CN105557516A - 消除组织培养苗细菌污染的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：步骤A、称取一定重量份的鱼腥草、芦荟、鹅不食草、艾叶、藿香和大蒜，混合后打浆或混合后加水浸泡一段时间再打浆，得中草药浆；步骤B、将所述中草药浆加入一定重量份的常规培养基中，混匀后高压灭菌，得去污培养基；步骤C、将污染的组织培养苗转接到所述去污培养基中培养7-10天；步骤D、重复步骤A至步骤C，直至所述污染的组织培养苗的污染消除，得去污组织培养苗；步骤E、将所述去污组织培养苗转入常规培养基中继续培养。本发明具有杀菌效果好，对组织培养苗的损伤小，成本低，操作简便，适用于工业推广等优点。

Description

消除组织培养苗细菌污染的方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域。更具体地说，本发明涉及一种消除组织培养苗细菌污染的方法。
背景技术
在植物组织培养过程中，污染现象是目前组织培养过程中三大难题之一，由于各种原因，造成组织培养苗出现细菌污染，被污染后的组织培养苗一般是弃之另作，在生产过程中污染细菌生长讯速，且易传播，如果处理不当会造成毁灭性的打击、生产成本的提高，对植株资源的保存往往造成无法挽回的损失。目前组织培养中，多采用抗生素进行杀菌处理，但至今并未发现那种抗生素能够对各种菌都有效，效果不理想，还有的采用氯化汞进行防治，但是氯化汞在使用以后，容易造成环境的二次污染。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种消除组织培养苗细菌污染的方法，该方法将鱼腥草、芦荟、鹅不食草、艾叶、藿香和大蒜等中草药经合理的配伍和处理后加入到常规培养基中，制备成去污培养基，用于转接污染的组织培养苗，该方法杀菌效果好，操作简便，可解决现有技术存在的灭菌效果不理想、操作复杂、容易造成二次污染和不具备推广价值的问题。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤A、称取5-10重量份的鲜鱼腥草、3-5重量份的鲜芦荟、15-20重量份的鲜鹅不食草、10-15重量份的鲜艾叶、3-8重量份的鲜藿香和10-20重量份的大蒜，混合后打浆，得第一中草药浆；
步骤B、将所述第一中草药浆加入100重量份的常规培养基中，混匀后高压灭菌，得第一去污培养基；
步骤C、将污染的组织培养苗转接到所述第一去污培养基中培养7-10天；
步骤D、重复步骤A至步骤C，直至所述污染的组织培养苗的污染消除，得去污组织培养苗；
步骤E、将所述去污组织培养苗转入常规培养基中继续培养。
优选的是，所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤A中，所述鲜鱼腥草为7-8重量份、鲜芦荟为3.5-4重量份、鲜鹅不食草为17-18重量份、鲜艾叶为12-14重量份、鲜藿香为4-6重量份、大蒜为13-16重量份。
优选的是，所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤A中，还包括，将所述第一中草药浆于50-60℃，超声波功率为320-380w的条件下，分散提取40min。
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤一、称取2-4重量份的干鱼腥草、3-5重量份的鲜芦荟、4-7重量份的干鹅不食草、3-5重量份的干艾叶、1-3重量份的干藿香和10-20重量份的大蒜，混合后加入25-40重量份的水，于70-80℃下浸泡2-3小时，打浆，得第二中草药浆；
步骤二、将所述第二中草药浆加入100重量份的常规培养基中，混匀后高压灭菌，得第二去污培养基；
步骤三、将污染的组织培养苗转接到所述第二去污培养基中培养7-10天；
步骤四、重复步骤一至步骤三，直至所述污染的组织培养苗的污染消除，得去污组织培养苗；
步骤五、将所述去污组织培养苗转入常规培养基中继续培养。
优选的是，所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤一中，所述干鱼腥草为3重量份、鲜芦荟为4重量份、干鹅不食草为5重量份、干艾叶为4重量份、干藿香为2重量份、大蒜为15重量份。
优选的是，所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤一中，还包括：在浸泡过程中，采用超声波辅助提取，超声波提取条件为：超声波功率350-400w，单次超声时间5-8min，间隔时间15min，超声次数6-8次。
优选的是，所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤一中，还包括：将所述第二中草药浆于70-80℃，超声波功率为350-380W条件下分散提取40min。
本发明至少包括以下有益效果：
第一、通过将鱼腥草、芦荟、鹅不食草、艾叶、藿香和大蒜按照合理的比例进行配伍，可拓宽其抗菌谱，增强杀菌药效，将上述中草药处理后加入常规培养基中培养污染的组织培养苗，经数次转接培养即可得到去污培养苗，该方法可杀灭污染的组织培养苗中的各种细菌，杀菌效果好；
第二、通过将第一中草药浆或第二中草药浆进行适当的超声波处理，可促进浆料中的有效成分充分溶出，提高去污培养基的杀菌能力；
第三、通过在浸泡过程中添加超声波处理，可使水分子快速进入上述干制中草药的微孔中，大大缩短上述中草药的复水时间，还可促进中草药中的有效成分的溶出，进而提高去污培养基的杀菌能力；
