CN105548338A

CN105548338A - 唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型及其应用

Info

Publication number: CN105548338A
Application number: CN201510908148.XA
Authority: CN
Inventors: 吴兴海; 冯建军; 吴振兴; 孙敏; 肖西志; 封立平; 段维军; 邓丛良; 房保海; 李健勇; 冯黎霞
Original assignee: Inspection and Quarantine Technology Center of Shandong Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau
Current assignee: Inspection and Quarantine Technology Center of Shandong Entry Exit Inspection and Quarantine Bureau
Priority date: 2015-12-10
Filing date: 2015-12-10
Publication date: 2016-05-04

Abstract

本发明公开了一种唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的蛋白质指纹图谱模型及其应用。该模型由唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质的质荷比及其波峰强度系数绘制而成，质荷比包括3568.4、3864.3、4802.0、5233.8、6829.7、7133.9、7422.1、7701.7、9602.7、10153.8。检测方法包括样品蛋白质芯片制备、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测，以及样品蛋白质图谱比对。本发明能定性检测出样品中是否含有唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌。可用于商业化的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测，特别适用于口岸检验检疫等部门快速、高通量等检测要求。

Description

唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型及其应用

技术领域

本发明涉及一种唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的蛋白质指纹图谱模型，及该模型在唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌检测和鉴定中的应用。属于微生物检测领域。

背景技术

唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌(Burkholderiagladioli)为植物致病菌、人的条件致病菌(可导致人产生肺炎症状)，也是食品中关键中毒、致病菌。印尼的椰毒发酵食物，中国东北等地的酵米面，养殖的鲜银耳因污染此菌导致食物中毒，已引广泛重视。其所引起的食物中毒致死率极高，在我国东北和西南的发酵米面食物中毒事件中，死亡率达到40％以上。唐菖蒲伯克霍尔德菌首先于1921年作为一种能够侵染唐菖蒲和其他花类植物的植物病原细菌而被提及。该种病菌可能导致囊纤维化和免疫力低下的部分病人发生肺炎症状。但是这种病菌对于CF病人影响程度是未知的。国外研究者报道由唐菖蒲伯克霍尔德菌引起的脓血症和菌血症。然而，感染通常发生于肺移植时，期间通过胸腔侵染。还有一些报道相继描述了唐菖蒲伯克霍尔德菌肺炎和严重的脓毒症。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测(Matrix-assistedlaserdesorptionionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDITOFMS)中，样品的蛋白分子在飞行管内的飞行速度与m/z^-1/2成正比，不同m/z值的蛋白分子到达检测器的时间不同，从而得到具有不同m/z值的图谱，实现对样品的鉴定。目前尚未有用于检测或鉴定的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型，也没有基于该蛋白质指纹图谱模型的检测方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题提供一种具有特异性识别唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型及该模型的蛋白质检测分析数据库，以及该模型或分析系统在唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测和鉴定中的应用。

本发明要解决的另一技术问题是提供一种唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测方法。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明提供一种唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型，该模型根据多个蛋白质的质荷比及其蛋白质波峰强度系数绘制而成，其中蛋白质的质荷比(m/z值)分别为3568.4、3864.3、4802.0、5233.8、6829.7、7133.9、7422.1、7701.7、9602.7、10153.8。需要说明的是，上述质荷比的值是一组相对稳定的值，但是，本领域技术人员可以理解，在不同实验条件下，在这些数值的基础上进行的小数点值的变化，或者说在1‰允许误差范围内个别值进行的数值变化，也属于本发明的保护范围。

进一步地，蛋白质的质荷比及蛋白质波峰强度系数由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪的软件统计分析得到。

本发明还公开了一种包括上述蛋白质指纹图谱模型的蛋白质检测分析数据库。

本发明还公开了上述蛋白质指纹图谱模型或蛋白质检测分析系统在唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测或鉴定中的应用。

本发明还公开了一种唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测方法，包括样品蛋白质芯片制备、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测，以及样品蛋白质图谱比对；其中，样品蛋白质图谱比对是将基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测分析获得的样品蛋白质图谱，与上述的蛋白质指纹图谱模型比较；或者在上述的蛋白质检测分析数据库中比对。

