CN105566413A - 一种栀子苷的分离纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种栀子苷的分离纯化方法，属于栀子苷分离纯化技术领域。本发明将栀子青果榨汁后，用黄酒醇提，并透析浓缩，随后将透析浓缩液经过大孔树脂柱吸附脱色，并用甲酯对其进行结晶，之后将栀子苷晶体重新溶于乙酸乙酯中，再次进行浓缩，最后将浓缩液加入冰水浴中，重新结晶后干燥，从而得到栀子苷的分离纯化方法。实例证明，本发明不仅操作简便，无任何有毒试剂添加，绿色环保，而且制得的栀子苷粉末产品中无任何杂质，使得纯度纯度>98%，产品收率>97％，适合工业化生产。

Description

一种栀子苷的分离纯化方法

技术领域

本发明公开了一种栀子苷的分离纯化方法，属于栀子苷分离纯化技术领域。

背景技术

栀子为栀子属茜草科常绿灌木栀子的果实，为我国大宗传统中药材，入选中国卫生部首批药食两用中药材名录，为国家中药保护品种清开灵注射液、龙胆泻肝片和茵胆平肝胶囊的主要药效成分，是中医临床治疗黄疸型肝炎的首选药物和提取栀子天然色素的原料，盛产于闽、浙、赣、徽、湘等省山区。

栀子苷是从茜草科植物栀子的干燥成熟果实中运用的高科技手段提取精制而成的结晶性产品，分子量为388，外观为白色针状结晶，熔点为148～150℃，易溶于水和甲醇、乙醇等亲水性有机溶剂，难溶于乙醚、氯仿、四氯化碳等疏水性有机溶剂，主要成分的环烯醚萜苷类化合物具有利胆护肝、清热解毒功能，广泛用于中医临床治疗黄疸型肝炎。

目前，栀子苷的分离纯化主要有：铅盐沉淀法、活性炭除杂法、大孔树脂吸附法。

（1）铅盐沉淀法是利用中性醋酸铅或醋酸铅在水或稀醇溶液中能与许多物质生产难溶的铅盐或络盐，通常将铅盐沉淀滤除，然后将沉淀悬于水或者稀醇中，通硫化氢气体或硫酸钠等试剂进行脱铅，即可回收提取物；

（2）活性炭除杂法是利用活性炭的物理吸附、化学吸附、氧化、催化氧化和还原等性能对提取物进行杂质吸附；

（3）大孔树脂吸附是将栀子果粉碎然后用乙醇水溶液回流提取，得到粗提液，浓缩后直接上大孔树脂柱，最后以一定浓度的乙醇为洗脱剂进行洗脱，收集流出液使栀子苷得以纯化，这种方法不仅无法去除极性稍强于栀子苷的环烯醚萜苷类成分，而且弱极性杂质残留很多；会使得内孔残留惰性溶剂高，预处理难度大，解吸不充分，影响分离效果，树脂再生困难，生产成本增加。

以上三种方法中第一、二种方法工艺复杂、耗物过大、收得率低、而且大量使用有毒有害的试剂，如乙醚、氯仿、甲醇、丙酮、铅盐等，对于人体和环境都有危害，不符合食品、药品的生产规范，第三种方法杂质得到的栀子苷纯度低，含有较多的杂质。

我国栀子种植面积大，资源丰富，因此进一步开展低成本、高品质栀子系列产品的制备工艺研究，对实现栀子的综合开发利用具有重大意义。

发明内容

本发明主要解决的技术问题：针对目前利用常用方法对栀子苷进行分离纯化时，虽可以将栀子苷进行分离纯化，但还是存在含有较多杂质，导致收率低，纯度低，且提取过程中工艺复杂，处理困难，需要使用大量的有毒试剂，对人体和环境造成危害的现状，提供了一种将栀子青果榨汁后，用黄酒醇提，并透析浓缩，随后将透析浓缩液经过大孔树脂柱吸附脱色，并用甲酯对其进行结晶，之后将栀子苷晶体重新溶于乙酸乙酯中，再次进行浓缩，最后将浓缩液加入冰水浴中，重新结晶后干燥，从而得到栀子苷的分离纯化方法。该方法不仅操作简便，无任何有毒试剂添加，绿色环保，而且制得的栀子苷粉末产品中无任何杂质，使得纯度纯度>98%，产品收率>97％，适合工业化生产。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

