), 84.1 (1 C, C-3), 81.8 (1 C,
C-2), 75.6 (1 C, C-5), 73.6 (1 C, OCH2(CH2)10CH3),
73.0 (1 C, OCH2(CH2)10CH3),
79.9 (1 C, C-4), 66.5 (1 C, OCH 2 CH2 CH2N(CH3)3),
64.7 (1 C, OCH 2 CH2CH2N(CH3)3),
61.4 (1 C, C-6), 53.9, 59.9, 53.9 (3 C, OCH 2 CH2CH2N(CH3) 3 ),
31.8, 30.8, 30.4, 29.7, 29.6, 29.3, 26.2, 26.1, 24.4, 22.7 (21 C, some signals
were overlapped, 2 OCH2(CH2)10CH3,
OCH 2CH2CH2N(CH3)3),
14.0, 14.0 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)9 CH3).
取3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(7.4 mg, 0.01
mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体di-C12-Glu-TMA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径90.73
nm，PDI分布0.318，表面电势+46.0 mv，pH = 6.15。
实施例2. 葡萄糖衍生物阳离子脂质体di-C14-Glu-TMA纳米颗粒的制备：
在500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (7.0 g, 23.1 mmol)，加入无水DMF
(100.0 mL)溶解，磁力搅拌下加入NaH (3.3 g, 138.6 mmol)，缓慢滴加肉豆蔻基溴(27.5 mL, 92.4 mmol)。常温反应，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料基本消失。往反应混合液中加入DCM
(200.0 mL)，用水洗涤三遍，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)分离纯化得化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (6.5 g, 40.3%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.30 (d, 1 H, J 1,2 = 7.5 Hz,
H-1), 3.94-3.87 (m, 2 H, OCH2CH2CHHN3,
H-6a), 3.76-3.70 (m, 3 H, OCH 2(CH2)12CH3,
H-6b), 3.66-3.58 (m, 3 H, OCH2CH2CHHN3,
OCH 2(CH2)12CH3), 3.53 (dd, 1
H, J 4,3 = J 4,5 = 9.0 Hz, H-4), 3.41-3.3.39
(m, 2 H, OCH 2CH2CH2N3 ),
3.25 (dd, 1 H, J 3,2 = J 3,4 = 9.0 Hz, H-3),
3.16 (ddd, 1 H, J 5,4 = 9.0 Hz, J 5,6a =
5.5 Hz, J 5,6b = 5.0 Hz, H-5), 3.16 (dd, 1 H, J 2,1
= 7.5 Hz, J 2,3 = 9.0 Hz, H-2), 1.87-1.85 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.56-1.46 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)11CH3),
1.46 (s, 3 H, C(CH3 )2), 1.39 (s, 3 H, C(CH 3)2),
1.38-1.20 (m, 44 H, 2 OCH2CH2(CH 2)11CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)11CH3 );
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 104.0 (1 C, C-1), 99.2 (1 C, C(CH3)2), 82.2
(1 C, C-2), 81.7 (1 C, C-3), 73.9 (1 C, C-4), 73.6 (1 C, OCH2(CH2)12CH3),
73.2 (1 C, OCH2(CH2)12CH3),
66.9 (1 C, C-5), 66.8 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
62.2 (1 C, C-6), 48.2 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.3, 30.2, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 29.1, 26.1, 26.0, 22.7, 19.0
(25 C some signals were overlapped, 2 OCH2(CH2)12CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 22.7
(1 C, C(CH3)2), 19.0 (1 C, C(CH3)2),
14.1, 14.1 (2 C, 2 OCH2(CH2)12 CH3).
在500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (6.5 g, 9.3 mmol)，加入甲醇(100.0
mL)溶解，冰浴。磁力搅拌下滴加乙酰氯(2.0 mL, 28.2 mmol)，自然升温至室温，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液浓缩，经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)分离纯化得无色油状物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (5.0 g, 82.0%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.30 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.97-3.93 (m, 1 H, OCH2CH2CHHN3),
3.91-3.87 (m, 2 H, OCHH(CH2)12CH3,
H-6a), 3.81-3.74 (m, 2 H, OCHH(CH2)12CH3,
H-6b), 3.64-3.56 (m, 3 H, OCH2 (CH2)12CH3,
OCH2CH2CHHN3), 3.48-3.41 (m, 3 H, OCH2CH2CH 2N3,
H-4), 3.33 (ddd, 1 H, J 5,4 = 9.0 Hz, J 5,6a =
4.5 Hz, J 5,6b = 4.0 Hz, H-5), 3.19 (dd,1 H, J 3,2 =
J 3,4 = 9.0 Hz, H-3), 3.06 (dd, 1 H, J 2,1 =
7.5 Hz, J 2,3 = 9.0 Hz, H-2), 1.90-1.85 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.61-1.52 (m, 4 H, 2 OCH2CH 2(CH2)11CH3),
1.37-1.20 (m, 44 H, 2 OCH2CH2(CH 2)11CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 3.0 Hz, 2 OCH2(CH2)12CH 3);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.7 (1 C, C-1), 84.2 (1 C, C-3), 82.1 (1 C, C-2), 74.8 (1 C, C-5), 73.6
(1 C, OCH2(CH2)12CH3), 73.0
(1 C, OCH2(CH2)12CH3), 70.4
(1 C, C-4), 66.5 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
62.8 (1 C, C-6), 48.2 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.4, 30.3, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 26.2, 26.1, 22.7 (25 C some
signals were overlapped, 2 OCH2(CH2)12CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 14.1,
14.1 (2 C, 2 OCH2(CH2)12 CH3).
在100.0 mL圆底烧瓶中依次加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.0 g, 1.5
mmol)、36%甲醛水溶液(1.0
mL, 12.0 mmol)、5%Pd/C (300.0 mg) 和甲醇(60.0 mL)，搅拌下通入氢气。TLC (乙酸乙酯 : 甲醇= 5 : 2，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯 : 甲醇= 5 : 2，体积比)分离纯化，得无色油状物3’-N,N-二甲胺基丙基
2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (0.5 g, 50.6%).