本发明实施方式的检测方法中，样品蛋白质芯片制备包括释放样品蛋白质的前处理和点样，点样的步骤包括，先在质谱靶芯片上滴加样品上清液，晾干后再滴加基质溶液。

进一步地，检测方法中，基质溶液的溶剂乙腈：甲醇：无菌去离子水按体积比1：0.8-1.2：0.8-1.2混合而成。

进一步地，检测方法中，基质溶液的溶质为α-氰基-4-羟基肉桂酸。

本发明实施方式的检测方法中，释放样品蛋白质的前处理采用的溶剂包括第一溶剂、第二溶剂和第三溶剂中的至少一种；第一溶剂为0.1％的三氟乙酸；第二溶剂为70％的甲酸；第三溶剂为100％乙腈。

本发明实施方式的检测方法中，样品蛋白质图谱比对采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪自带的软件进行，且比对获得的log(score)值大于2.2小于3.0时，即可实现样品的检测鉴定。即当未知菌株获得谱图与本发明中公开的所有唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌标准谱图比较，其log(score)值大于2.2小于3.0时，即可鉴定未知菌株为唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌。

由于采用以上技术方案，本发明的有益效果在于：

本发明的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型是一种全新的，区别于现有的蛋白质指纹图谱的模型。该蛋白质指纹图谱模型包含唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的特异性的蛋白质图谱信息，具有特异识别作用，可用于商业化的检测分析系统，用以对唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的特异性检测或鉴定。

本发明的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测方法，该方法将检测获得的样品蛋白质图谱与本发明提供的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型进行比对，可以准确的定性检测出样品中的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌。为唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌提供了一种快速、高通量、特异性强的检测方法，特别适用于口岸检验检疫等部门。

附图说明

图1是编号是1.3824菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

图2是编号是1.3077菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

图3是编号是1.3133菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

图4是编号是1.2741菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

图5是编号是1.3898菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

图6是编号是1.3050菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

图7是编号是菌1.3360株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

图8是编号是1.2892菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

图9是编号是1.3824菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

其中，图中右上角的数字表示的是菌株编号。图1-5是唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌近似种的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。图6-9是唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌不同菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测的蛋白质指纹图谱。

具体实施方式

本发明的蛋白质指纹图谱模型是一种现有的蛋白质图谱中没有的，新的MALDITOFMS蛋白质指纹图谱；根据唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的多个蛋白质的质荷比及其蛋白质波峰强度系数绘制而成，其中蛋白质的质荷比值分别为3568.4、3864.3、4802.0、5233.8、6829.7、7133.9、7422.1、7701.7、9602.7、10153.8。这些质荷比是不同的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌菌株采用本发明中公开的有机溶剂进行前处理释放蛋白质并采用MADLITOFMS分析获得的，区别于其它供试菌株的质荷比，因此，能够稳定而特异地表征唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌。此处所说的其它供试菌株，是本发明实施例中采用的用于试验的除唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌菌株以外的菌株。也就是说，通过与该模型进行比较，就可以判断出，检测的材料里面是否含有唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌。需要说明的是，在采用唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌进行试验时，由于采用的具体处理试剂或处理方法不同，最终还会获得以上提到的质荷比以外的其它质荷比；但是，本发明以上提到的质荷比是会稳定而特异的出现的，因此，这并不影响唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测和判断。还需要说明的是，由于本发明的上述质荷比值是通过对4种不同来源以及不同株型的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌进行检测后获得的平均值，因此，在不同的实验室或实验条件下，允许获得的具体质荷比值在上述质荷比的1‰范围内变化。

此外，还需要说明的是，由于本发明提供的是唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型，是根据唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的特异性的质荷比绘制出来的波峰图，也就是说，只要能够对唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质的质荷比进行检测，并绘制出波峰图就能特异性的反映出唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌，这与采用的仪器没有直接和必然的关联。但是，基于现有技术的限制，本发明的具体实施方式中采用的是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪对唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌进行检测，并利用其软件统计分析得到质荷比与蛋白质波峰强度系数的波峰图。即对应的蛋白质波峰强度系数是由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪根据具体检测对象中对应的蛋白质的含量自动计算得出的。一般来说某个蛋白质的含量越高，其蛋白质波峰强度系数就越大，在质谱图中的波峰值就越高。由于不同的菌株或者同一菌株在不同时期在不同的检测条件下，其蛋白质波峰强度系数会有细微差异，因此，具体的蛋白质波峰强度系数值在本发明中不做具体限定。同时，由于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪自带软件的参数设置条件的限制，谱图中仅显示部分标注了主要峰的质荷比值，而无法显示所有标注峰对应的质荷比(m/z)值，但可以通过导出数据获得谱图中无论标注还是没有标注显示的所有峰对应的质荷比(m/z)值。该蛋白质指纹图谱根据唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌标准菌株的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测获得的，具有特异识别作用，可用于唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的特异性检测或鉴定。同时，该蛋白质指纹图谱模型也可以用于商业化的蛋白质检测分析系统，用于唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测或鉴定。