（1）采集500～600g7月初至8月初未成熟的栀子青果，放入清水中，反复搓洗，去除表面残留的污物后，置于榨汁机中，榨汁15～25min，得果浆混合物；

（2）将上述得到的果浆混合物倒入1L的烧杯中，并向烧杯中加入果浆混合物质量1～3倍的黄酒，放置在超声振荡仪中，在频率为25～30KHz，功率为120～180W下振荡反应1～2h，待振荡完成，过滤，除去滤渣，得到滤液；

（3）将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提40～45min，收集滤液抽提液，并将其移入蒸馏装置，在60～70℃下水浴加热35～45min，蒸馏去除黄酒，得到栀子青果提取液；

（4）将上述得到的栀子青果提取液倒入经反渗透膜制成的透析袋中，以水为媒介，对其进行透析浓缩，直至透析袋中提取液体积变为原有体积1/3时，停止透析浓缩，得到栀子青果浓缩液；

（5）将上述得到的栀子青果浓缩液经过非极性大孔树脂柱，从大孔树脂柱的顶部流入，控制流速为10～15mL/min，反复洗脱脱色3～5次，收集大孔树脂柱底部流出的洗脱液，放入反应釜中，并向反应釜中加入洗脱液1～2倍质量浓度为35％的甲酯溶液，混合均匀，于5～7℃冷藏，放置养晶、过滤，得栀子苷晶体；

（6）将上述得到的栀子苷晶体在室温的条件下，加入栀子苷晶体体积2～3倍的质量浓度为38％的乙酸乙酯，之后以5～10℃/min的速率提升温度至80～100℃，使其完全溶解，待溶解后，将溶解后的混合液放入浓缩罐中，降低罐内压力为1000～1200Pa，减压浓缩直至浓缩罐内混合液体积为原有体积1/3～1/2时，停止浓缩，得二次浓缩液；

（7）将上述得到的二次浓缩液倒入1L的烧杯，置于4～5℃冰水浴中，静置过夜，使其重结晶，得栀子苷晶体，随后将得到的栀子苷晶体用无水乙醇淋洗3～5次，待淋洗结束，放入干燥箱中于90～95℃下干燥，粉碎后得分离纯化后的栀子苷粉末产品。

所述的非极性大孔树脂柱为HPD-100、D101、1300-1中的任意一种。

本发明的应用方法是：取20～30g本发明制得的栀子苷粉末产品，向其中加入50～60mL去离子水，使其完全溶解，随后再向其中加入1～2g矫味剂以及0.8～1g防腐剂，待加入完毕，充分搅拌均匀，用质量浓度为37％的盐酸溶液调节pH值为7.2～7.5为止，接下来定容至500mL，并过滤后放于紫光灯下灭菌3～5h，最后通过分装制成30mL/支的口服液。食用时，早晚各一支，即可，具有利胆护肝、清热解毒功能，尤其适用于黄疸型肝炎患者。