第四、本发明的方法可解决现有技术存在的灭菌效果不理想、操作复杂、容易造成二次污染和不具备推广价值的问题，对组织培养苗的损伤小，成本低，操作简便，适用于工业推广。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤A、称取5重量份的鲜鱼腥草、5重量份的鲜芦荟、15重量份的鲜鹅不食草、15重量份的鲜艾叶、8重量份的鲜藿香和10重量份的大蒜，混合后打浆，得第一中草药浆；
步骤B、将所述第一中草药浆加入100重量份的常规姜黄培养基中，混匀后高压灭菌，得第一去污培养基；
步骤C、将污染的姜黄组织培养苗转接到所述第一去污培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每周转接一次，经过四周的培养，即可消除污染，获得健壮姜黄组织培养苗；
步骤D、将所得健壮姜黄组织培养苗转入常规姜黄培养基中继续培养。
实施例2：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤A、称取8重量份的鲜鱼腥草、5重量份的鲜芦荟、15重量份的鲜鹅不食草、10重量份的鲜艾叶、8重量份的鲜藿香和10重量份的大蒜，混合后打浆，得第一中草药浆；
步骤B、将所述第一中草药浆加入100重量份的常规黄斑唇柱苣苔培养基中，混匀后高压灭菌，得第一去污培养基；
步骤C、将污染的黄斑唇柱苣苔组织培养苗转接到所述第一去污培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每周转接一次，经过三周的培养，即可消除污染，获得健壮黄斑唇柱苣苔组织培养苗；
步骤D、将所得健壮黄斑唇柱苣苔组织培养苗转入常规黄斑唇柱苣苔培养基中继续培养。
实施例3：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤A、称取10重量份的鲜鱼腥草、5重量份的鲜芦荟、16重量份的鲜鹅不食草、15重量份的鲜艾叶、5重量份的鲜藿香和20重量份的大蒜，混合后打浆，得第一中草药浆；
步骤B、将所述第一中草药浆加入100重量份的常规黄精培养基中，混匀后高压灭菌，得第一去污培养基；
步骤C、将污染的黄精组织培养苗转接到所述第一去污培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每周转接一次，经过四周的培养，即可消除污染，获得健壮黄精组织培养苗；
步骤D、将所得健壮黄精组织培养苗转入常规黄精培养基中继续培养。
实施例4：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤A、称取8重量份的鲜鱼腥草、5重量份的鲜芦荟、15重量份的鲜鹅不食草、15重量份的鲜艾叶、8重量份的鲜藿香和20重量份的大蒜，混合后打浆，得第一中草药浆；
步骤B、将所述第一中草药浆加入100重量份的常规铁皮石斛培养基中，混匀后高压灭菌，得第一去污培养基；
步骤C、将污染的铁皮石斛组织培养苗转接到所述第一去污培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每周转接一次，经过四周的培养，即可消除污染，获得健壮铁皮石斛组织培养苗；
步骤D、将所得健壮铁皮石斛组织培养苗转入常规铁皮石斛培养基中继续培养。
实施例5：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤A、称取8重量份的鲜鱼腥草、3重量份的鲜芦荟、20重量份的鲜鹅不食草、15重量份的鲜艾叶、3重量份的鲜藿香和15重量份的大蒜，混合后打浆，得第一中草药浆；
步骤B、将所述第一中草药浆加入100重量份的常规姜黄培养基中，混匀后高压灭菌，得第一去污培养基；
步骤C、将污染的姜黄组织培养苗转接到所述第一去污培养基中培养，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每10天转接一次，经过2次转接(共培养30天)，即可消除污染，获得健壮姜黄组织培养苗；
步骤D、将所得健壮姜黄组织培养苗转入常规姜黄培养基中继续培养。
所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤A中，还包括，将所述第一中草药浆于55℃，超声波功率为360w的条件下，分散提取40min。
实施例6：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤A、称取8重量份的鲜鱼腥草、4重量份的鲜芦荟、17重量份的鲜鹅不食草、12重量份的鲜艾叶、6重量份的鲜藿香和16重量份的大蒜，混合后打浆，得第一中草药浆；
步骤B、将所述第一中草药浆加入100重量份的常规黄精培养基中，混匀后高压灭菌，得第一去污培养基；
步骤C、将污染的黄精组织培养苗转接到所述第一去污培养基中培养，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每8天转接一次，经过2次转接(共培养24天)，即可消除污染，获得健壮黄精组织培养苗；
步骤D、将所得健壮黄精组织培养苗转入常规黄精培养基中继续培养。
所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤A中，还包括，将所述第一中草药浆于60℃，超声波功率为380w的条件下，分散提取40min。
实施例7：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤一、称取2重量份的干鱼腥草、3重量份的鲜芦荟、4重量份的干鹅不食草、3重量份的干艾叶、1重量份的干藿香和10重量份的大蒜，混合后加入25重量份的水，于70℃下浸泡3小时，打浆，得第二中草药浆；
步骤二、将所述第二中草药浆加入100重量份的常规铁皮石斛培养基中，混匀后高压灭菌，得第二去污培养基；