在此基础上，本发明提供了一种唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测方法，包括样品蛋白质芯片制备、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测，以及样品蛋白质图谱比对。其中，样品蛋白质图谱比对即，将检测获得的样品的蛋白质图谱与本发明的提供的蛋白质指纹图谱模型比对，从而定性的判断样品中是否含有唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌，即实现唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测。

本发明中，样品蛋白质芯片制备包括蛋白质样品溶液制备和点样，其中点样的步骤包括，先在质谱靶芯片上点蛋白质样品溶液，晾干后再点基质溶液。需要指出的是，点样步骤中蛋白质样品溶液和基质溶液的顺序，主要是影响基质和样品形成结晶的均匀性，从而影响蛋白质图谱中质荷比对应的蛋白质波峰效果。本发明的点样步骤，使得基质和样品的结晶均匀，从而获得重复性好的蛋白质图谱。

本发明中，基质溶液的溶剂为乙腈：甲醇：无菌去离子水按体积比1：0.8-1.2：0.8-1.2混合而成。基质溶液的溶质为α-氰基-4-羟基肉桂酸。释放菌体蛋白质样品溶液的前处理溶剂包括第一溶剂、第二溶剂、第三溶剂中的至少一种；第一溶剂为0.1％三氟乙酸，第二溶剂为70％甲酸，第三溶剂为100％乙腈。

本领域技术人员熟知，在实际操作过程中，对上述基质溶剂或蛋白质溶剂的体积比进行适当调整同样可以满足本发明的要求；因此，在该范围外进行的，符合本领域技术人员认知的适当调整，仍然在本发明的体积比保护范围内。

下面通过具体实施例并结合附图对本发明作进一步详细说明。以下实施例仅仅对本发明进行进一步的说明，不应理解为对本发明的限制。

实施例

一、材料

1.供试菌株

表1所有供试菌株编号和来源

菌株编号	菌株名称
		1.3050	Burkholderia gladioli
1.2741	Burkholderia caryophylli
		1.2892	Burkholderia gladioli
1.3059	Burkholderia stabilis
		1.3077	Burkholderia cenocepacia
1.3133	Burkholderia cepacia4 -->
		1.3167	Comamonas testosteronii
1.3360	Burkholderia gladioli
		1.3809	Burkholderia pyrrocinia
1.3824	Burkholderia gladioli
		1.3898	Burkholderia multivorans
1.3973	Ralstonia pickettii
		1.10195	Burkholderia tropica
1.10200	Burkholderia tropica

2.实验试剂

(1)基质溶液的溶质

α-氰基-4-羟基肉桂酸(HCCA；Alpha-cyano-4hydroxy-cinnamicacid)，来源于德国BrukerDaltonics公司

(2)其它试剂

乙醇(Ethanolabsolute,HPLC/spectroscopygrade)，来源于ScharlauChemieS.A.公司

三氟乙酸(Trifluoroaceticacid,DNAsynthesisreagent)，来源于Burdick&Jackson公司

乙腈(Acetonitrile,ACS/HPLCcertifiedsolvent)，来源于Burdick&Jackson公司

甲醇(Methanol,HPLC/spectroscopygrade)来源于Burdick&Jackson公司

PeptideCalibrationStandard(No.206195)和ProteinCalibrationStandardI(No.206355)，来源于BrukerDaltonics公司

琼脂粉、葡萄糖均为分析纯，来源于上海生工生物工程有限公司。

3.主要仪器设备和材料

质谱仪：microflexMALDITOF(德国BrukerDaltonics公司)

超声波清洗仪：舒美KQ5200B型(昆山市超声波仪器有限公司)

Eppendorf离心机：5481(德国Eppendorf公司)