在25.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-N,N-二甲胺基丙基
2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷(300.0 mg, 0.46
mmol)、CH3I (112.0 µL , 1.8 mmol)和THF (3.0 mL)，常温下磁力搅拌。TLC (乙酸乙酯 : 甲醇= 5 : 2，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液用冰水浴冷却，有晶体析出，过滤，用丙酮洗涤，真空干燥得白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (220.0 mg,
59.5%)。1H NMR (500 MHz,
CDCl3): δ (ppm) 4.31 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.91-3.78 (m, 5 H, OCH2CH2CHHN(CH3)3,OCH 2CH2CH2N(CH3)3,
OCHH(CH2)12CH3, H-6a), 3.77-3.65 (m, 4
H, OCH 2(CH2)12 CH3, OCH2CH2CHHN(CH3)3,
H-6b), 3.58-3.54 (m, 1 H, OCHH(CH2)12CH3),
3.46-3.32 (m, 11 H, OCH2CH2CH2N(CH 3)3,
H-4, H-5), 3.19 (dd, 1 H, J 3,2 = J 3,4 = 9.0
Hz, H-3), 3.10 (s, 1 H, OH), 3.01 (dd, 1 H, J 2,1 = 7.5
Hz, J2,3 = 9.0 Hz, H-2), 2.22-2.20 (m, 1 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
2.06-2.00 (m, 1 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
1.60-1.50 (m, 4 H, 2 OCH2CH 2(CH2)11CH3),
1.37-1.20 (m, 44 H, 2 OCH2CH2(CH 2)11CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0Hz, 2 OCH2 CH2(CH2)11CH 3)
; 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ (ppm) 103.9 (1 C, C-1), 84.2 (1 C, C-3), 81.9 (1 C,
C-2), 75.6 (1 C, C-5), 73.6 (1 C, OCH2(CH2)12CH3),
73.0 (1 C, OCH2(CH2)12CH3),
70.0 (1 C, C-4), 66.5 (1 C, OCH 2 CH2CH2N(CH3)3),
64.8 (1 C, OCH 2 CH2 CH2N(CH3)3),
61.6 (1 C, C-6), 53.9, 53.9, 53.9 (3 C, OCH 2 CH2CH2N(CH3)3),
31.8, 30.4, 29.7, 29.6, 29.3, 26.2, 26.1, 24.4, 22.7 (25 C some signals were
overlapped, 2 OCH2(CH2)12CH3,
OCH2 CH2CH2N(CH3)3),
14.0, 14.0 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)11 CH3).
取3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷(8.0 mg, 0.01
mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体di-C14-Glu-TMA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径63.49
nm，PDI分布0.501，表面电势+36.2 mv，pH = 6.59。
实施例3. 葡萄糖衍生物阳离子脂质体di-C16-Glu-TMA纳米颗粒的制备：
在500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5.0 g, 16.6 mmol)，加入无水DMF
(100.0 mL)溶解，磁力搅拌下加入NaH (4.0 g, 99.6 mmol)，缓慢滴加鲸蜡基溴(20.3 mL, 66.4 mmol)。油浴50oC反应，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料基本消失。往反应混合液中加入DCM (200.0 mL)，用水洗涤三遍，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16 : 1，体积比)分离纯化得化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (10.0 g, 80.1%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.30 (d, 1 H, J 1,2 = 8.0 Hz,
H-1), 3.94-3.87 (m, 2 H, OCH2CH2CHHN3,
H-6a), 3.75-3.70 (m, 3 H, OCH 2(CH2)14CH3,
H-6b), 3.66-3.60 (m, 3 H, OCH2CH2CHHN3,
OCH 2(CH2)14CH3), 3.53 (dd, 1
H, J 4,3 = J 4,5 = 9.0 Hz, H-4), 3.41-3.3.39
(m, 2 H, OCH 2CH2CH2N3 ),
3.25 (dd, 1 H, J 3,2 = J 3,4 = 9.0 Hz, H-3),
3.16 (ddd, 1 H, J 5,4 = 9.0 Hz, J 5,6a =
J 5,6b = 5.5 Hz, H-5), 3.06 (dd, 1 H, J 2,1 =
8.0 Hz, J 2,3 = 9.0 Hz, H-2), 1.87-1.85 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.56-1.52 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)13CH3),
1.46 (s, 3 H, C(CH3 )2), 1.39 (s, 3 H, C(CH 3)2),
1.38-1.20 (m, 52 H, 2 OCH2CH2(CH 2)13CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)13CH3 );
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 104.0 (1 C, C-1), 99.2 (1 C, C(CH3)2), 82.2
(1 C, C-2), 81.7 (1 C, C-3), 73.9 (1 C, C-4), 73.6 (1 C, OCH2(CH2)14CH3),
73.1 (1 C, OCH2(CH2)14CH3),
67.0 (1 C, C-5), 66.8 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
62.3 (1 C, C-6), 48.2 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.3, 30.2, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 29.1, 26.1, 22.7, 19.0 (29
C some signals were overlapped, 2 OCH2(CH2)14CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 26.0
(1 C, C(CH3)2), 19.1 (1 C, C(CH3)2),
14.1, 14.1 (2 C, 2 OCH2(CH2)14 CH3).
在500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (10.0 g, 13.3 mmol)，加入甲醇(100.0
mL)溶解，冰浴。 磁力搅拌下滴加乙酰氯(3.7 mL, 53.2
mmol)，自然升温至室温，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液浓缩，经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)分离纯化得无色油状物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (9.0 g, 95.0%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.31 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.97-3.93 (m, 1 H, OCH2CH2CHHN3),
3.90-3.88 (m, 2 H, OCHH(CH2)14CH3,
H-6a), 3.81-3.73 (m, 2 H, OCHH (CH2)14CH3,
H-6b), 3.64-3.56 (m, 3 H, OCH2 (CH2)14CH3,
OCH2CH2CHHN3), 3.48-3.40 (m, 3 H, OCH2CH2CH 2N3,
H-4), 3.38 (ddd, 1 H, J 5,4 = 9.0 Hz, J 5,6a =
4.5 Hz, J 5,6b = 4.0 Hz, H-5), 3.19 (dd,1 H, J 3,2 =
J 3,4 = 9.0 Hz, H-3), 3.06 (dd, 1 H, J 2,1 =
7.5 Hz, J 2,3 = 9.0 Hz, H-2), 2.53(s, 1 H, OH),
2.20(s, 1 H, OH), 1.90-1.85 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.61-1.52 (m, 4 H, 2 OCH2CH 2(CH2)13CH3),
1.37-1.20 (m, 52 H, 2 OCH2CH2(CH 2)13CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, 2 OCH2(CH2)14CH 3);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.8 (1 C, C-1), 84.2 (1 C, C-3), 82.1 (1 C, C-2), 74.8 (1 C, C-5), 73.6
(1 C, OCH2(CH2)14CH3), 73.0
(1 C, OCH2(CH2)14CH3), 70.5
(1 C, C-4), 66.5 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
62.7 (1 C, C-6), 48.2 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.4, 30.3, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 26.2, 26.1, 22.7 (29 C some
signals were overlapped, 2 OCH2(CH2)14CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 14.1,
14.1 (2 C, 2 OCH2(CH2)14 CH3).