本发明的有益效果是：

（1）本发明方法简单，操作简便，无任何有毒试剂添加，绿色环保，提高了栀子苷分离纯化的效率，使得产品收率>97％，适合工业化生产；

（2）本发明所制栀子苷粉末产品中无任何杂质，且纯度>98%，具有现代中成药“三高”、“三小”和“三便”等优点，具有较大推广性。

具体实施方式

首先采集500～600g7月初至8月初未成熟的栀子青果，放入清水中，反复搓洗，去除表面残留的污物后，置于榨汁机中，榨汁15～25min，得果浆混合物；然后将上述得到的果浆混合物倒入1L的烧杯，并烧杯中加入果浆混合物质量1～3倍的黄酒，放置在超声振荡仪中，在频率为25～30KHz，功率为120～180W下振荡反应1～2h，待振荡完成，过滤，除去滤渣，得到滤液；随后将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提40～45min，收集滤液抽提液，并将其移入蒸馏装置，在60～70℃下水浴加热35～45min，蒸馏去除黄酒，得到栀子青果提取液；接下来将上述得到的栀子青果提取液倒入经反渗透膜制成的透析袋中，以水为媒介，对其进行透析浓缩，直至透析袋中提取液体积变为原有体积1/3时，停止透析浓缩，得到栀子青果浓缩液；将上述得到的栀子青果浓缩液经过非极性大孔树脂柱，从大孔树脂柱的顶部流入，控制流速为10～15mL/min，反复洗脱脱色3～5次，收集大孔树脂柱底部流出的洗脱液，放入反应釜中，并向反应釜中加入洗脱液1～2倍质量浓度为35％的甲酯溶液，混合均匀，于5～7℃冷藏，放置养晶、过滤，得栀子苷晶体；随后将上述得到的栀子苷晶体在室温的条件下，加入栀子苷晶体体积2～3倍的质量浓度为38％的乙酸乙酯，之后以5～10℃/min的速率提升温度至80～100℃，使其完全溶解，待溶解后，将溶解后的混合液放入浓缩罐中，降低罐内压力为1000～1200Pa，减压浓缩直至浓缩罐内混合液体积为原有体积1/3～1/2时，停止浓缩，得二次浓缩液；最后将上述得到的二次浓缩液倒入1L的烧杯，置于4～5℃冰水浴中，静置过夜，使其重结晶，得栀子苷晶体，随后将得到的栀子苷晶体用无水乙醇淋洗3～5次，待淋洗结束，放入干燥箱中于90～95℃下干燥，粉碎后得分离纯化后的栀子苷粉末产品。

所述的非极性大孔树脂柱为HPD-100、D101、1300-1中的任意一种。

实例1

首先采集500g7月初至8月初未成熟的栀子青果，放入清水中，反复搓洗，去除表面残留的污物后，置于榨汁机中，榨汁15min，得果浆混合物；然后将上述得到的果浆混合物倒入1L的烧杯，并向烧杯中加入果浆混合物质量1倍的黄酒，放置在超声振荡仪中，在频率为25KHz，功率为120W下振荡反应1h，待振荡完成，过滤，除去滤渣，得到滤液；随后将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提40min，收集滤液抽提液，并将其移入蒸馏装置，在60℃下水浴加热35min，蒸馏去除黄酒，得到栀子青果提取液；接下来将上述得到的栀子青果提取液倒入经反渗透膜制成的透析袋中，以水为媒介，对其进行透析浓缩，直至透析袋中提取液体积变为原有体积1/3时，停止透析浓缩，得到栀子青果浓缩液；将上述得到的栀子青果浓缩液经过非极性大孔树脂柱，从大孔树脂柱的顶部流入，控制流速为10mL/min，反复洗脱脱色3次，收集大孔树脂柱底部流出的洗脱液，放入反应釜中，并向反应釜中加入洗脱液1倍质量浓度为35％的甲酯溶液，混合均匀，于5℃冷藏，放置养晶、过滤，得栀子苷晶体；随后将上述得到的栀子苷晶体在室温的条件下，加入栀子苷晶体体积2倍的质量浓度为38％的乙酸乙酯，之后以5℃/min的速率提升温度至80℃，使其完全溶解，待溶解后，将溶解后的混合液放入浓缩罐中，降低罐内压力为1000Pa，减压浓缩直至浓缩罐内混合液体积为原有体积1/3时，停止浓缩，得二次浓缩液；最后将上述得到的二次浓缩液倒入1L的烧杯，置于4℃冰水浴中，静置过夜，使其重结晶，得栀子苷晶体，随后将得到的栀子苷晶体用无水乙醇淋洗3次，待淋洗结束，放入干燥箱中于90℃下干燥，粉碎后得分离纯化后的栀子苷粉末产品。