斡旋振荡器：其林贝尔CL-861

样品靶：德国BrukerDaltonics公司

高压灭菌锅：HV50

生物安全柜：SC18RW1800型

电子天平：XP603S

离心机：Spectrafuge24D

Eppendorf离心管及tips，购自德国Eppendorf公司。

4.主要试剂的配制

(1)基质溶液的配制

分别准确称量5mgHCCA溶于500μL乙腈：甲醇：水(1:1:1)溶剂中，振荡使其尽量溶解，但离心管底部仍会有少量结晶，使其饱和溶液约10mg/mL。同时每次使用时均新鲜配置。(3)样品处理溶剂的配制

按照体积比进行如下三种溶剂的配置，混匀，室温放置使用

A.0.1％三氟乙酸

B.70％甲酸

C.100％乙腈

(4)YDC培养基

酵母粉10g，碳酸钙超微粉末20g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，蒸馏水定容至1L，其中葡萄糖单独置于100ml蒸馏水中溶解，121℃高温灭菌15min后置于水浴锅后冷却至55℃，将1ml过滤灭菌的250mg/ml放线菌酮和葡萄糖加入培养基中并充分摇匀后倒入培养皿或试管备用。

(5)NBY培养基

牛肉浸膏3g，蛋白胨5g，酵母粉2g，三水磷酸氢二钾2.6g，磷酸二氢钾0.5g，葡萄糖2.5g，蒸馏水1000ml，121℃高温灭菌15min后加入1M硫酸镁溶液1ml；对于NBY固体培养基，需要加入15g琼脂粉。

(6)标准校正品制备

分别选取1管PeptideCalibrationStandard和ProteinCalibrationStandardI，并加入125μL0.1％TFA的50％乙腈溶剂，充分混匀后，-20℃保存备用。当校准时，分别取0.5μL两种标准校正溶液混合滴到样品板同一样品孔中使用。

二、实验方法

1.菌株培养

挑取唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌(Burkholderiagladioli)单菌落接种于YDC固体培养基培养，挑取其他供试菌株单菌落也接种于YDC或NBY固体培养基培养，30℃，黑暗培养48h后备用。

2.样品处理

称取供试菌株1-2mg用1000μL无菌水水洗2次，分别10000rpm离心2min，弃上清；再取200μL的0.1％三氟乙酸重悬混匀后，10000rpm离心2min，弃上清；加入25μL的70％甲酸重悬，混匀后再加入25μL的100％乙腈处理；然后以HCCA为基质，乙腈：甲醇：水(1:1:1)作为基质溶剂，采用改进的干滴法点样进行MALDI分析。

3.蛋白质芯片点样

即吸取1μL样品上清液点样于MALDI样品板上，室温条件下晾干，再直接滴加1μL基质溶液覆盖于样品之上，室温条件下晾干。

4.MALDITOFMS检测

(1)设置仪器参数

离子源1：20.08KV；离子源2：18.60KV；脉冲离子提取时间：30ns；线性正离子检测方式；质量范围m/z值：1000Da-20000Da；激光频率：60.0Hz；激光能量：35﹪左右。

(2)质量校正

当利用FlexControl软件对样品进行采集图谱前，需使用校正标准样品PeptideCalibrationStandard和ProteinCalibrationStandardI混合液进行自动或手工校正，其m/z值见表2。

表2校正标准物质对应的质荷比范围

5.图谱分析

(1)图谱的调基

MALDITOFMS带有flexanalysis专业技术软件，在此软件中打开需要分析的图谱，点击工具栏process,选择subtractmassspectrumbaseline。调基目的是使基线降低，比较直观。

(2)图谱的标峰

调基之后的图谱，点击工具栏Method，点击open，选择proteins1-20kDafullprocess.FAMSMethod,点击工具栏MassList选择find。

对其他图谱同样标峰，可以通过copy已标峰图谱，然后选定待标峰图谱pastespecial，选择method，后点击工具栏MassList选择find。标峰的目的是使主要信号峰的m/z值显示，比较直观。

三、蛋白质指纹图谱模型的建立

利用MALDITOFMS自带的Biotyper专业技术软件，对22株唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌菌株的蛋白质图谱进行分析，获得22株菌株的特异性识别图谱。部分结果如图5-9所述，其对应的质荷比检测值见表3。图5-9中1.3050、1.3360、1.2892、1.3824分别表示菌株编号为1.3050、1.3360、1.2892、1.3824的菌株的检测结果图，其中带下划线的数字表示共同特有峰对应的质荷比值。