在100.0 mL圆底烧瓶中依次加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.5 g, 2.1
mmol)、36%甲醛水溶液(1.3
mL, 16.8 mmol)、5%Pd/C (450.0 mg) 和甲醇(60.0 mL)，搅拌下通入氢气。TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1，体积比)分离纯化，得无色油状物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (0.6 g, 40.0%).
在25.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (250.0 mg, 0.35
mmol)、CH3I (86.8 µL , 1.4 mmol)和THF (3.0 mL)，常温下磁力搅拌。TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液用冰水浴冷却，有晶体析出，过滤，用丙酮洗涤，真空干燥得白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (170.0 mg,
56.7%)。1H NMR (500 MHz,
CDCl3): δ (ppm) 4.31 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.91-3.82 (m, 3 H, OCH 2CH2CH2N(CH3)3,
H-6a), 3.80-3.77 (m, 2 H, OCH2CH2CHHN(CH3)3,OCHH(CH2)14CH3),
3.75-3.66 (m, 4 H, OCH 2(CH2)14CH3,
OCH2CH2CHHN(CH3)3, H-6b),
3.58-3.54 (m, 1 H, OCHH(CH2)14CH3),
3.45-3.32 (m, 11 H, OCH2CH2CH2N(CH 3)3,
H-4, H-5), 3.19 (dd, 1 H, J 3,2 = J 3,4 = 9.0
Hz, H-3), 3.03 (dd, 1 H, J 2,1 = 7.5 Hz, J2,3 = 9.0
Hz, H-2), 2.28-2.18 (m, 1 H, OCH2 CHHCH2N(CH3)3),
2.09-2.00 (m, 1 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
1.60-1.50 (m, 4 H, 2 OCH2 CH 2(CH2)13CH3),
1.37-1.20 (m, 52 H, 2 OCH2CH2(CH 2)13CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0Hz, 2 OCH2CH2(CH2)13CH 3)
; 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ (ppm) 104.0 (1 C, C-1), 84.2 (1 C, C-3), 82.0 (1 C,
C-2), 75.7 (1 C, C-5), 73.6 (1 C, OCH2(CH2)14CH3),
73.0 (1 C, OCH2(CH2)14CH3),
70.1 (1 C, C-4), 66.6 (1 C, OCH 2 CH2CH2N(CH3)3),
64.9 (1 C, OCH 2 CH2 CH2N(CH3)3),
61.6 (1 C, C-6), 53.9, 53.9, 53.9 (3 C, OCH 2 CH2CH2N(CH3)3),
31.9, 30.4, 29.7, 29.6, 29.3, 26.2, 26.1, 24.5, 22.7 (29 C some signals were
overlapped, 2 OCH2(CH2)14CH3,
OCH2 CH2CH2N(CH3)3),
14.1, 14.1 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)13 CH3).
取3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷(8.5 mg, 0.01
mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体di-C16-Glu-TMA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径109.70
nm，PDI分布0.466，表面电势+37.4 mv，pH = 6.82。
实施例4. 葡萄糖衍生物阳离子脂质体di-C18-Glu-TMA纳米颗粒的制备：
在500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (5.2 g, 17.3 mmol)，加入无水DMF (200.0
mL)溶解，磁力搅拌下加入NaH (4.2 g, 103.8 mmol)，缓慢滴加硬脂基溴(23.1 mL, 69.2 mmol)。油浴40oC反应，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料基本消失。往反应混合液中加入DCM (200.0 mL)，用水洗涤三遍，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16 : 1，体积比)分离纯化得化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (10.5 g, 75.1%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.30 (d, 1 H, J 1,2 = 7.5 Hz,
H-1), 3.94-3.87 (m, 2 H, OCH2CH2CHHN3,
H-6a), 3.76-3.70 (m, 3 H, OCH 2(CH2)16CH3,
H-6b), 3.67-3.59 (m, 3 H, OCH2CH2CHHN3,
OCH 2(CH2)16CH3), 3.53 (dd, 1
H, J 4,3 = J 4,5 = 9.0 Hz, H-4), 3.43-3.3.40
(m, 2 H, OCH 2CH2CH2N3 ),
3.25 (dd, 1 H, J 3,2 = J 3,4 = 9.0 Hz, H-3),
3.17 (ddd, 1 H, J 5,4 = 9.0 Hz, J 5,6a =
J 5,6b = 5.0 Hz, H-5), 3.06 (dd, 1 H, J 2,1 =
7.5 Hz, J 2,3 = 9.0 Hz, H-2), 1.88-1.85 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.56-1.52 (m, 4 H, 2 OCH2CH2 (CH2)15CH3),
1.46 (s, 3 H, C(CH3 )2), 1.39 (s, 3 H, C(CH 3)2),
1.38-1.20 (m, 60 H, 2 OCH2CH2(CH 2)15CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)15CH3 );
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 104.0 (1 C, C-1), 99.2 (1 C, C(CH3)2), 82.2
(1 C, C-2), 81.7 (1 C, C-3), 73.9 (1 C, C-4), 73.6 (1 C, OCH2(CH2)16CH3),
73.2 (1 C, OCH2(CH2)16CH3),
67.0 (1 C, C-5), 66.8 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
62.3 (1 C, C-6), 48.2 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.3, 30.2, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 29.2, 29.1, 26.1, 22.7, 19.0 (33
C some signals were overlapped, 2 OCH2(CH2)16CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 26.0
(1 C, C(CH3)2), 19.1 (1 C, C(CH3)2),
14.1, 14.1 (2 C, 2 OCH2(CH2)16 CH3).