本实例操作简单易行，取20g本发明制得的栀子苷粉末产品，向其中加入50mL去离子水，使其完全溶解，随后再向其中加入1g矫味剂以及0.8g防腐剂，待加入完毕，充分搅拌均匀，用质量浓度为37％的盐酸溶液调节pH值为7.2为止，接下来定容至500mL，并过滤后放于紫光灯下灭菌3h，最后通过分装制成30mL/支的口服液。食用时，早晚各一支，即可，具有利胆护肝、清热解毒功能，尤其适用于黄疸型肝炎患者。

实例2

首先采集550g7月初至8月初未成熟的栀子青果，放入清水中，反复搓洗，去除表面残留的污物后，置于榨汁机中，榨汁20min，得果浆混合物；然后将上述得到的果浆混合物倒入1L的烧杯，并向烧杯中加入果浆混合物质量2倍的黄酒，放置在超声振荡仪中，在频率为28KHz，功率为160W下振荡反应1.5h，待振荡完成，过滤，除去滤渣，得到滤液；随后将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提43min，收集滤液抽提液，并将其移入蒸馏装置，在65℃下水浴加热40min，蒸馏去除黄酒，得到栀子青果提取液；接下来将上述得到的栀子青果提取液倒入经反渗透膜制成的透析袋中，以水为媒介，对其进行透析浓缩，直至透析袋中提取液体积变为原有体积5/12时，停止透析浓缩，得到栀子青果浓缩液；将上述得到的栀子青果浓缩液经过非极性大孔树脂柱，从大孔树脂柱的顶部流入，控制流速为13mL/min，反复洗脱脱色4次，收集大孔树脂柱底部流出的洗脱液，放入反应釜中，并向反应釜中加入洗脱液1.5倍质量浓度为35％的甲酯溶液，混合均匀，于6℃冷藏，放置养晶、过滤，得栀子苷晶体；随后将上述得到的栀子苷晶体在室温的条件下，加入栀子苷晶体体积2.5倍的质量浓度为38％的乙酸乙酯，之后以8℃/min的速率提升温度至90℃，使其完全溶解，待溶解后，将溶解后的混合液放入浓缩罐中，降低罐内压力为1100Pa，减压浓缩直至浓缩罐内混合液体积为原有体积1/3～1/2时，停止浓缩，得二次浓缩液；最后将上述得到的二次浓缩液倒入1L的烧杯，置于4.5℃冰水浴中，静置过夜，使其重结晶，得栀子苷晶体，随后将得到的栀子苷晶体用无水乙醇淋洗4次，待淋洗结束，放入干燥箱中于93℃下干燥，粉碎后得分离纯化后的栀子苷粉末产品。

本实例操作简单易行，取25g本发明制得的栀子苷粉末产品，向其中加入55mL去离子水，使其完全溶解，随后再向其中加入1.5g矫味剂以及0.9g防腐剂，待加入完毕，充分搅拌均匀，用质量浓度为37％的盐酸溶液调节pH值为7.4为止，接下来定容至500mL，并过滤后放于紫光灯下灭菌4h，最后通过分装制成30mL/支的口服液。食用时，早晚各一支，即可，具有利胆护肝、清热解毒功能，尤其适用于黄疸型肝炎患者。

实例3

首先采集600g7月初至8月初未成熟的栀子青果，放入清水中，反复搓洗，去除表面残留的污物后，置于榨汁机中，榨汁25min，得果浆混合物；然后将上述得到的果浆混合物倒入1L的烧杯，并向烧杯中加入果浆混合物质量3倍的黄酒，放置在超声振荡仪中，在频率为30KHz，功率为180W下振荡反应2h，待振荡完成，过滤，除去滤渣，得到滤液；随后将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提45min，收集滤液抽提液，并将其移入蒸馏装置，在70℃下水浴加热45min，蒸馏去除黄酒，得到栀子青果提取液；接下来将上述得到的栀子青果提取液倒入经反渗透膜制成的透析袋中，以水为媒介，对其进行透析浓缩，直至透析袋中提取液体积变为原有体积1/3时，停止透析浓缩，得到栀子青果浓缩液；将上述得到的栀子青果浓缩液经过非极性大孔树脂柱，从大孔树脂柱的顶部流入，控制流速为15mL/min，反复洗脱脱色5次，收集大孔树脂柱底部流出的洗脱液，放入反应釜中，并向反应釜中加入洗脱液2倍质量浓度为35％的甲酯溶液，混合均匀，于7℃冷藏，放置养晶、过滤，得栀子苷晶体；随后将上述得到的栀子苷晶体在室温的条件下，加入栀子苷晶体体积3倍的质量浓度为38％的乙酸乙酯，之后以10℃/min的速率提升温度至100℃，使其完全溶解，待溶解后，将溶解后的混合液放入浓缩罐中，降低罐内压力为1200Pa，减压浓缩直至浓缩罐内混合液体积为原有体积1/2时，停止浓缩，得二次浓缩液；最后将上述得到的二次浓缩液倒入1L的烧杯，置于5℃冰水浴中，静置过夜，使其重结晶，得栀子苷晶体，随后将得到的栀子苷晶体用无水乙醇淋洗5次，待淋洗结束，放入干燥箱中于95℃下干燥，粉碎后得分离纯化后的栀子苷粉末产品。