表3唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌及其近似种蛋白质谱峰图的质荷比值

本例中建立的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的特异性识别图谱包括22株菌株均具有的特异性质荷比值，质荷比值包括3568.4、3864.3、4802.0、5233.8、6829.7、7133.9、7422.1、7701.7、9602.7、10153.8。需要说明的是，这些值是4种菌株均具有的质荷比值，并通过对具体检测值进行平均后获得的，唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌能够较为准确地反应唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的特异性识别图谱。实际上各个菌株还包括其它的质荷比值，但是，这些值并不是唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌所共有的值，这可能是由于各个菌株的个体差异造成的，不具有种识别作用，因此，不被包括在本例的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌特异性识别图谱中。此外，从图5-9中可见，并非本例中所有特异性质荷比均能被显示，这是因为图片显示的是经过软件自动压缩处理的峰图，在部分值彼此较接近或者虽然存在该特异性蛋白的质荷比，但是该蛋白质含量较少的情况下，无法全部被显示在图中。

本例的蛋白质指纹图谱模型可单独的用于唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测鉴定，或者，整合到其它商业用途的蛋白质检测分析系统或数据库，用于唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测鉴定。

四、唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌特异性和稳定性检测

1.稳定性检测

按照上述试验方法对4种唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌(Burkholderiagladioli)进行检测，每个样品点采集5张峰图，4次重复，获得的20张峰图与本例中建立的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型进行比对，并通过软件计算得到一个log(score)值，log(score)值大于2.2小于3.0则为阳性。结果显示，所有唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌菌株均为阳性。

2.特异性检测

采用所有菌株，按照本例提供的试验方法进行检测，每个样品点采集5张峰图，获得的峰图与本例中建立的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的蛋白质指纹图谱模型进行比对，能够匹配并且通过软件计算得到一个log(score)值，log(score)值大于2.2小于3则为阳性，否则为阴性。结果显示，所有4种唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌菌株均为阳性，其它供试菌株均为阴性。部分结果见图1-5，图1-5中带下划线的数字表示唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌共同特有峰对应的质荷比值。唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌近似种的部分质荷比值见表4。

从表4可见，唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌近似种中也有个别质荷比与唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌相同，这可能是由于彼此之间同源关系较近或其它原因，但是近似种中并没有全部的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的特异性质荷比值，并且，从图1-5中也可以看到，其质谱图的图形与图5-9中的唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌质谱图存在很大差异。

表4部分唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌及其近似种蛋白质谱峰图的质荷比值

以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的蛋白质指纹图谱模型，其特征在于：由唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的多个蛋白质的质荷比及其蛋白质波峰强度系数绘制而成，所述多个蛋白质的质荷比包括3568.4、3864.3、4802.0、5233.8、6829.7、7133.9、7422.1、7701.7、9602.7、10153.8。

2.根据权利要求1所述的蛋白质指纹图谱模型，其特征在于：所述蛋白质的质荷比值及其波峰强度系数由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪的软件统计分析得到。

3.一种包括权利要求1或2所述的蛋白质指纹图谱模型的蛋白质检测分析数据库。

4.权利要求1或2所述的蛋白质指纹图谱模型在唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的检测或鉴定中的应用。

5.一种唐菖蒲伯克霍尔徳氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测方法，其特征在于：包括样品蛋白质芯片制备，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测，以及样品蛋白质图谱比对；

所述样品蛋白质图谱比对是将基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪检测分析获得的样品蛋白质图谱，与权利要求1或2所述的蛋白质指纹图谱模型比较；或者在权利要求3所述的蛋白质检测分析数据库中比对。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：所述样品蛋白质芯片制备包括释放样品蛋白质的前处理和点样，所述点样的步骤包括，先在质谱靶芯片上滴加样品上清液，晾干后再滴加基质溶液。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述释放样品蛋白质的前处理采用的溶剂包括第一溶剂、第二溶剂和第三溶剂中的至少一种；

第一溶剂为0.1%的三氟乙酸；

第二溶剂为70%的甲酸；

第三溶剂为100%乙腈。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述基质溶液的溶剂为乙腈：甲醇：无菌去离子水按体积比1：0.8-1.2：0.8-1.2混合而成；所述基质溶液的溶质为α-氰基-4-羟基肉桂酸。

9.根据权利要求5-8任一项所述的检测方法，其特征在于：所述样品蛋白质图谱比对采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪自带的软件及所建立的模型分析数据库进行，且比对获得的log(score)值为大于2.2小于3.0。