在500.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (10.5 g, 13.0 mmol)，加入甲醇(100.0
mL)溶解，冰浴。 磁力搅拌下滴加乙酰氯(3.7 mL, 52.0
mmol)，自然升温至室温，TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液浓缩，经柱层析(洗脱剂：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)分离纯化得无色油状物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (6.2 g, 62.1%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm) 4.31 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.97-3.93 (m, 1 H, OCH2CH2CHHN3),
3.90-3.86 (m, 2 H, OCHH(CH2)16CH3,
H-6a), 3.81-3.73 (m, 2 H, OCHH (CH2)16CH3,
H-6b), 3.64-3.56 (m, 3 H, OCH2 (CH2)16CH3,
OCH2CH2CHHN3), 3.48-3.40 (m, 3 H, OCH2CH2CH 2N3,
H-4), 3.38 (ddd, 1 H, J 5,4 = 9.0 Hz, J 5,6a =
4.5 Hz, J 5,6b = 5.0 Hz, H-5), 3.19 (dd,1 H, J 3,2 =
J 3,4 = 9.0 Hz, H-3), 3.06 (dd, 1 H, J 2,1 =
7.5 Hz, J 2,3 = 9.0 Hz, H-2), 2.70 (s, 1 H, OH),
2.30 (s, 1 H, OH), 1.88-1.86 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N3),
1.60-1.53 (m, 4 H, 2 OCH2CH 2(CH2)15CH3),
1.37-1.20 (m, 60 H, 2 OCH2CH2(CH 2)15CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, 2 OCH2(CH2)16CH 3);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.8 (1 C, C-1), 84.2 (1 C, C-3), 82.1 (1 C, C-2), 74.9 (1 C, C-5), 73.6
(1 C, OCH2(CH2)14CH3), 73.0
(1 C, OCH2(CH2)14CH3), 70.5
(1 C, C-4), 66.5 (1 C, OCH2CH2 CH2N3),
62.6 (1 C, C-6), 48.2 (1 C, OCH2CH2CH2N3),
31.9, 30.4, 30.3, 29.7, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 26.2, 26.1, 22.7 (33 C
some signals were overlapped, 2 OCH2(CH2)16CH3,
OCH2 CH2CH2N3), 14.1,
14.1 (2 C, 2 OCH2(CH2)16 CH3).
在100.0 mL圆底烧瓶中依次加入化合物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.2 g, 1.56
mmol)、36%甲醛水溶液(1.0
mL, 12.5 mmol)、5%Pd/C (360.0 mg) 和甲醇(60.0 mL)，搅拌下通入氢气。油浴55oC反应，TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)分离纯化，得无色油状物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (0.5 g, 41.6%).
在25.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (230.0 mg, 0.3
mmol)、CH3I (74.0 µL , 1.2 mmol)和THF (3.0 mL)，常温下磁力搅拌。TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)监测反应至原料点完全消失。反应混合液用冰水浴冷却，有晶体析出，过滤，用丙酮洗涤，真空干燥得白色固体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷 (150.0 mg,
54.8%)。1H NMR (500 MHz,
CDCl3): δ (ppm) 4.31 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.91-3.84 (m, 3 H, OCH 2CH2CH2N(CH3)3,
H-6a), 3.80-3.77 (m, 2 H, OCH2CH2CHHN(CH3)3,OCHH(CH2)16CH3),
3.75-3.66 (m, 4 H, OCH 2(CH2)16CH3,
OCH2CH2CHHN(CH3)3, H-6b),
3.59-3.56 (m, 1 H, OCHH(CH2)16CH3),
3.47-3.32 (m, 11 H, OCH2CH2CH2N(CH 3)3,
H-4, H-5), 3.20 (dd, 1 H, J 3,2 = J 3,4 = 9.0
Hz, H-3), 3.03 (dd, 1 H, J 2,1 = 7.5 Hz, J2,3 = 9.0
Hz, H-2), 2.21-2.16 (m, 1 H, OCH2 CHHCH2N(CH3)3),
2.10-2.03 (m, 1 H, OCH2CHHCH2N(CH3)3),
1.57-1.52 (m, 4 H, 2 OCH2 CH 2(CH2)13CH3),
1.37-1.20 (m, 60 H, 2 OCH2CH2(CH 2)15CH3),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, 2 OCH2CH2(CH2)13CH 3)
; 13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ (ppm) 104.0 (1 C, C-1), 84.3 (1 C, C-3), 82.0 (1 C,
C-2), 75.8 (1 C, C-5), 73.6 (1 C, OCH2(CH2)16CH3),
73.0 (1 C, OCH2(CH2)16CH3),
70.1 (1 C, C-4), 66.6 (1 C, OCH 2 CH2CH2N(CH3)3),
64.9 (1 C, OCH 2 CH2 CH2N(CH3)3),
61.6 (1 C, C-6), 53.9, 53.9, 53.9 (3 C, OCH 2 CH2CH2N(CH3)3),
31.9, 30.4, 29.7, 29.6, 29.3, 26.2, 26.1, 24.5, 22.7 (33 C some signals were
overlapped, 2 OCH2(CH2)16CH3,
OCH2 CH2CH2N(CH3)3),
14.1, 14.1 (2 C, 2 OCH2CH2(CH2)15 CH3).
取3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷(9.1 mg, 0.01
mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体di-C18-Glu-TMA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径132.70
nm，PDI分布0.146，表面电势+41.4 mv，pH = 6.37。
实施例5. 葡萄糖衍生物阳离子脂质体Glu-DiC12MA纳米颗粒的制备：
在100.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 ( 3.9 g , 14.8 mmol)、PPh3
(7.8 g, 29.6 mmol)、 THF (50.0 mL)、H2O (5.0 mL)。混合物在75oC条件下回流反应3 h，用TLC (石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入水50.0
mL，有白色固体析出。过滤，浓缩，抽真空干燥得黄色浆状化合物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (3.0 g, 85.4%).
在100.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 ( 1.2 g , 5.1 mmol)、月桂基溴(5.1
g, 20.4 mmol)、无水K2CO3 (1.4 g, 10.2
mmol)、CH3OH (20.0 mL)、CH3CH2OH (20.0 mL)。反应混合物在75oC条件下回流反应48 h，用TLC (甲醇)监测反应至原料不再发生变化。往反应混合液中加入DCM (30.0 mL)，用水洗两遍，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1，体积比)分离纯化得黄色油状物3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.2 g, 41.3%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 4.30 (d, 1 H, J 1,2 = 7.5 Hz,
H-1), 3.95-3.85 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2
(C9H18)CH3)2), 3.88-3.70 (m,
2 H, H-6), 3.64-3.50 (m, 3 H, OCHHCH2CH2N(CH2
CH2(C9H18)CH3)2),
H-3, H-4), 3.39 (dd, 1 H, J 2,1 = 7.5 Hz, J 2,3 =
3.5 Hz, H-2), 3.30-3.28 (m, 1 H, H-5), 2.58-2.50 (m, 2 H, OCH2CH2CH 2N(CH2CH2
(C9H18)CH3)2), 2.44 (t, J =6.5
Hz,4 H, N(CH 2CH2(C9H18)CH3)2),
1.89-1.75 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH2CH2
(C9H18)CH3)2), 1.49-1.40 (m,
4 H, N(CH2CH 2(C9H18)CH3)2),
1.37-1.21 (m, 36 H, N(CH2CH2(C9 H 18)
CH3)2), 0.89 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, N(CH2CH2(C9H18)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.1 (1 C, C-1), 76.5 (1 C, C-3), 75.8 (1 C, C-5), 73.5 (1 C, C-2), 69.6
(1 C, C-4), 68.7 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
61.4 (1 C, C-6), 53.4, 53.4 (2 C, N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
50.7 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH2CH2(C9H18)
CH3)2), 31.9, 29.8, 29.7, 29.6, 29.3, 27.7, 27.2, 25.7,
22.6 (21 C, some signals were overlapped, N(CH2(C 10H20)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
14.1, 14.1 (2 C, N(CH2(C10H20)CH3)2).