本实例操作简单易行，取30g本发明制得的栀子苷粉末产品，向其中加入60mL去离子水，使其完全溶解，随后再向其中加入2g矫味剂以及1g防腐剂，待加入完毕，充分搅拌均匀，用质量浓度为37％的盐酸溶液调节pH值为7.5为止，接下来定容至500mL，并过滤后放于紫光灯下灭菌5h，最后通过分装制成30mL/支的口服液。食用时，早晚各一支，即可，具有利胆护肝、清热解毒功能，尤其适用于黄疸型肝炎患者。

Claims (2)

1.一种栀子苷的分离纯化方法，其特征在于具体操作步骤为：

（1）采集500～600g7月初至8月初未成熟的栀子青果，放入清水中，反复搓洗，去除表面残留的污物后，置于榨汁机中，榨汁15～25min，得果浆混合物；

（2）将上述得到的果浆混合物倒入1L的烧杯中，并向烧杯中加入果浆混合物质量1～3倍的黄酒，放置在超声振荡仪中，在频率为25～30KHz，功率为120～180W下振荡反应1～2h，待振荡完成，过滤，除去滤渣，得到滤液；

（3）将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提40～45min，收集滤液抽提液，并将其移入蒸馏装置，在60～70℃下水浴加热35～45min，蒸馏去除黄酒，得到栀子青果提取液；

（4）将上述得到的栀子青果提取液倒入经反渗透膜制成的透析袋中，以水为媒介，对其进行透析浓缩，直至透析袋中提取液体积变为原有体积1/3时，停止透析浓缩，得到栀子青果浓缩液；

（5）将上述得到的栀子青果浓缩液经过非极性大孔树脂柱，从大孔树脂柱的顶部流入，控制流速为10～15mL/min，反复洗脱脱色3～5次，收集大孔树脂柱底部流出的洗脱液，放入反应釜中，并向反应釜中加入洗脱液1～2倍质量浓度为35％的甲酯溶液，混合均匀，于5～7℃冷藏，放置养晶、过滤，得栀子苷晶体；

（6）将上述得到的栀子苷晶体在室温的条件下，加入栀子苷晶体体积2～3倍的质量浓度为38％的乙酸乙酯，之后以5～10℃/min的速率提升温度至80～100℃，使其完全溶解，待溶解后，将溶解后的混合液放入浓缩罐中，降低罐内压力为1000～1200Pa，减压浓缩直至浓缩罐内混合液体积为原有体积1/3～1/2时，停止浓缩，得二次浓缩液；

（7）将上述得到的二次浓缩液倒入1L的烧杯，置于4～5℃冰水浴中，静置过夜，使其重结晶，得栀子苷晶体，随后将得到的栀子苷晶体用无水乙醇淋洗3～5次，待淋洗结束，放入干燥箱中于90～95℃下干燥，粉碎后得分离纯化后的栀子苷粉末产品。

2.根据权利要求1所述的一种栀子苷的分离纯化方法，其特征在于：所述的非极性大孔树脂柱为HPD-100、D101、1300-1中的任意一种。