步骤三、将污染的铁皮石斛组织培养苗转接到所述第二去污培养基中培养，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每7天转接一次，经过3次转接(共培养28天)，即可消除污染，获得健壮铁皮石斛组织培养苗；
步骤四、将所得健壮铁皮石斛组织培养苗转入常规铁皮石斛培养基中继续培养。
实施例8：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤一、称取3重量份的干鱼腥草、4重量份的鲜芦荟、5重量份的干鹅不食草、4重量份的干艾叶、2重量份的干藿香和15重量份的大蒜，混合后加入34重量份的水，于75℃下浸泡2.5小时，打浆，得第二中草药浆；
步骤二、将所述第二中草药浆加入100重量份的常规铁皮石斛培养基中，混匀后高压灭菌，得第二去污培养基；
步骤三、将污染的铁皮石斛组织培养苗转接到所述第二去污培养基中培养，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每8天转接一次，经过2次转接(共培养24天)，即可消除污染，获得健壮铁皮石斛组织培养苗；
步骤四、将所得健壮铁皮石斛组织培养苗转入常规铁皮石斛培养基中继续培养。
所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤一中，还包括：在浸泡过程中，采用超声波辅助提取，超声波提取条件为：超声波功率375w，单次超声时间6min，间隔时间15min，超声次数7次。
实施例9：
一种消除组织培养苗细菌污染的方法，包括如下步骤：
步骤一、称取4重量份的干鱼腥草、5重量份的鲜芦荟、7重量份的干鹅不食草、5重量份的干艾叶、3重量份的干藿香和20重量份的大蒜，混合后加入40重量份的水，于80℃下浸泡2小时，打浆，得第二中草药浆；
步骤二、将所述第二中草药浆加入100重量份的常规铁皮石斛培养基中，混匀后高压灭菌，得第二去污培养基；
步骤三、将污染的铁皮石斛组织培养苗转接到所述第二去污培养基中培养，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/d的条件下培养，每10天转接一次，经过1次转接(共培养20天)，即可消除污染，获得健壮铁皮石斛组织培养苗；
步骤四、将所得健壮铁皮石斛组织培养苗转入常规铁皮石斛培养基中继续培养。
所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，所述步骤一中，还包括：将所述第二中草药浆于75℃，超声波功率为365W条件下分散提取40min。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (7)

1.一种消除组织培养苗细菌污染的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤A、称取5-10重量份的鲜鱼腥草、3-5重量份的鲜芦荟、15-20重量份的鲜鹅不食草、10-15重量份的鲜艾叶、3-8重量份的鲜藿香和10-20重量份的大蒜，混合后打浆，得第一中草药浆；
步骤B、将所述第一中草药浆加入100重量份的常规培养基中，混匀后高压灭菌，得第一去污培养基；
步骤C、将污染的组织培养苗转接到所述第一去污培养基中培养7-10天；
步骤D、重复步骤A至步骤C，直至所述污染的组织培养苗的污染消除，得去污组织培养苗；
步骤E、将所述去污组织培养苗转入常规培养基中继续培养。
2.如权利要求1所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，其特征在于，所述步骤A中，所述鲜鱼腥草为7-8重量份、鲜芦荟为3.5-4重量份、鲜鹅不食草为17-18重量份、鲜艾叶为12-14重量份、鲜藿香为4-6重量份、大蒜为13-16重量份。
3.如权利要求1所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，其特征在于，所述步骤A中，还包括，将所述第一中草药浆于50-60℃，超声波功率为320-380w的条件下，分散提取40min。
4.一种消除组织培养苗细菌污染的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、称取2-4重量份的干鱼腥草、3-5重量份的鲜芦荟、4-7重量份的干鹅不食草、3-5重量份的干艾叶、1-3重量份的干藿香和10-20重量份的大蒜，混合后加入25-40重量份的水，于70-80℃下浸泡2-3小时，打浆，得第二中草药浆；
步骤二、将所述第二中草药浆加入100重量份的常规培养基中，混匀后高压灭菌，得第二去污培养基；
步骤三、将污染的组织培养苗转接到所述第二去污培养基中培养7-10天；
步骤四、重复步骤一至步骤三，直至所述污染的组织培养苗的污染消除，得去污组织培养苗；
步骤五、将所述去污组织培养苗转入常规培养基中继续培养。
5.如权利要求4所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，其特征在于，所述步骤一中，所述干鱼腥草为3重量份、鲜芦荟为4重量份、干鹅不食草为5重量份、干艾叶为4重量份、干藿香为2重量份、大蒜为15重量份。
6.如权利要求4所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，其特征在于，所述步骤一中，还包括：在浸泡过程中，采用超声波辅助提取，超声波提取条件为：超声波功率350-400w，单次超声时间5-8min，间隔时间15min，超声次数6-8次。
7.如权利要求4所述的消除组织培养苗细菌污染的方法，其特征在于，所述步骤一中，还包括：将所述第二中草药浆于70-80℃，超声波功率为350-380W条件下分散提取40min。
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