在50.0 mL 圆底烧瓶中加入化合物3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 ( 250 mg , 0.44 mmol)、CH3I(250
mg, 1.76 mmol, 109.0 µL)、THF (5.0 mL) 。常温下反应，用TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入(CH3)2CO (10.0 mL)，有白色固体析出，过滤，干燥得白色粉末状固体3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(270
mg, 86.8%)。1H NMR (500 MHz,
CDCl3): δ (ppm): 5.09 (s,
1 H, OH), 4.88 (s, 2 H, 2 OH), 4.46 (d, 1 H, J 1,2 =
7.5 Hz, H-1), 4.10-4.00 (m, 2 H, OH, OCHHCH2CH2N(CH3)(C12H25)2),
3.86-3.75 (m, 3 H, H-6, OCHHCH2CH2N(CH3)
(C12H25)2), 3.74-3.50 (m, 4 H, H-3, H-4, OCH2CH2CH 2N(CH3)(C12H25)2),
3.44-3.30 (m, 6 H, H-2, H-5, (CH3)N(CH 2CH2(C9H18)CH3)2),
3.21 (s, 3 H, (CH 3)N(CH2CH2(C9 H18)CH3)2),
2.22-2.14 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH3)(C12H25)2),
1.75-1.67 (m, 2 H, (CH3)N(CH2CH 2(C9H18)CH3)2),
1.40-1.20 (m, 36 H, (CH3)N(CH2CH2(C9 H 18)CH3)2),
0.86 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, (CH3)N(CH2CH2(C9H18)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 102.7 (1 C, C-1), 76.2 (1 C, C-3), 75.9 (1 C, C-5), 73.2 (1 C, C-2), 69.8
(1 C, C-4), 66.2 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH3)(C12H25)2),
61.2, 61.2, 61.2 (3 C, OCH2CH2 CH2N(CH3)(CH2CH2(C9H18)
CH3)2), 60.8 (1 C, C-6), 49.4 (1 C, (CH3)N(CH2CH2(C9H18)CH3)2),
31.9, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 29.1, 26.3, 23.5, 22.6 (21 C, some signals were
overlapped, (CH3)N(CH2(C 10H20)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH3) (C12H25)2),
14.1, 14.1 (2 C, (CH3)N(CH2(C10H20)CH3)2).
取3’-(N-甲基-N,N -二-正十二烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(7.1 mg, 0.01 mmol)，用二次蒸馏水(10
mL)经超声波分散得阳离子脂质体Glu-DiC12MA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径247.10nm，PDI分布0.333，表面电势+69.5 mv，pH = 5.92。
实施例6. 葡萄糖衍生物阳离子脂质体Glu-DiC14MA纳米颗粒的制备：
在100.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 ( 1.9 g , 8.0 mmol)、豆蔻基溴(8.9
g, 32.0 mmol)无水K2CO3 (2.2 g, 16.0
mmol)、CH3OH (20.0 mL)、CH3CH2OH (20.0 mL)。反应混合物在75oC条件下回流反应48 h，用TLC (甲醇)监测反应至原料不再发生变化。往反应混合液中加入DCM (30.0 mL)，用水洗两遍，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1，体积比)分离纯化得黄色油状物3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.6 g, 32.9%)。1H NMR
(500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 4.30 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 3.93-3.87 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2
(C11H22)CH3)2), 3.82-3.77 (m,
2 H, H-6), 3.64-3.50 (m, 3 H, OCHHCH2CH2N (CH2CH2(C11H22)CH3)2),
H-3, H-4), 3.35 (dd, 1 H, J 2,1 = 7.5 Hz, J 2,3 =
3.5 Hz, H-2), 3.30-3.25 (m, 1 H, H-5), 2.78-2.65 (m, 2 H, OCH2CH2CH 2N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
2.57 (t, J =6.5 Hz,4 H, N(CH 2CH2(C11H22)CH3)2),
1.85-1.80 (m, 2 H, OCH2CH 2 CH2N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
1.50-1.40 (m, 4 H, N(CH2CH 2(C11H22)CH3)2),
1.37- 1.21 (m, 44 H, N(CH2CH2(C11 H 22)CH3)2),
0.89 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, N(CH2CH2 (C11H22)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.1 (1 C, C-1), 76.6 (1 C, C-3), 76.0 (1 C, C-5), 73.5 (1 C, C-2), 70.0
(1 C, C-4), 68.2 (1 C, OCH2CH2CH2N (CH2CH2(C11H22)CH3)2),
61.7 (1 C, C-6), 52.8, 52.8 (2 C, N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
50.7 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH2CH2
(C11H22)CH3)2), 31.9, 29.7,
29.6, 29.5, 29.3, 27.4, 26.3, 24.9, 22.6 (25 C, some signals were overlapped,
N(CH2(C 12H24)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
14.1, 14.1 (2 C, N(CH2(C12H24)CH3)2).
在50.0 mL 圆底烧瓶中加入化合物3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (
220 mg , 0.32 mmol)、CH3I(250
mg, 1.28 mmol, 79.0 µL)、THF (5.0 mL) 。常温下反应，用TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入(CH3)2CO (10.0 mL)，有白色固体析出，过滤，干燥得白色粉末状固体3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (160
mg, 59.2%)。1H NMR (500 MHz,
CDCl3): δ (ppm): 5.11 (s,
1 H, OH), 4.89 (s, 2 H, 2 OH), 4.44 (d, 1 H, J 1,2 =
7.5 Hz, H-1), 4.10-4.00 (m, 2 H, OH, OCHHCH2CH2N(CH3)(C14H29)2),
3.84-3.73 (m, 3 H, H-6, OCHHCH2CH2N(CH3)
(C14H29)2), 3.74-3.50 (m, 4 H, H-3, H-4, OCH2CH2CH 2N(CH3)(C14H29)2),
3.44-3.28 (m, 6 H, H-2, H-5, (CH3)N(CH 2CH2(C11H22)CH3)2),
3.20 (s, 3 H, (CH 3)N(CH2CH2 (C11H22)CH3)2),
2.20-2.10 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH3)(C14H29)2),
1.72-1.60 (m, 2 H, (CH3)N(CH2CH 2(C11H22)CH3)2),
1.40-1.20 (m, 44 H, (CH3)N(CH2CH2(C11 H 22)
CH3)2), 0.85 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, (CH3)N(CH2CH2(C11H22)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 102.7 (1 C, C-1), 76.2 (1 C, C-3), 75.9 (1 C, C-5), 73.2 (1 C, C-2), 69.8
(1 C, C-4), 66.2 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH3)(C14H29)2),
61.2, 61.2, 61.2 (3 C, OCH2CH2 CH2N(CH3)(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
60.8 (1 C, C-6), 49.4 (1 C, (CH3)N(CH2CH2(C11H22)CH3)2),
31.8, 29.6, 29.5, 29.4, 29.3, 29.1, 26.3, 23.5, 22.5 (25 C, some signals were
overlapped, (CH3)N(CH2(C 12H24)CH3)2),
OCH2 CH2 CH2N(CH3)(C14H29)2
), 14.0, 14.0 (2 C, (CH3)N(CH2(C12H24)CH3)2).
取3’-(N-甲基-N,N -二正十四烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(7.7
mg, 0.01 mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体Glu-DiC14MA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径80.48
nm，PDI分布0.429，表面电势+62.5 mv，pH = 6.64。
实施例7. 葡萄糖衍生物阳离子脂质体Glu-DiC16MA纳米颗粒的制备：
在100.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 ( 1.2 g , 5.1 mmol)、鲸蜡基溴(6.2
g, 20.4 mmol)无水K2CO3 (1.4 g, 10.2
mmol)、CH3OH (20.0 mL)、CH3CH2OH (20.0 mL)。反应混合物在75oC条件下回流反应48 h，用TLC (甲醇)监测反应至原料不再发生变化。往反应混合液中加入DCM (30.0 mL)，用水洗两遍，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1，体积比)分离纯化得黄色油状物3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (1.1 g, 32.4%)。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ (ppm): 4.30 (d, 1 H, J 1,2 = 7.0 Hz,
H-1), 3.93-3.87 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2
(C13H26)CH3)2), 3.86-3.78 (m,
2 H, H-6), 3.60-3.51 (m, 3 H, OCHHCH2CH2N(CH2
CH2(C13H26)CH3)2),
H-3, H-4), 3.36 (dd, 1 H, J 2,1 = 7.0 Hz, J 2,3 =
3.5 Hz, H-2), 3.30-3.25 (m, 1 H, H-5), 2.78-2.57 (m, 2 H, OCH2CH2CH 2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
2.57 (t, J =6.5 Hz,4 H, N(CH 2CH2(C13H26)CH3)2),
1.83-1.73 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
1.50-1.40 (m, 4 H, N(CH2CH 2(C13H26)
CH3)2), 1.31-1.21 (m, 52 H, N(CH2CH2(C13 H 26)CH3)2),
0.87 (t, 6 H, J = 7.0 Hz, N(CH2CH2(C13H26)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.1 (1 C, C-1), 76.5 (1 C, C-3), 76.0 (1 C, C-5), 73.5 (1 C, C-2), 70.0
(1 C, C-4), 68.4 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
61.6 (1 C, C-6), 53.1, 53.1 (2 C, N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
50.8 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 27.6, 26.7, 25.3, 22.7 (29 C, some signals were
overlapped, N(CH2(C 14H24)CH3)2,
OCH2 CH2CH2N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
14.1, 14.1 (2 C, N(CH2(C14H28)CH3)2).
在50.0 mL 圆底烧瓶中加入化合物3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 ( 200 mg , 0.3 mmol)、CH3I
(170 mg, 1.2 mmol, 75.0 µL)、THF (5.0 mL) 。常温下反应，用TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入(CH3)2CO (10.0 mL)，有白色固体析出，过滤，干燥得白色粉末状固体3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(150
mg, 60.4%)。1H NMR (500 MHz,
CDCl3): δ (ppm): 4.43 (d,
1 H, J 1,2 = 7.5 Hz, H-1), 4.03-3.97 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH3)(C16H33)2),
3.93-3.90 (m, 1 H, H-6a), 3.82- 3.75 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH3)(C16H33)2)2),
3.73-3.66 (m, 1 H, H-6b), 3.35-3.49 (m, 2 H, OCH2CH2CH 2N(CH3)(C16H33)2),
3.43-3.26 (m, 7 H, OCH2CH2CH2N(CH3)CH 2CH2(C13H26)2CH3,
H-3, H-4, H-5), 3.22-3.19 (dd, 1 H, J 2,1 = 7.5 Hz, J 2,3
= 4.0 Hz), 3.09 (s, 3 H, (CH 3)N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
2.14-2.05 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH3)(C16H33)2),
1.82-1.75 (m, 4 H, (CH3)N(CH2CH 2(C13H26)
CH3)2), 1.50-1.20 (m, 52 H, (CH3)N(CH2CH2(C13 H 26)CH3)2),
0.93 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, (CH3)N(CH2CH2(C13H26)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.0 (1 C, C-1), 76.6, 76.6 (2 C, C-3, C-3), 73.6 (1 C, C-2), 70.0 (1 C,
C-4), 65.9 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH3)(C16H33)2),
61.4, 61.4, (2 C, N(CH3)(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
61.3 (1 C, C-6), 59.4 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH3)(C16H33)2),48.1
(1 C, (CH3)N(CH2CH2(C13H26)CH3)2),
31.6, 29.3, 29.2, 29.1, 28.7, 26.0, 22.8, 22.3, 21.7 (29 C, some signals were
overlapped, (CH3)N(CH2(C 14H28)CH3)2),
OCH2 CH2CH2N (CH3)(C16H33)2),
13.0, 13.0 (2 C, (CH3)N(CH2 (C14H28)CH3)2).
取3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(8.3
mg, 0.01 mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体Glu-DiC16MA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径75.04
nm，PDI分布0.338，表面电势+40.0 mv，pH = 6.20。
实施例8. 葡萄糖衍生物阳离子脂质体Glu-DiC18MA纳米颗粒的制备：
在100.0 mL圆底烧瓶中加入化合物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 ( 1.3 g , 5.5 mmol)、硬脂基溴(7.3
g, 22.0 mmol)无水K2CO3 (1.5 g, 11.0
mmol)、CH3OH (20.0 mL)、CH3CH2OH (20.0 mL)。反应混合物在75oC条件下回流反应48 h，用TLC (甲醇)监测反应至原料不再发生变化。往反应混合液中加入DCM (30.0 mL)，用水洗两遍，有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。经柱层析(洗脱剂：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1，体积比)分离纯化得黄色油状物3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(1.1 g, 26.9%).1H NMR (500 MHz, CDCl3):
δ (ppm): 4.30 (d, 1 H, J 1,2 =
7.5 Hz, H-1), 3.93-3.87 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
3.86-3.78 (m, 2 H, H-6), 3.65-3.58 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
3.65-3.58 (m, 2 H, H-3, H-4), 3.38-3.32 (m, 1 H, H-2), 3.32-3.26 (m, 1 H,
H-5), 2.83-2.70 (m, 2 H, OCH2CH2CH 2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
2.61 (t, J =6.5 Hz,4 H, N(CH 2CH2(C15H30)
CH3)2), 1.90-1.85 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
1.52-1.45 (m, 4 H, N(CH2CH 2(C15H30)CH3)2),
1.30-1.20 (m, 60 H, N(CH2 CH2(C15 H 30)CH3)2),
0.87 (t, 6 H, J = 6.5 Hz, N(CH2CH2(C15H30)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.0 (1 C, C-1), 76.4 (1 C, C-3), 76.1 (1 C, C-5), 73.4 (1 C, C-2), 69.8
(1 C, C-4), 68.0 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
61.5 (1 C, C-6), 52.7, 52.7 (2 C, N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
50.8 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
31.9, 29.7, 29.6, 29.5, 29.3, 27.4, 26.2, 24.7, 24.5, 22.7 (33 C, some signals
were overlapped, N(CH2(C 16H32)CH3)2,
OCH2 CH2CH2N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
14.1, 14.1 (2 C, N(CH2(C16H32)CH3)2).
在50.0 mL 圆底烧瓶中加入化合物3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(
300.0 mg , 0.4 mmol)、CH3I(227.0
mg, 1.6 mmol, 100.8 µL)、THF (5.0 mL)。常温下反应，用TLC (乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1，体积比)监测反应至原料消失。旋蒸去除溶剂，加入(CH3)2CO (10.0 mL)，有白色固体析出，过滤，干燥得白色粉末状固体3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 (200.0 mg, 56.6%). 1H NMR (500
MHz, CDCl3): δ (ppm): 4.30 (d,
1 H, J 1,2 = 8.0 Hz, H-1), 4.03-3.94 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N(CH3)(C18H37)2),
3.93-3.87 (m, 1 H, H-6a), 3.78- 3.72 (m, 1 H, OCHHCH2CH2N
(CH3)(C18H37)2), 3.68-3.64 (m, 1 H,
H-6b), 3.37-3.45 (m, 2 H, OCH2CH2CH 2N(CH3)(C18H37)2),
3.40-3.26 (m, 7 H, OCH2CH2CH2N(CH3)(CH 2CH2
(C15H30)CH3)2, H-3, H-4,
H-5), 3.18 (dd, 1 H, J 2,1 = 8.0 Hz, J 2,3 =
4.0 Hz, H-2), 3.05 (s, 3 H, (CH 3)N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
2.10-2.05 (m, 2 H, OCH2CH 2CH2N(CH3)
(C18H37)2), 1.80-1.70 (m, 4 H, (CH3)N(CH2CH 2(C15H30)CH3)2),
1.50-1.20 (m, 60 H, (CH3)N(CH2CH2(C15 H 30)CH3)2),
0.93 (t, 6 H, J = 6.0 Hz, (CH3)N(CH2CH2 (C15H30)CH 3)2);
13C NMR (125 MHz, CDCl3): δ
(ppm) 103.0 (1 C, C-1), 76.7, 76.7 (2 C, C-3, C-5), 73.6 (1 C, C-2), 70.0 (1 C,
C-4), 65.9 (1 C, OCH2CH2CH2N(CH3)
(C18H37)2), 61.4, 61.4, (2 C, N(CH3)(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
61.3 (1 C, C-6), 59.4 (1 C, OCH2CH2 CH2N(CH3)(C18H37)2),
48.1 (1 C, (CH3)N(CH2CH2(C15H30)CH3)2),
31.6, 29.4, 29.2, 29.1, 28.7, 26.0, 22.7, 22.3, 21.7 (33 C, some signals were
overlapped, (CH3)N(CH2(C 16H32)CH3)2),
), 13.0, 13.0 (2 C, (CH3)N(CH2 (C16H32)CH3)2).
取3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(8.8
mg, 0.01 mmol)，用二次蒸馏水(10 mL)经超声波分散得阳离子脂质体Glu-DiC18MA纳米颗粒，用Zetasizer Nano ZS仪测得平均粒径462.30
nm，PDI分布0.444，表面电势+25.0 mv，pH = 6.72。
各种阳离子脂质体经水超声分散后，所得阳离子脂质体纳米颗粒的平均粒径、PDI分布、Zeta表面电势以及pH值见表1。表中数据表明，所得阳离子脂质体纳米颗粒的平均粒径为60-500
nm；PDI值较小，粒径分布相对集中；多数阳离子脂质体纳米颗粒具有较高的表面电势(36-70
mv)和适中的pH值。上述各物理参数表明，所得的葡糖糖阳离子脂质体纳米颗粒具有通过静电作用结合和转运基因类药物的潜力。
表1 水分散后阳离子脂质体的平均粒径、PDI分布、Zeta表面电势以及pH值
Claims (11)
1.一系列葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：
(1) 以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为酰化剂及反应溶剂，经酸催化乙酰化反应，经结晶纯化处理得到白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖；
(2) 以二氧六环和甲醇为混合溶剂，1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖与氨气反应，选择性脱1-O-乙酰基，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖；
(3) 以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾为催化剂，2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得淡色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯；
(4) 以无水二氯甲烷为溶剂，三氟甲磺酸三甲基硅酯(简称为TMSOTf)为催化剂，步骤(3)所得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯与3-氯-1-丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(5) 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到白色固体3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(6) 以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与氨气反应脱去全部乙酰基，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基β-D-吡喃葡萄糖苷；
(7) 室温下，以浓硫酸为催化剂，骤(6)所得产物与2,2-二甲氧基丙烷反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(8) 以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，以氢化钠为催化剂，3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷与正烷基溴发生威廉姆逊醚化反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-二正烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(9) 以甲醇为溶剂，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷与乙酰氯反应脱去异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷；
(10) 以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷与甲醛和氢气反应得到叔胺，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄苷；
(11) 步骤(10)得到的3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正烷基-β-D-吡喃葡萄 苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(12) 以步骤(6)得到的3’-叠氮基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮得到伯胺，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷；
(13) 以甲醇、乙醇为溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下，步骤(12)得到的3’-氨基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷与溴代烷烃反应，经柱层析分离纯化得无色油状物3’-(N,N-二正烷基)丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷；
(14) 步骤(13)得到的3’-(N,N-二正烷基)丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷与碘甲烷进行季铵盐化反应，经柱层析分离纯化得白色固体；
(15) 步骤(11)和步骤(14)得到的固体经超声波振荡水分散后得到相应的葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(4) 3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：以葡萄糖为原料，以高氯酸为催化剂，乙酸酐为溶剂及反应物，浓缩，结晶得白色粉末状固体1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，反应温度：10oC~20oC；反应时间：10 h；反应投料比为：葡萄糖(mol)
: 乙酸酐(mol) : 高氯酸(mol) = 1 : 7.5 : 0.06；结晶使用溶剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 10 : 1(体积比)；所得产物1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，以二氧六环和甲醇为混合溶剂(二氧六环 : 甲醇 = 5 : 2，体积比)，常温下通入氨气反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，反应时间：20 min~40 min；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)；所得产物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖，以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，常温下与三氯乙腈反应，经柱层析分离纯化得淡黄色浆状物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，反应时间：24 h；反应投料比为：2,3,4,6-四-O-乙酰基-α,β-D-吡喃葡萄糖(mol) : 三氯乙腈(mol) : 无水碳酸钾(mol) = 1 : 2.5 : 1；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1(体积比)；所得产物2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯，以无水二氯甲烷为溶剂，4Ǻ分子筛为除水剂，以TMSOTf为催化剂，在氮气的保护下与3-氯-1-丙醇反应，经柱层析分离纯化得白色晶体3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：-20oC至室温；反应时间：4 h；反应投料比为：2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖三氯乙酰亚胺酯(mol)
: 3-氯丙醇(mol) :
TMSOTf (mol) = 1 : 2.4 : 0.01；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1(体积比)。
3.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(7) 3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，在加热条件下，3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC，反应时间：24 h；反应投料比为：3’-氯丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 叠氮化钠(mol) = 1 : 6；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 3 : 1(体积比)；以甲醇为溶剂，通入氨气至饱和条件下，脱除3’-叠氮基丙基 2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷的乙酰基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：24
h；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 2 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以2,2-二甲氧基丙烷为溶剂及反应物，以浓硫酸为催化剂，室温反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：4
h，柱层析分离洗脱剂为：石油醚
: 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)。
4.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)
3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷的合成：步骤(7)所得产物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 月桂基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，在甲醇-乙酰氯条件下去异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：0oC至室温；反应时间：1 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 乙酰氯(mol) = 1 : 8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：24
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 8，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：3 h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，真空干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十二烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C12-Glu-TMA)纳米颗粒。
5.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)
3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷的合成：步骤(7)所得产物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与肉豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 肉豆蔻基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：0oC至室温；反应时间：1 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 乙酰氯(mol) = 1 : 8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：24
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 8，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：3 h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十四烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C14-Glu-TMA)纳米颗粒。
6.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)
3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷的合成：步骤(7)所得产物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与鲸蜡基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol) : 鲸蜡基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：0oC至室温；反应时间：1 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 乙酰氯(mol) = 1 : 8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：24
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 8，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：3 h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十六烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C16-Glu-TMA)纳米颗粒。
7.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(11)
3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷的合成：步骤(7)所得产物3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖，以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为催化剂，常温下与硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：10
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 氢化钠(mol): 硬脂基溴(mol) = 1 : 6 : 4；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 16 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，与乙酰氯反应脱除异丙叉基，经柱层析分离纯化得3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：0oC至室温；反应时间：1 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-4,6-O-异丙叉基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 乙酰氯(mol) = 1 : 8；柱层析分离洗脱剂为：石油醚 : 乙酸乙酯 = 2 : 1(体积比)；所得产物3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇为溶剂，钯碳为催化剂，与甲醛和氢气反应，经柱层析分离纯化得3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：24
h；反应投料比：3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 甲醛(mol) = 1 : 8，3’-叠氮基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷(g) : 钯碳(g) = 1 : 0.3；柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 5 : 1(体积比)；所得产物3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，分离纯化得3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷，反应时间：3 h；反应投料比：3’-N,N-二甲胺基丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷(mol) : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；反应混合液经冰浴冷却析晶，过滤，干燥，得白色固体；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N,N,N-三甲基碘化铵基)丙基 2,3-二-O-正十八烷基-β-D-吡喃葡萄苷(简写为di-C18-Glu-TMA)纳米颗粒。
8.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(13)
3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：以步骤(6)所得产物3’-叠氮基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷为原料，以四氢呋喃和水为溶剂，用三苯基膦还原叠氮基为氨基，分离纯化得到3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：3 h；反应投料比：3’-叠氮基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷(mol) : 三苯基膦(mol) = 1 : 2；纯化：加水除去杂质；所得产物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与月桂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷 : 月桂基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得产物3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h，反应投料比：3’-(N,N-二正十二烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十二烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为Glu-DiC12MA)纳米颗粒。
9.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(13)
3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：步骤(6)所得产物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与肉豆蔻基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷 : 肉豆蔻基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得产物3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h，反应投料比：3’-(N,N-二正十四烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十四烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为Glu-DiC14MA)纳米颗粒。
10.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(13)
3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：所得3’-氨基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与鲸蜡基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷 : 鲸蜡基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得产物3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h，反应投料比：3’-(N,N-二正十六烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十六烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为Glu-DiC16MA)纳米颗粒。
11.根据权利要求1所述葡萄糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于步骤(13)
3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷的合成：步骤(6)所得产物3’-氨基丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以甲醇和乙醇为混合溶剂，无水碳酸钾为缚酸剂，在加热的条件下与硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应温度：75oC；反应时间：48 h；反应投料比：3’-氨基丙基
β-D-吡喃葡萄糖苷 : 硬脂基溴(mol) : 无水碳酸钾 = 1 : 4 : 2，柱层析分离洗脱剂为：乙酸乙酯 : 甲醇 = 4 : 1(体积比)；所得产物3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，以四氢呋喃为溶剂，常温下与碘甲烷反应，丙酮结晶得3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷，反应时间：3
h，反应投料比：3’-(N,N-二正十八烷基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷 : 碘甲烷(mol) = 1 : 4；纯化：丙酮结晶；所得白色固体经超声波振荡水分散后得到阳离子脂质体3’-(N-甲基-N,N-二正十八烷基碘化铵基)丙基 β-D-吡喃葡萄糖苷(简写为Glu-DiC18MA)纳米颗粒。
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